香菇多糖提取实验汇报

超声波法提取香菇多糖

研究背景：

香菇多糖的性质：香菇多糖以β~1，3葡聚糖为主，含有少量的木糖和甘露糖，具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能

用途：抗肿瘤药。为化、放疗辅助药。主要用于胃癌、肺癌、乳腺癌。

生产技术状况：因为香菇多糖的用途广泛，提取比较方便，越来越多的人投身于这方面的研究，是的提取技术方面的大幅度提升。状况良好。

操作过程：

方案设计：香菇多糖的提取

香菇预先烘干→称取干香菇15克→粉碎→圆底烧瓶→200ml热水70℃→超声波发生器（水预热在60℃左右）→提取45min（中间停顿2次，每次5min）→过滤→滤渣→等滤液体积热水70℃→提取30min（中间超声波停2次，每次5min）→过滤→合并滤液→抽滤→滤液→量体积标识贮藏备用

香菇多糖的测定：1.首先去掉香菇多糖溶液中的的蛋白质：采用氯化钙法：将溶液PH 调节至8---9，加热到85℃，加入氯化钙使浓度达5% (w/v)，搅拌，冷却至室温，过滤，得脱蛋白多糖液。

2.制作标准曲线：准确吸取1mg/ ml 葡萄糖标准溶液1.0 、2.0 、

3.0 、

4.0 、

5.0ml 置于50ml 容量瓶定容，准确吸取该系列溶液各2ml ，然后加入6%苯酚1.0ml 及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。

3. 样品的测定：取去完蛋白的样液2ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度。将吸光度控制在0.2-0.8

人员分工：我们分成两组来完成实验，因为有两组待测夜要进行测定。然后标准溶液是由第一大组完成。由于操作比较简单，我们就一起完成。1人对溶液进行去蛋白，2人制作待测液，1人对待测液进行测定，并记录数据。

实验现象：配置待测液时，加入浓硫酸后溶液变成橙黄色。从而可来额定吸光度。（附照片）总结分析

实验结果：标准曲线

两组待测液所得的吸光度：稀释100倍后

组一：

平均吸光度：0.392 浓度：0.0492

组二

平均吸光度：0.345 浓度0.0423

实验遇到问题及解决方法

遇到问题：1.开始提取香菇多糖时对香菇要进行如何处理不是很懂。

经过学习知道要先对香菇进行粉碎，但是又不能多余粉碎。过细的香菇会对后期的过滤产生一定的影响。不易过滤。

2.在测定香菇多糖的含量之前要对香菇进行曲蛋白质，加入的是氯化钙，但对于要加多少的氯化钙不是很了解。以为是每组多加一定的量的。通过向老师询问，知道加入的量是根据原香菇多糖的溶液的多少，计算出的溶度应该是5% 即液体的总体积×5%

3.制作待测液时，当加入浓硫酸后，发现液体全部变为黑色了。

询问老师得知里面的香菇多糖全部碳化，因为其浓度过高，应稀释50-100倍。我们就将其稀释了100倍在进行测定。

4.测定吸光度时，将待测液到入比色皿中时发现溶液变成了红色。

因为我们是第一组做的实验，比色皿中存在水分。溶液遇到水时就变成了红色，对比色皿进行润洗几次，即可，否则会对实验照成较大影响。

5.测定其吸光度时发现有一个特别小，而另一组有一个特别大。

存在原因很多：特别小可能是因为比色皿中的水分将其稀释。特别大可能是稀释过程中存在的误差。也有可能仪器存在的误差。计算时应避免这种数据。

收获建议

实训收获：

1.学会掌握用超声波法提取香菇多糖。

2.知道如何去除香菇多糖中的蛋白质，有多种方法。

3．团队协作能力的提升。

4．对于实验中碰到的一些小问题，能够自己进行解决。

5.对香菇多糖的作用有了一定的了解。

经验教训

1.因为疏忽大意，在配置待测液时，加浓硫酸时，将试管拿在了手里，加入的速度过快，

导致试管温度迅速上升，试管内液体差点喷出。给我们组的人教训很大，以后在加入这些有毒，或强腐蚀性的液体时，一定要小心谨慎，代号手套，可将试管放在烧杯中，在安全的情况下仔细的加。

改进建议

1.苯酚是一种有毒的物质，是否有其他方法，或其他试剂代替苯酚。可以使实验更具有

安全性。

2.用超声波提取香菇多糖时，对于各种影响因素是否是最合理的不是很清楚，可以进行

分组实验寻找最合理的因素。

3.对于去蛋白这步操作中，是否完全的去除了蛋白并不是完全的清楚，应该找一个方法

进行检测。