弗氏佐剂
05生物制品的佐剂保护剂灭活剂
(二) 白油Span佐剂
用 轻 质 矿 物 油 ( 白 油 ) 作 油 相 ， 用 Span-80( 去 水 山 梨 醇 单 油 酸 酯 ) 或 Span-85(去水山梨醇三油酸酯)及吐温-80(Tween-80)(聚氧乙烯脱水山梨 醇单油酸酯)，作为乳化剂制成的油乳佐剂，是当前兽医生物制品中最常 用最有效的佐剂之一。白油佐剂的配制方法很多，比例互有差别，仅举一 例作为参考，即：
存
化十八烷基三甲铵。
型
胺及其类似物：癸胺、癸胍及其他。
核酸及类似物：DNA、RNA、低核苷酸、多聚核苷
酸、环磷酸腺苷等。
药物：左旋咪唑及蜂胶等
佐剂的作用机理
各种佐剂的作用机理不尽相同，但概括起来有如下方面
1．对抗原的作用
(1) 增加抗原分子的表面积 某些佐剂颗粒表面可以吸附许多抗原，使抗原表面积明显
这些细胞增殖发挥更大作用。有些佐剂，如短小棒状杆菌、百日咳杆菌和 葡聚糖等，主要作用于巨噬细胞，使之激活，大量增殖分化，释放白细胞 介素-1等细胞因子，再去活化T细胞和B细胞。被激活的T细胞进一步分泌 各种细胞因子，进而促进B细胞和巨噬细胞功能。 对T细胞的作用
一些佐剂的主要作用对象是T细胞，通过T细胞的介导，增强各种免 疫功能。胸腺素、分枝杆菌及其有关成分如卡介苗及MDP等、香菇多糖、 异丙肌昔、左旋咪吐、二乙胺基二硫代甲酸钠（DTC）等均为T细胞增强 剂。它们作用于胸腺细胞系统，诱导T细胞前体细胞的产生，T细胞大量增 殖分化，形成效应淋巴细胞，产生淋巴因子。
被分散的物质称为分散相，承受分散的液体称为连续相，这两相间的 界面活性物质称为乳化剂。当以水为分散相，以加有乳化剂的油为连续相
时，制成的乳剂为油包水型(W/O)，反之为水包油型(O/W)。 油包水型油乳佐剂粘稠，在机体内不易分散，抗原从乳剂中缓慢释
sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书
sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书生物商城 / 2011-02-08一、定义：弗氏佐剂（Freundadjuvant）,这是目前最常用于动物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植物油）等量混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温80）制成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。
如在不完全佐剂中加入分枝杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐剂。
二、制备方法：弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。
不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。
一般首次注射时用1／2体积FCA 加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。
如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。
因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。
抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。
一般是每兔（约2kg重）或每羊（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。
佐剂与抗原乳化可按如下方法进行：（1）研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。
待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。
本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。
（2）注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净空气，然后交替推动针管，直至形成粘稠的乳剂为止。
弗氏完全佐剂(CFA)诱导的大鼠关节炎模型筛选
弗氏完全佐剂（CFA）诱导的大鼠关节炎模型筛选服务类风湿性关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎为特征的自身免疫性疾病，其发病机制十分复杂，迄今尚未完全阐明。
佐剂性关节炎(从)模型此模型是Freund于20世纪50年代创立的，又称福氏佐剂关节炎，福氏佐剂分为完全佐剂(cFA)和不完全佐剂(IFA)。
其机制是结核杆菌致关节炎抗原为65 kD 热休克蛋白(HSP)，RA病人软骨内具有与65kD HSP相似的蛋白多糖桥联蛋白抗原成分，FCA 注入激活T细胞，激活T细胞参与RA发病机制。
原发病变主要表现为致炎局部的炎症反应，续发病变一般于致炎后10—20d出现，约20d达到高峰，病理改变为滑膜下组织炎症，滑膜增生，血管翳形成，软骨破坏。
4周后，关节红肿减退，骨质减少，新骨形成，关节间隙变窄，形成不可逆的关节改变。
从大鼠的关节组织病理学及血中变化与人RA相似。
同时，对其免疫学机制研究发现，此模型存在明显的细胞免疫异常，为一种典型的免疫性炎症模型。
从制作方法简单，可广泛应用于多种动物，便于研究者选择应用。
RA的病因与发病机制目前尚未完全阐明，但随着细胞分子学和免疫学的深入研究，RA 动物模型的建立，发现了细胞因子、TH1／TH2细胞平衡、性激素等在RA的发病中起重要作用。
其中人们已证实TNF-a及IL-lβ在RA进展中起着决定性作用。
TNF-a是机体炎症反应与免疫应答的重要调节因子，能刺激滑膜细胞和软骨细胞合成PGE2和胶原酶，导致关节局部滑膜炎症和软骨组织破坏，TNF-a既能刺激IL-Iβ，IL-6，IL-8的产生，又能刺激其自身的合成，在RA的细胞因子网络中起中心作用；IL-1分为IL-1a和IL-lβ，主要由巨噬细胞分泌，内皮细胞和淋巴细胞也能产生，能诱导一系列全身的炎症反应，包括引起发热和消瘦，合成急性期蛋白，也可对软骨和骨基质代谢产生局部作用。
TNF-a主要导致RA初期的关节肿胀，而软骨的侵蚀则由IL-Iβ介导且和免疫复合物有协同效应。
弗氏佐剂的成分
弗氏佐剂的成分
弗氏佐剂，也称沙努尔霉素佐剂或者啊水间毒素佐剂，是一种用于驱除口腔疾病的联合药
物体系。
弗氏佐剂由三种组分组成：氨酚羟亚胺、异丙酚和马来酰亚胺链霉素，它们都是
有效的抗菌成分，而它们的合成可以帮助人们更好地祛病去疾，让病人由口腔病痛中解脱
出来。
首先，氨酚羟亚胺是一种传统的抗菌药，它具有抗真菌和抗细菌的作用，可以有效地抑制
细菌的生长，产生一定的抗菌活性。
在使用氨酚羟亚胺的弗氏佐剂中，它的作用是有效抑
制细菌生长，针对病菌进行杀伤，同时也可以减少炎症以减轻牙痛，并使牙齿更易于清洁、保养。
其次，异丙酚是一种常用的抗菌剂，它可以阻断细菌的新陈代谢，从而有效地达到抗菌的
目的，也有助于消除口腔炎症。
在弗氏佐剂中，异丙酚可以起抑制细菌生长，抑制皮肤及
口腔疾病发展的作用，进一步增强口腔疾病的治疗效果。
最后，马来酰胺链霉素是一种新型的抗生素，它可以有效地抑制细菌的生长，达到杀伤细
菌的效果。
弗氏佐剂中使用的马来酰胺链霉素可以抑制放线菌科、链球菌科和变形菌科的
细菌，有效抑制口腔疾病菌的繁殖，从而帮助患者更快恢复健康。
弗氏佐剂的三种组分，可以有效地降低细菌对口腔疾病的侵害，减轻病情，使口腔疾病得
到有效的治疗。
它们的有效组合和使用，可以使病人的口腔更快恢复，保持个人口腔卫生，让你的口腔洁净健康，使你湛然如新！。
弗氏完全佐剂(complete
弗氏完全佐剂（complete freund’s adjuvant, CFA）弗氏不完全佐剂（incomplete freund’s adjuvant, IFA）佐剂的作用：1．形成抗原储存库。
2．形成局部肉芽肿。
3．刺激淋巴细胞增殖和分化。
二、抗体特异性体液免疫是由抗体介导的免疫。
是人和动物的B细胞在抗原刺激下转化成浆细胞，并由浆细胞产生的具有与抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白（Ig）。
存在于血液、淋巴液和组织液中。
（一）抗体的种类与结构抗体的种类多，血清中可有千百种不同的抗体，分为五种，已统一命名为IgG、IgM、IgA、IgD相IgE。
五种免疫球蛋白的分子结构基本相似（P257图9—9）说明。
(1)每个单体由两条长链又称重链(H链)及两条短链又称轻链(L链)构成。
各链之间以二硫键(S—S)相连接，两条L链位于两条H链所形成的Y形结构的两侧。
(2) 重链：每条H链分子量为55000，由420--460个氨基酸组成，重链共分四段，各段约含110个氨基酸。
靠近氨基(N—端)的第一段为重链可变区(V区)，简称VH，其余三段为恒定区(简称CH)，以CH1、CH2、CH3表示。
重链有γ、α、μ、δ、ε五种类型，每种抗体只能有一种类型的重链。
(3)轻链：分子量为22000，由2l3—216个氨基酸组成。
每条轻链分为两段：轻链可变区(简称v L)和轻链恒定区(简称C L)。
V L区有109个左右的氨基酸，CL区有l04个左右氨基酸。
轻链有两种类型，κ链和λ链。
一种抗体只能有同一种轻链。
(4)可变区：重链与轻链的可变区共同构成抗体结合价(即抗原结合簇部位)，与抗原呈特异性结合。
一个单体抗体分子具有两个结合抗原的部位，故为二价。
(5)用木瓜蛋白酶消化抗体，可得到三个片段：两个抗原结合片段，称为Fab，一个可结晶片段Fc；用胃蛋白酶消化，得到一个二价抗体活性部分，称F(ab’)2和两个剩余的小分子片段Fc’,不具任何生物活性。
弗氏佐剂使用方法
弗氏佐剂使用方法弗氏佐剂是一种广泛应用于实验动物免疫接种的添加剂，能够增强疫苗的免疫原性，提高疫苗的效果。
在使用弗氏佐剂时，需要注意以下使用方法：一、弗氏佐剂的分类与选择1. 根据成分可分为油剂弗氏佐剂和水剂弗氏佐剂。
油剂弗氏佐剂主要包括油酸钠和胆固醇等，适用于油溶性抗原；水剂弗氏佐剂主要包括氢氧化铝和磷酸铝等，适用于水溶性抗原。
2. 根据剂型可分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂主要适用于初次免疫，添加比例一般为0.5%-5%；完全弗氏佐剂适用于加强免疫，添加比例一般为1%-5%。
二、弗氏佐剂的使用步骤1.准备抗原：根据实验需要，制备相应浓度和纯度的抗原溶液。
2.配制弗氏佐剂：根据实验需求，将弗氏佐剂与抗原溶液混合，充分搅拌，确保抗原充分吸附。
3.免疫接种：将配制好的弗氏佐剂-抗原混合物接种到实验动物体内，如小鼠、大鼠等。
接种部位可选择腹腔、皮下、肌肉等。
4.观察与监测：在免疫过程中，定期观察实验动物的生长状况、疫苗反应等，以评估疫苗效果。
三、弗氏佐剂的注意事项1.严格无菌操作：弗氏佐剂在使用过程中，应确保无菌操作，避免细菌污染。
2.适量使用：根据实验动物的体重、年龄等因素，合理控制弗氏佐剂的用量，避免过量导致不良反应。
3.观察动物反应：在免疫过程中，密切观察实验动物的反应，如食欲、精神状态等。
一旦发现异常，应及时处理。
4.储存条件：弗氏佐剂应存放在密封容器中，置于阴凉、干燥处，避免高温、潮湿。
总之，弗氏佐剂在实验动物免疫接种中发挥着重要作用。
正确选用和使用弗氏佐剂，可以提高疫苗的免疫效果，为实验研究奠定基础。
在使用过程中，要严格遵循使用方法，注意观察实验动物的反应，确保实验安全顺利进行。
不同浓度的完全弗氏佐剂影响大鼠疼痛行为的观察
不同浓度的完全弗氏佐剂影响大鼠疼痛行为的观察目的：观察脚掌注射不同浓度完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant，CFA）产生的不同强度的伤害刺激对大鼠痛感受和痛情绪反应程度的影响。
方法：福尔马林诱导的条件性位置回避（conditioned place avoidance，CPA）的行为测试近来被用于评估痛情绪反应。
本实验采用另一种炎性致痛物质CFA在大鼠的脚掌皮下注射使之产生持续性炎性痛，诱导大鼠产生条件性位置回避（conditioned place avoidance，C-CPA）反应。
根据在大鼠的脚掌皮下注射不同浓度的CFA将大鼠分为正常（Naive）组，生理盐水（NS）组，1/5 CFA组，1/3 CFA组，1/2 CFA组，之后分别检测各组大鼠的热缩足潜伏期（paw withdrawal latency，PWL）和C-CPA反应。
结果：1/3 CFA组和1/2 CFA组匹配后热缩足潜伏期与匹配前比较，均明显减小，即痛阈下降，且两组匹配前与匹配后的差值与生理盐水组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）；1/3 CFA组的下降值小于1/2 CFA组（P＜0.05）；1/2 CFA组在匹配后痛侧停留的时间明显缩短，且回避分数与生理盐水组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论：CFA所诱导的PWL 反应和CPA反应的程度与CFA的注射浓度有关，从行为上证实大鼠痛情绪与痛感受的产生存在不同的机制。
慢性疼痛是一个世界性的医疗难题，它既是与大多数疾病相伴生的临床症状，同时本身也是一种疾病[1]。
患者除了遭受疼痛造成的肉体伤害之外，其导致的心理、精神伤害和社会并发症也成了一个重大的负担[2-3]。
国际疼痛协会对疼痛的最新定义为“疼痛是一种与组织损伤或潜在的组织损伤相关的感觉、情感、认知和社会维度的痛苦体验”[4]。
这一定义将疼痛分为感觉、情感、认知和社会四个维度，其中痛感觉主要感受疼痛刺激的性质、位置、强度等，痛情绪则指伤害性刺激引起的焦虑、恐惧、厌恶等情绪反应[5]。
弗氏完全佐剂(CFA)诱导的大鼠关节炎模型筛选
弗氏完全佐剂（CFA）诱导的大鼠关节炎模型筛选服务类风湿性关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎为特征的自身免疫性疾病，其发病机制十分复杂，迄今尚未完全阐明。
佐剂性关节炎(从)模型此模型是Freund于20世纪50年代创立的，又称福氏佐剂关节炎，福氏佐剂分为完全佐剂(cFA)和不完全佐剂(IFA)。
其机制是结核杆菌致关节炎抗原为65 kD 热休克蛋白(HSP)，RA病人软骨内具有与65kD HSP相似的蛋白多糖桥联蛋白抗原成分，FCA 注入激活T细胞，激活T细胞参与RA发病机制。
原发病变主要表现为致炎局部的炎症反应，续发病变一般于致炎后10—20d出现，约20d达到高峰，病理改变为滑膜下组织炎症，滑膜增生，血管翳形成，软骨破坏。
4周后，关节红肿减退，骨质减少，新骨形成，关节间隙变窄，形成不可逆的关节改变。
从大鼠的关节组织病理学及血中变化与人RA相似。
同时，对其免疫学机制研究发现，此模型存在明显的细胞免疫异常，为一种典型的免疫性炎症模型。
从制作方法简单，可广泛应用于多种动物，便于研究者选择应用。
RA的病因与发病机制目前尚未完全阐明，但随着细胞分子学和免疫学的深入研究，RA 动物模型的建立，发现了细胞因子、TH1／TH2细胞平衡、性激素等在RA的发病中起重要作用。
其中人们已证实TNF-a及IL-lβ在RA进展中起着决定性作用。
TNF-a是机体炎症反应与免疫应答的重要调节因子，能刺激滑膜细胞和软骨细胞合成PGE2和胶原酶，导致关节局部滑膜炎症和软骨组织破坏，TNF-a既能刺激IL-Iβ，IL-6，IL-8的产生，又能刺激其自身的合成，在RA的细胞因子网络中起中心作用；IL-1分为IL-1a和IL-lβ，主要由巨噬细胞分泌，内皮细胞和淋巴细胞也能产生，能诱导一系列全身的炎症反应，包括引起发热和消瘦，合成急性期蛋白，也可对软骨和骨基质代谢产生局部作用。
TNF-a主要导致RA初期的关节肿胀，而软骨的侵蚀则由IL-Iβ介导且和免疫复合物有协同效应。
弗氏完全佐剂对小鼠细胞免疫功能的影响
弗氏完全佐剂对小鼠细胞免疫功能的影响弗氏完全佐剂(CFA)是一种常用免疫佐剂，其提高体液免疫应答的作用已被公认，而对细胞免疫应答的影响鲜有报道。
作者测定了一些注射佐剂后小鼠的细胞免疫应答指标，同时测定体液免疫指标对CFA剂量作一监测，报告如下。
1材料和方法1.1实验材料1.1.1实验动物昆明种小鼠24只，由本校实验动物室提供。
1.1.2主要试剂弗氏完全佐剂，为sigma公司生产。
1.2实验方法1.2.1CFA对小鼠产生抗卵黄抗体水平的影响昆明种小鼠24只，体质量18～22 g，雌雄随机分组，8只/组，以5倍稀释鸡卵黄为抗原。
免疫方法及程序见表1。
表1卵黄抗原免疫程序组别注射物第1天第4天第10天佐剂组佐剂(ml)0.2抗原(ml)0.20.2非佐剂组抗原(ml)0.20.2空白对照组生理盐水(ml)0.20.20.2注：以上均为背部皮下多点注射末次注射7 d后，将小鼠眼球取血并分离血清，用ELISA方法测定待检血清中抗卵黄抗体：鸡卵黄抗原5倍稀释包板，待检血清1∶10稀释，HRP-SPA按说明书配制。
1.2.2CFA对小鼠足跖肿胀的影响实验动物及免疫程序同表1，末次注射6 d 后每只小鼠右后掌皮下注射卵黄(5倍稀释)0.02 ml/只致敏，第2天测量其足的后掌至踝关节体积(ml)，并与小鼠自身左后足体积作对照，计算足肿率，如下：足肿率(%)=免疫后右足体积-自身左足体积自身左足体积×100%1.2.3CFA对小鼠碳粒廓清实验的影响昆明种小鼠16只，体质量18～22 g，雌雄随机分组，分为佐剂组与对照组，8只/组。
佐剂组小鼠腹腔注射CFA 0.2 ml/只，对照组腹腔注射无菌生理盐水0.2 ml/只，1 w后给2组小鼠分别经尾静脉注射20%墨汁0.2 ml/只，注射后1 min与5 min于小鼠眼球采血20 μl，置于2.0 ml 0.1%碳酸钠溶液中混匀，于680 ml波长下测定A值，并按如下公式计算K值：K=logA5-logA1[]T5-T1=[SX(]logA5/A1[]4[SX)]1.3统计分析数据均采用SPSS统计软件进行组间t检验，方差不齐时行t′检验。
弗氏佐剂说明书
弗氏佐剂说明书
弗氏佐剂（Freund's adjuvant）是一种常用的免疫佐剂，用于增强抗原的
免疫原性，常用于制备疫苗和进行免疫学研究。
以下是弗氏佐剂的基本信息和使用说明：
1. 成分：弗氏佐剂主要包含羊毛脂和液体石蜡，有时还会加入卡介苗（BCG）或其他微生物成分。
2. 用法：在免疫动物前，将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，制备成“油包水”乳状液。
佐剂和抗原体积比一般为1：1。
制备好的乳化剂可用于免疫
注射。
3. 作用机制：弗氏佐剂的作用机制包括延缓抗原的释放，保护抗原不被水解，延长抗原在体内滞留时间，有利于高亲和力抗体的产生。
此外，弗氏佐剂还能活化巨噬细胞并促进巨噬细胞与T细胞的相互作用，对淋巴细胞有特异性加强刺激的作用。
4. 注意事项：
弗氏佐剂对动物有一定的毒性，使用时应严格按照说明书操作，避免直接接触皮肤或吸入。
储存和运输过程中应避免阳光直射和高温，选择阴凉干燥处存放。
弗氏佐剂含有羊毛脂等成分，可能会引起过敏反应，使用前应了解受试者的过敏史，如有过敏情况应及时处理。
注射后可能会引起局部和全身的不良反应，如注射部位红肿、炎症等，应密切观察受试者的反应情况，及时处理。
5. 安全性：弗氏佐剂具有一定的安全性，但也有一定的副作用和不良反应，如局部炎症、全身发热等。
因此，在实验过程中应严格控制剂量和使用条件，确保安全有效。
总之，在使用弗氏佐剂时，应严格按照说明书操作，注意安全性和有效性。
如有任何疑问或需要更多帮助，请咨询专业人士。
完全弗氏佐剂预防自身免疫性糖尿病机理的初步研究
的聚集， 从而对胰岛局部 Ｂ 细胞起到免疫保护作用。保存了胰岛 ｐ 细胞， 明显减轻化学毒索引起胰岛炎， 预防了糖尿病
的发生
关键词 Ｉ 型糖尿病 ； Ｔ细胞； Ｆ ＣＡ
中图分类号 Ｒ ５７１ ８ ． 文献标识码 Ａ 文章 编号 １ ０ ０ ８ （０ ７０ ０ ２ ０ ０ ４— １ ８ ２ ０ ） １— ０ ５— ３
ｉ ｄ ｃ ｏ Ｄ ｏ ｔ ｓ ｎ ｅ ｅ ｆ Ｍ ｆ ｈ ｅ ｄ ｎ ｅ
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方法注入等量的生理盐水）２ ， ｗ后均予以 Ｓ Ｚ ４ ｇ ｋ ・ １×５ ） Ｔ （０ｍ ・ ｇ ｄ 注射， ｄ 以血糖＞１． ｍｏ Ｌ ６７ｍ ｌ 诊断为糖尿病， ／ 观 察糖尿病的发病率， 并在 Ｓ Ｚ Ｔ 注射后 ６ ｗ处死小鼠， 观察胰岛 ８ 细胞 和 Ｔ细胞 亚群情况。结果 ： ｗ后糖尿病发病率 ４
兽医生物制品学实验教学讲义
兽医生物制品学实验教学讲义实习一、弗氏佐剂的制备目的及要求掌握弗氏佐剂的制备方法及检验方法。
内容与方法弗氏佐剂是目前最常用的油乳佐剂，根据佐剂中加入或不加入死结核杆菌可分为弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂。
在灭活疫菌苗的制备过程中常用油乳佐剂，即“弗氏不完全佐剂”。
下面我们主要介绍弗氏不完全佐剂的制备方法。
一、材料和设备：1、材料：7#白油、硬脂酸铝、司班——80、吐温——80、蒸馏水等。
2、设备：乳化泵、分析天平、离心机（4000r/min）、恒温培养箱、粘度计、高压灭菌锅、量杯、量筒、烧杯、试管、吸管（出液口径2mm）等。
二、方法：使用不同乳化剂和不同的配合比例及乳化方法，决定了制备乳剂的性状和稳定性。
疫苗生产中主要有两种基本方法。
1、剂在水中法此法将乳化剂直接溶于水中，在激烈搅拌下将油加入，可直接生成O/W 乳剂。
若欲得W/O型，可继续加入油，直到发生变型。
该法通常用匀浆器或胶体磨，高速搅拌而得到较好的乳剂。
2、剂在油中法此法将乳化剂溶于油相，将油相直接加入水相中得O/W，如水相直接加入油相，得到W/O型，如欲得O/W，继续加入至变型。
该法制成的乳剂，一般均匀颗粒直径在0.5um左右，比较稳定。
3、油乳剂配方免疫实验动物用的佐剂配方：7#白油85ml，司班——80 15ml混合后经除菌过滤而成为弗氏不完全佐剂（FIA）；如向其中加入0.5mg/ml死结核杆菌即为弗氏完全佐剂（FCA）。
使用时，将含抗原的水相，与上述任一佐剂等量混合，用力振摇即可成为均匀的乳剂。
疫苗生产用乳剂配方：7#白油90ml，司班——80 10ml，混合后加2ml的吐温——80和1.5g的硬脂酸铝，经高压灭菌后备用，使用前将配好的油佐剂与抗原水相1∶1混合，强力振摇，或通过胶体磨搅拌即可制成性状良好的乳剂疫苗。
大量生产乳剂疫苗时，可将94%白油与6%司班——80混合后加入2%的硬脂酸铝，经灭菌后为油相；抗原液加入2%的吐温——80为水相。
免疫标准操作步骤
利用弗氏佐剂免疫制备多克隆抗体方法材料：兔子、大鼠、小鼠或恰当种系的仓鼠完全弗氏佐剂（CFA）不完全弗氏佐剂（IFA）PBS50ml一次性聚丙烯离心管玻璃注射器两端开口接头100ml烧杯步骤：1、采实验动物血液放入离心管中，制血清，供检验用。
2、CFA用前需摇晃，将沉淀的卡介苗结核杆菌摇起。
2ml 0.25—0.5mg/ml纯化的蛋白抗原（用PBS溶解）与2ml CFA在4℃混合。
（足够免疫4只兔子或80只小鼠）。
不要用Tris 缓冲液作为蛋白质抗原的溶剂。
3、用玻璃注射器将CFA与抗原混合，尽量赶出气泡，如图将两针管接起，来回抽动，将佐剂与抗原混合。
多次将其置于冰上，尽量保证温度在4℃左右。
当混合物变白时，在100ml烧杯中加入冷水，将白色混合物取一些放在水上，如不散去，则乳化完成。
4、将所有混合物全部置于一个针管中。
5、对兔子进行皮下多点（6—8点左右）注射，小鼠则进行腹腔注射。
如果抗原样品及其珍贵，可将未用完的混合物置于4℃保存，用前再次乳化，否则，剩余的混合物予以丢弃。
6、10—14天后取血样制血清，留作检测用。
7、免疫2周后，进行二次免疫，采用IFA，乳化方法同CFA乳化方法。
8、一周后取血样制血清，留作检测用。
再次免疫，同于二次免疫。
9、一周后取血样制血清，留作检测用。
如果效果不好，可对实验动物进行静脉注射抗原（必须滤除细菌，不加佐剂，剂量减半甚至更少，要根据不同蛋白制定剂量。
）。
直接注射抗原容易造成动物死亡，须密切观察其状态。
3—7天后免疫结束。
弗氏不完全佐剂,弗氏完全佐剂
弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂一、定义：弗氏佐剂（Freundadjuvant）,这是目前最常用于动物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植物油）等量混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温80）制成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。
如在不完全佐剂中加入分枝杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐剂。
二、区别：弗氏不完全佐剂产品简介：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，含结核分枝杆菌的细胞壁成分。
佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。
弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。
为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐剂用于加强免疫。
弗氏完全佐剂产品简介：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。
弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。
佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。
三、制备方法：弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。
不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。
一般首次注射时用1／2体积FCA加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。
如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。
因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。
抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。
一般是每兔（约2kg重）或每羊（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。
完全弗氏佐剂的成分
完全弗氏佐剂的成分
完全弗氏佐剂是一种用于预防和治疗动物疾病的佐剂，它由多种
成分组成。
以下是完全弗氏佐剂的成分以及其作用。
1. 矿物质与微量元素：矿物质和微量元素在动物体内发挥着重
要的生理作用，例如在体内协调传递神经信息、维持酸碱平衡。
此外，还参与多种代谢过程和酶反应，帮助机体增强免疫力。
2. 维生素：动物体内需要多种维生素，如A、C、D、E、K和B
族维生素。
维生素A有助于提高免疫功能和增强视力，维生素D有利
于钙和磷的吸收和利用，维生素B族则是合成和酵解蛋白质和糖类重
要的辅酶。
3. 氨基酸：氨基酸是蛋白质合成的主要原料，同时还能促进生
长和增强免疫力，对于动物的生长和健康至关重要。
4. 植物提取物：植物提取物是从各种植物中提取的天然化合物，具有多种生化活性，例如抗氧化、抗炎和抑菌作用等。
5. 生物活性成分：这些成分能够直接参与机体生化代谢反应，
提高机体免疫功能，促进生长发育，减轻疲劳和改善身体健康。
最后，完全弗氏佐剂除了以上基本成分外，还可能添加其他成分，以适应不同种类动物和不同的生长期需求。
这些成分可以发挥协同作用，提高佐剂的治疗效果，对于保障动物健康至关重要。
弗氏完全佐剂制备
弗氏完全佐剂制备【一、弗氏完全佐剂的概述】弗氏完全佐剂（FCA，Freund"s Complete Adjuvant）是一种广泛应用于疫苗研究和动物实验的佐剂。
它可以增强疫苗的免疫原性，诱导机体产生更强的免疫应答，从而提高疫苗的保护效果。
弗氏完全佐剂由抗原、免疫剂和辅助剂组成，其制备方法相对简单，但在操作过程中需要注意一些细节。
【二、弗氏完全佐剂的制备方法】1.原材料：弗氏完全佐剂的主要原材料包括抗原、免疫剂和辅助剂。
抗原可以是蛋白质、多糖或核酸等，免疫剂通常为氢氧化铝（Al(OH)3），辅助剂主要有油酸、石蜡油等。
2.操作步骤：（1）将抗原与氢氧化铝混合，充分搅拌，使其形成均匀的悬浊液；（2）将石蜡油与水混合，加热至充分溶解，然后与氢氧化铝抗原混合物混合，再次搅拌均匀；（3）将混合物冷却至室温，缓慢加入油酸，持续搅拌，直至形成稳定的乳状液；（4）用滤纸过滤，除去杂质，得到弗氏完全佐剂。
3.注意事项：（1）抗原与氢氧化铝的比例要适当，过低免疫原性不足，过高则会导致佐剂性能不稳定；（2）在搅拌过程中，速度不宜过快，以免产生气泡，影响最终产品的质量；（3）加入油酸时，要缓慢均匀地加入，以免出现油水分离现象；（4）制备过程中需严格无菌操作，避免细菌污染。
【三、弗氏完全佐剂的应用领域】弗氏完全佐剂广泛应用于疫苗研究、免疫学实验和生物制品研发等领域。
通过加入弗氏完全佐剂，可以提高疫苗的免疫原性，增强机体对病原体的抵抗力，从而预防和控制多种疾病。
【四、弗氏完全佐剂的优点与局限性】优点：1.免疫原性强，能有效提高疫苗的保护效果；2.制备方法简单，易于操作；3.适用范围广泛，几乎可用于所有抗原的免疫实验。
局限性：1.有一定的副作用，可能导致注射部位疼痛、红肿等；2.对于某些抗原，可能出现过敏反应；3.储存和运输条件要求较高，不耐高温，易受微生物污染。
【五、总结】弗氏完全佐剂作为一种重要的疫苗佐剂，在疫苗研究和动物实验中具有广泛的应用。
弗氏完全佐剂制备
弗氏完全佐剂制备摘要：1.弗氏完全佐剂的定义与分类2.弗氏完全佐剂的主要成分3.弗氏完全佐剂的制备方法4.弗氏完全佐剂的作用与应用5.弗氏完全佐剂的注意事项正文：一、弗氏完全佐剂的定义与分类弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效地诱导产生高滴度的抗体。
它含有结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。
根据成分的不同，弗氏佐剂分为完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂。
完全弗氏佐剂含有杀死的结核分枝杆菌，而不完全弗氏佐剂则不含细菌。
二、弗氏完全佐剂的主要成分弗氏完全佐剂的主要成分包括不可代谢的油（石蜡油和甘露醇单油酸酯）以及杀死的结核分枝杆菌。
其中，油滴中免疫原的持续释放是佐剂活性的来源，能够刺激局部免疫反应。
三、弗氏完全佐剂的制备方法弗氏完全佐剂的制备过程较为简单。
首先，将石蜡油和甘露醇单油酸酯混合，形成油包水的乳浊液。
然后，将杀死的结核分枝杆菌加入乳浊液中，即可得到完全弗氏佐剂。
四、弗氏完全佐剂的作用与应用弗氏完全佐剂的作用主要是通过刺激局部免疫反应，增强抗原的免疫效果。
它被广泛应用于疫苗制备和免疫学研究中，尤其是结核病疫苗的制备。
五、弗氏完全佐剂的注意事项1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗和食品及药品行业。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴手套操作。
在使用过程中，应注意避免吸入或接触到眼睛和皮肤。
3.实验动物应按照相关规定进行饲养和操作，确保实验结果的可靠性。
总之，弗氏完全佐剂是一种具有良好免疫效果且制备简单的佐剂，广泛应用于疫苗制备和免疫学研究领域。
弗氏佐剂
弗氏佐剂(Freundadjuvant),这是目前最常用于动物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂(石蜡油或植物油)等量混合，再加乳化剂(羊毛脂或叶吐温80)制成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。
如在不完全佐剂中加入分枝杆菌(如死卡苗)则称为完全弗氏佐剂。
二、制备方法：弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。
不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂(FCA)。
一般首次注射时用1／2体积FCA加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。
如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。
因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。
抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。
一般是每兔(约2kg重)或每羊(约20kg重)第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。
佐剂与抗原乳化可按如下方法进行：(1)研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。
待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。
本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。
(2)注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净空气，然后交替推动针管，直至形成粘稠的乳剂为止。
佐剂的作用与制备-免疫学实验技术-生物秀论坛『中国生物科学论坛』-Powere...
佐剂的作用与制备-免疫学实验技术-生物秀论坛『中国生物科学论坛』-Powere...佐剂的作用概念佐剂（adjuvant）是指能够增强免疫应答或改变免疫应答类型的物质，应用时可与抗原同时或预先注射于机体。
佐剂本身可以有免疫原性，也可以没有免疫原性。
应用佐剂的目的是为了提高抗原对机体的免疫原性，从而提高抗体的效价。
颗粒性抗原（如细菌、细胞）因具有较强的免疫原性，一般情况下不使用佐剂即可取得较好的免疫效果。
对于可溶性大分子量的蛋白质免疫原、人工抗原，初次免疫时必须使用佐剂才能取得较好的免疫效果。
另外，一般不连续两次使用完全弗氏佐剂，以免导致动物严重反应。
免疫佐剂的作用归纳起来有：（1）延缓抗原的释放，保护抗原不被水解，佐剂可延长抗原在体内滞留时间，避免频繁注射，有利于高亲和力抗体的产生；（2）活化巨噬细胞并促进巨噬细胞与T和B细胞的相互作用，从而对淋巴细胞有特异性加强刺激的作用；（3）佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬；（4）佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理；（5）可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体。
故免疫佐剂的作用可使无免疫原性物质变成有效的免疫原；（6）可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴变；（7）改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态反应，并使其增强。
由于佐剂常混有微量的其他物质，这些物质进入机体后也可引起抗体的产生，影响抗体的特异性。
注射完全佐剂可引起局部炎症反应，使局部组织坏死佐剂的制备具备条件佐剂的条件作为一种良好的佐剂，必须具备下列条件：（1）增加抗原的表面积，并改变抗原的活性基团构型，从而增强抗原的免疫原性；（2）佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间，减低抗原的分解速度，使抗原缓慢释放至淋巴系统中，持续刺激机体产生高滴度的抗体；（3）佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并使之增生，从而增强了体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能；（4）良好的佐剂应具有无毒性或副作用低的特点。