输血科相关技术规范与操作规程(SOP)

输血科相关技术规范与操作规程(SOP)

输血科相关技术规范与操作规程(SOP)

曲靖市第一人民医院科室管理操作规范文件文件编号：QJYY－SXK

第一版

第1次修改责任部门：输血科生效日期：xx年1 月1日ABO血型鉴定文件页数：共5页 ABO血型鉴定

【标本】

抗凝或不抗凝静脉血。

【原理】

根据红细胞膜表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A 型.B型.AB型.O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是指用标准抗A和抗B分型血

清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原;所谓反定型，是指用标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应

的抗A和（或）抗B。

【器材】

载玻片.塑料吸管.小试管.台式离心机.微柱凝胶离心机.蜡笔.记号笔.显微镜等。

【试剂】

1.单克隆抗-A，抗-B血清试剂。

2. 0.8%.4％A

1.B及O型试剂红细胞盐水悬液。

3. ABO.RhD血型定型检测卡（单克隆抗体）。

【操作步骤】

（一）试管法

1.样本处理标本用离心机离心分离血清，备用，将被检RBC 以N.S洗涤1~2次，配制成2-5%红细胞悬液。

2.加样

2.1.正定型：2支小管，标“-A”，“-B”，分别加抗A.抗B 试剂1滴，2-5%红细胞悬液1滴；

2.2.反定型：4支小管，标“Ac”，“Bc”，“Oc”，“自c”，分别加2滴P.s，然后各加1滴相应细胞；（注意：先加血清再加血球）

3.离心：离心机3400r/min离心15秒，观察结果。

4.结果判定：血型抗A抗B AcBcOc 自身c A4＋－－＞2＋－－ B－4＋＞2＋－－－ O－－＞2＋＞2＋－－ AB4＋4＋－－－－如有不符合上表情况需进一步试验。

5.试管法凝集强度判断表试管中红细胞的凝集情况结果判读一个结实的凝块4+ 数个结实凝块，背景清晰3+ 不结实的凝块，背景清晰，振揺后背景混浊2+ 背景混浊，散在的不结实的小凝块，振揺后凝块仍可见1+ 背景混浊，散在的不结实的小凝块，振揺后凝块不可见± 凝集和不凝集的红细胞同时存在混合视野

（mf）红细胞扣完全或部分消失，细胞上请液为透明红色溶血（H）红细胞从细胞扣细沙样均匀划落，直至细胞扣完全消失 0

(二)玻片法（正定型，仅用于交叉配血时复查患者血型）

1.取清洁玻片1张，用蜡笔画成方格，标明抗-A，抗-B和抗-D，分别用滴管滴加抗-A，抗-B和抗-D分型血清1滴于标明的方格内，再各加受检者2-5%红细胞悬液1滴，混合。

2.将玻片不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约

15min,先以肉眼观察有无凝集或溶血反应；再在低倍镜下观察结果。

3.结果判定：凝集者为阳性结果，不凝集者为阴性结果。

(三)微柱凝胶法

【原理.方法.用途】

本品采用微柱凝胶免疫检测技术，用于人ABO血型正定型和反定型以及RhD血型的筛查。对于RhD阴性的样本，应按有关规定作进一步的实验。

本品系由聚丙烯塑料透明卡片，卡片上并排六支微柱型管中充填葡聚糖凝胶，从左向右顺序第一支至第三支微管凝胶中分别充填抗A. 抗B.抗D单克隆抗体IgM试剂，称之为特异性胶，检测人红细胞ABO.RhD抗原。第四支至第六支微管中只有凝胶，称之为中性胶，第四支微管作为阴性对照管；第五支和第六支微管作为ABO血型反定型管。

【操作】

1.样本处理标本离心，分离出血清，用 N.S配制0.5%-

0.8%RBC悬液。

2.在标有Ac.Bc的微管中各加入50ul（约1滴）受检血清。

3.在标有“-A”，“-B”，“-D” 对照的微管中各加入

50ul (约1滴)受检0.5%-0.8%RBC悬液。

4.将0.5%-0.8%试剂Ac.Bc分别加入标有Ac.Bc的微管中,每管50ul 。

5.即刻使用专用离心机离心5分钟，2分钟900rpm, ，3分钟1500rpm，观察结果。

6.结果判定：（1）阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。

（2）反应强度：特异性抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。（3）阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶底部。

附：微柱凝胶法凝集强度判断表反应强度现象及说明4+ 红细胞复合物（凝集）位于凝胶表面3+ 大部分红细胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中上部分2+ 大部分红细胞复合物位于凝胶中部，少部分位于凝胶下部1+ 红细胞复合物位于凝胶中下部± 与同一卡阴性管结果对照，如与阴性结果有差别，即为± －红细胞完全沉积在凝胶管尖底部完全溶血凝胶和液体无凝集或

未凝集的红细胞，液体出现透明清澈红色不完全溶血残留红细胞在胶表面.胶中或胶底部，液体出现透明清澈红色混合凝集红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部主要参考文献

1.叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》中华人民共和国卫生部医政司编东南大学出版社出版发行xx年11月第3版

2.试剂盒说明书编写者：徐路琼审核者：马丽琼时间：xx 年1月1日曲靖市第一人民医院科室管理操作规范文件文件编号：QJYY－SXK

第一版

第1次修改责任部门：输血科生效日期：xx年1月1 日RH血型鉴定文件页数：共6页 RH血型鉴定 RH（D）抗原初筛【标本】

抗凝或（和）不抗凝静脉血，制备成2-5%红细胞生理盐水悬液。

【原理】

根据凝集反应原理，当被检测者红细胞上有D抗原存在时，可与IgM抗D产生特异性的抗原抗体反应，出现红细胞凝集现象。凡带有D抗原者称为RH阳性，不带D抗原者称为RH阴性。

【器材】

塑料吸管.载玻片.记号笔.小试管.离心机.显微镜等。

【试剂】

1.单克隆抗D（IgM）血清试剂。