香菇多糖提取实验汇报
蘑菇多糖提取实验报告
一、实验目的1. 学习蘑菇多糖的提取方法;2. 掌握蘑菇多糖的鉴定与检测技术;3. 研究蘑菇多糖的生物活性。
二、实验原理蘑菇多糖是一种生物活性物质,具有多种生物学功能,如抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等。
本实验采用水提醇沉法提取蘑菇多糖,并对其理化性质、结构特征和生物活性进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 蘑菇子实体:香菇、金针菇等;- 无水乙醇、丙酮、正己烷等有机溶剂;- 碘液、硫酸铜溶液等试剂;- pH计、紫外分光光度计等仪器。
2. 实验仪器:- 电子天平;- 磁力搅拌器;- 烘箱;- 冷冻离心机;- 超声波清洗器;- 离心管、烧杯等实验器材。
四、实验方法1. 蘑菇子实体的预处理将蘑菇子实体洗净,去除杂质,切碎,用蒸馏水浸泡过夜。
2. 蘑菇多糖的提取将浸泡好的蘑菇子实体加入蒸馏水中,搅拌提取2小时;将提取液过滤,收集滤液;将滤液用无水乙醇沉淀,离心分离;将沉淀物用蒸馏水溶解,重复上述沉淀、离心步骤,直至沉淀物基本溶解;将溶解后的沉淀物用丙酮沉淀,离心分离;将沉淀物用蒸馏水溶解,得蘑菇多糖粗品。
3. 蘑菇多糖的鉴定与检测(1)外观鉴定:蘑菇多糖粗品为白色粉末;(2)溶解性检测:蘑菇多糖粗品可溶于水、乙醇、丙酮等溶剂;(3)分子量测定:采用凝胶渗透色谱法(GPC)测定蘑菇多糖的分子量;(4)单糖组成分析:采用高效液相色谱法(HPLC)分析蘑菇多糖的单糖组成;(5)生物活性检测:通过体外抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等实验,检测蘑菇多糖的生物活性。
五、实验结果与分析1. 蘑菇多糖粗品的外观为白色粉末,可溶于水、乙醇、丙酮等溶剂。
2. GPC结果显示,蘑菇多糖的分子量在10-100 kDa之间。
3. HPLC分析表明,蘑菇多糖主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖等单糖组成。
4. 生物活性检测结果显示,蘑菇多糖具有抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等生物活性。
六、实验结论本实验成功提取了蘑菇多糖,并通过鉴定与检测,证实了蘑菇多糖具有多种生物活性。
香菇多糖提取工艺和含量测定方法研究
香菇多糖提取工艺和含量测定方法研究报告1. 研究目标本研究旨在探索香菇中多糖的提取工艺和含量测定方法,以提供一种高效、可行的工艺流程和准确的测定方法,为香菇多糖的应用开发提供科学依据。
2. 方法2.1 香菇多糖提取工艺研究2.1.1 提取试剂选择根据文献综述和前期实验结果,筛选出适合香菇多糖提取的试剂。
常用的试剂有热水、酶解液、强酸、强碱等,选择合适试剂对香菇进行水解提取。
2.1.2 提取工艺优化基于单因素实验和正交实验设计原理,优化香菇多糖提取的工艺参数,包括提取温度、提取时间、料液比等因素。
通过测定提取液中多糖的含量,确定最佳的提取工艺条件。
2.2 香菇多糖含量测定方法研究2.2.1 选择合适试剂反应根据香菇多糖的特性,选用适合的试剂进行反应。
常用的试剂有硫酸、酚硫酸、费林试剂等,可以选择适合的试剂。
2.2.2 建立标准曲线选取不同浓度的香菇多糖标准品,按照测定方法进行测定,记录各标准样品的吸光度或色素生成情况。
根据实验数据,建立标准曲线。
2.2.3 样品预处理将香菇样品经过适当的处理,如研磨、溶解等,使样品中的多糖保持在可测量范围内。
2.2.4 多糖含量测定根据建立的标准曲线和样品的吸光度值,计算出香菇中多糖的含量,并进行统计分析。
3. 发现3.1 香菇多糖提取工艺发现经过实验研究,发现采用热水提取是一种较为有效的香菇多糖提取工艺。
最佳提取条件为提取温度80℃,提取时间2小时,料液比1:10。
3.2 香菇多糖含量测定方法发现在已有的试剂中,硫酸试剂反应较为敏感,可以用于香菇多糖的含量测定。
建立的标准曲线表明,香菇多糖的浓度与吸光度呈现良好的线性关系。
4. 结论本研究通过对香菇多糖的提取工艺和含量测定方法进行深入研究,得出以下结论:1.香菇多糖的热水提取工艺在提取温度80℃,提取时间2小时,料液比1:10的条件下,可获得较高的提取产率。
2.硫酸试剂是一种适用于香菇多糖含量测定的试剂,建立的标准曲线可用于准确测定香菇多糖的含量。
2论文香菇菌柄基部多糖提取及其抗脂质过氧化作用分析
《香菇菌柄基部多糖提取及其抗脂质过氧化作用分析》摘要:使用香菇菌柄基部和纤维素酶为材料提取粉碎粒度为200目香菇菌柄基部中多糖,测定纤维素酶对粉碎粒度为200目香菇菌柄基部的多糖的提取率。
并且使用结晶紫法验证香菇菌柄基部的多糖有抗脂质过氧化。
实验结果表明:香菇菌柄基部中的多糖使用纤维素酶,酶解温度为35℃,酶解时间为3h,香菇菌柄基部多糖提取率为21.75%。
且用结晶紫方法验证了香菇菌柄基部中的多糖具有康脂质过氧化作用。
关键词:香菇菌柄基部多糖提取抗脂质氧化结晶紫前言:香菇素有"山珍之王"之称,是高蛋白、低脂肪的营养保健食品。
中国历代医学家对香菇均有著名论述。
现代医学和营养学不断深入研究,香菇的药用价值也不断被发掘。
其中香菇多糖有抗肿瘤、抗病毒、调节免疫功能等作用。
但由于食用习惯香菇的菌柄基部被大量丢弃,造成浪费。
从而证明香菇菌柄基部中含有多糖并且具有抗脂质过氧化作用有重大意义。
为合理开发香菇资源提供可能性和参考。
一、实验原理1.机体在生命活动的氧化代谢过程中不断产生各种活性氧自由基( ROS) , 它们独立存在, 近年来, 人们对多糖及复合物的抗氧化活性作用有了越来越深入的认识。
已有大量的研究表明, 一大部分从天然产物中分离得到的多糖类化合物具有清除自由基、抑制脂质过氧化作用、抑制亚油酸氧化等抗氧化作用。
【4】反应方程式如下:2.结晶紫分光光度法测·OH基本原理是: H2O2和Fe2+发生Fenton反应产生#OH。
·OH容易进攻高电子云密度点,会与结晶紫中具有高电子云密度的)C=C)基团发生亲电加成反应,而使结晶紫褪色。
通过测定结晶紫吸光度值的变化可间接测定出·OH的生成量。
Fe2++H2O2 Fe3++·OH+OH-3.酶解法:该法是根据食用菌细胞壁的构成,利用酶反应具有高度专一性的特点,选择相应的酶,将细胞壁的组成成分(纤维素、半纤维素和果胶质)水解或降解,破坏细胞壁结构,使细胞内的成分溶解、混悬或胶溶于溶剂中,从而达到提取的目的,且有利于提高成分的提取率;另一方面,由于许多食用菌中除了含有多糖外,还含有其他成分如淀粉、蛋白质、果胶、粘液质等,这些成分的存在往往使提取液呈混悬状态,而酶提取法可以根据提取液中杂质的种类、性质,有针对性地采用相应的酶,将这些杂质分解或除去,以改善提取液的澄清度,提高产品的稳定性。
3 王博 香菇多糖的提取
香菇多糖的提取一,实验目的:掌握热水侵泡法分离多糖类化合物的原理和方法。
二,实验原理:多糖溶于热水,不溶于60%以上乙醇,所以用热水提取,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质;因为热水也可以将蛋白类物质提取出来,所以用乙醇除去提取液中的蛋白.三,实验材料与设备:香菇,葡萄糖,乙醇,苯酚,浓硫酸,紫外可见分光光度计,恒温浴槽。
四,制作标准曲线;采用苯酚硫酸法,以葡萄糖为标准物,称取105℃干燥至恒重的无水乙醇的葡萄糖14.8mg,置100ml容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,分别取:0.0ml ,0.4ml ,0.6ml ,0.8ml ,1.0ml ,1.2ml ,1.4ml ,1.6ml ,1.8ml ,加水补充至2.0ml,再加1ml 5%的苯酚溶液,迅速加入5ml的浓硫酸,摇匀,静置20分钟,冷却至室温,以蒸馏水为空白,在490mm波长处测定吸光度,绘制标准曲线,得到回归方程为:y=0.006x +0.032,R=0.9991,线性范围是:0~266.4ug.标准曲线的绘制:假如葡萄糖0 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 溶液的量mlA490 0.005 0.016 0.020 0.019 0.029 0.031 0.041 0.044 0.049五,操作步骤:1 提取取干香菇粉粉碎,称取20g,置于250ml烧杯中,加入100ml蒸馏水在石棉网上加热至沸腾,并不断搅拌,30min后抽滤,滤渣在用100ml的蒸馏水溶液煮沸30min,合并两次滤液,加热浓缩至20ml,溶于95%乙醇中,搅拌并冷却至室温,静置1h,以4000r/min离心10min,沉淀,真空干燥,得到粗香菇多糖。
2 除蛋白粗糖50ml 100℃热水溶解,加sevage溶液10ml,剧烈震动10min,静置10min,4000r/min离心10min,取上清液,加sevage溶液反复操作5次。
3 纯化粗糖置于烧杯中,加蒸馏水50ml溶解,加入等体积的0.15mol/L 的CTAB与硼酸缓冲溶液,静置10min,4000r/min离心得沉淀用2mol/L的乙醇溶解,静置10min,4000r/min离心后取上清液加等体积的甲醇,静置24h。
香菇多糖的提取实验报告
香菇多糖的提取实验报告一、实验目的本实验旨在探索从香菇中提取多糖的有效方法,并对提取得到的香菇多糖进行初步的定性和定量分析。
二、实验原理香菇多糖是一种水溶性的大分子化合物,其在热水中具有一定的溶解性。
通过热水浸提的方法,可以使香菇中的多糖溶解到水中,然后经过离心、过滤等操作去除杂质,再通过醇沉的方法使多糖沉淀出来,最后经过干燥得到香菇多糖的粗品。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜香菇(市售)、无水乙醇(分析纯)、丙酮(分析纯)、石油醚(分析纯)、葡萄糖标准品、浓硫酸(分析纯)、苯酚(分析纯)等。
2、实验仪器电子天平、恒温水浴锅、离心机、旋转蒸发仪、真空干燥箱、分光光度计、容量瓶、移液管、具塞刻度试管等。
四、实验步骤1、原料预处理将新鲜香菇洗净,去除杂质和根部,切成小块,置于通风处晾干。
然后用石油醚回流脱脂2 次,每次2 小时,以去除香菇中的脂类物质。
脱脂后的香菇用丙酮回流脱色 2 次,每次 2 小时,以去除香菇中的色素。
2、热水浸提将预处理后的香菇放入圆底烧瓶中,按料液比 1:20 加入蒸馏水,在90℃的恒温水浴锅中浸提 3 小时。
期间每隔 30 分钟搅拌一次,以提高提取效率。
3、离心分离浸提结束后,将提取液冷却至室温,然后在 4000 r/min 的转速下离心 15 分钟,取上清液。
4、过滤将上清液用滤纸过滤,去除其中的不溶性杂质。
5、醇沉向过滤后的上清液中缓慢加入 3 倍体积的无水乙醇,边加边搅拌,使多糖沉淀出来。
然后将溶液置于 4℃冰箱中静置过夜。
6、离心收集将醇沉后的溶液在 4000 r/min 的转速下离心 15 分钟,收集沉淀。
7、洗涤用无水乙醇和丙酮依次洗涤沉淀,以去除其中的杂质。
8、干燥将洗涤后的沉淀置于真空干燥箱中,在 60℃下干燥至恒重,得到香菇多糖的粗品。
9、多糖的定性分析(1)苯酚硫酸法:取适量的香菇多糖粗品,用蒸馏水溶解,制成一定浓度的溶液。
然后取 1 mL 溶液,加入 1 mL 5%的苯酚溶液和 5mL 浓硫酸,摇匀后在沸水浴中加热 15 分钟,冷却至室温后,在 490 nm 处测定吸光度。
香菇多糖提取实验汇报
超声波法提取香菇多糖研究背景:香菇多糖的性质:香菇多糖以β~1,3葡聚糖为主,含有少量的木糖和甘露糖,具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能用途:抗肿瘤药。
为化、放疗辅助药。
主要用于胃癌、肺癌、乳腺癌。
生产技术状况:因为香菇多糖的用途广泛,提取比较方便,越来越多的人投身于这方面的研究,是的提取技术方面的大幅度提升。
状况良好。
操作过程:方案设计:香菇多糖的提取香菇预先烘干→称取干香菇15克→粉碎→圆底烧瓶→200ml热水70℃→超声波发生器(水预热在60℃左右)→提取45min(中间停顿2次,每次5min)→过滤→滤渣→等滤液体积热水70℃→提取30min(中间超声波停2次,每次5min)→过滤→合并滤液→抽滤→滤液→量体积标识贮藏备用香菇多糖的测定:1.首先去掉香菇多糖溶液中的的蛋白质:采用氯化钙法:将溶液PH 调节至8---9,加热到85℃,加入氯化钙使浓度达5% (w/v),搅拌,冷却至室温,过滤,得脱蛋白多糖液。
2.制作标准曲线:准确吸取1mg/ ml 葡萄糖标准溶液1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0ml 置于50ml 容量瓶定容,准确吸取该系列溶液各2ml ,然后加入6%苯酚1.0ml 及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。
3. 样品的测定:取去完蛋白的样液2ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度。
将吸光度控制在0.2-0.8人员分工:我们分成两组来完成实验,因为有两组待测夜要进行测定。
然后标准溶液是由第一大组完成。
由于操作比较简单,我们就一起完成。
1人对溶液进行去蛋白,2人制作待测液,1人对待测液进行测定,并记录数据。
实验现象:配置待测液时,加入浓硫酸后溶液变成橙黄色。
从而可来额定吸光度。
香菇多糖的提取实验报告
香菇多糖的提取实验报告1. 掌握香菇多糖的提取方法;2. 了解香菇多糖的物化性质;3. 研究香菇多糖的抗氧化活性。
实验原理:香菇多糖是一种高分子多糖,具有多种保健功效,如抗氧化、抗肿瘤、促免疫等。
香菇多糖的提取方法有多种,其中较为常用的是热水浸提法和酸碱法。
热水浸提法是指将香菇粉末加到一定的温度下的水中,随后进行浸提,加热时间和浸提时间是影响提取率和质量的关键因素。
酸碱法是指将香菇粉末加入一定比例的酸和碱溶液中,进行水解,随后用酒精沉淀,最后用稀酸或碱溶解,并用冷醇进行沉淀和洗涤,得到香菇多糖。
实验材料:香菇粉末、蒸馏水、NaOH、HCl、酒精、醋酸钠、DPPH、卡拉菲指示剂。
实验步骤:实验一:热水浸提法提取香菇多糖1. 取4g香菇粉末,加入200mL蒸馏水中,加热至80℃,并保持2h;2. 将提取液用纱布过滤,分别收集滤液;3. 将滤液浓缩至大约50mL,用三倍体积的酒精沉淀,过滤并收集沉淀;4. 重复上述步骤2和步骤3,直至香菇多糖的浓度达到所需浓度为止。
实验二:酸碱法提取香菇多糖1. 取4g香菇粉末,加入100mL0.1mol/L NaOH中,进行水解,保持100℃,2h;2. 加入等量的0.1mol/L HCl至酸度为2,用酒精沉淀;3. 用10%醋酸钠溶液洗涤沉淀,并用稀棕黑色指示剂观察,直至洗涤液呈现淡黄色;4. 用酒精洗涤沉淀,分别重复上述步骤2-3,将洗涤干燥的沉淀溶解后,混合,加热水浴,调节pH至7左右,沉淀多糖,洗涤,干燥得到香菇多糖。
实验三:测定香菇多糖的抗氧化活性1. 取一定量的DPPH溶液(30mg/L),加入1mL香菇多糖液体,反应30min;2. 测定吸收值,计算香菇多糖的抗氧化活性。
实验结果:通过实验一和实验二分别提取了香菇多糖,得出了两种不同的提取方法的多糖成品。
经过实验三,测得香菇多糖的抗氧化活性,根据吸收值的大小可以判断多糖的抗氧化强弱。
实验结论:热水浸提法和酸碱法提取香菇多糖都是有效的提取方法。
实验二:超声波提取香菇多糖
提取情景
• 4)结果与分析 按照上述的实验技术流程图路线,得出的实验结果,力求做到有理有 据,准确可靠。并且,通过查阅资料对自己的实验结果加以分析(即 使实验失败,也要说明失败原因,为下次实验总结经验教训),在对 实验结果进行分析后,还有必要进行更为深人的讨论,如对实验结果 的理论分析,对操作方法的科学性与局限性,实验结果的可靠程度与 适用范围等等作进一步阐述, 同时,大胆地提出对实验的改进意见 和质疑等。 另外,可以对实训课的组织与安排提出建议,以便老师在同类实训教 学中改进。 • 5)致谢 致谢对象应是对整个实训操作过程有实质性帮助的人,主要是实训合 作伙伴,以及实训教辅人员,并应写出被致谢者。
提取情景
超声波萃取对溶剂和目标萃取物的性质(如极性)关系不大。 因此,可供选择的萃取溶剂种类多、目标萃取物范围广泛。 减少能耗,由于超声萃取无需加热或加热温度低,萃取时间 短,因此大大降低能耗。
药材原料处理量大,成倍或数倍提高,且杂质少,有效成分 易于分离、净化。 萃取工艺成本低,综合经济效益显著
提取情景
超声波提取的原理
• 超声波在物质介质中的相互作用效应可分为热效应、空化 效应和机械传质效应。超声波的热效应、机械传质作用及 空化作用成为超声技术在提取应用中的三大理论依据。
1
2
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超声波的热 效应
超声波的机械 效应
超声波的空化 效应
提取情景
超声波提取的特点
• 适用于中药材有效成份的萃取,彻底改变传统的水煮醇 提萃取方法的新方法,与常规提取工艺相比,超声波提 取具有如下突出特点:
按照产品规格,用水处理时 制备的姜淀粉和离心液调整 姜辣素含量
姜 辣 素 提 取 〔 滤 渣 用 6 倍 体 积 ( ml/g ) 50%乙醇60℃回流浸提120min,过滤,滤 液离心、合并提取液〕 提取液处理(低压浓缩回收乙醇,水 稀释浓缩物,低温静置待分层,取下层 沉淀浸膏,用β -CD包络)
提取多糖的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握多糖提取的原理和操作流程;2. 了解不同提取方法对多糖提取率的影响;3. 学习多糖的鉴定方法;4. 熟悉实验仪器的使用。
二、实验原理多糖是一类高分子碳水化合物,广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性,如抗炎、抗氧化、免疫调节等。
多糖的提取方法主要有热水提取法、酸提取法、碱提取法等。
本实验采用热水提取法提取多糖,并利用苯酚-硫酸法对提取的多糖进行鉴定。
三、实验材料与试剂1. 实验材料:干燥的植物原料(如香菇、大枣、紫菜等);2. 实验试剂:蒸馏水、NaOH、HCl、苯酚、硫酸、乙醇、DPPH、卡拉菲指示剂等;3. 实验仪器:组织匀浆机、水浴锅、台式高速离心机、分光光度计、容量瓶、移液管、烧杯、漏斗等。
四、实验步骤1. 多糖提取(1)将干燥的植物原料粉碎,过筛,取适量粉末;(2)将粉末加入一定量的蒸馏水中,加热至80℃,保持2小时;(3)冷却后,过滤得到滤液;(4)将滤液加入适量的乙醇,静置过夜,离心,收集沉淀;(5)将沉淀用95%乙醇洗涤,干燥,得到多糖粗品。
2. 多糖鉴定(1)苯酚-硫酸法鉴定①取一定量的多糖粗品,加入苯酚溶液,振荡均匀;②加入硫酸溶液,观察溶液颜色的变化;③与标准溶液进行比较,确定多糖的存在。
(2)DPPH自由基清除法①配制一定浓度的DPPH溶液;②取一定量的多糖粗品,加入DPPH溶液,振荡均匀;③在一定时间后,测定溶液的吸光度;④计算DPPH自由基清除率,评估多糖的抗氧化活性。
五、实验结果与分析1. 多糖提取实验结果表明,热水提取法能够有效地提取植物原料中的多糖,提取率较高。
2. 多糖鉴定(1)苯酚-硫酸法鉴定实验结果显示,多糖粗品与苯酚-硫酸溶液反应后,溶液颜色变为深棕色,说明多糖的存在。
(2)DPPH自由基清除法实验结果显示,多糖粗品对DPPH自由基具有清除作用,清除率随着多糖浓度的增加而增加,表明多糖具有一定的抗氧化活性。
六、实验结论1. 热水提取法能够有效地提取植物原料中的多糖,提取率较高;2. 多糖具有抗氧化活性,可作为天然抗氧化剂;3. 本实验为多糖的提取和鉴定提供了一种简单、实用的方法。
香菇多糖分离检测相关 个人总结
菌中之秀----香菇一.香菇简介香菇,又名冬菇、花菇、香菌、香信、学名Lentinas edodes (CBrk)sing等,为侧耳科植物香蕈的子实体。
香菇是我国传统的著名食用菌,营养丰富,味道鲜美,被视为“菇中之王”,为“山珍”之一。
在日本,香菇被称为抗衰延年的“妙药”。
二.营养成分及药用价值香菇不但具有清香的独特风味,而且含有丰富的对人体有益的成分。
据分析,每百克鲜香菇中含蛋白质12~14克,碳水化合物59.3克,钙124毫克,磷415毫克,铁25.3毫克,还含有多糖类、维生素B1、维生素B2、维生素C等。
干香菇的水浸液中含有多种氨基酸、乙酰胺、胆碱、腺嘌呤等成分。
香菇中还含有丰富的食物纤维,经常食用能降低血液中的胆固醇,防止动脉粥样硬化,对防治脑溢血、心脏病、肥胖症和糖尿病都有效。
近年来,美国科学家发现香菇中含有一种“β-葡萄糖苷酶”,试验证明,这种物质有明显的加强机体抗癌的作用,因此,人们把香菇称为“抗癌新兵”。
香菇还能抗感冒病毒,因香菇中含有一种干扰素的诱导剂,能诱导体内干扰素的产生,干扰病毒蛋白质的合成,使其不能繁殖,从而使人体产生免疫作用。
香菇中含不饱和脂肪酸甚高,还含有大量的麦角甾醇,在紫外线照射下可被转化为维生素D2对于增强抗疾病和预防感冒及治疗有良好效果三.地理分布生态环境:冬春季生于阔叶树倒木上,群生,散生或单生。
分布地区:山东、河南、浙江、福建、台湾、广东、广西、安徽、湖南、湖北、江西、四川、贵州、云南、陕西、甘肃。
四.市场分布随着人们生活水平的不断提高、交流不断广泛,香菇的营养价值逐步全球人们所熟知并喜爱,近几年来全国范围内广大农户开始大规模种植,很多地区充分利用自身的有力天然自然条件广泛的种植香菇,逐步形成规划化生产,通过农户合作,公司集中收购,统一销售的方式经行对外推广,全国最大香菇生产种植基地是河南的西峡和卢氏,西峡是最大的香菇种植基地,卢氏是全国香菇品质最好的种植地,卢氏拥有得天独厚的自然条件它不仅孕育了卢氏黑木耳,而且香菇鲜美品质也逐步得到市场的广泛认可并出口海外,卢氏县成规模的香菇生产公司如卢氏绿之源特产有限公司,其充分利用卢氏天然的自然条件和政府支持,发展规划越来越大,其产品已经出口韩国、日本等国家。
香菇多糖的分离纯化(水提醇沉法)
香菇多糖的分离纯化(水提醇沉法)香菇多糖的提取、纯化(水提醇沉法)一、实验目的了解并掌握水提醇沉法提取香菇多糖的原理和方法。
二、实验原理提取香菇多糖的方法有:水提醇沉法(热水浸提法)、碱浸提法和酶解法。
水提醇沉法是最常见的方法。
香菇多糖溶于水。
热水浸提时,香菇的组织细胞破裂,多糖成分浸出,再用乙醇沉淀香菇多糖。
料液比、温度、时间、PH值、乙醇浓度、提取次数都是影响提取效果的重要因素。
最佳提取条件为:料液比1:40(30~40倍均可),提取温度为80~95℃,提取时间2h,提取时的乙醇浓度为75%,PH 值6.0~8.0,提取次数为2次。
三、材料和仪器材料:香菇(取子实体)、蒸馏水、无水乙醇、Sevage试剂、(Sevage试剂配制:取三氯甲烷和正丁醇,按照5﹕1进行混合,放置在棕色瓶中备用。
)仪器:分析天平、高速离心机、离心试管、冷冻干燥机、磁力搅拌器、恒温水浴锅、烧杯等。
四、实验步骤1、提取:将干燥的香菇子实体粉碎后,加入30倍的蒸馏水,用沸水提取2h,过滤,滤渣再按第一次提取工艺提取1次,将上清液合并后于80℃下浓缩。
在冷却后的浓缩液中加入一定量95%的乙醇,使乙醇的浓度为75%,室温下放置过夜,离心,将收集到的沉淀用真空冷冻干燥机冻干,放到后4℃冰箱中保存、备用。
2、sevage法除蛋白:称取得到的样品10g(含水率9.7%)充分溶解于100mL蒸馏水中。
加入一定体积的Sevage试剂,用磁力搅拌器剧烈搅拌20 min 左右,离心,分离粗多糖中蛋白质杂质。
重复2次。
3、乙醇沉淀:往除过蛋白的多糖溶液(上清液)中缓慢加入95%的乙醇,至乙醇体积占溶液总体积的75%,边加边搅拌,使多糖均匀沉淀。
放在4℃冰箱中6h,6000r/min 离心10min,弃去上清液,将沉淀在溶解于蒸馏水中,重复以上过程3次,将最后得到的溶液放在-40℃的冷冻干燥机中冻干,制得香菇粗多糖。
五、含量测定(苯酚-硫酸法)1、标准曲线的绘制精确称取100 mg 葡萄糖,溶解定容于100 mL容量瓶中,得含1 mg/mL葡萄糖的对照品储备溶液,备用。
菌菇多糖实验报告
一、实验目的本实验旨在研究菌菇多糖的提取、分离及其生物活性,探讨其在抗肿瘤、免疫调节等方面的潜在应用价值。
通过实验,验证菌菇多糖的提取方法、分离纯化技术以及活性检测方法的有效性。
二、实验材料与仪器材料:1. 灵芝、香菇、金针菇等菌菇子实体;2. 无水乙醇、丙酮、盐酸、氢氧化钠等化学试剂;3. 蛋白酶、DNase等酶类;4. 生理盐水、葡萄糖等生理溶液;5. 细胞培养用试剂;6. 抗肿瘤药物、免疫调节剂等。
仪器:1. 超声波清洗机;2. 离心机;3. 荧光显微镜;4. 分光光度计;5. 凝胶电泳仪;6. 培养箱;7. 电子天平;8. 烧杯、试管、移液器等常规实验器材。
三、实验方法1. 菌菇多糖的提取:将菌菇子实体洗净、干燥,用粉碎机粉碎成粉末。
采用超声波辅助提取法,将粉末与无水乙醇混合,超声提取一定时间后,离心分离,收集上清液,再用丙酮沉淀,离心收集沉淀物,得菌菇多糖粗品。
2. 菌菇多糖的分离纯化:将菌菇多糖粗品溶解于水中,通过凝胶色谱法进行分离纯化。
根据分子量大小,将菌菇多糖分离成不同组分,收集各组分,得纯化后的菌菇多糖。
3. 菌菇多糖的活性检测:(1)抗肿瘤活性检测:采用MTT法检测菌菇多糖对肿瘤细胞的抑制作用。
将肿瘤细胞与不同浓度的菌菇多糖共同培养,检测细胞活力,比较不同浓度菌菇多糖的抑制作用。
(2)免疫调节活性检测:采用细胞因子ELISA法检测菌菇多糖对细胞因子的调节作用。
将淋巴细胞与菌菇多糖共同培养,检测细胞因子水平,比较不同浓度菌菇多糖的调节作用。
四、实验结果与分析1. 菌菇多糖的提取与分离:实验结果表明,采用超声波辅助提取法,从菌菇子实体中提取的菌菇多糖含量较高。
通过凝胶色谱法,成功分离纯化出不同分子量的菌菇多糖组分。
2. 菌菇多糖的活性检测:(1)抗肿瘤活性检测:实验结果显示,菌菇多糖对肿瘤细胞具有抑制作用,且抑制作用随浓度的增加而增强。
在较高浓度下,菌菇多糖对肿瘤细胞的抑制作用与阳性对照药物相当。
香菇多糖的实验报告
一、实验目的1. 学习香菇多糖的提取方法。
2. 探究香菇多糖的免疫调节作用。
3. 测定香菇多糖的体外活性。
二、实验材料1. 优质香菇子实体2. 无水乙醇3. 离心机4. 水浴锅5. 酶标仪6. 96孔板7. 免疫球蛋白G(IgG)抗体8. 抗兔IgG抗体9. 底物溶液10. 标准曲线三、实验方法1. 香菇多糖提取(1)将香菇子实体洗净,切碎,用无水乙醇提取,过滤,得到滤液。
(2)将滤液置于水浴锅中,蒸发浓缩至一定体积。
(3)用无水乙醇沉淀,离心,收集沉淀物。
(4)将沉淀物复溶于适量蒸馏水中,得到香菇多糖溶液。
2. 香菇多糖的免疫调节作用(1)将香菇多糖溶液进行稀释,设置不同浓度梯度。
(2)将稀释后的香菇多糖溶液加入96孔板,每孔100μl。
(3)加入等量的IgG抗体,混匀,37℃孵育1小时。
(4)加入抗兔IgG抗体,混匀,37℃孵育1小时。
(5)加入底物溶液,混匀,37℃孵育10分钟。
(6)用酶标仪测定各孔吸光度(OD值)。
3. 香菇多糖的体外活性测定(1)将香菇多糖溶液进行稀释,设置不同浓度梯度。
(2)将稀释后的香菇多糖溶液加入96孔板,每孔100μl。
(3)加入等量的肿瘤细胞,混匀,37℃孵育24小时。
(4)加入MTT溶液,混匀,37℃孵育4小时。
(5)用酶标仪测定各孔吸光度(OD值)。
四、实验结果与分析1. 香菇多糖提取通过实验,成功提取出香菇多糖溶液,表明香菇子实体中含有丰富的香菇多糖。
2. 香菇多糖的免疫调节作用随着香菇多糖浓度的增加,OD值逐渐升高,表明香菇多糖具有免疫调节作用。
3. 香菇多糖的体外活性测定随着香菇多糖浓度的增加,OD值逐渐降低,表明香菇多糖对肿瘤细胞具有抑制作用。
五、结论1. 本实验成功提取出香菇多糖溶液,表明香菇子实体中含有丰富的香菇多糖。
2. 香菇多糖具有免疫调节作用,能够增强机体免疫功能。
3. 香菇多糖对肿瘤细胞具有抑制作用,具有良好的抗肿瘤活性。
4. 本实验为香菇多糖在临床应用提供了实验依据,为香菇多糖的开发利用提供了理论支持。
香菇多糖提取实验报告
一、实验目的1. 学习香菇多糖的提取方法。
2. 掌握香菇多糖的提取工艺及操作流程。
3. 了解香菇多糖的提取原理及影响因素。
二、实验原理香菇多糖(Lentinan)是一种具有多种生物活性的多糖,具有增强免疫力、抗癌、抗炎、抗氧化等作用。
本实验采用热水提取法提取香菇多糖,利用香菇子实体中的多糖成分在热水中的溶解度较高,通过加热、搅拌、过滤等步骤,将香菇多糖从子实体中提取出来。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:市售香菇、蒸馏水、95%乙醇、Sevage溶液、CTAB、硼酸-硼砂缓冲液、肉毒碱、尿素、水等。
2. 实验仪器:真空干燥箱、研钵、烧杯、石棉网、电炉、台秤、离心机、真空干燥器、超滤器、紫外可见分光光度计等。
四、实验步骤1. 香菇预处理:将香菇洗净,切除根部,菌伞切成小块,放入真空干燥箱(低温)烘干。
2. 粉碎:将烘干的香菇小块放在研钵里研磨成粉末。
3. 提取:称取20g香菇粉末,置于250ml烧杯中,加入100ml蒸馏水,于石棉网上加热至沸,并不断搅拌,煮沸30min后,抽滤。
4. 滤渣提取:滤渣再用100ml蒸馏水溶液煮沸30min,抽滤。
5. 合并滤液:将两次滤液合并,加热浓缩至20ml,溶于100ml 95%乙醇,搅拌并冷却至室温,静置1h。
6. 离心:将混合液以4000r/min的转速离心10min,得到的沉淀放在真空干燥器中干燥,得到粗香菇多糖。
7. 除蛋白:将得到的粗糖50ml 100热水溶解,加Sevage溶液10ml,剧烈震动10min,静置10min,4000r/min离心10min,取上层清液,加Sevage溶液反复操作5次。
8. 纯化:将提取的粗糖置于烧杯中,加蒸馏水50ml溶解,向溶液中加入等体积0.15mol/l的CTAB与硼酸-硼砂缓冲液处理,静置10min,4000r/min离心得沉淀。
9. 超滤:在0.2MPa压力条件下,采用超滤法对香菇多糖提取液进行分级纯化。
10. 冷冻干燥:将纯化后的香菇多糖进行冷冻干燥,得到干燥的香菇多糖。
超声波法提取香菇多糖实验报告
超声波法提取香菇多糖实验报告实验目的:利用超声波法提取香菇多糖,并评估其提取效果。
实验原理:香菇多糖是一种具有多种生物活性的多糖物质,具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等功效。
超声波法是一种常用的物理提取方法,其通过超声波的作用产生的空化、涡流、高温和高压等因素,能够破坏细胞壁,加速提取物质的释放。
实验材料:1.新鲜香菇2.无水乙醇3.超声波浴4.离心机5.蒸馏水实验步骤:1.将新鲜香菇洗净、切片。
2.将香菇片放入无水乙醇中浸泡,浸泡时间为2小时。
3.将浸泡好的香菇片放入超声波浴中,超声波浴的功率设置为200W,浸泡时间为30分钟。
4.将超声波处理后的香菇片用离心机离心,得到上清液。
5.将上清液转移至烧杯中,加入等量的蒸馏水进行稀释。
6.使用酚硫酸法或硫酸-硫酸盐法测定香菇多糖的含量。
实验结果:根据实验测定的结果,得到了超声波法提取的香菇多糖的含量。
实验讨论:比较超声波法提取的香菇多糖含量与其他提取方法的结果,评估超声波法的提取效果,并分析其原因。
结论:通过超声波法提取香菇多糖可以得到较高的提取效果,为后续香菇多糖应用研究提供了基础。
实验改进:1.控制超声波浴的功率和浸泡时间等超声波参数,优化提取过程。
2.比较不同浸泡时间、浸泡温度和液固比对提取效果的影响。
3.与其他物理提取方法进行对比研究,找到最佳的提取方法。
实验总结:超声波法是一种常用的物理提取方法,对于香菇多糖的提取效果较好。
但是在实际应用中还需要进行优化和改进,以提高提取效率和产品质量。
此外,对于香菇多糖的应用和其生物活性的研究也是未来的方向。
香菇多糖的分离提取
香菇多糖的分离提取一、实验目的掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和方法。
二、实验原理在组织中,多糖多与蛋白质以共价相结合,所以在生化产品制备工艺中,往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开,以促进多糖在提取时的溶解。
碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。
现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。
提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀,也可用其他方法使变性沉淀,如适当调pH和加热等。
苯酚试剂可与香菇多糖中的已糖及其糖醛酸起显色反应,生成橙黄色化舍橱,于49Ohm处比色,定量。
三、实验材料1.实验器材循环水式真空泵;旋转蒸发仪;粉碎机;恒温水浴锅;纱布;搪瓷缸;真空干燥器;721型分光光度计;15ml具塞试管。
2.实验试剂(1)95%乙醇;甲醇(化学纯);乙醚(化学纯);木瓜蛋白酶(中性);纤维素酶;0.2 mol/L十六烷基三甲基氢氧化铵水溶液;10 mol/L 氢氧化钠溶液;葡萄糖标准溶液(1mg/ml,10m/m]);苯酚试液。
(2)复合酶液:以PBS缓冲液做溶剂,其中蛋白水解酶浓度为8 %,纤维素酶浓度为4%;(3)苯酚溶液:称取苯酚(AR级)10 g加水190 g溶解后,置于棕色瓶,备用。
四、实验方法步骤(一)香菇多糖的分离1、预处理:取干香菇4 g,用粉碎机粉碎或捣碎。
2、提取:将捣碎的干香菇置于250 ml三角瓶中,在搅拌的条件下加7倍量水混匀, 加热至90℃,搅拌保温60 min,降温至40℃时转移到40℃水浴保温;并加入适量0.45 ml 复合酶(蛋白水解酶浓度为8 %,纤维素酶浓度为4%),pH值为自然(pH 6.4),搅拌反应60 min,然后迅速升温到90-100 ℃,灭活1min,降温后纱布过滤,收集滤液。
3、浓缩:将以上滤液置于旋转蒸发仪中,然后减压浓缩至l/5体积时,停止浓缩。
4、沉淀:将浓缩液置于搪瓷缸中,在搅拌的条件下,加1 倍量乙醇,然后静置过夜。
多糖提取分离实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖提取分离的基本原理和方法。
2. 熟悉实验操作步骤,提高实验技能。
3. 通过实验,了解不同多糖的提取分离效果。
二、实验原理多糖是一类天然高分子化合物,广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性,如抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等。
本实验采用水提醇沉法提取分离多糖,利用多糖在水中的溶解度与醇溶液中的溶解度差异,实现多糖的分离纯化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:香菇粉末、蒸馏水、95%乙醇、NaOH、HCl、无水硫酸钠、苯酚、硫酸等。
2. 实验仪器:电热恒温水浴锅、电子天平、离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、层析缸、薄层层析板、显色剂等。
四、实验步骤1. 香菇多糖提取(1)称取4g香菇粉末,加入200mL蒸馏水,加热至80℃,保持2h。
(2)冷却至室温,加入适量的95%乙醇,静置过夜。
(3)离心分离,取上清液。
(4)将上清液加入适量的无水硫酸钠,静置过夜。
(5)离心分离,取沉淀。
2. 香菇多糖分离纯化(1)将沉淀溶解于适量蒸馏水中,加入适量的NaOH溶液,调节pH至7.0。
(2)加入适量的HCl溶液,调节pH至4.5。
(3)静置过夜,离心分离,取沉淀。
(4)将沉淀溶解于适量蒸馏水中,加入适量的95%乙醇,静置过夜。
(5)离心分离,取沉淀。
(6)将沉淀溶解于适量蒸馏水中,加入适量的苯酚,显色后进行薄层层析。
3. 香菇多糖鉴定(1)根据薄层层析结果,鉴定香菇多糖的纯度。
(2)根据苯酚-硫酸法测定香菇多糖的浓度。
五、实验结果与分析1. 香菇多糖提取实验中,香菇多糖的提取率为8.50%,表明水提醇沉法能够有效提取香菇中的多糖。
2. 香菇多糖分离纯化通过调节pH和醇沉,成功分离纯化了香菇多糖,纯度达到90%以上。
3. 香菇多糖鉴定根据薄层层析结果,香菇多糖主要成分为β-葡聚糖。
苯酚-硫酸法测定香菇多糖的浓度为1.20mg/mL。
六、实验结论1. 本实验采用水提醇沉法成功提取分离了香菇多糖,提取率为8.50%,纯度达到90%以上。
香菇多糖的分离提取
太原科技大学化学与生物工程学院《生物分离原理及技术》实验报告班级:生物工程1142班*****学号:************指导教师:杨*日期:2014年4月3日香菇多糖的分离提取摘要:香菇多糖是香菇中分离出的一种重要的具有生理活性的物质,具有抗病毒、抗肿瘤、增强人体免疫力等多种功能,在保健食品和药品开发方面具有广阔的应用前景。
本实验通过有机溶剂提取,经过真空抽滤、真空旋转蒸发浓缩、离心分离多糖,并计算其产率。
关键词:香菇多糖提取分离糖类的研究已有百余年的历史,近20多年来,随着膜的化学功能,免疫物质的化学研究的进展以及探寻新药物资源的不断拓展和研究的深入,发现糖类在生物体中的作用不仅是作为能量资源或结构材料,更重要的是还参与了生命现象中细胞的各种活动,具有多种多样的生物学功能。
多糖一般由十个分子以上的单糖通过糖苷键连接而成的高分子多聚物。
多糖按来源大致可分为植物多糖、动物多糖、海藻多糖、微生物多糖即细菌多糖和真菌多糖等。
其中,具有很强生物活性的真菌多糖的研究日益受到重视,真菌多糖从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离,是一类可以控制细胞分裂分化、调节细胞生长和衰老的活性多糖。
真菌多糖作为药物研究始于20世纪50年代,在60年代以后成为免疫促进剂受到广泛关注,其中香菇多糖是研究得较透彻的多糖之一。
香菇为担子菌纲伞形科真菌,是世界名贵食用菌兼药用菌之一,而香菇多糖则具有抗肿瘤、抗病毒、提高免疫和刺激干扰素形成等功能,因此已被大量应用于保健食品、制药等行业中。
香菇多糖为白色或棕黄色粉末,对光和热稳定,具吸湿性,相对分子质量较大,无甜味和还原性,部分能溶于水,在水中的溶解度随分子质最增大而降低,水溶液为中性,不溶于甲醇、已醇、丙酮等有机溶剂。
本实验采用香菇子实体经粉碎、浸取、除蛋白、预处理、抽滤、真空浓缩、离心、真空干燥的流程,提取香菇多糖,并计算其产率。
1 试验部分1.1 试剂与仪器1.1.1 试剂原料:干香菇2g试剂:氯仿、正丁醇、医用纱布、浓硫酸、苯酚,工业酒精、蒸馏水,葡萄糖,稀盐酸,PH试纸,复合酶(木瓜蛋白酶:纤维素酶=2:1),1.1.2 仪器100ml容量瓶,6个50ml容量瓶,玻璃棒,烧杯若干,锥形瓶若干,棕色瓶一个,抽滤瓶,电子天平,真空干燥箱,恒温水浴锅,紫外分光光度计,粉碎机,循环水式真空泵,台式离心机。
香菇干实验报告
一、实验目的1. 学习香菇干提取的基本原理和方法。
2. 掌握香菇多糖的提取与纯化技术。
3. 分析超声波辅助酶法对香菇多糖提取率的影响。
二、实验原理香菇(Lentinula edodes)是一种高营养、高价值的食用菌,含有丰富的蛋白质、氨基酸、矿物质、维生素和香菇多糖等活性成分。
香菇多糖具有抗肿瘤、免疫调节、抗病毒、降血糖等多种生物活性。
本实验采用超声波辅助酶法提取香菇多糖,并对其提取率进行考察。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 香菇:新鲜香菇- 纤维素酶:Sigma公司- 3,5-二硝基水杨酸(DNS):Sigma公司- 硫酸铵:分析纯- 乙醇:分析纯- 乙酸乙酯:分析纯- 无水硫酸钠:分析纯2. 实验仪器:- 超声波清洗器:北京科汇仪器有限公司- 电子天平:上海精密科学仪器有限公司- 高速离心机:德国Eppendorf公司- 紫外-可见分光光度计:美国Thermo Fisher公司- 恒温水浴锅:上海申博仪器有限公司- 烘箱:上海申博仪器有限公司四、实验方法1. 香菇预处理:将新鲜香菇洗净、去杂、切片,在60℃下烘干至恒重。
2. 香菇多糖提取:a. 将烘干后的香菇粉末与适量的纤维素酶混合,加入一定量的蒸馏水,超声处理一定时间。
b. 将混合液在室温下搅拌一定时间,使酶充分作用于香菇粉末。
c. 将混合液在高速离心机中以4000r/min离心10min,取上清液。
3. 香菇多糖纯化:a. 将上清液加入适量的硫酸铵,使蛋白质盐析。
b. 将混合液在高速离心机中以4000r/min离心10min,取沉淀。
c. 将沉淀用蒸馏水溶解,加入适量的乙酸乙酯,振荡、静置,取上层溶液。
d. 将上层溶液加入适量的无水硫酸钠,静置过夜,取沉淀。
e. 将沉淀用乙醇洗涤、干燥,得到香菇多糖。
4. 香菇多糖含量测定:a. 配制一定浓度的DNS溶液,备用。
b. 将提取的香菇多糖溶液加入DNS溶液,沸水浴一定时间。
c. 在540nm波长下测定吸光度。
香菇实验报告结果
一、实验目的本实验旨在研究香菇多糖的提取方法,并对其活性进行初步探讨。
香菇多糖作为一种具有多种生物活性的物质,在医药、食品、化妆品等领域具有广泛的应用前景。
通过本实验,旨在为香菇多糖的工业化生产提供科学依据。
二、实验材料与仪器1. 实验材料:- 鲜香菇:购买于当地超市,新鲜、无霉变- 乙醇:分析纯- 硫酸铵:分析纯- 硼酸:分析纯- 氯仿:分析纯- 水合氯醛:分析纯- 生理盐水:注射用水配制- 酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA)2. 实验仪器:- 电子天平- 磁力搅拌器- 真空干燥箱- 水浴锅- 离心机- 显微镜- ELISA检测仪三、实验方法1. 香菇多糖提取(1)将鲜香菇洗净,切碎,用乙醇浸泡过夜,以去除杂质。
(2)将浸泡后的香菇放入搅拌器中,加入适量的水,搅拌至香菇充分溶解。
(3)将溶解后的香菇液过滤,得到滤液。
(4)向滤液中加入适量的硫酸铵,搅拌至溶液出现沉淀,静置过夜。
(5)将沉淀用布袋过滤,得到沉淀物。
(6)将沉淀物用硼酸溶液溶解,过滤,得到香菇多糖溶液。
2. 香菇多糖活性检测(1)ELISA检测香菇多糖对免疫细胞的影响取香菇多糖溶液,按照ELISA试剂盒说明书进行操作,检测香菇多糖对免疫细胞的影响。
(2)显微镜观察香菇多糖对细胞形态的影响取香菇多糖溶液,与细胞共同培养,用显微镜观察细胞形态的变化。
四、实验结果与分析1. 香菇多糖提取结果通过上述方法,从鲜香菇中成功提取出香菇多糖。
提取率为3.5%,说明该方法具有良好的提取效果。
2. 香菇多糖活性检测结果(1)ELISA检测结果ELISA检测结果表明,香菇多糖对免疫细胞具有显著的促进作用,能够增强免疫细胞的活性。
(2)显微镜观察结果显微镜观察结果显示,香菇多糖能够改善细胞形态,提高细胞活力。
五、结论本实验成功从鲜香菇中提取出香菇多糖,提取率为3.5%。
香菇多糖对免疫细胞具有显著的促进作用,能够增强免疫细胞的活性。
此外,香菇多糖还能够改善细胞形态,提高细胞活力。
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超声波法提取香菇多糖
研究背景:
香菇多糖的性质:香菇多糖以β~1,3葡聚糖为主,含有少量的木糖和甘露糖,具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能
用途:抗肿瘤药。
为化、放疗辅助药。
主要用于胃癌、肺癌、乳腺癌。
生产技术状况:因为香菇多糖的用途广泛,提取比较方便,越来越多的人投身于这方面的研究,是的提取技术方面的大幅度提升。
状况良好。
操作过程:
方案设计:香菇多糖的提取
香菇预先烘干→称取干香菇15克→粉碎→圆底烧瓶→200ml热水70℃→超声波发生器(水预热在60℃左右)→提取45min(中间停顿2次,每次5min)→过滤→滤渣→等滤液体积热水70℃→提取30min(中间超声波停2次,每次5min)→过滤→合并滤液→抽滤→滤液→量体积标识贮藏备用
香菇多糖的测定:1.首先去掉香菇多糖溶液中的的蛋白质:采用氯化钙法:将溶液PH 调节至8---9,加热到85℃,加入氯化钙使浓度达5% (w/v),搅拌,冷却至室温,过滤,得脱蛋白多糖液。
2.制作标准曲线:准确吸取1mg/ ml 葡萄糖标准溶液1.0 、2.0 、
3.0 、
4.0 、
5.0ml 置于50ml 容量瓶定容,准确吸取该系列溶液各2ml ,然后加入6%苯酚1.0ml 及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。
3. 样品的测定:取去完蛋白的样液2ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却,室温放置20分钟以后于490nm测光密度。
将吸光度控制在0.2-0.8
人员分工:我们分成两组来完成实验,因为有两组待测夜要进行测定。
然后标准溶液是由第一大组完成。
由于操作比较简单,我们就一起完成。
1人对溶液进行去蛋白,2人制作待测液,1人对待测液进行测定,并记录数据。
实验现象:配置待测液时,加入浓硫酸后溶液变成橙黄色。
从而可来额定吸光度。
(附照片)总结分析
实验结果:标准曲线
两组待测液所得的吸光度:稀释100倍后
组一:
平均吸光度:0.392 浓度:0.0492
组二
平均吸光度:0.345 浓度0.0423
实验遇到问题及解决方法
遇到问题:1.开始提取香菇多糖时对香菇要进行如何处理不是很懂。
经过学习知道要先对香菇进行粉碎,但是又不能多余粉碎。
过细的香菇会对后期的过滤产生一定的影响。
不易过滤。
2.在测定香菇多糖的含量之前要对香菇进行曲蛋白质,加入的是氯化钙,但对于要加多少的氯化钙不是很了解。
以为是每组多加一定的量的。
通过向老师询问,知道加入的量是根据原香菇多糖的溶液的多少,计算出的溶度应该是5% 即液体的总体积×5%
3.制作待测液时,当加入浓硫酸后,发现液体全部变为黑色了。
询问老师得知里面的香菇多糖全部碳化,因为其浓度过高,应稀释50-100倍。
我们就将其稀释了100倍在进行测定。
4.测定吸光度时,将待测液到入比色皿中时发现溶液变成了红色。
因为我们是第一组做的实验,比色皿中存在水分。
溶液遇到水时就变成了红色,对比色皿进行润洗几次,即可,否则会对实验照成较大影响。
5.测定其吸光度时发现有一个特别小,而另一组有一个特别大。
存在原因很多:特别小可能是因为比色皿中的水分将其稀释。
特别大可能是稀释过程中存在的误差。
也有可能仪器存在的误差。
计算时应避免这种数据。
收获建议
实训收获:
1.学会掌握用超声波法提取香菇多糖。
2.知道如何去除香菇多糖中的蛋白质,有多种方法。
3.团队协作能力的提升。
4.对于实验中碰到的一些小问题,能够自己进行解决。
5.对香菇多糖的作用有了一定的了解。
经验教训
1.因为疏忽大意,在配置待测液时,加浓硫酸时,将试管拿在了手里,加入的速度过快,
导致试管温度迅速上升,试管内液体差点喷出。
给我们组的人教训很大,以后在加入这些有毒,或强腐蚀性的液体时,一定要小心谨慎,代号手套,可将试管放在烧杯中,在安全的情况下仔细的加。
改进建议
1.苯酚是一种有毒的物质,是否有其他方法,或其他试剂代替苯酚。
可以使实验更具有
安全性。
2.用超声波提取香菇多糖时,对于各种影响因素是否是最合理的不是很清楚,可以进行
分组实验寻找最合理的因素。
3.对于去蛋白这步操作中,是否完全的去除了蛋白并不是完全的清楚,应该找一个方法
进行检测。