EXPO32中文版操作手册

EXPO32 ADC
中文简易操作手册
For Epics XL-MCL、Epics ALTRA
目录
一、 开机步骤与软件主画面说明 1
二、 建立一个新的使用者 5
三、 设定一个新的Protocol与新的Panel 9
设定一个新的Protocol 9
设定一个新的Panel 21 四、 Flow Check 与样品Data的收集26
Flow Check 26 样品Data的收集28 五、 LMD(List Mode Data)分析30
单一LMD Data的分析30
编写打印页FlowPAGE 36
建立一个可以同时分析多个LMD档案的Protocol 39
批次分析44
一、基本开机步骤与软件主画面说明：
1.依常规模式进入Window98系统。

2.双点桌面上，即可激活机器并进入操作软件。

此时您可见到下面的画面：
3.选取您自己的数据夹（若有密码，请在Password处输入），并按下Next继续。

接着您能看到下面的画面：
4.此时您能在左边的窗口选取您即将使用的Protocol，然后按下Finish进入软件。

或不选取任何Protocol，直接按下Finish进入软件。

此时您即可见到软件的工作区（workspeace），如下图：
工作区分成三部份：
a. 工具列（EXPO32 Toolbars）:
各种功能的操作工具列，包含
1. 存取工具列
提供开启、储存、打印及一般Windows操作系统下软件编辑功能
2. 绘图工具列
提供绘制分析图形（Dotplot、Histograme）及框选区域（Gating）的功能。

3. 统计
设定各框选区域（Gate）的颜色、选择统计数值、及将数据输出至Winsow Excel。

4. 打印页（FlowPAGE）
提供编辑打印页所需的各项功能。

5. 机器操控
操控机器的各项功能，包括：流速及机器所有的设定值。

6. 批次分析
提供批次分析的各项设定及操控。

7. 工作清单编写
供使用者编辑工作清单的内容。

b. 档案总管（Resource Explorer）:
可利用鼠标在此处做切换，让您能够看到您
专属资料夹中的Worklist、Penal、Protocol、LMD Data和HST Data等档案。

另外，您也可以利用鼠标将这些档案直接选取并拖曳至软件的桌面上，以供分析及应用。

c. 工作清单编写区（Acquisition Manager）:
利用工作清单工具列您可以在此处编写您即将要收集的样本内容，包括用来收集Data的Protocol、设定参数名、Data存盘的模式…..等等。

二、建立一个新的使用者
在EXPO32 ADC这个软件中，您可以预先设定属与自己的档案资料夹，藉由这个资料夹的设定，计算机会自动的将您在实验中设定的资料和实验时收集的Data储存到您专属的资料夹中，以避免不同使用者之间资料存取造成的混乱。

以下步骤说明如何建立一个属于您自己的资料夹：
1.依常规模式进入Window98系统。

2.双点桌面上，即可激活机器并进入操作软件。

此时您可见到下面的画面：
3.点选程序管理员（admin）后，左下角的Admin按键会反黑，点选它，您能见到下面的画面：
在此您可以新增一个使用者（Add user）；
删除一个使用者（Delete user）；
或修改已经存在的使用者（Modify user）。

4.点选Add user，您会看到下面画面：
5.键入您的使用者姓名（Username），并键入您的密码（Password），您也可以选择不设定密码。

Privilege部份是用来设定当您使用这个使用者时存取的权限，建议您依照上图勾选。

6.点选Paths，您会看到下面的画面：
当您建立一个新的使用者后，计算机自动帮您在软件的资料夹中
（C:\EXPO_32\User）建立数个您专属的资料夹，用来存取不同类型的档案。

7.您也可以点选键，将档案储存在您另外选定的资料夹中。

例如，如果您想要把LMD档案存在D槽的Data这个资料夹中，您便可以将上列选项改为如下：
如此一来，您所收集的LMD档案就会自动存在D:\DATA中了。

8.设定好后，按下OK键，您会看到一个让您确认的对会窗口
按下OK，您便完成了一个新使用者的设定。

三、设定一个新的Protocol与新的Panel：
设定一个新的Protocol
Protocol是EXPO32这个软件的中心骨架，一个完整的Protocol档案包含您所选取的参数种类，您想要表现的图形，和机器的所有设定值。

叫出一个Protocol后，您可以利用它来收取Data，或分析之前收下来的Data。

一般来说，设定一个新的Protocol分为四个步骤：
a.选择您想要收取的参数，并利用这些参数绘制您想要表现的Flow图形（双参数图Dotplot或单参数图Histograme）（此时可以不用Run样品）。

b.实际Run样品，调整FS、SS的Volts和Gain值，让您在FS/SS Dotplot图中能看到你想要分析的细胞族群。

c.Run阴性控制组（Negative Control），调整各个萤光参数的Volts和Gain值，让阴性控制组（Negative Control）的细胞族群落在萤光图中的第一个对数方格内。

d.Run单一萤光染色的样品调整出适当的萤光补偿值。

＊以上所有的设定，都被储存在Protocol这个档案中，日后您若要进行相同的实验时，仅需把以前设定好的Protocol叫出，就可以直接收取您想要的Data。

依照上述的步骤，以双萤光染色的Surface Marker实验为例，作为说明：
a. 选择您想要收取的参数，并利用这些参数绘制您想要表现的Flow图形：
1.进入EXPO32的软件后，点选File/New/New Protocol（如下图），您便可以产生一个新的Protocol（此Protocol的设定值为软件的原始设定值），以此为出发点，我们将其修改为合乎您实验需求的Protocol。

2.按下机器操控工具列中的，您能开启机器设定值控制窗口（Cytometer Control）
3.将Setup Mode的选项勾起。

4.按下Parameter键后，便会出现选择参数的窗口（如下图）：
勾选您实验所需要的参数（如上图，我们选择了FS、SS、FL1 Log和FL2 Log 等四个参数），按下OK键，软件会问您是否要储存这个新的Protocol（如下图），输入您想要的Protocol档名后，即完成参数的选择。

此时在档案总管您的资料夹的Ptotocol选项中会出现一个新的Protocol，如下图：
5.回到软件工作区，在绘图工具列中点选Color Dotplot键，您会看到下面的对话窗口：
依照上图，将X轴的参数设为SS，Y轴的参数设为FS，按下OK；您便可以得到一个以SS为X轴，FS为Y轴的Dotplot。

如下图：
点选绘图工具列中的多边形框选或矩形框选，在此图中画出一个区域（计算机会自动将此区域命名为A；您也可以利用鼠标点选A处，将此区域名称更改为您所希望的。

）如下图：
6. 再次点选绘图工具列中的Color Dotplot键，绘制第二个Dotplot：
依照上图，将X轴的参数设为FL1 Log，Y轴的参数设为Fl2 Log，Gate处选为A，按下OK；您便可以得到一个以FL1 Log为X轴，Fl2 Log为Y轴的Dotplot。

如下图：
7.按下存取工具列中的储存Protoco l，将您对这个Protocol所做的修改储存起来。

b.调整FS、SS的Volts和Gain值，让您在FS/SS Dotplot图中能看到你想要分析的细胞族群：
8.待机器暖机完毕后，插入标准样品（未染色的样品，或以Isotype染色的阴性样品，Negative Control）。

机器开始收集Data，并显示在您刚刚设定好的SS-FS Dotplot图上（因为您刚刚已将Setup Mode选项勾起，故现在此时机器所收集的Data并不会储存。

）
9.开启机器设定值控制窗口（Cytometer Control）中的Detector选项如下图：
10.调整FS和SS的Volts和Gain值，直到FS-SS Dotplot的图中能够见到您想要
分析的细胞族群（此时机器仍在收集Data）。

11.调整区域A的位置，框选您有兴趣的细胞族群
以血液样本为例，您可以看到如下面的图形，A框选的区域为淋巴球：
12.按下存取工具列中的储存Protoco l，将您调整的FS、SS设定值储存起来。

此
时即完成FS、SS的设定。

（检机器仍在收集样品）
c.调整各个萤光参数的Volts和Gain值，让阴性控制组（Negative Control）的细胞族群落在第一个对数方格内：
13.继续调整机器设定值控制窗口（Cytometer Control）中Detector选项内FL1、
FL2的Volts和Gain值，如下图
最后使FL1-FL2 Dotplot图中的细胞落在第一个对数方格内，如下图（此时机器仍在收集Data）：
15.点选绘图工具列中的四方格选项，将四方格区域的横线定位在上图中细胞区域的上缘，纵线定位在细胞区域的右缘，如下图（计算机会自动将四个区域命名）：
16.按下存取工具列中的储存Protocol，将刚刚您所做的设定储存起来。

17.按下机器操控工具列中的放弃键，将出现下列窗口：
选择重复这管（Repeat the tube），按下OK，此时机器停止Data的收集（样品架会下降）。

d. 调整光补偿（Compensation）：
18.分别插入单染的样品（在本例中为FL1:FITC；FL2:PE），进行光补偿调整：
以FL1单染样品调整FL2-%FL1
以FL2单染样品调整FL1-%FL2
19-a.您可以利用机器设定值控制窗口（Cytometer Control）中的Compensation选项来调整补偿值，如下图
19-b.或在机器设定值启控窗口（Cytometer Control）内勾选QuickCOMP选项
此时您可以在FL1-FL2 Dotplot图的两侧看到调整萤光补偿的滚动条，如下图：
直接拉动滚动条，您也可以做萤光补偿的调整。

20. Run FL1单染样品调整FL2-%FL1，如下图：
No Compensation Compensation set OK
20.按下存取工具列中的储存Protocol，将刚刚您所做的设定储存起来。

22. Run FL2单染样品调整FL1-%FL2，如下图：
No Compensation Compensation set OK
20.按下存取工具列中的储存Protocol，将刚刚您所做的设定储存起来。

21.按下机器操控工具列中的放弃键，选择重复这管（Repeat the tube），按下OK，此时机器停止Data的收集（样品架会下降）。

22.去除机器设定值启控窗口（Cytometer Control）中Setup Mode的勾选，并将Max. events设定为10000，如下图：
23.选取File/workspace preference中的Plot Display，勾选show % in region，如下图：
24.再按一次储存Protocol，将刚刚您所做的设定储存起来。

25.此时，您已经完成这个Protocol的设定，您可以开始利用此Protocol来收集双染色（FITC and PE）样品的Data。

如下图：
26.将鼠标移至Dotplot的左下角，按下出现的符号，您可以看到计算机对此图的统计数值：如下图：
27.如果您想要看其它的统计值，请选择Analysis / Select Results，您便可以重新选择您想要看的统计数值，如下图
设定一个新的Panel
如果您分析的样品常常必须进行同一组实验（如一血液样本，同时要做下列五项实验1.CD45/CD14、2.IgG1/IgG1、3.CD3/CD4、4.CD3/CD8、5.CD3/CD19、
6.CD3/CD16+56），此时您可以预先编写并储存一个合用的Panel，待您要进行这组实验时，只消将这个Panel从档案中叫出，便可以直接进行。

1.我们以Coulter triCHROME这组kit为例子，说明如何设定一个新的Panel：
从File/New/New Panel进入Panel编写精灵：
2.输入Panel名称和Panel的管数：
3.按下Next:
Protocol Settings：
在此处您可以选择您想用那个Protocol来收集您第一管实验的Data，您也可以选择是否要用这个Protocol的机器设定值（Volts、Gain、Compensation等）来跑这管Data。

Region Settings：
在此处您可以选择是否要用上面选用的那个Protocol中的Region来收集这一管的Data，您也可以选择其用他Protocol中的Region来收集这一管Data。

Instrument Settings：
在此处您可以选择是否要用上面选用的那个Protocol中的机器设定值来收集这一管的Data，您也可以选择其用他Protocol中的机器设定值来收集这一管Data。

Parameter Names：
您可以在此编写您选用的参数名称，通常我们在此将参数编写成抗体和萤光染剂的名称。

按下Next
4.重复上面的步骤，直到4管都编写完成。

现在，您就可以用这个您已经编写好的Panel插入您的工作清单中。

四、Flow Check与样品Data的收集：
Flow Check
1.依常规模式进入Window98系统。

2.双点桌面上，即可激活机器并进入操作软件。

此时您可见到下面的画面：
3.选取您自己的数据夹（若有密码，请在Password处输入），并按下Next继续。

接着您能看到下面的画面：
4.请您在左边的窗口选取Flow check这个Protocol，并按下Finish进入软件。

或不选取任何Protocol，直接按下Finish进入软件。

此时您可进到软件的工作区（workspeace），如下图：
（若您上一步骤没有选取Flow check这个Protocol，您可以在左侧的档案总管中利用鼠标点选，然后在您的Protocol资料夹中，将Flow check这个Protocol拖曳到软件的桌面上。

）
5.按下机器操控工具列中的，您便能开启控制机器设定值的窗口，如下图：
6.此时，若机器已暖机完毕（当机器上RUN的按键已呈绿色），即可将装有Flow check Beads的样品管插入样品架中收集Data。

7.当机器收集Data时，您可以利用机器操控工具列来控制流速、操控机器重新开始、暂停、继续、停止和放弃。

8.待Data收集完毕后（您可以在最大细胞数的窗口内调整您想要收取的细胞数）机器会自动停止，样品架会自动下降，机器所收集的LMD Data 也会自动储存到您专属的LMD资料夹内。

9.此时，将鼠标移动到FS、FL1、FL2、FL3、FL4 单参数图（Histograme）的左下角，开启统计数据栏，记下XHP-CV和X-main值。

10.XHP-CV值应在3以下，每次所测得X-main值的差异应在+/-5%之间，以确保之后所做的样品分析的可信度。

若XHP-CV和X-main值不在标准范围内，请进行Prime和Cleanz的动作后，重新再跑一次Flow check，若无法改善，请即刻通知Beckman Coulter公司的工程师。

当Flow check完成后，即可进行您样品Data的收集。

收集样品Data:
1.按下工作清单编写工具列中的新工作清单，您可以得到一个空白的工作清单编写区，如下图：
2.利用工作清单编写工具列中的按键，您可以开启一个事先储存好的工作清单，
也可以插入一个事先编写好的penal，或是插入一管可由您指定protocol的
tube，在此，请您根据您实验的需求，编写合乎您实验的工作清单（您也可以在此编写参数的名称，在此编写的参数名称会连同你的Data一同储存在LMD档案中）。

3.工作清单完成后，利用鼠标将工作清单编写区的滚动条移至最右侧，您可以看到工作清单最右侧的选项，在此您可以设定LMD文件名的储存模式。

直接点选后会出现下面的设定窗口：
选择您所想要的文件名模式后，按下OK即完成设定。

在此，如果您有勾选Sample ID选项，您便可以在关闭此窗口后，在工作清单编写区内，输入您的Sample ID，此ID便会一起储存到您Data的档名内。

4.完成工作清单的编写后，您即可进行样品的分析。

如果您使用的是手动上机模式，请您依照工作清单上的顺序，将您的样品依序送上样品架上进行Data的收集。

如果您使用的是自动上机模式，请您依照工作清单上的顺序，将样品依序排列在自动上机盘上，置入MCL后，关上盖子，并在工作清单编写区内的处输
入您使用的上机盘号码，按下机器上Auto的按键，机器便会依序进行Data的收集。

五、LMD Data分析
此份文件分为4个部份：单一LMD Data的分析
编写打印页FlowPAGE
建立一个可以同时分析多个LMD档案的Protocol
批次分析
单一LMD Data的分析：
1.依常规模式进入Window98系统。

2.双点桌面上，即可进入Data分析软件。

此时您可见到下面的画面：
3.选取您自己的数据夹（若有密码，请在Password处输入），并按下Next继续。

接着您能看到下面的画面：
4.此时您能在左边的窗口选取您即将用来分析Data的Protocol，然后按下Finish 进入软件。

或不选取任何Protocol，直接按下Finish进入软件。

此时您即可见到软件的工作区（workspeace），如下图：
工作区分成三部份：
a. 工作区（Workspace）:
您可以在此处绘制或编辑您想要浏览的各式图形，并可以将编辑好的工作区储存成一个Protocol，以供类似的LMD Data分析使用。

b. 工具列（EXPO32 Toolbars）:
各种功能的操作工具列，包含
存取
绘图
统计
打印页（FlowPAGE）
批次分析
c. 档案总管（Resource Explorer）:
可利用鼠标在此处做切换，让您能够看到您专属资料夹中的Worklist、Penal、Protocol、LMD Data和HST Data等档案。

另外，您也可以利用鼠标将这些档案直接选取并拖曳至软件的桌面上，以供分析及应用。

5.用鼠标点选档案总管（Resource Explorer）中的Protocol ，您能看到在您的资料夹中所有的的Protocol，选取您要用来分析Data的Protocol，并将它拖曳至工作区中。

注意：我们通常利用收集这个Data的Protocol来分析这个Data，但在分析Data 时，我们常会对Protocol做一些修改（例如加入打印页（FlowPage）、或将Protocol 修改成能同时分析数个Data的模式），所以建议您将收集Data的Protocol拖曳到工作区后，将它另外存成一个专门用来分析的Protocol，以免影响日后Data的收集。

如下图我们将2 color.PRO这个Protocol拖曳到工作区后，利用File/Save Protocol
As将它存成2 colorAna.PRO专供分析使用：
6.点选档案总管（Resource Explorer ）中的LMD
，您可以看到存在您专属资
料夹中所有的LMD Data 档案。

选取您要想要分析的档案，拖曳至工作区中的
Protol内，您便可以看到分析后的结果，如下图：
7.接着，您可以再拖曳其它的LMD Data到这个Protocol中，旧的Data便会被新的取代。

8.打印这个分析结果。

选择存取存取工具列中
的打印功能，您可以看到下列画面：选择您想要打印的模式（图形（Plot）、统计数值（Statistics）或打印页（FlowPAGE）），按下OK即可。

编写打印页（FlowPAGE）:
打印页（FlowPAGE）好比一张A4的打印纸，我们可以在分析的Protocol中预先编写排好版的打印页，待LMD Data拖曳至Protocol后，您只要打印这张打印页，便可以得到您想要的排版模式。

1.点选打印页工具列中的插入一
个新的打印页，您会得到一个空白的打印页；选择工作区中您想要放在打印页中的图形，并将它拖曳到打印页中，这个图形就会出现在打印页中，如下图：
2.利用打印页工具列中的工具，您可以在打印页中编辑文字、插入图标并排列这些图形成您想要的样子（编写方式和
Window PowerPoint类似）：
3.按下存取工具列中的储存Protoco l，您编写的打印页便会储存成Protocol的一部份；当您下次再将这个Protocol叫出时，这个打印页会同时出现在工作区中。

注意：打印页上的图形和工作区中的图形是同步的，所以当您拖曳一个新的LMD Data到工作区时，打印页中的图形也会随之更新。

建立一个可以同时分析多个LMD档案的Protocol
有时候我们会同时将数个LMD Data放在同一个Protocol中分析比较，这时我们必须将原来只能分析一个LMD Data的Protocol进行修改：
在此，我们以建立一个能同时分析4个档案的Protocol为例子作为说明：
1.将只能分析一个LMD Data的Protocol拖曳至工作区。

2.拖曳第一个要分析的LMD Data到这个Protocol中。

3.点选Fl1/FL2的DotPlot后，选择Plot/Duplicate Plot：
4.这时候会开启一个和工作区中FL1/FL2完全相同的DotPlot；利用鼠标直接将原来DotPlot中的十字区域拖曳至新的DotPlot中，新的DotPlot中将会出现和原来DotPlot中位置完全相同的十字区域，但软件会自动将您新的区域附上新的名字。

如下图：
一步骤中复制出来的DotPlot中，如下图：
这时，我们会在新的DotPlot中看到第二个LMD Data的分析结果。

6.重复步骤3到步骤5，您便可以在一个Protocol中，同时看到四个不同档案分析的结果，如下图：
7.编写这个 Protocol的打印页，如下图：
注意：打印页中的分析结果和工作区中的分析结果是相对应且同步的。

8.按下存取工具列中的储存Protoco l，现在这个Protocol便能用来同时分析4个LMD Data。

9.重新开启这个Protocol，这时您可以直接（不需再按Ctrl键）将您要分析的4个
LMD Data拖曳到各个DotPlot中。

如下图：
批次分析（AUTOMator）：
利用上述的Protocol，以拖曳的方法，我们能在同一个工作区中同时分析数个LMD Data，也能将这些分析结果打印在同一张报告单上。

此外，我们能利用批次分析这个功能，一次选取数个LMD Data后，让软件自动在上述的Protocol中进行分析。

1.拖曳能同时分析数个LMD Data的Protocol到工作区中。

2.点选批次分析工具列中的批次分析设定
，您会看到下面的画面：
3.点选增加档案（Add Files），在档案选取窗口中选取要分析的LMD Data（选取的档案数目必须是这个Protocol能分析的档案数目的倍数；例如上述的Protocol
能同时分析4个档案，所以您必须选取4、8、12…..个档案。

）如下图：
4.按下OK，您会看到下面的画面：
在窗口中间，能看您到选取的8个档案，软件用打印符号将其分成2个批次，
您可以在下面勾选打印的格式，或选择不打印（若选择不打印，会出现不打印的符号）。

另外您也可以利用鼠标在左边的符号处设定：当软件分析完一个档案时是要继续分析、暂停5秒再分析，还是停止分析。

5.设定完后，按下OK，您会回到工作区的画面。

6.在工作区的批次分析工具列中，按下开始
分析，软件就会依照您的设定，自动分析和打印。

此时画面中央会出现分析的状况，如下图：
桌面上的图形也会依着正在分析的Data而改变。