最新转基因工程复习题与答案
基因工程期末试题及答案
基因工程期末试题及答案一、选择题(每题2分,共20分)1. 基因工程是指利用现代生物技术手段对DNA进行操作和控制的一种技术。
2. 基因工程的主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
3. DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
4. 在基因工程中,限制性内切酶用于切割DNA分子,产生特定片段。
5. 基因工程可以产生转基因生物,通过对生物基因进行改造,使其具有特定的特性。
6. CRISPR/Cas9是一种常用的基因编辑工具,可以精确地修改基因组中的特定片段。
7. 基因工程在医学领域可以用于基因治疗,通过修复或替换异常基因,治疗遗传性疾病。
8. 在农业领域,基因工程可以用于改良作物,提高产量和抗病虫害能力。
9. PCR是一种常用的基因扩增技术,可以通过复制DNA片段来放大特定基因。
10. DNA梯度离心是基因工程中常用的分离DNA片段的方法。
二、问答题(每题10分,共30分)1. 请简要介绍基因工程的基本原理和主要方法。
基因工程的基本原理是通过对DNA进行操作和控制来改变生物的遗传性状。
其主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
基因克隆是通过将特定DNA片段放入载体中,然后转化到宿主细胞中,使重组DNA在宿主细胞中大量复制。
PCR是一种基因扩增技术,通过在DNA复制过程中加入特定引物,使特定基因片段在体外大量扩增。
DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
2. 什么是转基因生物?请举例说明。
转基因生物是指经过基因工程改造,将外源基因导入到目标生物体中,使其具有新的遗传性状的生物。
例如,将耐旱基因导入水稻,使其具有抗旱能力;将Bt毒素基因导入棉花,使其具有抗虫能力。
3. 基因工程在医学领域有哪些应用?举例说明。
基因工程在医学领域可以用于基因治疗、疫苗研发等。
例如,利用基因工程技术可以修复或替换患者体内异常基因,治疗遗传性疾病。
另外,基因工程也可以用于疫苗研发,通过基因工程技术将病原体的基因导入宿主细胞,产生病原体的抗原蛋白,从而刺激免疫系统产生抗体,用于预防传染病。
基因工程练习题带答案
基因工程练习题一、单项选择题1.在基因工程中,切割载体和含有目的基因的DNA片段中,一般需使用A.同种限制酶B.两种限制酶C.同种连接酶D.两种连接酶2.基因工程常用的受体有①大肠杆菌②枯草杆菌③结核杆菌④动植物细胞A.①②③④B.①②③C.②③④D.①②④3.有关基因工程的叙述正确的是A.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成是在细胞内完成的C.质粒都可作为载体D.蛋白质的结构成分为合成目的基因提供资料4.下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体A.细菌质粒B.噬菌体C.动植物病毒D.细菌核区的DNA5.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。
在基因操作的基本步骤中,不进行碱基互补配对的是A.人工合成目的基因B.目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测表达6.不是基因工程方法生产的药物是A.干扰素B.白细胞介素C.青霉素D.乙肝疫苗7.在基因工程中用来修饰改造基因的工具是A.限制酶和连接酶B.限制酶和水解酶C.限制酶和运载酶D.连接酶和运载酶8.下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件A.具有某些标记基因B.决定宿主细胞的生存C.能够在宿主细胞中复制D.有一个或多个限制酶切点9.水母发光蛋白由236个氨基酸构成,其中有三种氨基酸构成发光环,现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。
在转基因技术中,这种蛋白质的作用A.促使目的基因导入宿主细胞中B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使目的基因容易被检测和选择D.使目的基因容易成功表达10.应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。
这里的基因探针是指A.用于检测疾病的医疗器械B.用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C.合成β—球蛋白的DNAD.合成苯丙氨酸羟化酶的DNA片段11.基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来,这要利用限制性内切酶。
一种限制性内切酶能识别DNA子中的GAATTC顺序,切点在G 和A之间,这是应用了酶的A.高效性 B.专一性 C.多样性D.催化活性受外界条件影响12.上海医学遗传研究所成功培育出第一头携带白蛋白的转基因牛,还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法,使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍,转基因动物是指A.提供基因的动物B.基因组中增加外源基因的动物C.能产生白蛋白的动物D.能表达基因信息的动物13.作为基因的运输工具——运载体,必须具备的条件之一及理由是A.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制,以便提供大量的目的基因B.具有多个限制酶切点,以便于目的基因的表达C.具有某些标记基因,以使目的基因能够与其结合D.对宿主细胞无伤害,以便于重组DNA的鉴定和选择14.下列黏性末端属于同一种限制酶切割而成的是:A.①②B.①③ C.①④ D.②③15.下列平末端属于同一种限制酶切割而成的是A.①③B.①④C.②③D.②④16.下列有关基因工程的叙述中,不正确的是A.DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B.基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C.基因治疗主要是对有基因缺陷的细胞进行替换D.蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因提供资料17.下列属于PCR技术的条件的是[来源:学科网]①单链的脱氧核苷酸序列引物②目的基因所在的DNA片段③脱氧核苷酸④核糖核苷酸⑤DNA连接酶⑥DNA聚合酶⑦DNA限制性内切酶A.①②③⑤B.①②③⑥C.①②③⑤⑦D.①②④⑤⑦18.下列有关PCR技术的叙述正确的是A.作为模板的DNA序列必须不断的加进每一次的扩增当中B.作为引物的脱氧核苷酸序列必须不断的加进每一次的扩增当中C.反应需要的DNA聚合酶必须不断的加进反应当中D.反应需要的DNA连接酶必须不断的加进反应当中19.蛋白质工程中,直接需要进行操作的对象是A.氨基酸结构B.蛋白质的空间结构C.肽链结构D.基因结构20.有关基因与酶关系的叙述正确的是A.每个基因都控制合成一种酶B.酶的遗传信息编码在内含子的碱基序列中C.基因的转录、翻译都需要酶D.同一生物体不同细胞的基因和酶是相同的21.某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶(Amy)基因a,通过基因工程的方法,将a转到马铃薯植株中,经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。
基因工程复习题及答案
基因工程复习题及答案一、选择题1. 基因工程是指:A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然进化答案:B2. 基因工程中常用的载体是:A. 噬菌体B. 质粒C. 病毒D. 所有以上选项答案:D3. 以下哪个不是基因工程中常用的受体细胞?A. 细菌B. 酵母C. 植物D. 动物答案:C4. 基因枪法属于哪种基因转移技术?A. 化学介导法B. 电穿孔法C. 微注射法D. 粒子轰击法答案:D5. 基因编辑技术CRISPR-Cas9中,Cas9蛋白的主要作用是:A. 识别目标DNA序列B. 切割目标DNA序列C. 连接DNA片段D. 转录mRNA答案:B二、填空题6. 基因工程的基本操作步骤包括:目的基因的________、________、检测与表达。
答案:提取、重组7. 基因工程在医学领域的应用包括________、________和基因治疗。
答案:基因诊断、基因疫苗8. 在基因工程中,________技术可以用于快速繁殖转基因植物。
答案:组织培养9. 基因工程中,________是将目的基因导入植物细胞的常用方法。
答案:农杆菌介导法10. 基因工程在农业上的应用包括提高作物的________、________和改良品质。
答案:抗病性、抗虫性三、简答题11. 简述基因工程在环境保护方面的应用。
答案:基因工程在环境保护方面的应用主要包括:- 利用基因工程改造微生物,以降解环境中的有毒物质,如石油污染物。
- 通过基因工程改良植物,使其能够耐受重金属污染,从而净化土壤。
- 利用基因工程改造的微生物处理工业废水,减少水体污染。
12. 阐述基因工程在生物制药领域的主要应用。
答案:基因工程在生物制药领域的主要应用包括:- 生产重组蛋白质药物,如胰岛素、干扰素等。
- 利用转基因动物生产药物,如转基因羊产生的抗凝血酶。
- 利用基因工程改造的微生物生产抗生素等药物。
- 开发基因治疗药物,用于治疗遗传性疾病。
基因工程期末考试题及答案
基因工程期末考试题及答案一、选择题(每题2分,共20分)1. 基因工程中常用的工具酶是:A. 纤维素酶B. 限制性内切酶C. 淀粉酶D. 过氧化氢酶答案:B2. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因的表达C. 基因的克隆D. 基因的测序答案:D3. 基因枪法是一种:A. 植物转基因方法B. 动物转基因方法C. 微生物转基因方法D. 所有生物的转基因方法答案:A4. 重组DNA技术中,通常使用哪种质粒作为载体?A. 质粒DNAB. 线粒体DNAC. 核糖体RNAD. 染色体DNA答案:A5. 基因工程中,目的基因的表达通常需要:A. 启动子B. 终止子C. 增强子D. 所有选项答案:D二、填空题(每空2分,共20分)1. 基因工程是指按照人们的意愿,将不同来源的基因在体外构建杂合DNA分子,然后导入到活细胞和生物体内,以改变生物的遗传特性并取得新品种或新产品。
2. 基因工程中常用的宿主细胞有大肠杆菌、酵母菌和________。
答案:哺乳动物细胞3. 基因工程中,________是连接目的基因和载体DNA的关键酶。
答案:DNA连接酶4. 目的基因的表达需要________和________的协同作用。
答案:启动子;终止子5. 基因工程产品在医学领域的应用包括生产________、________和基因治疗等。
答案:重组蛋白;单克隆抗体三、简答题(每题10分,共30分)1. 请简述基因工程在农业中的应用。
答案:基因工程在农业中的应用主要包括提高作物的抗病性、抗虫性、抗旱性和提高作物的产量和品质。
例如,通过基因工程培育的抗虫棉可以减少农药的使用,提高棉花的产量和质量。
2. 基因工程在医学领域有哪些应用?答案:基因工程在医学领域的应用包括生产重组蛋白药物、单克隆抗体、基因治疗和疫苗开发等。
例如,利用基因工程技术生产的胰岛素可以治疗糖尿病,单克隆抗体用于治疗癌症和自身免疫性疾病。
3. 请解释什么是转基因生物,并简述其潜在的风险。
基因工程复习题及参考答案
【基因工程复习题及参考答案】绪论、基因工程基础一、填空题1. 基因工程是20 世纪70 年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
基因工程技术的诞生使人们从简单地利用现存的生物资源进行诸如发酵、酿酒、制醋和酱油等传统的生物技术时代,走向按人们的需要定向地改造和创造具有新的遗传性品种的时代。
2.Cohen 等在1973 年构建了第一个有功能的重组DNA 分子。
3.基因工程的两个基本特点是:(1)分子水平上的操作,(2)细胞水平上的表达。
4.基因克隆中三个基本要点是:克隆基因的类型、受体的选择和载体的选择。
5.克隆基因的主要目的有四个:①扩增DNA ;②获得基因产物;③研究基因的表达调控;④改造生物的遗传特性。
6.基因工程的基本程序包括DNA 制备、体外DNA 重组、遗传转化、转化细胞的筛选等方面。
7.基因工程又称重组DNA 技术/基因操作技术/基因克隆/分子克隆/遗传修饰/新遗传学。
8.克隆的进行依赖于各种参与DNA 新陈代谢的酶的使用,它们主要是从原核细胞中分离的。
限制性内切核酸酶能够将DNA 切割成特定大小的片段。
各种各样的DNA 聚合酶也是克隆所必需的,包括将RNA 转录出单链DNA 的反转录酶。
DNA 连接酶用于连接限制性片段。
克隆也需要来源于微生物的DNA 序列,包括用来运载被被克隆DNA 的克隆载体。
质粒载体来源于天然细菌质粒,通常携带有抗生素抗性基因。
其他载体来源于噬菌体,如λ噬菌体,它们经过修饰后可以运输外源DNA。
要想克隆一个感兴趣的真核生物的基因就必须先制作一个能与该基因杂交的探针。
人们已经发展了很多有效而精细的技术来分析克隆的DNA。
例如,极微量的DNA 片段可以通过PCR 得到扩增。
在感兴趣基因的启动子上连接,如CAT 或LacZ 之类的报告基因能够定量检测基因的活性。
二、选项题(单选或多选)1.因研究重组DNA 技术而获得诺贝尔奖的科学家是(C )。
A. Kornberg AB. Gilbert WC. Berg PD. McClintock2.第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是(A )。
高考生物《基因工程》真题练习含答案
高考生物《基因工程》真题练习含答案1.[2024·山东卷]关于“DNA的粗提取与鉴定”实验,下列说法正确的是()A.整个提取过程中可以不使用离心机B.研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后,应充分摇匀再倒入烧杯中C.鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变D.仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰答案:A解析:研磨后,可以将研磨液过滤到烧杯中,在4 ℃冰箱中放置几分钟后,再取上清液,可以不使用离心机,A正确,B错误。
鉴定过程中的沸水浴加热可使DNA双螺旋结构发生改变,C错误。
该实验中,为排除二苯胺加热后可能变蓝对实验结果造成干扰,可设置加二苯胺不加DNA的对照组,D错误。
2.[2023·新课标卷]某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具,将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接,以构建重组表达载体。
限制酶的切割位点如图所示。
下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是()A.质粒和目的基因都用酶3切割,用E.coli DNA连接酶连接B.质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割,用T4 DNA连接酶连接C.质粒和目的基因都用酶1和酶2切割,用T4 DNA连接酶连接D.质粒和目的基因都用酶2和酶4切割,用E.coli DNA连接酶连接答案:C解析:只用一种限制酶切割质粒和目的基因,会使质粒和目的基因发生自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接,A错误;用酶1切割目的基因,产生的是黏性末端,用酶3切割质粒,产生的是平末端,无法连接,B错误;质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后,可使用T4 DNA连接酶连接,使目的基因定向插到质粒中,C正确;酶2和酶4切割后产生的黏性末端相同,易导致目的基因和质粒自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接,并且用酶4切割会破坏标记基因,D错误。
3.[2023·浙江6月]某研究小组利用转基因技术,将绿色荧光蛋白基因(GFP)整合到野生型小鼠Gata3基因一端,如图甲所示。
基因工程复习题答案
基因工程复习题答案1. 基因工程的定义是什么?基因工程是指通过体外DNA重组和转基因等技术,按照人类的设计,对生物的基因进行改造和重新组合,然后导入受体细胞内,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品的技术。
2. 基因工程的基本操作步骤有哪些?基因工程的基本操作步骤包括:目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。
3. 基因工程中常用的运载体有哪些?常用的运载体包括质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒等。
4. 基因工程中目的基因的检测方法有哪些?目的基因的检测方法包括分子水平上的检测和个体水平上的鉴定。
分子水平上的检测包括DNA分子杂交技术、分子杂交技术和免疫学方法等;个体水平上的鉴定包括抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
5. 基因工程在农业上的应用有哪些?基因工程在农业上的应用主要包括:提高农作物的抗病虫能力、提高农作物的耐逆境能力、改良农作物的品质、提高农作物的产量等。
6. 基因工程在医学上的应用有哪些?基因工程在医学上的应用主要包括:生产药物、基因治疗、生产疫苗、诊断疾病等。
7. 基因工程的安全性问题主要有哪些?基因工程的安全性问题主要包括:对生物多样性的影响、对生态系统的影响、对人类健康的潜在影响等。
8. 基因工程产品如何进行安全性评价?基因工程产品的安全性评价需要从分子、细胞、个体、种群和生态系统等多个层次进行,包括对基因工程产品的分子特征、生物学特性、生态学特性等方面的评价。
9. 基因工程的伦理问题主要有哪些?基因工程的伦理问题主要包括:对人类尊严的挑战、对生物多样性的影响、对环境的潜在威胁、对人类健康的潜在风险等。
10. 如何平衡基因工程的利弊?平衡基因工程的利弊需要综合考虑其在经济、社会、环境和伦理等方面的影响,通过科学合理的管理和监管,确保基因工程的健康发展。
2023年浙江省中考科学专题复习:现代农业与基因工程(含答案解析)
2023年浙江省中考科学专题复习:现代农业与基因工程含答案解析一、选择题1.分析如图转基因抗虫烟草的培育过程可知A.苏云金杆菌表面光滑无鞭毛B.抗虫基因取自苏云金杆菌的DNAC.抗虫基因应导入到烟草细胞的细胞质中D.抗虫烟草的培育属于有性生殖2.2018年11月26日,南方科技大学生物系副教授贺建奎宣称,一对名为露露和娜娜的基因编辑婴儿于11月在中国诞生,这是世界首例免疫艾滋病的基因编辑婴儿,她们出生后即能“天然抵抗艾滋病”。
这个技术在中国科学界和互联网引发了巨大的伦理质疑。
下列描述错误..的是()A.这对双胞胎姐妹细胞核中的染色体数相同B.编辑和改变基因,可以改变生物的性状C.使用基因编辑技术来“改造人类”是合法的D.艾滋病主要通过性接触、血液和母婴三种途径传播3.科学家发现将固氮醋杆菌的固氮基因植入到农作物体内,使这些作物具有固氮能力。
该技术一旦推广,将大幅减少氮肥的使用,降低能源消耗。
下列分析正确的是()A.固氮醋杆菌成形的细胞核内具有遗传物质B.固氮醋杆菌和根瘤菌结构相似,都属于单细胞真菌C.固氮醋杆菌和小麦的生殖方式主要都是有性生殖D.将固氮基因植入农作物体内,所运用的生物技术属于转基因技术4.如图表示一种培育生物优良新品种的方法,该方法称为()A.转基因技术B.太空育种C.杂交育种D.克隆技术5.中央电视台播了一个奇怪的家族遗传病,这个家族生下来的男性大多正常,长到一定年龄就出现重度身体残疾,而出生的女性则不会。
后来在某军队医院的努力之下,通过遗传学的科学办法使这个家族彻底摆脱了这种家族遗传病。
你认为下列说法不太可能的是()A.这种家族遗传疾病是由于该家族的体细胞核内的染色体数量变化引起的B.这种家族遗传疾病可能是由DNA上的基因发生了变异引起的C.医务人员用通过胎儿的基因与正常基因对比分析控制生育的办法来实现优生优育D.已经出生的带有遗传病的人难以治愈这种重度身体残疾疾病6.概念之间、化学反应之间具有包含、并列、交叉等关系。
高考复习(生物)专项练习:基因工程类大题突破【含答案及解析】
大题分析与表达练7基因工程类大题突破1.(2021山东日照二模)新型冠状病毒主要通过其表面刺突蛋白(S蛋白)与人体细胞膜上的ACE2蛋白结合实现感染。
截至2021年4月12日,中国成为全球首个能提供三种生产新型冠状病毒疫苗技术路线(灭活疫苗、重组蛋白疫苗和腺病毒载体疫苗)的国家。
三种新型冠状病毒疫苗研发途径的技术原理如下:灭活疫苗是用各种理化方法灭活病原微生物及其代谢产物,再通过纯化等步骤制备出相应疫苗;重组蛋白疫苗是将病毒的目标抗原基因整合到表达载体中,然后将表达载体转化到中国仓鼠卵巢细胞中,经诱导表达出大量的抗原蛋白,再通过纯化而得到的疫苗;腺病毒载体疫苗是以腺病毒作为载体,将目标抗原基因重组到载体病毒基因组中得到的疫苗。
回答下列问题。
(1)上述灭活疫苗中的“灭活”是使新型冠状病毒失去,但并不破坏该病毒的。
(2)制备重组蛋白疫苗和腺病毒载体疫苗均需要获取S蛋白基因,获取过程是提取新型冠状病毒总RNA,在酶的作用下合成DNA,再采用PCR技术选择性扩增出S蛋白基因。
PCR技术的前提是要有一段,以便根据这一序列设计出特异性的引物。
(3)腺病毒载体疫苗是将S蛋白基因重组到改造后的腺病毒内,导入人体,在体内产生S蛋白,刺激人体产生相应抗体。
改造后的腺病毒载体应具备的条件是(答出两点即可)。
与重组蛋白疫苗相比,腺病毒载体疫苗的优点体现在。
(4)腺病毒载体疫苗注入人体后,其发挥作用的机理是。
2.(2021山东青岛二模)基因工程抗体又称重组抗体,是指利用重组DNA及蛋白质工程技术对编码抗体的基因按不同需要进行加工改造和重新装配,经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子。
下图为某研究所制备小鼠抗甲型肝炎病毒抗体的流程图。
回答下列问题。
(1)实验室构建重组质粒时,为保证目的基因与载体的正确连接,过程①最好选择的限制酶是。
(2)在重组质粒中,目的基因首端的启动子能够,从而驱动目的基因的转录。
除启动子之外,重组质粒还应该包含等。
基因工程练习题(附答案)
基因⼯程练习题(附答案)基因⼯程练习题1、在基因⼯程中使⽤的限制性核酸内切酶,其作⽤是( )A、将⽬的基因从染⾊体上切割出来B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列C、将⽬的基因与运载体结合D、将⽬的基因导⼊受体细胞2、基因⼯程中常⽤细菌等原核⽣物作受体细胞的原因不包括( )A、繁殖速度快B、遗传物质相对较少C、多为单细胞,操作简便D、DNA为单链,变异少3、基因⼯程是DNA分⼦⽔平的操作,下列有关基因⼯程的叙述中,错误的是( )A、限制酶只⽤于切割获取⽬的基因B、载体与⽬的基因可以⽤同⼀种限制酶处理C、基因⼯程所⽤的⼯具酶是限制酶,DNA连接酶D、带有⽬的基因的载体是否进⼊受体细胞需检测4、运⽤现代⽣物技术,将苏云⾦芽孢杆菌的抗⾍基因整合到棉花细胞中,为检测实验是否成功,最⽅便的⽅法是检测棉花植株是否有( )A、抗⾍基因B、抗⾍基因产物C、新的细胞核D、相应性状5、转基因动物转基因时的受体细胞是( )A、受精卵B、精细胞C、卵细胞D、体细胞6、基因⼯程中常见的载体是( )A、质体B、染⾊体C、质粒D、线粒体7、⽔母发光蛋⽩由236个氨基酸构成,其中Asp、Gly、Ser构成发光环,现已将这种蛋⽩质的基因作为⽣物转基因的标记,在转基因技术中,这种蛋⽩质的作⽤是( ) A、促使⽬的基因导⼊宿主细胞中B、促使⽬的基因在宿主细胞中复制C、使⽬的基因容易被检测出来D、使⽬的基因容易成功表达8、运⽤现代⽣物技术的育种⽅法,将抗菜青⾍的Bt基因转移到优质油菜中,培育出转基因抗⾍的油菜品种,这⼀品种在⽣长过程中能产⽣特异的杀⾍蛋⽩质,对菜青⾍有显著抗性,能⼤⼤减轻菜青⾍对油菜的危害,提⾼油菜产量,减少农药使⽤,据以上信息,下列叙述正确的是( )A、Bt基因的化学成分是蛋⽩质B、Bt基因中有菜青⾍的遗传物质C、转基因抗⾍油菜能产⽣杀⾍蛋⽩是由于具有Bt基因D、转基因抗⾍油菜产⽣的杀⾍蛋⽩是⽆机物9、⼈的糖蛋⽩必须经内质⽹和⾼尔基体进⼀步加⼯合成,通过转基因技术,可以使⼈的糖蛋⽩基因得以表达的受体细胞是( )A、⼤肠杆菌B、酵母菌C、T噬菌体 D、质粒DNA410、不属于质粒被选为基因运载体的理由是()A.能复制 B.有多个限制酶切点C.具有标记基因D.它是环状DNA11.下列关于各种酶作⽤的叙述,不正确的是()A.DNA连接酶能使不同脱氧核苷酸的磷酸与脱氧核糖连接B.RNA聚合酶能与基因的特定位点结合,催化遗传信息的转录C.⼀种DNA限制酶能识别多种核苷酸序列,切割出多种⽬的基因D.胰蛋⽩酶能作⽤于离体的动物组织,使其分散成单个细胞12、治疗⽩化病、苯丙酮尿症等⼈类遗传疾病的根本途径是A、⼝服化学药物B、注射化学药物C、利⽤辐射或药物诱发致病基因突变D、采取基因疗法13.下列与基因⼯程⽆关的是( )A、培养利⽤“⼯程菌”⽣产胰岛素B、基因治疗C、产⽣⼈胰岛素的⼤肠杆菌D、杂交育种14.基因⼯程的设计施⼯是在什么⽔平上进⾏的 ( )A.细胞B.细胞器C. 原⼦D.分⼦15.⼈胰岛细胞能产⽣胰岛素,但不能产⽣⾎红蛋⽩,据此推测胰岛细胞中()A.只有胰岛素基因B.⽐⼈受精卵的基因要少C.既有胰岛素基因,也有⾎红蛋⽩基因和其他基因D.有胰岛素基因和其他基因,但没有⾎红蛋⽩基因16、能够使植物体表达动物蛋⽩的育种⽅法是()A、单倍体育种B、杂交育种C、基因⼯程育种D、多倍体育种17、要彻底治疗⽩化病必须采⽤()A.基因治疗 B.医学⼿术C.射线照射 D.⼀般药物18、下列哪项不是基因⼯程中经常使⽤的⽤来运载⽬的基因的载体()A、细菌质粒B、噬菌体C、动植物病毒D、细菌核区的DNA19、在基因⼯程中,作为基因运输⼯具的运载体,下列特征除哪项外,都是运载体必须具备的条件()A、能够在宿主细胞中复制,并稳定地保存B、具有多个限制酶切点C、必须是细菌的质粒或噬菌体D、具有某些标记基因20、1993年,我国科学⼯作者培育成的抗棉铃⾍的转基因抗⾍棉,其抗⾍基因的来源()A.普通棉花的基因突变B.棉铃⾍变异形成的致死基因C.寄⽣在棉铃⾍体内的线⾍D.苏云⾦芽孢杆菌体内的抗⾍基因21.正确表⽰基因操作“四步曲”的是()①提取⽬的基因②⽬的基因导⼊受体细胞③⽬的基因与运载体的结合④⽬的基因的检测和表达A.①②③④B.④①③②C.①③②④D.③①②④22.现有⼀长度为1000碱基对(bp)的DNA分⼦,⽤限制性核酸内切酶EcoRI酶切后得到的DNA分⼦仍是1000bp,⽤KpnI单独酶切得到400bp和600bp两种长度的DNA分⼦,⽤EcoRI、KpnI同时酶切后得到200bp和600bp两种长度的DNA分⼦。
2020智慧树,知到《转基因的科学—基因工程》章节测试[完整答案]
2020智慧树,知到《转基因的科学—基因工程》章节测试[完整答案]第一章单元测试1、多选题:基因修饰生物包括哪些类型?( )选项:A:抗虫转基因玉米B:抗虫转基因棉花C:黄金大米D:改变花色的转基因牵牛花答案: 【抗虫转基因玉米;抗虫转基因棉花;黄金大米;改变花色的转基因牵牛花】2、多选题:转基因技术又叫做( )选项:A:分子克隆技术B:基因修饰技术C:DNA重组技术D:基因工程技术答案: 【分子克隆技术;基因修饰技术;DNA重组技术;基因工程技术】3、单选题:现代杂交育种技术中建立的转基因智能不育系,育性是( )选项:A:完全可育的B:完全不育的C:部分不育的D:不能确定答案: 【部分不育的】4、单选题:A品系跟B品系杂交,是把A品系中几个基因转移到B细胞内?( ) 选项:A:2个B:1个C:全部基因D:多个答案: 【全部基因】5、判断题:基因工程第一步“切”的步骤包括切下目的基因,但不包括切开载体。
选项:A:对B:错答案: 【错】第二章单元测试1、单选题:识别不同序列但切出的DNA片段具有相同末端序列的酶称为( ) 选项:A:甲基化酶B:同裂酶C:同尾酶D:同位酶答案: 【同尾酶】2、单选题:关于限制性内切酶,下列说法中错误的是( )选项:A:每一种酶都在识别位点内部或两侧切割B:每一种酶都有各自特异的识别序列C:每一种酶的识别序列都不相同D:酶的识别序列中往往含有回文结构答案: 【每一种酶的识别序列都不相同】3、单选题:根据酶切活性对盐浓度的要求,限制性核酸内切酶可分成( )选项:A:5 大类B:2 大类C:4 大类D:3 大类答案: 【3 大类】4、多选题:以下属于大肠杆菌中的聚合酶的是( )选项:A:DNA聚合酶αB:DNA聚合酶βC:DNA聚合酶ID:DNA聚合酶II答案: 【DNA聚合酶I;DNA聚合酶II】5、多选题:基因工程中klenow片段应用包括( )选项:A:补平DNA 3'凹端B:Sanger合成测序C:切平DNA 3'凸端D:合成cDNA第二条链答案: 【补平DNA 3'凹端;Sanger合成测序;切平DNA 3'凸端;合成cDNA第二条链】。
高考生物专题复习《基因工程》含答案
高考生物专题复习《基因工程》【考点梳理.逐个击破】一、基因工程的操作工具1.限制性核酸内切酶(简称限制酶)(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。
(2)作用:识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列并切开特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
(3)结果:产生黏性末端或平末端。
2.DNA 连接酶3.载体(1)作用:携带外源DNA 片段进入受体细胞。
(2)种类:质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。
(3)条件⎩⎪⎨⎪⎧能自我复制有一个至多个限制酶切割位点有特殊的标记基因二、基因工程的基本操作程序 1.目的基因的获取(1)目的基因:主要是指编码蛋白质的基因,也可以是具有调控作用的因子。
(2)获取方法⎩⎪⎨⎪⎧从基因文库中获取利用PCR 技术扩增通过化学方法人工合成2.基因表达载体的构建 (1)构建基因表达载体的目的①使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代。
②使目的基因能够表达和发挥作用。
(2)基因表达载体的组成:目的基因、启动子、终止子及标记基因等。
3.目的基因导入受体细胞微生物细胞感受态细胞法(Ca2+处理法)4.目的基因的检测与鉴定检测目的检测方法判断标准目的基因是否插入转基因生物的DNA DNA分子杂交技术是否出现杂交带目的基因是否转录出了mRNA 分子杂交技术是否出现杂交带目的基因是否翻译出蛋白质抗原—抗体杂交技术是否出现杂交带个体水平的检测如抗虫、抗病的接种实验是否表现出相应的特性三、基因工程的应用及蛋白质工程1.基因工程的应用(1)动物基因工程:提高动物生长速度从而提高产品产量;改善畜产品品质;用转基因动物生产药物;用转基因动物作器官移植的供体等。
(2)植物基因工程:培育抗虫转基因植物(如抗虫棉)、抗病转基因植物(如转基因烟草)和抗逆转基因植物(如抗寒番茄);利用转基因改良植物的品质(如新花色矮牵牛)。
2.基因诊断与基因治疗(1)基因诊断:又称为DNA诊断,是采用基因检测的方法来判断患者是否出现了基因异常或携带病原体。
基因工程试题库及答案
基因工程习题集一、名词解释:(20×4/)1、基因2、克隆3、基因定位4、PCR5、基因工程工具酶6、组织培养7、限制性核酸内切酶8、受体细胞9、生物技术 10、基因沉默11、重组DNA技术12、逆转录酶13、单克隆抗体14、核移植技术15、细胞融合16、胞内酶17、凝胶过滤18、固定化酶 19、蛋白质工程20、生物反应器二、单项选择题:(60×2/)1.下列关于基因工程应用的叙述,正确的是()A.基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因B.基因诊断的基本原理是DNA分子杂交C.一种基因探针能检测水体中的各种病毒D.原核基因不能用来进行真核生物的遗传改良2.在已知某小片段基因碱基序列的情况下,获得该基因的最佳方法是()A.用mRNA为模板逆转录合成DNA B.以4种脱氧核苷酸为原料人工合成C.将供体DNA片段转入受体细胞中,再进一步筛选 D.由蛋白质的氨基酸序列推测mRNA 3.我国科学家运用基因工程技术,将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导人棉花细胞并成功表达,培育出了抗虫棉。
下列叙述不.正确的是()A.基因非编码区对于抗虫基因在棉花细胞中的表达不可缺少B.重组DNA分子中增加一个碱基对,不一定导致毒蛋白的毒性丧失C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘作物,从而造成基因污染D.转基因棉花是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的4.采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵,培育出转基因羊。
但是,人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。
以下有关叙述,正确的是()A.人体细胞中凝血因子基因编码区的碱基对数目,等于凝血因子氨基酸数目的3倍B.可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵C.在该转基因羊中,人凝血因子基因存在于乳腺细胞,而不存在于其他体细胞中D.人凝血因子基因开始转录后,DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA5.科学家通过基因工程的方法,能使马铃薯块茎含有人奶主要蛋白。
专题1 基因工程专题试卷及答案解析
专题1 基因工程一、选择题1.科学家们经过多年的努力,创立了一种新兴生物技术——基因工程,实施该工程的最终目的是()A.定向提取生物体的DNA分子B.定向地对DNA分子进行人工“剪切”C.在生物体外对DNA分子进行改造D.定向地改造生物的遗传性状2.关于基因工程的叙述,正确的是()A.基因工程是指非同源染色体上非等位基因重组B.基因工程是指同源染色体上等位基因重组C.基因工程是指一种生物的基因转接到另一种生物的DNA分子上D.基因工程是指同种生物的基因转接到同种生物的其他个体DNA上3.“分子手术刀”在切割DNA时,切开的结构是()A.氢键 B. 共价键C.二硫键D.磷酸二酯键4.下列关于限制性核酸内切酶的说法,正确的是()A.限制性核酸内切酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键B.一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列C.不同的限制性核酸内切酶切割DNA后都会形成黏性末端D.限制性核酸内切酶广泛存在于各种生物中,微生物中很少分布5.作为基因的运输工具——载体,必须具备的条件之一及理由是()A.具有多个限制酶切点,以便于目的基因的表达B.具有标记基因,以便为检测目的基因的表达提供条件C.能够在宿主细胞中复制并稳定保存,以便于进行筛选D.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制,以便提供大量的目的基因6.属于“分子缝合针”的是()①E•coli DNA连接酶②T4 DNA连接酶③DNA聚合酶④解旋酶⑤RNA聚合酶A.①②③B.①②C.①②⑤D.②④7.下列说法正确的是()A.DNA连接酶最初是从人体细胞中发现的B.限制酶的切口一定是GAA TTC碱基序列C.质粒是基因工程中惟一用作运载目的基因的载体D.利用载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆”8.正确表示基因操作“四步曲”的是()A.提取目的基因→将目的基因导入受体细胞→目的基因与载体结合→目的基因的检测和表达B.目的基因的检测和表达→提取目的基因→目的基因与载体结合→将目的基因导入受体细胞C.提取目的基因→目的基因与载体结合→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和表达D.目的基因与载体结合→提取目的基因→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和表达9.基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞,主要原因是() A.结构简单、操作方便B.繁殖速度快C.遗传物质含量少D.性状稳定、变异少10.1993年,我国科学工作者培育成的抗棉铃虫的转基因抗虫棉,其抗虫基因来源于()A.普通棉的突变基因B.棉铃虫变异形成的致死基因C.寄生在棉铃虫体内的线虫基因D.苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因11.右下图表示限制酶切割某DNA的过程,从图中可知,该限制酶能识别的碱基序列及切点是()A.CTTAAG,切点在T和C之间B.GAATTC,切点在G和A之间C.GAATTC,切点在A和G之间D.CTTAAC,切点在T和C之间12.用DNA 探针检测饮用水中病毒的具体方法是( )A .与被检测病毒的DNA 碱基序列进行比较B .与被检测病毒的DNA 碱基序列进行杂交C .与被检测病毒的DNA 碱基序列进行组合D .A 、B 、C 三种方法均可13.基因治疗是指( )A .运用基因工程技术,把有缺陷的基因切除,达到治疗疾病的目的B .运用人工诱变的方法,使有基因缺陷的细胞发生基因突变恢复正常C .把健康的外源基因导入到有基因缺陷的细胞中,达到治疗疾病的目的D .对有基因缺陷的细胞进行修复,从而使其恢复正常,达到治疗疾病的目的14.下列关于基因工程成果的概述,错误的是( )A .在医药卫生方面,主要用于诊断治疗疾病B .在环境保护方面主要用于环境检测和对污染环境的净化C .在畜牧业上主要通过克隆培育出体型巨大,品质优良的动物D .在农业上主要是培育高产、稳产、品质优良和具有抗性的农作物15.切取牛的生长激素和人的生长激素基因,构建表达载体后,用显微注射技术将含有目的基因的表达载体分别注入小鼠的受精卵中,从而获得了“超级鼠”,此项技术遵循的原理是( )A .基因突变:DNA →RNA →蛋白质B .基因工程:DNA →RNA →蛋白质C .细胞工程:DNA →RNA →蛋白质D .胚胎工程:DNA →RNA →蛋白质二、非选择题16.限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是 —G ↓GATCC —,限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是 —↓GATC —。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
基因工程原理复习题思考题1、基因工程的定义与特征。
2、试述基因工程的主要研究内容。
3、基因工程在食品工业上有何应用发展?4、转基因是一把双刃剑,请客观谈谈对转基因及转基因食品安全性的认识。
1、原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别?2、什么是基因?根据基因的产物,基因可分为哪三类?3、引起核酸变性的因素主要有哪些?核酸变性后性质有何变化?4、DNA复性及其影响因素。
1,DNA凝胶电泳中核酸分子分离的机理。
2,DNA凝胶电泳中影响电泳迁移率的因素主要有哪些?3,PCR的原理和主要反应过程,并分析影响PCR扩增的影响因素。
4,PCR引物设计的原则,若给一指定DNA序列并需要通过PCR扩增此序列,如何设计扩增引物?5,定量PCR的原理?Ct值的含义。
6,分子杂交的类型主要有哪些?探针的标记方法与标记类型?常用的双链DNA的标记方法是哪两种?7,Southern杂交一般过程及影响杂交因素。
8,基因组文库的构建过程?如何确定文库的大小?9,基因文库的类型包括哪两种?各有什么特点?10,一般质粒DNA的构型有哪几种?在琼脂糖凝胶电泳中的有何特点?11,碱裂解法提取质粒DNA的原理,分析影响试验结果的各种可能因素。
12,电泳缓冲液使用一定时间后出现DNA在凝胶中跑不动现象的原因,有何解决办法?13,电泳的指示剂和染色剂有何区别,各自的作用是什么?1限制性核酸内切酶的类型,基因工程常用的是哪种限制性核酸内切酶?2什么是星活性,产生星活性的因素可能有哪些?3结合已做的实验,分析影响酶切的因素。
4限制性核酸内切酶命名规则及各字母代表的含义。
5简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。
6连接酶主要有哪些类型?有何异同点?影响连接酶连接效果的因素主要有哪些?7试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。
8基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些?1、作为基因工程载体,其应具备哪些条件?2、质粒的不相容性及其分子机理。
3、载体的类型主要有哪些?在基因工程操作中如何选择载体?4、质粒转化原理,影响转化率的因素有哪些?5重组体分子的选择方法主要有哪些?并简单阐述其原理1、基因的克隆方法主要有哪些?并阐述其克隆原理(至少3种,都是书上找的,自选哈,建议必选DD RT-PCR和SSH,原因请看下题)2、简单阐述差异显示PCR克隆基因的原理及其优缺点,有何应用?3抑制性差减杂交的原理与应用。
4酵母双杂交技术、噬菌体表面展示技术的原理。
5、T-DNA标签法克隆基因的一般技术路线。
1、通过比较,分析大肠杆菌表达系统和酵母表达系统各有何优缺点。
2、如何提高克隆基因的表达水平?3、克隆基因目的蛋白的表达的形式主要有哪些类型?4、启动子从转录模式上可分为哪两种?表达系统常选用哪一种?其机理是什么?5、表达载体和基因工程一般克隆载体在元件构成上有何差别?6、根据表达蛋白用途的不同,设计选择基因的表达策略。
1、什么叫转基因植物?植物转基因技术的基本路线主要包括哪些?2、外源基因导入植物的方法主要有哪些?3、运用已学的知识,如何全面分析获得的转基因个体(提示:包括外源基因是否整合,被插入位点分析,外源基因是否表达,表达量如何?等)4、出现转基因沉默现象的可能原因分析。
基因工程绪论1、基因工程的定义与特征。
定义:在体外把核酸分子(DNA的分离、合成)插入载体分子,构成遗传物质的新组合(重组DNA),引入原先没有这类分子的受体细胞内,稳定地复制表达繁殖,培育符合人们需要的新品种(品系),生产人类急需的药品、食品、工业品等。
特征:1、具跨越天然物种屏障的能力。
2、强调了确定的DNA片段在新寄主细胞中的扩增。
2、试述基因工程的主要研究内容。
1)、目的基因的分离2)、DNA的体外重组(载体、受体系统等)3)、重组DNA分子转移到受体细胞及其筛选4)、基因在受体细胞内的扩增、表达、检测及其分析。
3、基因工程在食品工业上有何应用发展?主要是通过基因重组,使各种转基因生物提高生产谷氨酸、调味剂、酒类和油类等有机物的产率;或者改良这些有机物组成成分,提高利用价值。
4、转基因是一把双刃剑,请客观谈谈对转基因及转基因食品安全性的认识。
转基因技术所带来的好处是显而易见的,在人类历史进步和发展中起到了积极作用。
首先,通过该项技术可以提供人们所需要的特性,改良培育新品种;第二,延长食品保存时间或增加营养成分;第三,将抗虫防菌基因转入到作物中,使作物本身产生抵抗病虫害侵袭的能力,减少了农药的使用量,有利于环境保护;第四,转基因技术及基因食物在医学方面得到广泛研究和应用。
人们对转基因技术的主要担忧在于环境方面。
外源基因的导入可能会造就某种强势生物,产生新物种或超级杂草、损害非目标生物、破坏原有生物种群的动态平衡和生物多样性,也即转基因生物存在潜在的环境安全问题。
转基因作物的大面积种植已有数年,食用转基因食品的人群至少有10亿之多,但至今仍未有转基因食品对生命造成危害的实例;更何况目前每一种基因工程食品在上市前,都要经过国家法律认可,食品卫生部门和环境部门的严格检测。
只有测试合格了,才能投放市场。
因此公众完全可以安全地消费、大胆地食用转基因食品。
第一章DNA的分子特性与利用5、原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别?1)原核基因表达调控的三个水平:转录水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控原核基因表达调控主要是在转录水平上的调控。
2)真核生物基因表达的特点:●1.基因组DNA存在的形式与原核生物不同;●2.真核生物中转录和翻译分开进行;●3.基因表达具有细胞特异性或组织特异性;●4.真核基因表达的调控在多个水平上进行:DNA水平的调控、转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控;6、什么是基因?根据基因的产物,基因可分为哪三类?基因是具有生物学功能的、在染色体上占据一定位置的一段核苷酸序列,是分子遗传的功能单位。
根据基因的产物,基因可分为三类:●转录并翻译编码蛋白质的基因:包括结构蛋白基因、编码酶的基因、调节基因●转录但不翻译产物的基因:包括tRNA、rRNA●不转录但有功能的DNA区段:如启动子、操纵基因7、引起核酸变性的因素主要有哪些?核酸变性后性质有何变化?引起核酸变性的因素:--温度、酸、碱、甲醛和尿素等。
DNA变性后,它的一系列性质发生变化,如紫外吸收(260 nm)值升高(增色效应), 粘度降低等,如DNA增加25-40%. RNA约增加1.1%。
8、DNA复性及其影响因素。
变性DNA在适当的条件下,两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构,这一过程称为复性。
DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关,也与它本身的组成和结构有关:分子量越大复性越难。
浓度越大,复性越容易。
(附加:注意:将热变性的DNA骤然冷却至低温时,DNA不可能复性。
但是将变性的DNA 缓慢冷却时,可以复性。
复性的应用:核酸的杂交,分子扩增)第二章基因工程操作的基本技术1.DNA凝胶电泳中核酸分子分离的机理。
在碱性环境下,核酸分子带负电荷,在外加电场的作用下,分子在凝胶多孔性刚性滤孔中从负极向正极泳动,其中主要由于分子筛效应和电荷效应达到分离不同大小核酸分子的目的。
2.DNA凝胶电泳中影响电泳迁移率的因素主要有哪些?1)分子本身的影响⌝分子的大小:小则快⌝带电荷数:多则快⌝分子构型:超螺旋>解螺旋2)电场:直流电场⌝电压高则快⌝电压太高则结果不准确常用3~5V/CM3)支持物介质⌝种类:琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶⌝凝胶浓度: 浓度大,筛孔小,适合小分子电泳;浓度小,筛孔大,适合大分子电泳4)电泳缓冲液⇐ pH值:偏碱性,带负电荷⇐离子浓度:离子浓度高⎽电流大⎽发热快⎽胶溶解⇐种类:TAE、TBE、TPE、TNE3.PCR的原理和主要反应过程,并分析影响PCR扩增的影响因素。
PCR原理:变性温度下,DNA双链变性双螺旋解开成单链DNA,在退火温度中人工合成的特异引物根据碱基互补配对原则与单链DNA特异结合,然后在DNA聚合酶的作用下,在延伸温度下不同的脱氧核苷酸按照碱基互补配对原则在引物的引导下合成与模板DNA互补的新链,实现DNA 的扩增。
影响PCR 扩增的影响因素:§(1)Taq 酶:常用1U/25µL≥浓度低,扩增产物不够;≥浓度高,非特异性扩增增加;≥酶的活性;§(2)dNTP 的浓度:常用100-200µmol/L ,不能低于20µmol/L ,特异性、保真性;§(3)模板:主要考虑纯度及使用量,对纯度要求不高,但含有酚、氯仿等杂质则难以成功。
使用量从几个ng 到100ng.§(4)引物浓度:0.1-0.5µmol/L 之间,过多则非特异扩增增加,形成引物二聚体;§(5)Mg2+浓度:常用 0.5-2.5mmol/L ;影响:酶的活性、引物-模板退火、特异性§(6)PCR 反应程序设定:变性温度和时间、引物退火温度Tm 与时间、引物延伸温度与时间和循环数4. PCR 引物设计的原则,若给一指定DNA 序列并需要通过PCR 扩增此序列,如何设计扩增引物?引物设计原则:1、G+C 含量45-55%;2、Tm 值高于55;3、引物特异性;4、引物扩增跨度;5、是否形成引物二聚体5. 定量PCR 的原理?Ct 值的含义。
原理:通过实时检测PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号,来实现对起始模板进行定量及定性的分析。
初始模板量X0的对数值与C(T) 值之间呈线性关系:log X0= - log(1+Ex) *Ct+ log N Ct 值的含义是:每个反应管内的荧光信号开始由本底进入指数增长阶段时到达设定的域值时所经历的循环数(如后图所示,图仅供参考)6. 分子杂交的类型主要有哪些?探针的标记方法与标记类型?常用的双链DNA 的标记方法是哪两种? Threshold line C(t) valueC(t) value 18.12 - 0.0阈值线 Ct 值 Ct 值探针的标记方法:切口平移法、随机引物合成法,末端标记法,PCR标记法,体外转录标记法。
探针按核酸分子分:DNA探针和RNA探针;按标记物的不同:放射性标记探针和非放射性标记探针。
标记类型:按核酸分子的不同:可分为DNA探针和RNA探针根据标记物的不同:可分放射性标记探针和非放射性标记探针;双链DNA探针标记主要方法:切口平移法、随机引物合成法;7.Southern杂交一般过程及影响杂交因素。
Southern杂交操作步骤:(1) 用限制性内切酶酶切DNA, 经凝胶电泳分离各酶切片段;(2) 转膜:将DNA片段转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上;(3) 预杂交:封阻滤膜上非特异性位点;(4) 杂交:让探针与同源DNA片段特异性结合;(5) 洗脱:去除非特异性结合的探针;(6) 自显影检查目的DNA所在的位置。