HTRF生物过程和抗体药物研发解决方案
HTRF 生物过程和抗体药物研发解决方案
HTRF生物过程和抗体药物研发解决方案前言随着现代生物技术的迅猛发展，运用功能基因组学、蛋白质组学、生物信息学等现代生化与分子生物学技术，结合基因工程、蛋白质工程、细胞工程等技术，使得生物技术药物研发高潮迭起。
当前，治疗性抗体药物研发已成为生物技术药物领域的热点。
治疗性抗体也称为抗体药物，指能在体内发挥疾病治疗作用的抗体制剂。
200年前，人们将自白喉杆菌培养上清液中分离到的可溶性毒素注入马体内，发现得到的抗血清可以治疗白喉，这是第一个用抗体治疗疾病的例子。
20世纪70年代德国学者Geroge KÖhler和英国学者Cesar Milstein利用细胞融合技术成功地制备了杂交瘤单克隆抗体 (mAb)以来，抗体的生产技术才实现革命性的突破, 其在诊断、治疗、预防和蛋白提纯方面显示了重要的作用和非常广阔的应用前景。
进入80年代，随着免疫学和分子生物学技术的发展，以及抗体基因结构的阐明，DNA重组技术开始被用于抗体的改造，人们可以根据需要对以往的鼠抗体进行相应的改造，以消除抗体应用的不利性状或增加新的生物学功能，还可用新的技术重新制备出各种形式的重组抗体，标志着基因工程抗体时代的来临。
自第一个基因工程抗体——人-鼠嵌合抗体于1984年诞生以来，新型基因工程抗体不断出现，包括嵌合抗体，人源化抗体、小分子抗体（Fab片段、单链抗体、单域抗体等）、多价小分子抗体（双链抗体等）及抗体融合蛋白（免疫毒素、同位素等）等不断完善，目前全人抗体生产技术也已处于蓬勃发展中。
最近的统计显示，在基于生物技术背景而进行临床实验的药物研究中，单克隆抗体药物占据了18%，治疗性单克隆抗体已发展成为非常具有市场应用价值的产品。
2009年FDA批准的14个药物中有4个为全人抗体，而这4个抗体药物中有两个抗体来自强生公司，使强生公司称为2009年抗体药物的最大赢家。
目前，美国已批准26个单抗药物用于治疗，主要包括癌症，慢性炎症，移植，感染疾病和心血管疾病。
HTRF used in Kinase research
HTRF激酶检测解决方案激酶简介激酶是磷酸转移酶的一种，它在控制细胞生长，代谢，分化和凋亡的很多信号通路中起着核心作用。
激酶能催化一个磷酸基团从三磷酸腺苷（ATP）转移到特定的底物上。
这些底物可以是蛋白、多肽、脂质，糖，核苷，这些底物被磷酸化后会被激活从而发挥出一些特殊功能，例如在信号传导，调控细胞周期以及代谢等复杂的功能中发挥作用。
因此激酶跟人体的多种疾病如肿瘤，炎症，免疫失调，代谢疾病等有关。
激酶通常根据它们的底物命名。
激酶当中最大的一类是蛋白激酶，蛋白激酶作用于特定的蛋白或多肽，并改变其活性。
目前在人类基因组中已经发现了500多种蛋白激酶，占了人类所有基因的2%左右。
蛋白激酶可以分为：丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，酪氨酸蛋白激酶，组氨酸蛋白激酶，色氨酸蛋白激酶，天冬氨酰基/谷氨酰基蛋白激酶，目前研究的比较多得是前两类。
Cisbio公司利用其专利HTRF技术，开发出一系列的激酶平台，可以分为以下四类：HTRF KinEASE TM, HTRF Transcreener ADP, HTRF Kinase toolbox, Cellular Kinase assays。
目前这些产品被世界上几乎所有的大型药企广泛使用，本期我们将对这些产品逐一作介绍。
HTRF KinEASE TM试剂盒----测定丝氨酸/苏氨酸激酶，酪氨酸激酶活性最方便的平台丝氨酸/苏氨酸激酶和酪氨酸激酶是药筛的主要靶点。
Cisbio Bioassays和Millipore合作研发了基于HTRF技术的四个激酶试剂盒，已经有160多种激酶利用这个平台上得到了验证。
HTRF KinEASE TM四个试剂盒的实验方法都是一样的，每一个试剂盒都包含有一个通用的生物素化的多肽底物，一个标记了Eu的只针对特异性磷酸化位点的单抗，Sa-XL665以及实验缓冲液。
如图1所示，丝氨酸/苏氨酸激酶试剂盒有三种不同试剂盒，每一种有不同的底物；酪氨酸激酶试剂盒有一种底物，每一种底物都适用于一系列的激酶。
高通量药物筛选利器——HTRF, Mini Catalogue - Cisbio
HTRF 产品纵览HTRF 的优势HTRF 是不需要洗涤的ELISA 。
其优势如下：∙ 操作非常简单∙ 体系非常稳定∙ 反映样品的实际情况，假阳性假阴性率低，可去除由于天热产物自发荧光引起的背景HTRF 原理HTRF 技术基于时间分辨荧光（TRF ）和荧光共振能量转移（FRET ）两大技术原理时间分辨荧光 （TRF ） TRF 利用稀土元素中镧系元素的独特性质。
它们与普通荧光的主要区别是荧光的持续时间不同。
普通荧光的半衰期为纳秒级，镧系元素的半衰期是毫秒级，有6个数量级的差别。
所以，在检测时，TRF 有一个时间延迟---50微秒。
经过这个时间延迟，普通荧光的信号几乎为零。
所以，TRF 的背景非常低，反映样品的实际情况。
荧光共振能量转移（FRET ）FRET 技术利用了两种荧光基团的能量转移，这两种荧光基团分别称为能量供体（Donor ）和能量受体（Acceptor ）。
Donor 被外来光源激发（例如氙灯或激光），如果它与Acceptor 比较接近，可以将能量共振转移到Acceptor 上，使其受到激发，发出特定波长的发射光。
将Donor 和Acceptor 分别与相互作用的两个生物分子结合，生物分子的结合可以将Donor 和Acceptor 拉到足够近的距离，产生能量转移。
由于Acceptor 的发射光来自于能量转移，所以在实验中不需要将未结合与已结合的分子分开，即不需要洗涤步骤。
HTRF 的能量供体HTRF 的能量供体是铕（Eu ）和铽（Tb ）的穴状化合物。
在这个穴状化合物里，Eu 和Tb 被永久地嵌合在一个笼子里，结构非常稳定。
这个结构是由 J.M. Lehn’s 教授发明的，并由此在1987年获得了诺贝尔奖。
图1：时间分辨荧光技术原理Donor 与Acceptor 距离较远，无FRETDonor 与Acceptor 距离较近，产生FRETHTRF 的能量受体HTRF 的能量受体也有两种，XL665和d2。
htrf法 -回复
htrf法-回复[HTRF法]：一种高灵敏、高准确性的生物分析技术引言：近年来，生物分析技术在生命科学和药物研发领域发挥着至关重要的作用。
其中，HTRF法（Homogeneous Time-Resolved Fluorescence Assay）以其高灵敏度、高准确性和简便操作而备受瞩目。
本文将一步一步回答关于HTRF法的基本原理、应用领域和未来发展方向。
一. HTRF法的基本原理HTRF法是一种光学测量技术，其基本原理是通过荧光共振能量传递来检测分子之间的相互作用或反应。
这个传递过程需要三个关键成分：Donor 标记物、受体标记物和荧光基质。
1. Donor标记物：Donor标记物是受体分子表面的产生能量的物质，通常是用稀土金属离子（如铕或镭）标记。
Donor标记物在受到激发光照射后会发射光子。
2. 受体标记物：受体标记物是Donor标记物能量传递的接收者，通常用荧光染料或荧光蛋白标记。
当Donor标记物的发射光与受体标记物的激发光在频率匹配时，能量会传递给受体标记物。
3. 荧光基质：荧光基质是一个短寿命的荧光化合物，例如有机化学家染料Terbium。
荧光基质在受到发射光照射后，会产生荧光信号，并在一段时间后减弱。
基于这个原理，HTRF法如下工作原理：首先，通过标记Donor和受体标记物，将其加入试验样品中。
当样品中发生特定的分子相互作用或反应时，Donor标记物的发光会与受体标记物的激发光匹配，从而传递能量，使受体标记物产生荧光。
荧光基质会吸收这些荧光，并在一段时间后发射出荧光信号，该荧光信号可以被检测并与样品中分子相互作用的程度相关联。
通过检测荧光信号的幅度与光谱特性，我们可以量化目标分子相互作用的强度和动力学参数。
二. HTRF法的应用领域1. 蛋白质相互作用研究：HTRF法被广泛应用于研究蛋白质相互作用，如配体-受体结合、酶底物结合等。
该技术不仅能够定量测量蛋白质相互作用的强度，还可以研究这些相互作用的动力学参数。
htrf法 -回复
htrf法-回复[htrf法]原理与应用领域[htrf法]（High-throughput Fluorescence Resonance Energy Transfer）是一种高通量荧光共振能量转移技术，广泛应用于生物医学研究领域。
本文将逐步讨论[htrf法]的原理、实验步骤和应用领域。
一、[htrf法]原理[htrf法]利用荧光分子之间的共振能量转移现象，测量分子之间的相互作用。
当两种荧光染料分别存在于分子A和分子B上时，它们的光谱特性可以相互影响。
其中一种染料吸收光子的能量会以非辐射跃迁的方式传递给另一种染料，从而导致获能染料的发射峰增强，另一种染料的发射峰减弱。
这种共振能量转移现象可以通过检测发射光谱的变化来量化分子之间的相互作用。
二、[htrf法]实验步骤1. 实验准备：准备待测样本、荧光探针和仪器设备。
2. 样本标记：将待测的分子A和分子B各自用不同的荧光染料标记。
选择合适的染料对是非常重要的，需要考虑其发射和吸收波长的兼容性以及染料的光稳定性。
3. 混合反应：将标记的分子A和分子B混合，使它们相互作用。
也可以加入其他试剂以改变反应条件，以便研究分子间的互作用。
4. 测量反应结果：使用[htrf法]分析仪器测量样品的荧光发射谱。
该仪器可以同时测量两种不同波长的荧光发射。
5. 数据分析：根据[htrf法]原理中共振能量转移的特点，分析测量到的发射谱数据，计算共振能量转移的效率。
这可以通过计算荧光峰的比例来完成，即获能染料峰的强度与失能染料峰的强度之比。
三、[htrf法]应用领域[htrf法]在生物医学研究中具有广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：1. 蛋白质相互作用研究：[htrf法]可用于研究蛋白质之间的相互作用，如蛋白质与配体的结合和酶促反应。
通过标记不同的蛋白质和配体，可以研究它们之间的相互作用及其动力学特性。
2. 细胞信号转导：[htrf法]可以用于研究细胞中信号传递途径的动态过程。
htrf方法学
htrf方法学一、HTRF方法学简介高灵敏度时间分辨荧光（HTRF）方法学是一种生物分析技术，主要用于检测低浓度目标分子。
它结合了时间分辨荧光（TRF）技术和高效液相色谱（HPLC）技术，具有高灵敏度、高特异性和宽线性动态范围等特点。
二、HTRF技术原理HTRF技术通过将目标分子与荧光标记物结合，利用荧光信号的强度和时间特性进行分析。
在实验过程中，样品经过HPLC分离，随后通过荧光检测器检测，实现对目标分子的定量分析。
三、HTRF方法学的应用领域HTRF方法学广泛应用于生物科学研究、药物筛选、生物标志物检测等领域。
在生物科学研究中，HTRF技术可用于研究蛋白质相互作用、酶动力学、核酸杂交等；在药物筛选中，可用于筛选药物靶点、评估药物活性等；在生物标志物检测中，可用于疾病诊断、疗效监测等。
四、HTRF方法学的优势与局限性优势：1.高灵敏度：HTRF技术可检测低至ng/L级别的目标分子。
2.高特异性：可通过特异性抗体或核酸探针实现对目标分子的识别。
3.宽线性动态范围：适用于不同浓度范围的样品分析。
4.快速检测：实验流程简便，检测速度较快。
局限性：1.仪器设备较高：HTRF仪器设备相对昂贵，投入成本较高。
2.检测范围有限：对于高浓度样品，HTRF方法的检测效果较好，而对于高分子量或大分子复合物的分析能力较弱。
3.操作技巧要求较高：实验过程中需要严格控制条件，以避免非特异性信号干扰。
五、我国HTRF研究与发展现状近年来，我国HTRF技术研究取得了显著成果，不仅在基础研究方面取得了突破，还成功应用于临床医学、药物研发等领域。
此外，国内多家企业致力于HTRF仪器设备的研发与生产，逐步降低了国外产品的市场占有率。
六、未来发展趋势与展望随着科学技术的不断发展，HTRF方法学在以下几个方面有望取得突破：1.仪器设备的微型化和便携化：通过技术创新，降低设备成本，实现HTRF 仪器的便携化，以满足现场快速检测的需求。
均相时间分辨荧光
Bagnols-sur-Cèze法国-2009年11月5日-Cisbio Bioassays ()公司是IBA旗下的子公司，也是药物研究和药物筛选领域HTRF (均相时间分辨荧光)技术的发明者。
今天Cisbio公司宣布，其在中国和韩国已建立了自己的销售团队，以便进一步开发亚洲市场。
本土销售团队将能让Cisbio为这两个迅速增长的生物制药市场的客户提供GPCR和激酶研究的HTRF平台、生物标志物检测以及其他相关的服务。
Cisbio Bioassays公司所销售的基于HTRF技术的产品包括：IP1, cAMP, Cellul’erk 以及Tag-lite™细胞表面受体平台。
这些业务将会通过IBA集团旗下的IBA中国分公司()来操作。
为了在亚洲市场拓展应用于癌症诊断和治疗方面的放射药物产品、仪器和方法, IBA集团于2007年建立了IBA中国公司。
韩国的销售业务则由位于首尔的代理商JCBio公司(www.jcbio.co.kr)负责。
JCBio公司专注于为制药和生物技术实验室提供相关商品。
“在过去的10年里，我们一直致力于在欧洲、北美和亚洲建立本土化的团队，针对特定市场并拓展我们在当地的业务。
” Cisbio Bioassays 市场部主管François Degorce说道，“我们的目标是成为一个客户至上的服务性公司，并让业务遍及全球。
我们在中国和韩国的团队将帮助我们促进与该两个重要市场的客户的关系。
”作为2009年度 Frost & Sullivan北美技术创新奖项的获得者，Cisbio Bioassays凭借着其专利技术HTRF领先于均相荧光方法领域。
HTRF是一种很灵敏且稳定的技术，主要应用于药物研发的高通量筛选阶段。
除了基于HTRF的一些产品外，Cisbio还能提供一系列的定制服务，其包括：为客户特定的实验蛋白，抗体或化合物等进行标记，为客户设计和研发实验方法，以及为客户提供HTRF 技术培训。
htrf方法
htrf方法HTRF方法简介HTRF（Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）是一种高灵敏度的荧光检测技术，广泛应用于生物和药物领域的研究。
该方法通过利用能够发射长寿命荧光的荧光标记物，结合时间分辨荧光检测技术，实现了高度灵敏的分析和定量测量。
HTRF方法的原理是基于荧光共振能量转移（FRET）的原理。
在HTRF实验中，通常使用两种不同的荧光染料标记待测物的两个不同位置。
其中一个标记物发射的荧光能量与另一个标记物的吸收光谱区域相重叠，使得能量可以通过非辐射转移的方式从一个标记物传递到另一个标记物，从而引起第二个标记物的荧光信号。
这种共振能量转移只在两个荧光染料之间的距离在几纳米范围内才能发生，因此具有高度的选择性和特异性。
HTRF方法相较于传统的荧光检测技术具有许多优势。
首先，HTRF 方法可以在混合溶液中进行测量，无需进行分离或洗涤步骤，大大简化了实验流程。
其次，HTRF方法对于样品的浓度范围非常宽广，可以进行从纳摩尔到毫摩尔的浓度测量。
此外，HTRF方法对样品的光学性质要求较低，可以在复杂的基质中进行测量，如血清、细胞培养基等。
最重要的是，HTRF方法具有极高的灵敏度，能够检测到非常微弱的信号。
HTRF方法在生物和药物研究中有着广泛的应用。
在药物发现和开发领域，HTRF方法可以用于高通量筛选（HTS）和药物分子相互作用研究。
例如，可以利用HTRF方法研究药物与靶蛋白之间的结合情况，评估药物的亲和力和抑制活性。
此外，HTRF方法还可以用于研究细胞信号转导、蛋白质交互作用、酶活性等生物学过程。
在免疫学和细胞生物学研究中，HTRF方法可以用于检测和定量细胞中的信号分子、蛋白质表达水平等。
总结起来，HTRF方法是一种高灵敏度的荧光检测技术，通过荧光共振能量转移实现对分子相互作用和生物过程的定量测量。
该方法在生物和药物研究中有着广泛的应用前景，为相关领域的研究者提供了一个强大的工具。
高通量药物筛选利器——HTRF,在生物标志物(biomarker)中的应用
HTRF技术介绍快速、稳定、不需洗涤、操作简单、易于自动化和微型化。
上述优势使得Cisbio的HTRF技术一直是药物研发领域的领先技术之一，并广泛用于免疫检测。
该技术已经在知名医药公司、生物技术公司和学术研究机构应用了15年以上。
HTRF（均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是用来检测纯液相体系中待测物的一种常用方法。
该技术结合了荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）和时间分辨荧光（TRF，Time-Resolved Fluorescence)）两种技术。
这种结合将TRF的低背景特点和FRET的均相实验方式融合在一起，使得HTRF技术拥有如下优势：实验方式Array灵活，具有很高的灵敏度和通量，实验数据稳定可靠，假阳性率较低。
虽然HTRF也是基于TR-FRET的化学技术，但它的许多特点把它与其它TR-FRET产品区分开来。
这些特点包括使用了镧系元素（铕和铽），从而具有非常长的半衰期，很大的Stroke's shift（如右图所示，Eu3+ Stroke’sshift > 300 nm）；但是HTRF有其独特的地方，镧系元素与络合的穴相结合，这种结合的穴状物与其它所有TR-FRET产品使用的螯合物相比，显著增加了稳定性（可耐受低pH值、金属离子、DMSO、EDTA等）；专利的比值测量能矫正淬灭和样品带来的干扰。
FRET技术简介FRET技术利用了两种荧光基团的能量转移，这两种荧光基团分别称为（能量）供体和（能量）受体。
供体被外来能源激发（例如闪光灯或激光），如果它与受体在足够近的距离之内，可以将能量共振转移到受体上。
受体受到激发，发出特定波长的发射光。
将供体和受体分别与相互作用的两个生物分子结合，生物分子的结合可以将受体和供体拉到足够近的距离，产生能量转移。
htrf技术原理
htrf技术原理一、引言htrf（high-throughput receptor functional assay）技术是一种高通量受体功能分析方法，用于研究受体与配体之间的相互作用和信号传导机制。
本文将介绍htrf技术的原理及其在生物医学研究中的应用。
二、htrf技术的原理htrf技术基于荧光共振能量转移（FRET）原理，通过测量荧光分子间的能量传递来研究受体与配体之间的相互作用。
其原理如下：1. 荧光共振能量转移（FRET）FRET是一种非辐射能量传递过程，发生在两个相互靠近的荧光分子之间。
该过程基于多种物理机制，其中最常见的是荧光蛋白或荧光染料的共振能量转移。
当一个荧光分子（受体）吸收光子能量并发射荧光时，如果有另一个荧光分子（配体）与之相互作用，能量将从受体传递给配体，导致受体的荧光减弱或熄灭。
2. 受体与配体相互作用的检测htrf技术利用了FRET原理来检测受体与配体的相互作用。
具体步骤如下：（1）在实验中，受体和配体分别与特定的荧光标记结合。
（2）当受体与配体结合时，荧光标记的受体与配体之间的距离缩短，从而促使FRET发生。
（3）通过激发受体特定的荧光标记，观察配体特定的荧光标记是否发生荧光减弱或熄灭，从而判断受体与配体的相互作用。
三、htrf技术在生物医学研究中的应用htrf技术在生物医学研究中具有广泛的应用，主要体现在以下几个方面：1. 受体配体筛选htrf技术可以用于大规模筛选化合物库，寻找与受体特异性结合的配体。
通过测量荧光信号的强度变化，可以筛选出具有高亲和力和特异性的配体，用于后续的药物研发。
2. 受体激活机制研究htrf技术可以用于研究受体的激活机制。
通过观察受体与不同配体结合后的荧光信号变化，可以揭示受体激活的动态过程和信号传导机制，进而深入理解相关疾病的发生机制。
3. 受体结构与功能关系研究htrf技术可以用于研究受体结构与功能之间的关系。
通过引入不同的突变体或受体片段，测量与配体结合相关的荧光信号变化，可以揭示受体结构的不同区域对功能的影响，从而进一步理解受体的生物学功能。
HTRF技术
HTRF技术生药活性成分的高通量筛选技术高通量筛选(High throughput screening，HTS)技术是20世纪80年代后期发展起来的一种药物筛选新技术。
它集计算机控制、自动化操作、高灵敏度检测、数据结果自动采集和处理于一体，实现了药物筛选的快速、微量、灵敏和大规律，日筛选量达到数万甚至数十万样品次，是新药发现技术和方法的一大进步。
传统的药物筛选方法是采用药理学的实验方法，通过体内、体外的多种实验方法，评价药用样品的药理活性。
但是，由于传统的药理实验方法需要消耗大量样品，使用大量实验动物，参加实验的技术人员具有较熟练的操作技能，而且筛选样品量有限，劳动强度大，不能适应大量样品的同时筛选。
高通量药物筛选是在传统的筛选技术基础上，应用先进的分子生物学、细胞生物学、计算机、自动化控制等高新技术，建立的一套更适合于药物筛选的技术体系。
本文试对高通量筛选技术的基本原理及其在生药活性成分筛选中的应用做一简单论述。
1．基本原理高通量药物筛选技术是将多种技术方法有机结合而形成的新的技术体系，它以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行实验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验数据，以计算机对实验获得的数据进行分析处理。
它的正常开展需要有一个高容量的化合物库、自动化的操作系统、高灵敏度的检测系统、高效率的数据处理系统以及高特异性的药物筛选模型。
1.1 化合物样品库高通量筛选是一种利用已有的化合物进行的体外随机筛选。
因此通过高通量药物筛选发现先导化合物(leading compounds)的有效性取决于化合物样品库中化合物的数量及其质量。
化合物样品的数量是指不同样品的数量。
化合物样品的质量主要由化合物结构的多样性决定的。
许多活性反应基团(reactive groups)使初筛的假阳性大量增加，剔除这些化合物可以提高化合物样品库的质量。
化合物样品主要有人工合成和从天然产物中分离纯化两个来源。
HTRF Human IgG Kit
Forget ELISA,You have HTRF® now!两步实验，轻松定量检测Human IgG实验原理Human Fc kit 采用竞争法对人的IgG 和Fc 标签蛋白的进行定量检测。
试剂盒中有一个Eu3+标记的多抗，特异性识别人的Fc 段，另外一个是标记了XL665的人IgG 。
此均相实验无需洗涤，可准确定量人Total IgG 的含量，且仅需2个小时的孵育时间，非常快速。
Human Fc kit 实验原理实验原理Human IgG Kit 采用夹心法可以对微量样本中的人IgG 进行高灵敏度的定量检测。
试剂盒中有两个多克隆抗体，一个特异性识别Fc ，标记Eu3+；另外一个特异性识别Fab ，标记d2。
FRET 信号随着样本中IgG 浓度的增加而增大。
Human IgG kit 实验原理产品特性 检测底限：5.5 ng/mL检测范围：5.5 - 4,000 ng/mL 信号/背景值：11反应形式：96孔板或384孔板特异性：IgG1, IgG2, IgG3, IgG4Human Fc kit 标准曲线产品特性 检测底限：0.9 ng/mL检测范围：0.9 - 2,000 ng/mL 孵育时间：室温2小时反应形式：96孔板或384孔板特异性：IgG1, IgG2, IgG3, IgG4Human IgG kit 标准曲线Human Fc Kit实验性能1.完整IgG和Fc段的检测不同特征的人Fc段嵌合抗体使用该试剂盒均可被检测到，但是不同嵌合抗体的亲和力不同，这与嵌合抗体的Fc段性质有关。
完整的IgG的亲和力高于部分Fc段抗体，但是完整IgG和部分Fc段抗体获得的浓度曲线是平行的，这意味着如果以完整IgG作标准品，根据曲线的偏移，可以计算出样本的浓度。
当然绝对的样本浓度需要用用样本相同的蛋白做标准品来计算获得。
运用该试剂盒检测4种不同的嵌合抗体在不同浓度下的FRET信号2.培养液的兼容性使用磷酸缓冲液，培养液和RPMI等，对试剂盒的检测结果均无影响。
文献译文：植物源性重组人血清转铁蛋白的多功能性
植物源性重组人血清转铁蛋白的多功能性概述人血清转铁蛋白〔htf〕是人血清中要紧的结合铁蛋白质，在铁转运中有重要作用。
另外，htf还有许多其他的作用，包括抗菌功能和对哺乳动物细胞增殖、分化中的生长因子效用。
其多功能性使其在不同疗法和商业应用中有巨大价值。
然而，htf的这些成功应用特殊大程度上取决于大量的高质量的htf的应用。
本研究中，我们将植物作为获得重组htf的一种新平台。
我们的研究讲明转基因植物是一种获得rhtf的有效系统，最大积存量到达了全部可溶蛋白的0.25%〔〕。
此外，植物源性rhtf维持了许多与天然htf相同的生物活性。
尤其是rhtf在体外可逆性的结合铁作用，讲明了其抑菌活性、在无血清培养基中的支持细胞增值的作用，和在体外内化进进哺乳动物细胞的性质。
本研究的成功使得今后多领域应用植物源性rhtf成为可能。
植物源性rhtf突出的应用确实是根基作为特定细胞的一种新的载体或者作为蛋白质/肽段药物的口服递送以治疗人类疾病例如糖尿病。
为证实此假讲，我们在植物中又额外地表达了一种包含胰高血糖素样肽段-1〔GLP-1〕或其衍生物的htf融合蛋白。
在此，我们展示植物源性htf-GLP-1融合蛋白维持了体外培养基中内化进进哺乳动物细胞的能力。
简介转铁蛋白Tf包含了所有脊椎动物体内发觉的一系列同源性的铁结合蛋白糖蛋白〔AisenandHarris,1989〕，要紧功能是铁的螯合和转运。
Tf是一种单分子蛋白，分子量范围为76-81kDa，取决于糖基化程度。
每种TF蛋白包含两种相似的裂片，分不喊做N-末端和C-末端，每一裂片包含单一的铁结合位点〔AisenandHarris,1989;Bakeretal.,2002〕。
hTf是转铁蛋白Tf家族的要紧成员。
hTf蛋白由679个氨基酸组成，要紧在肝脏合成并分泌进血〔MacGillivrayetal.,1983〕。
hTf的要紧功能是络合血中的游离铁并将之转运到全身各处〔MacGillivrayetal.,1983〕。
拥有自主知识产权的新型抗体药物开发和生产方案(二)
拥有自主知识产权的新型抗体药物开发和生产方案一、实施背景随着生物医药技术的飞速发展，抗体药物在肿瘤、免疫疾病等领域的应用越来越广泛。
然而，我国在抗体药物产业中缺乏具有自主知识产权的创新药物，大部分依赖进口或仿制。
为了改变这一现状，本方案旨在从产业结构改革的角度出发，通过自主研发，打造拥有自主知识产权的新型抗体药物开发和生产体系。
二、工作原理本方案采用双特异性抗体（bispecific antibodies，BsAbs）技术平台，通过设计和筛选，获得针对特定肿瘤细胞和免疫细胞的双特异性抗体。
同时，利用基因工程技术，对抗体进行人源化改造，降低免疫原性，提高亲和力。
最后，通过细胞培养和纯化，获得高效、低毒的新型抗体药物。
三、实施计划步骤1.确定治疗目标：针对某一特定肿瘤或免疫疾病，明确治疗目标和抗体作用机制。
2.设计和筛选双特异性抗体：根据治疗目标，设计和筛选合适的双特异性抗体，确定其与肿瘤细胞和免疫细胞的结合位点。
3.基因工程技术人源化改造：利用基因工程技术，对抗体进行人源化改造，降低免疫原性。
4.细胞培养和纯化：通过细胞培养和纯化技术，获得高纯度、高活性的新型抗体药物。
5.药效学研究：进行药效学研究，评估新型抗体药物的疗效、毒性和药代动力学特性。
6.临床试验：根据药效学研究结果，进行Ⅰ/Ⅱ期临床试验，评估新型抗体药物的安全性和有效性。
7.生产和销售：通过审批后，进行Ⅲ期临床试验和商业化生产，实现新型抗体药物的市场推广和销售。
四、适用范围本方案适用于肿瘤、免疫疾病等治疗领域的双特异性抗体药物研发和生产。
同时，也可适用于其他需要提高药物特异性和降低毒性的治疗领域。
五、创新要点1.采用双特异性抗体技术平台，可同时作用于肿瘤细胞和免疫细胞，提高疗效。
2.利用基因工程技术人源化改造抗体，降低免疫原性，提高亲和力。
3.通过细胞培养和纯化技术，获得高纯度、高活性的新型抗体药物。
4.药效学研究和临床试验紧密结合，确保药物安全性和有效性。
超嗜热古菌组蛋白HPhA单克隆抗体制备与初步应用
超嗜热古菌组蛋白HPhA单克隆抗体制备与初步应用张玲;郑艳军;朱平;张国利【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2007(011)004【摘要】目的制备针对超嗜热古菌组蛋白HPhA的单克隆抗体并进行鉴定.方法以重组纯化蛋白HPhA为抗原,用聚乙二醇(PEG)法制备杂交瘤细胞,ELISA检测杂交瘤细胞分泌抗体的效价和类型,Western blotting分析抗体的特异性.结果获得3株稳定分泌抗HPhA蛋白的单克隆抗体(MAb),3株单克隆抗体1A12、3C11、3B4分别属于IgG1、IgM和IgG2b亚类.ELISA和Western blotting结果显示,单克隆抗体3B4能特异性结合HPhA及PEA-HPhA重组蛋白.结论抗HPhA单克隆抗体可用于HPhA和PEA-HPhA检测.【总页数】3页(P517-519)【作者】张玲;郑艳军;朱平;张国利【作者单位】吉林大学,农学部,吉林,长春,130062;吉林大学,农学部,吉林,长春,130062;解放军军事医学科学院军事兽医研究所,吉林,长春,130062;解放军军事医学科学院军事兽医研究所,吉林,长春,130062【正文语种】中文【中图分类】Q936【相关文献】1.超嗜热古菌Thermococcus sp.HJ21产高温α-葡萄糖苷酶条件和酶学性质初步研究 [J], 杨磊;吕明生;王淑军;房耀维;刘姝;李华钟2.超嗜热古菌Palaeococcus pacificus PolB DNA聚合酶和dUTPase在PCR反应中的应用 [J], 陈孜孟;赵文昭;解兵斌;崔治中;李卓;3.超嗜热古菌 Palaeococcus pacificus PolB DNA聚合酶和d UTPase在 PCR反应中的应用 [J], 陈孜孟;赵文昭;解兵斌;崔治中;李卓4.深海热液区超嗜热古菌太平洋古球菌Palaecoccus pacificus DY20341T高温淀粉酶系分析 [J], 胡俊西;张静;曾湘5.超嗜热古菌Sulfolobus tokodaii尿嘧啶营养缺陷型筛选条件的最适化及初步筛选 [J], 黄奇洪;申玉龙;倪金凤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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HTRF生物过程和抗体药物研发解决方案前言随着现代生物技术的迅猛发展，运用功能基因组学、蛋白质组学、生物信息学等现代生化与分子生物学技术，结合基因工程、蛋白质工程、细胞工程等技术，使得生物技术药物研发高潮迭起。
当前，治疗性抗体药物研发已成为生物技术药物领域的热点。
治疗性抗体也称为抗体药物，指能在体内发挥疾病治疗作用的抗体制剂。
200年前，人们将自白喉杆菌培养上清液中分离到的可溶性毒素注入马体内，发现得到的抗血清可以治疗白喉，这是第一个用抗体治疗疾病的例子。
20世纪70年代德国学者Geroge KÖhler和英国学者Cesar Milstein利用细胞融合技术成功地制备了杂交瘤单克隆抗体 (mAb)以来，抗体的生产技术才实现革命性的突破, 其在诊断、治疗、预防和蛋白提纯方面显示了重要的作用和非常广阔的应用前景。
进入80年代，随着免疫学和分子生物学技术的发展，以及抗体基因结构的阐明，DNA重组技术开始被用于抗体的改造，人们可以根据需要对以往的鼠抗体进行相应的改造，以消除抗体应用的不利性状或增加新的生物学功能，还可用新的技术重新制备出各种形式的重组抗体，标志着基因工程抗体时代的来临。
自第一个基因工程抗体——人-鼠嵌合抗体于1984年诞生以来，新型基因工程抗体不断出现，包括嵌合抗体，人源化抗体、小分子抗体（Fab片段、单链抗体、单域抗体等）、多价小分子抗体（双链抗体等）及抗体融合蛋白（免疫毒素、同位素等）等不断完善，目前全人抗体生产技术也已处于蓬勃发展中。
最近的统计显示，在基于生物技术背景而进行临床实验的药物研究中，单克隆抗体药物占据了18%，治疗性单克隆抗体已发展成为非常具有市场应用价值的产品。
2009年FDA批准的14个药物中有4个为全人抗体，而这4个抗体药物中有两个抗体来自强生公司，使强生公司称为2009年抗体药物的最大赢家。
目前，美国已批准26个单抗药物用于治疗，主要包括癌症，慢性炎症，移植，感染疾病和心血管疾病。
同时，伴随着基因组药物科学的发展，各类疾病的靶分子被越来越多的揭示，迫切地需要针对对各类疾病相关的靶分子的抗体药物。
抗体药物的筛选过程和作用机理在治疗性抗体的研发和筛选过程中，通常需要经过以下步骤：首先基于生物化学结合反应，利用HTRF或ELISA技术从几千至上万的样本库中筛选目标候选样本。
在确定候选样本可以与表面受体结合后，进一步从细胞水平确定候选样本与细胞的结合能力。
随后，确定候选样本的Kd，Kon/off 和IC50值，对抗体药物的亲和力等特性进行确定，最后一步是进行抗体药物的功能试验，如抗体药物激活细胞表面受体后，cAMP和IP-One的表达水平等等。
抗体药物进入人体内，通常主要通过五大作用机理发挥其功能效应：1)治疗性抗体可以和激活受体的配体结合，配体不再与受体结合，信号通路中断；2)治疗性抗体可以直接与目标受体结合，从而阻断配体受体的相互作用，并下调细胞表面目标受体的表达；3)通过抗体的分子的Fc段发挥功能效应，包括抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)和补体依赖性细胞溶解作用(CDC)；4)治疗性抗体1与细胞表面受体结合后，激活下游信号分子，包括影响细胞增殖、分化、细胞因子分泌的信号分子进一步调节细胞的功能；5）治疗性抗体与药物分子偶联，通过内吞作用进入细胞后，在溶酶体的作用下，释放药物分子发挥功能。
图1：治疗性抗体的作用机理(1-4来源于Andrew C. Chan,Paul J. Carter. Therapeutic antibodies forautoimmunity and inflammation. Nature Reviews Immunology. 10, 301-316. 5来源于David Schrama, RalphA. Reisfeld,Jürgen C. Becker. Antibody targeted drugs as cancer therapeutics. Nature Reviews DrugDiscovery 5, 147-159.) 为了考虑清晰度，图有改动，具体请见附件23HTRF 解决方案Cisbio 提供了一系列经过优化的试剂盒，检测工具和服务为生物治疗和生物工艺领域的研究和生产提供便利。
我们独一无二的产品可以定量检测样本中总免疫球蛋白含量和抗原特异的免疫球蛋白含量，这些有助于客户在细胞实验平台中从抗体库中筛选出针对细胞表面特异抗原的抗体。
Cisbio 在该领域主要包括二大产品线，第一大类的是HTRF®工具盒试剂，这些工具盒试剂可以帮助客户构建基于生物化学检测平台的抗体结合试验；另一大类的Tag-lite 产品线，这一产品线可以帮助客户构建基于细胞平台的抗体结合试验，测定抗体的Kd ，Kon/off 和IC50值，同时结合一些其他产品进行受体的内化试验和功能试验等，如GPCR 第二信使检测试剂盒（cAMP 和IP-One 等），受体的内化试验和激酶试验等等，用于对抗体的功能进行确定。
这两大产品线都依靠强大的HTRF 技术创造出均相的、稳定可靠的实验。
具体而言，主要的产品应用范围包括 一、抗体生产过程中克隆株的筛选通过HTRF®抗体检测试剂盒和其他一些试剂可以对细胞上清中整个IgG 蛋白进行定量检测，可广泛应用于高表达量抗体的细胞克隆株的筛选。
例如，通过HTRF®人样本总IgG 检测试剂盒，轻链Kappa 链和轻链Lamda 检测试剂盒，可以取代传统的ELISA 技术测定IgG 表达量。
ELISA 需要清洗，费事费力，而HTRF 技术为均相技术，不需要清洗，只需混合和孵育两步，更适宜于高通量检测。
二、、基于生物化学实验平台筛选和鉴定抗原特异的抗体HTRF®工具盒中的一些经染料标记的试剂如生物素、亲和素，抗标签蛋白（GST ，6HIS 等）试剂，抗不同种类的IgG 抗体等，可以被广泛运用在均相的，高通量的筛选试验中。
三、生物工艺生产中的质量控制（QC ）在抗体生产的生物工艺中，可以使用HTRF® IgG 检测试剂盒或者融合蛋白检测试剂盒（GST 和6HIS 等）对抗体、融合蛋白等进行质量控制，此试剂盒还可用于排除假阳性样本。
目前，Cisbio 的某些相关产品已被写入生物工艺中标准操作流程中（SOP ）中。
图2：竞争法筛选细胞表面RTK 激酶受体的特异性抗体原理图。
标记的天然配体被与RTK 受体结合的抗体取代，则检测信号减弱。
该筛选平台也可以采用非竞争法的模式，直接标记抗IgG 的二抗，则所有与受体结合的抗体都会产生信号，信号越强则代表结合能力越强。
四、基于细胞实验平台筛选和鉴定和细胞表面受体特异性结合的抗体Tag-lite平台可以用于表达和荧光标记细胞表面受体蛋白如GPCR，RTK等等。
通过与经HTRF®标记的抗IgG的抗体结合，可以直接从抗体库和杂交瘤上清中筛选针对Tag-lite细胞表面受体的抗体。
Tag-lite细胞可以和标记或者未标记的配体结合，通过竞争结合进一步鉴定抗体的结合能力。
五、客户定制服务HTRF®和Tag-lite技术为生物治疗和生物工艺领域提供客户定制服务支持，如果产品目录中暂时没有相关满足客户的产品，可以根据要求定制标记试剂，检测试剂盒等满足客户的需求。
4人单抗检测试剂盒(Human MAb Screening Assay)药物筛选和生物工艺领域经常需要对人IgG 或 Fc标签蛋白进行定量。
目前，含免疫球蛋白Fc 段的嵌合抗体或人源化单克隆抗体因为其潜在的治疗价值而受到越来越多的关注，人源化的单克隆抗体库也是重要的候选药物资源。
Cisbio基于HTR®F技术的人单抗筛选试剂盒是优化过的用于IgG检测、筛选和质量控制的试剂盒，适合高通量筛选，结果准确、稳定、可靠。
产品特点操作方法简单，快速灵敏度高，准确性好适用于自动化可以微型化与各种培养液和添加剂兼容应用领域在各种生物混合物中对IgG进行定量检测Fc标签蛋白的检测人源化抗体的筛选生物工艺中的质量控制实验原理HTRF人单抗检测试剂盒采用竞争法对人的IgG和Fc标签蛋白的进行检测，该试剂盒中含有一个Eu3+标记的多抗，特异性地针对人的Fc段，另一成份是标记了XL665的人IgG。
这种均相的实验方法无需洗涤，可以准确地定量所有人IgG亚型的含量，并且仅需要两个小时的孵育时间即可，非常快速。
图3 人单抗检测试剂盒实验原理5产品特性检测底限：5.5 ng/mL检测范围：5.5 to 4,000 ng/mL信号/背景值：11反应形式：96孔板或384孔板特异性：IgG1, IgG2, IgG3, IgG4图4 据试剂盒中实验方法获得的人IgG标准曲线实验性能1.完整IgG和Fc段的检测不同特征的人Fc段嵌合抗体使用该试剂盒均可被检测到，但是不同嵌合抗体的亲和力不同，这与嵌合抗体的Fc段性质有关。
完整的IgG的亲和力高于部分Fc段抗体，但是完整IgG和部分Fc段抗体获得的浓度曲线是平行的，这意味着如果以完整IgG作标准品，根据曲线的偏移，可以计算出样本的浓度。
当然绝对的样本浓度需要用用样本相同的蛋白做标准品来计算获得。
图5 运用该试剂盒检测4种不同的嵌合抗体在不同浓度下的FRET信号62.培养液的兼容性使用磷酸缓冲液，培养液和RPMI等，对试剂盒的检测结果均无影响。
即使培液中加入10%的FCS胎牛血清，对实验结果也无影响。
该试剂盒不同于其他免疫试剂盒基于生物素-亲和素的办法来检测，需要排除胎牛血清的影响。
该试剂盒对培液不敏感，由于培液产生的淬灭作用可以通过计算ratio得到补偿。
图6 在磷酸缓冲液、细胞培液和 RPMI（含10&胎牛血清）的体系中检测IgG标准曲线3.实验的微型化该试剂盒与人Fc标签蛋白的克隆库筛选相适应，即使整个实验体系降低到12.5μl，对实验结果也无影响。
需要注意的是，实验体系中体积的减少需要与相应的小体积的微孔检测板相配套。
图7 运用Fc标签蛋白获得的IgG标准曲线实验体系按照50 µl，25µl和12.5 µl三个体系实验用的微孔反应板在括号中标明（标准的96孔板，96半孔板和标准的384孔板）。
订购信息7免疫球蛋白轻链(Kappa 链和Lambda链)检测试剂盒目前，人免疫球蛋白用于治疗的需求越来越大，伴随而来，在药物研发和生物工艺领域，对人免疫球蛋白进行定量测定的需求也越来越大！Cisbio基于其专利的HTRF技术开发出专门针对人免疫球蛋白轻链kappa链和轻链lambda链的检测试剂盒，为全人抗体的定量，筛选和质量控制提供非常好的解决方案。
产品特点操作方法简单，快速灵敏度高，准确性好适用于自动化可以微型化与各种培养液和添加剂兼容应用领域选择性筛选kappa链和lambda链适用于不同的IgG亚型(IgG1,IgG2,IgG3,IgG4)筛选100%全人抗体适于生物工艺中的质量控制实验原理HTRF 人轻链kappa链和人轻链lamda链的检测试剂盒采用夹心法特异性对对人IgG kappa链和lamda链进行测定。