微生物的实验室培养(导学案)

【课题】：微生物的实验室培养

1．基础知识

1．1培养基的种类包括培养基和培养基等。

〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的，在配制培养基中用作为。【补充】培养基的类型及其应用：

〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加，培养霉菌时需要将培养基pH调节为，培养细菌时需要将pH调节为。

活动2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：

1．4获得纯净培养物的关键是。

1．5无菌技术包括：

（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行；

（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行；

（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在旁进行；

（4）避免已灭菌处理的材料用具与相接触。

1．6比较消毒和灭菌（填表）

用进行物理消毒。

（4）实验操作者的双手使用进行消毒；

（5）饮水水源用进行消毒。

1．8灭菌方法：

（1）接种环、接种针、试管口等使用灭菌法；

（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是；

（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽，所用器械是。

（4）表面灭菌和空气灭菌等使用灭菌法，所用器械是。

〖思考6〗对接种环灭菌时要用酒精灯的层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。

〖思考7〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是__________________。

〖思考8〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀继续加热，气压升至，温度为，并维持；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时打开锅盖，其目的是防止。

【补充】培养基的配制原则：

①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。

②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。

③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。

〖思考1〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是。

〖思考2〗倒平板的目的是。

〖思考3〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？

〖思考4〗配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的________________________。

〖思考5〗试管培养基形成斜面的作用是。

2．7接种

2．7．1微生物接种的最常用方法是和，另外还有和_____种逐步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是：

〖思考6〗取菌种前灼烧接种环的目的是；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是_________________________；取菌种和划线前都要求接种环冷却后

进行，其目的是；最后灼烧接种环的目的是。

〖思考7〗在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是。

2．7．3 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的。

2．7．4 系列稀释操作：

〖思考8〗操作中试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。整个操作过程中使用了1支移液管。

3．结果分析与评价

3．1 培养未接种培养基的作用是，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。

3．2 在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。

3．3 培养12h和24h后的菌落大小（相同、不同）；菌落分布位置（相同、不同）。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。

〖思考9〗在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因______________________等

〖思考10〗频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油

管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4℃冰箱中，每3～6个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，容易发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在－20℃冷冻箱中。