无菌操作ppt课件

21
常用灭菌剂使用浓度及效果比较表
灭菌剂 次氯酸钙 次氯酸钠 氯化汞 使用浓度 9～10% 2% 0．1～1% 持续时间 去除的难易 (min) 5～30 5～30 5 ～8 易 易 较难
2018/10/22 9
2.湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）
原理是利用高温蒸汽实现灭菌，在密闭的蒸锅
内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使 水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。 高压是为了提高温度和缩短灭菌时间。
利用高温灭菌效果好，可有效缩短灭菌时间，
一般设定121℃（压力0.1～0.15MPa ），灭菌 时间15～20min。
无菌操作
离体培养是将植物的器官、组织和细胞培
养在人工合成培养基上，使其发育成完整植 物体的技术。此培养基也是各种细菌、真菌 滋生繁殖的极好场所，因此在取材、接种、 培养的整个过程中，必须建立较强的无菌操 作意识。必须严格培养基和培养材料的灭菌， 同时严格无菌操作防止污染。
2018/10/22 2
一、灭菌技术

灭菌是组织培养重要的工作之一。
要建立有菌和无菌的概念，即必须准确 识别哪些东西是有菌的，哪些东西是无菌

的，并掌握灭菌方法及其适用范围。
2018/10/22
3
灭菌是组织培养重要的工作之一 原因：

1. 培养基含有丰富的营养物质，非常适合微生物的生长。 稍不小心就会引起杂菌污染，微生物一旦接触培养基， 其生长速度一般都比培养的组织快很多，并且杂菌的繁 殖速度极快，大量消耗培养基的营养。 2.这些污染微生物还可能分泌和排泄一些对植物组织生长 和代谢有毒作用的代谢物，使培养的植物组织难以正常 生长，严重时引起植物组织坏死或失去培养价值。 因此，在培养容器内保持一个完全无菌的环境是绝对 必要的。
空气过滤灭菌：用于形成无菌的操作空间 液体过滤灭菌：用于对高温、高压不稳定的物 质的灭菌，特别是遇热易分解的物质的灭菌
分类：
2018/10/22
14
4.灼烧灭菌

利用酒精灯烧灼以达到灭菌的目的。 方法：在酒精灯的外焰上灼烧充分，一般达 到尖端部分烧红为止，可有效杀菌 金属操作器械（剪子、镊子、解剖刀、接种 针等）可以采用该法灭菌
2018/10/22 10
2018/10/22
11
培养基高压蒸汽Βιβλιοθήκη 菌所必需的最少时间容器体积(mL) 20-50 75-150 250-500 1000 121℃灭菌所需最少时间(min) 15 20 25 30
2018/10/22
12

高温湿热灭菌具有被灭菌物品不易失水， 灭菌时间短，灭菌效果好，应用最普遍 等特点，常用于培养基、无菌水等的灭 菌。
接种工具（如接种的剪子、镊子、培养 皿等）、用于进行外植体表面灭菌的无 菌空瓶、用于抽滤灭菌的滤膜、针管、 针头、容器等均用高压蒸汽灭菌好。
13

2018/10/22
3.过滤灭菌

原理：空气或溶液通过过滤膜后，细菌的细胞 和孢子直径等因大于滤膜孔径而被阻，而被过 滤的气体或液体顺利通过滤膜，从而使滤过的 空气或液体实现无菌状态。
消毒是指杀死、消除或充分抑制部分微生物， 使之不再发生危害作用。显然经过消毒，许 多细菌芽孢、霉菌的厚垣孢子等不会完全杀 死，即消毒后的环境里、物品上还有活着的 微生物。
7

2018/10/22
灭菌方法
灭菌方法可以分为

物理方法：干热（烘烧和灼烧）、湿热（常 压或高压蒸煮）、射线处理（超声波、微 波）、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等 化学方法：使用升汞、甲醛、过氧化氢、高 锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌 素、酒精等化学药品处理
19

2018/10/22
2018/10/22
20

消毒剂的浓度一般是浓度越大，杀菌能力越强，
但酒精例外（因95%或100%的酒精比70%酒精
穿透细菌孢子的能力弱，而不易杀死它们）。

这些药剂及浓度要根据灭菌对象、灭菌目的等方
面适当选用。原则上要保证既达到灭菌的目的， 还要不能损伤组织和细胞。
2018/10/22

2018/10/22
15
2018/10/22
16
5.照射灭菌（紫外线灭菌 ）

利用紫外线灯照射灭菌，细菌吸收紫外线后， 蛋白质和核酸发生结构变化，引起细菌的染色 体变异，造成死亡。

一般常用于培养室、接种室的空气紫外线照
射灭菌。
2018/10/22
17
化学灭菌
6.熏蒸灭菌

用加热焚烧、氧化等方法 ，使化学药剂变为 气体状态扩散到空气中，以杀死空气和物体 表面的微生物。
2018/10/22 5
无菌的概念：经过高温灼烧或蒸煮过足够时
间后的物体，经其他物理的或化学灭菌方法 (当然这些方法必须已经证明是有效的)处理 过的物体，有可能是无菌的。
2018/10/22
6
灭菌 与 消毒

灭菌是指用物理或化学的方法，杀死物体表 面和孔隙内的一切微生物，即把所有生命的 物质全部杀死。

以上方法和药剂要根据工作中的不同材料、 不同目的进行适当的选用。
2018/10/22 8
物理灭菌
1.干热灭菌
干热灭菌是利用烘箱进行烘烤来杀死微生物。
原理是利用高温的烘烤实现灭菌，灭菌温度与 灭菌时间成反比，即温度较高时，灭菌时间较 短。（150℃40min或120℃ 120min） 玻璃器皿（如三角瓶、培养皿等）、金属操 作器械（剪子、镊子、解剖刀、接种针等） 均可用高温干热灭菌 干热灭菌的物品要预先洗净、干燥、妥善包扎， 以免灭菌后取用时重新污染

适用于接种室和培养室的灭菌
2018/10/22
18
7.药剂灭菌

化学消毒剂使微生物的蛋白质变性，或竞争 其酶系统，或降低其表面张力，增加菌体细 胞浆膜的通透性，使细胞破裂或溶解，以至 细菌死亡。
常用70%酒精、0.1－0.2％升汞、10％次氯 酸钠、饱和漂白粉上清夜以及新洁尔灭喷洒 培养室、接种室或其他实验室，可有效杀死 空气中的各种杂菌，同时可以较大程度的降 尘。或用于培养材料的表面灭菌
2018/10/22 4
有菌 与 无菌
有菌的概念：凡是暴露在(未经处理的)空气中
的物体，曾经接触过自然水源的物体，至少它 的表面，毫无例外都是有菌的。 这里所指的菌，包括细菌、真菌、放线菌、 藻类及其它微生物。菌的特点是：极小，肉眼 看不见。无处不在，无时不有，无孔不入。在 自然条件下忍耐力强，生活条件要求简单，繁 殖力极强，条件适宜时便可大量滋生。