DNA重组技术的基本工具61864115
DNA重组技术的基本工具(共32张PPT)
E·coliDNA连接酶
3)1977年DNA合成和测序技术的发明
E·coli DNA连接酶
或T4DNA连接酶
通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到识别序列的
碱基上，使限制酶不能将其切开。
这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。
——特异性
（1）识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列
（2）在特定的位点切割DNA分子。
例如：大肠杆菌的EcoRⅠ限制酶只能识别GAATTC序
列，并在G和A之间切开。
“分子手术刀”---限制性核酸内切酶(限制酶)
• 限制酶的识别序列：
能被限制性内切酶特 大异多性数识限别制的酶切的割识部别位序都列具由
操作。
实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要 进行人工改造后才能用于基因工程操作。
思考与探究 P7
4、DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？
迄今为止，所发现的DNA连接酶都不具 有连接单链DNA的能力，至于原因，现在还 不清楚，也许将来会发现可以连接单链DNA 的酶。
通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到识别序列的
碱基上，使限制酶不能将其切开。
Haemophilus influenzae d )中先
后分离到3种限制酶，则分别命名为:
HindⅠ、HindⅡ、 HindⅢ
一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成
DNA重组技术的基本工具
DNA重组技术的基本工具DNA重组技术是一种重要的分子生物学技术，用于改变基因组中的DNA序列，使之具有特定的功能。
这项技术的应用范围广泛，可以在基础研究、医学诊断、药物开发等领域发挥重要作用。
DNA重组技术的基本工具包括DNA片段的制备、限制性内切酶、DNA连接酶、质粒和载体等。
首先，DNA片段的制备是DNA重组技术的第一步。
通过PCR（聚合酶链反应）或限制性内切酶切割，可以从某个DNA源中获取特定的DNA片段。
PCR是一种体外扩增技术，可以将特定的DNA序列进行快速放大。
限制性内切酶是一类特殊的酶，可以识别特定的DNA序列并在该序列上切割DNA链。
通过PCR和限制性内切酶的组合应用，可以制备出需要的DNA片段。
其次，限制性内切酶是DNA重组技术中的重要工具之一。
限制性内切酶可以特异性地切割DNA链，并产生一定的粘性或平滑的DNA末端。
这些末端的特性决定了DNA片段连接的方式。
常用的限制性内切酶有EcoRI、BamHI、HindIII等。
当两个DNA片段具有相同的限制性内切酶切割位点时，它们可以通过限制性内切酶的连接来形成一个新的DNA分子。
接下来，DNA连接酶也是DNA重组技术中必不可少的工具之一。
DNA连接酶能够将两个DNA片段在适当的条件下连接在一起。
常用的DNA连接酶有T4 DNA连接酶和DNA聚合酶。
通过合适的实验条件和适当的连接酶，可以使两个DNA片段有效地连接成为一个整体。
此外，质粒和载体也是DNA重组技术中的重要工具。
质粒是一种小环状DNA分子，在细菌细胞中存在，并能自我复制。
载体则是质粒或其他DNA分子，用于携带所需的DNA片段。
通过将需要插入的DNA片段连接到载体上的限制性内切酶切割位点上，并将该载体转化至宿主细胞中，就可以实现外源DNA的导入。
在实际应用中，DNA重组技术的基本工具往往是共同配合使用的。
通过PCR或限制性内切酶的组合，可以制备出所需的DNA片段；通过限制性内切酶的连接和DNA连接酶的应用，可以将不同的DNA片段连接起来形成一个新的DNA分子；通过质粒和载体的应用，可以将需要插入的DNA片段导入到宿主细胞中实现转化。
生物重组dna技术的基本工具
生物重组DNA技术是利用基因工程方法对DNA分子进行重新组合和修改的技术。
下面是生物重组DNA技术中常用的基本工具：限制性内切酶（Restriction Enzymes）：这些酶能够识别DNA的特定序列，并在该序列上切割DNA分子。
限制性内切酶可以用于切割目标DNA和载体DNA，以便进行重组。
DNA连接酶（DNA Ligase）：这种酶能够将两条DNA分子的断裂末端连接在一起，形成一个完整的DNA分子。
DNA连接酶用于将目标DNA片段与载体DNA片段连接起来，构建重组DNA。
DNA聚合酶（DNA Polymerase）：DNA聚合酶能够在DNA模板上合成新的DNA链。
在重组DNA技术中，DNA聚合酶可用于扩增目标DNA片段，进行PCR（聚合酶链式反应）等操作。
电泳装置（Electrophoresis Apparatus）：电泳装置用于将DNA分子按照大小进行分离和纯化。
通过电泳，可以根据目标DNA的大小和电荷特性对其进行分离和检测。
载体（Vector）：载体是用于携带和复制重组DNA的DNA分子，如质粒或病毒。
载体提供了重组DNA在细胞中复制和表达的环境。
转化（Transformation）：转化是将重组DNA导入目标细胞中的过程。
通过转化，重组DNA 可以被细胞摄取并稳定地存在于细胞内。
DNA测序技术（DNA Sequencing）：DNA测序技术用于确定DNA分子的核酸序列。
它是生物重组DNA技术中重要的工具，可用于验证重组DNA的正确性和准确性。
这些基本工具在生物重组DNA技术中起着关键的作用，使研究人员能够对DNA进行精确的操作和修改，从而实现基因的克隆、重组和表达。
DNA重组技术的基本工具 课件
基因工程概念
基因工程是指按照人们的意愿，进行 严格的设计，并通过体外DNA重组和 转基因等技术，赋予生物以新的遗传特 性，从而创造出更符合人们需要的新的 生物类型和生物产品。
由于基因工程是在DNA分子水平上进 行设计和施工的，因此又叫做DNA重 组技术
定向改造生物啦！
基因工程相关要点
种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部 位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开（切割 DNA分子） 作用结果： 形成平未端（SmaI）及黏性未端（EcoRI）
2.DNA连接酶——“分子缝合针” 1)、种类： E·coli DNA连接酶（黏性末端）
T4 DNA连接酶 （黏性末端和平末端）
2)、作用部位：磷酸二酯键
我复制并稳定存在 具一个或多个限制酶切位点 具标记基因
质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒
基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术
操作环境
生物体外
操作对象
基因
操作水平
DNA分子水平
基本过程 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达
实质
基因重组
结果
新生物类型、生物产品
重难点剖析: 基因工程的“专用工具”
1.限制性核酸内切酶 黏性末端
来Ec源oR：I 主要从原核细黏胞性分末离端 作用：一种限制性内切酶只能识别双链DNA分子的某
DNA连接酶可把平未端或黏性末端之间的缝隙 “缝合”起来，即相当于把梯子两边的扶手的断 口连接起来，这样一个重组DNA分子就形成了。
3.分子运载车——运载体 （1） 作用： 将目的基因送入受体细胞
（2） 具备的条件：
a.能自我复制. b.具有一个或多个酶切位点. c.有标记基因. d.对受体细胞无害. （3）种类： 质粒、噬菌体、动植物病毒
1.1 DNA重组技术的基本工具
DNA复制
2.下列关于 DNA 连接酶作用的叙述，正确的 是（ B ） A．将单个核苷酸加到某 DNA 片段的不同 末端，形成磷酸二酯键 B．将断开的两个 DNA 片段的骨架连接起 来，重新形成磷酸二酯键 C．连接两条 DNA 链上碱基之间的氢键 D．只能将双链 DNA 片段互补的黏性末端 连接起来，而不能将双链 DNA 片段的平末端 连接起来
课文P4“寻根问底”
为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 通过长期的进化，细菌中含有某种限制 酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的 识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转 移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将 其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶 也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外 源DN
SmaI只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间 切开。
SmaI限制酶的切割
当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时， 切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的 切口叫平末端。
平末端
平末端
课文P4“寻根问底”
你能推测限制酶存在于原核生物中的作用
是什么吗？
原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但 生物在长期的进化过程中形成了一套完善的 防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制 酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵 入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保 证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中 主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到 保护自身的目的。
类型
来源
相同点
差别
E· coliDNA连接酶 大肠杆菌 恢复磷 只能连接黏性末端 酸二酯 能连接黏性末端和 键 T4DNA连接酶 T4噬菌体 平末端(效率较低)
DNA连接酶的缝合作用
E· coliDNA连接酶和 T4DNA连接酶都可把黏性 末端之间的缝隙“缝合” 起来 两DNA片段要具有互补 的黏性末端才能拼起来
课件16：1.1 DNA重组技术的基本工具
EcoRⅠ和SmaⅠ限制酶识别序列均为6个核苷酸，其中 EcoRⅠ识别的序列为__G_A_A_T_T_C__，从G__和_A__直接切割，产 生的末端为_黏__性__末__端__;SmaⅠ识别的序列为__C_C_C_G_G_G____,从 __C_和__G_直接切割，产生的末端为__平__末__端___
2．目的：按照人们的愿望进行严格的设计，创造出更符 合人们需要的新的_生__物__类__型__和___生__物__产__品___。
3．设计和施工水平：__D_N__A_分__子____水平，因此，基因工 程又叫做DNA重组技术。
二、DNA重组技术的基本工具
1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀”(又称限制酶)。 (1)来源：主要是从__原__核__生__物____中分离纯化出来的。
• （补充）限制酶所识别的序列有什么特点？ • 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，
都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上 的碱基是反向对称重复排列的。
图1-1 限制酶识别序列的中心轴线
二、DNA连接酶——“分子缝合针”
1、种类：两类 E·coli DNA连接酶（黏性末端） T4 DNA连接酶 （黏性末端和平末端↓）
酯键断开。形成两种末端 • 4、结果 黏性末端
平末端
限制酶
大肠杆菌(E.coli)的一种限 制酶能识别GAATTC序列， 并在G和A之间切开。
• 黏性末端？
限制酶
被限制酶切开的DNA两 条单链的切口，带有几 个伸出的核苷酸，他们 之间正好互补配对，这 样的切口叫黏性末端。
平末端？
当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开 的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口 叫平末端。
DNA重组技术的基本工具概述
DNA重组技术的基本工具概述DNA重组技术是一种能够将不同生物体中的基因或DNA片段进行重组的技术。
它的出现使得科学家们能够更容易地研究和改变生物体的遗传信息，从而促进了生物学、医学等领域的发展。
DNA重组技术有许多的基本工具，其中包括限制性内切酶、DNA连接酶、质粒、转基因技术等。
本文将对这些基本工具进行详细介绍。
首先，限制性内切酶是DNA重组技术中最重要的工具之一。
限制性内切酶是从细菌中分离出来的一类特殊酶，它能够识别和切割DNA中的特定序列，产生黏性末端或平滑末端的DNA片段。
这种特殊的切割方式使得科学家们可以将不同来源的DNA片段进行精确地连接。
限制性内切酶的种类非常多，每一种限制性内切酶都有特定的切割序列，这使得科学家们可以选择适当的酶来进行重组操作。
其次，DNA连接酶也是DNA重组技术中的重要工具。
DNA连接酶能够将DNA片段进行连接，形成新的DNA分子。
在DNA分子连接过程中，科学家们通常使用DNA连接酶来催化连接反应。
DNA连接酶有许多种类，其中最常用的是DNA接头酶和DNA连接酶。
DNA接头酶能够将不同DNA片段的末端连接起来，而DNA连接酶则能够在两个DNA片段之间形成一个新的连接。
质粒也是DNA重组技术中不可或缺的工具之一。
质粒是存在于细菌和其他生物体中的一种小型DNA分子，它通常能够自主地复制和传递。
在DNA重组技术中，科学家们首先将需要重组的DNA片段插入到质粒中，然后将质粒转化到细菌中，使其能够在细菌内部大量复制。
通过这种方式，科学家们可以得到大量的重组质粒，用于其后的基因功能研究和基因工程等领域。
最后，转基因技术也是DNA重组技术中的重要内容。
转基因技术是指将外源基因导入到目标生物的基因组中，从而使其获得新的性状或功能。
转基因技术在农业、医学等领域有着广泛的应用。
通过DNA重组技术，科学家们可以将外源基因插入到质粒中，然后将质粒导入到目标生物体中，使其获得新的基因组成。
DNA重组技术的基本工具
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望， 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的 设计，通过体外DNA重组和转基因等技术， 重组和转基因等技术， 设计，通过体外 重组和转基因等技术 赋予生物以新的遗传特性， 赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人 们需要的新的生物类型和生物产品。 们需要的新的生物类型和生物产品。
DNA重组技术的基本工具
限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 分子手术刀” 限制性核酸内切酶 分子手术刀 DNA连接酶 连接酶——“分子缝合针” 分子缝合针” 连接酶 分子缝合针 基因进入受体细胞的载体——“分子运 基因进入受体细胞的载体 分子运 输车” 输车”
限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
分布： 分布：主要在原核生物中 作用特点：特异性， 作用特点：特异性，即识别 特定核苷酸序列， 特定核苷酸序列，切 割特定切点 切点： 切点：磷酸二酯键 举例： 举例：EcoRI限制酶能识别 限制酶能识别 GAATTC序列，并 序列， 序列 在G和A之间切开 和 之间切开
限制酶在原核生物中的作用
原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是， 的入侵，但是， 原核生物容易受到自然界外源 的入侵 生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御 机制，以防止外来病原物的侵害。 机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细 菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利 侵入时， 菌的一种防御性工具，当外源 侵入时 用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。 切割掉， 用限制酶将外源 切割掉 以保证自身的安全。 所以， 所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源 DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 、使之失效，从而达到保护自身的目的。 含有某种限制酶的细胞， 含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具 分子中或者不具 备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化 备这种限制酶的识别切割序列， 酶将甲基转移到所识别序列的碱基上， 酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶 不能将其切开。 不能将其切开。
1.1DNA重组技术的基本工具
运载体必须具备什么条件？
5、运载体DNA分子大小应适合，以便提取 和在体外进行操作，太大就不便操作。
P7：3、天然DNA分子可以直接 用作基因工程运载体吗？ 自然存在的质粒DNA分子并不完全具 备上述条件，往往都要进行人工改造 后才能用于基因工程操作。
运载体存在于许多细菌和酵母菌中，作为运载体几个条 件的具体表现： 最常用的是大肠杆菌的质粒。 独立于细菌拟核DNA之外 1、复制原点： 的一种可以自我复制、 说明能复制并能带着 双链闭环的裸露DNA分子
限制酶作用过程：
注意观察限制酶切割的部位
重播
限制酶的切点：
磷酸二酯键
磷酸和脱氧 核糖之间的 化学键
磷 酸 二 酯 键
根据限制酶作用特点分析：
P7：2、原核生物限制酶为什么不剪
切本身的DNA？
原核生物本身的DNA分子中一般不 具备这种限制酶的识别切割序列。
限制酶所识别的序列有什么特点
大多数由6个核苷酸组成，少数4、5或8个。 呈碱基互补对称，无论是奇数个还是偶数个碱 基，都可以找到一条中轴线，其两侧的双链 DNA上的碱基是反向对称重复排列的。
GAA TTC CTT AAG
CCAGG GGTCC
中轴线两侧分别切开
（大肠杆菌)
黏性末端
(粘质沙雷氏菌)
序列中轴线处切开
平末端
将切下来DNA片段拼接成新的DNA分子， 可用什么酶？
二、DNA连接酶——”分子缝合针 “
DNA连接酶的作用过程
探讨1：DNA连接酶连接的是什么部位？
限制酶切割后有两种结果：黏性末 端或平末端。恢复它们的连接时， 所用DNA连接酶是否可以不加选择？
”
一、限制酶——”分子手术刀 “
原创14：1.1 DNA重组技术的基本工具
B、目的基因与运载体结合
√C、将目的基因导入受体细胞
D、目的基因的检测和表达
4.下列有关基因工程的叙述，正确的是（ C ）
A. 重组DNA技术所用的工具酶是限制性核酸内切酶、 DNA连接酶和载体
B. 所有限制性核酸内切酶都只能识别同一种特定的核 苷酸序列
C. 一般选用细菌的质粒作为基因进入受体细胞的载体 D. 细菌体内的质粒可以直接作为基因工程中的载体
GA A T T C C T T A AG
G CTTAA
AATTC G
DNA连接酶——“分子缝合针”
磷酸二酯键
GA A T T C C T T A AG
重组 DNA
磷酸二酯键
（二）连接酶的部位：
磷酸二酯键，不是氢键
三、基因的载体——“分子运输车”
载体的作用：
1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。
1、主要来源：原核生物 2、种类和命名：
特点：专一性 一种限制酶只能识别 一种特定核苷酸序列， 并在特定的位点切割
3、作用： 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，
并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之
间的磷酸二酯键断开。
粘性末端
4、结果：形成两种末端 平末端
GAATTC CTTAAG
GAATTC CTTAAG 双链断开
3、作用： 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，
并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之
间的磷酸二酯键断开。
粘性末端
4、结果：形成两种末端 平末端
识别序列的特点：中轴线两侧
的碱基反向对称重复排列
EcoRⅠ
黏性末端
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日复一日的努力只为成就美好的明天 。15:51 :3815:51:381 5:51Wednes day, December 30, 2020
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安全放在第一位，防微杜渐。20.12.3 020.1 2.3015 :51:38 15:51:38December 30, 2020
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加强自身建设，增强个人的休养。20 20年1 2月30 日下午3 时51 分20.12. 3020. 12.30
• 2.有一个至多个限制酶切位点
• 能与目的基因结合
• 3.有遗传标记基因
• 便于观察
• 4.对受体细胞无害、易分离
• 安全、比较容易得到
认识常用的载体——质粒
质粒是基因工 程常用的载体， 是独立于染色体 之外、能自主复 制的小型环状DNA 分子，对宿主细 胞没有影响，主 要存在于细菌和 酵母菌体内。其 中最常用的是大 肠杆菌质粒。
基因工程的概念
基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术
操作环境
生物体外
操作对象
基因
操作水平
DNA分子水平
基本过程 实质 结果
剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组
人类需要的基因产物
课本知识回顾
基因工程又叫做 基因拼接技术 或 DNA重组技术 。通俗地说，就 是按照人们的意愿，把一种生物 的某种 基因 提取出来，加 以 修饰改造，然后放到另一种生 物的细胞里， 定向地
磷酸二脂键
二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶 1、种类：两类 E·coli DNA连接酶
T4 DNA连接酶
2、作用部位：是磷酸二酯键（扶手）
不是氢键（梯子）
DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙 “缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连 接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。
基因进入受体细胞的载体
这些定向改造基因 的设想能实现吗？
经过多年的努力，科学家 终于在20世纪70年代创立了 可以定向改造生物的新技术
——基因工程
• 基因工程培育抗虫棉的简要过程：
苏云金芽孢杆菌
提取
普通棉花(无抗虫特性)
抗虫基因 与运载体DNA拼接，导入
棉花细胞(含抗虫基因)
表达
棉花植株(有抗虫特性)
• 抗虫棉的培育有哪些关键步骤？
运载体
1、作用：将外源基因送入受体细胞
2、充当运载体的条件 1、能自我复制 2、具有一个或多个限制酶切点 3、具有遗传标记基因 4、对受体细胞无害、易分离
3、种类： 质粒、噬菌体、动植物病毒
基因工程的概念
基因工程：指按照人们的愿望,进行严格的设计 并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生 物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新 的生物类型和生物产品。由于基因工程是在 DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫 作DNA重组技术。
能否培养出具有抗虫 性状的抗虫棉呢？
胰岛素是治疗糖尿病的特效药,长期以来 只能从猪、牛等动物的胰腺中提取，产量 低成本高。
而微生物生长迅速，容易控制。于是科学 家设想，若能将人的胰岛素基因导入微生 物体内，并得以表达，就不仅能解决产量 问题，还能大大降低生产成本，使药品价 格大幅下降。
能否让微生物产生出人的 胰岛素等珍贵药物？
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科学，你是国力的灵魂；同时又是社 会发展 的标志 。下午 3时51 分38秒 下午3 时51分1 5:51:3 820.12 .30
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每天都是美好的一天，新的一天开启 。20.1 2.3020 .12.30 15:511 5:51:3 815:51:38Dec-20
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相信命运，让自己成长，慢慢的长大 。2020 年12 月30日 星期三3 时51 分38秒Wednes day, December 30, 2020
改造生物的遗传性状。
DNA 重组技术的基本工具
“分子手术刀”
限制（性核酸内切）酶
──
“分子缝合针” ── DNA连接酶
“分子运输车”──
基因进入受体细胞的载体
限制性核酸内切酶
• 主要是从 原核生物中分离纯化出来 的一种酶。
• 识别双链DNA 分子的某种 特定的核苷酸序列
，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之
间的
磷酸二酯键
断开。
• 形成两种末端
粘性末端
平末端
二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶
1、种类：
两类
E·coli DNA连接酶
连接黏性末端
T4 DNA连接酶
连接黏性末端和平末端
2、作用部位：
磷酸二酯键
基因进入受体细胞的载体
通常有三种:
质粒
λ噬菌体衍生物
动植物病毒
作为载体的条件：
能自我复制；有切割位点；
平末端
形成两种末端
限制性内切酶作用过程
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• 什么叫黏性末端？
当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切 开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切 口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正 好互补配对，这样的切口叫黏性末端。
什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切
开时，切开的DNA两条单链的切口，是平
那么这类生物为什么没有在长期的进化过程中被外源 DNA的入侵而灭绝，它们有何保护机制？
限制酶切割外源DNA,使之失效， 从而达到保护自身的目的！
2341、、种结作来类果用源：： 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶
主要是原核生物
4000种。
识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸 序列，并且使每一条链中特定部位的两 个核苷酸之间的磷黏酸性二末酯端 键断开。
生活中的辛苦阻挠不了我对生活的热 爱。20. 12.30 20.12. 30Wednesday , December 30, 2020
•
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。1 5:51:3 815:51 :3815:5112/ 30/20 20 3:51:38 PM
•
做一枚螺丝钉，那里需要那里上。20. 12.30 15:51:3 815:5 1Dec-2030-Dec-20
2、能否用SARS病毒作为基因载体？ 不能
3、作为载体，若没有切割位点将怎样？
不能进行DNA的重
4、携带目的组基因的载体是否进入了受体细胞，
如何鉴定？
载体上应有标记基因
5、假如目的基因导入受体细胞后不能复制， 将怎样？
可能造成基因丢失
作为载体的必要条件
• 1.能自我复制
• 能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制 并表达；
•
精益求精，追求卓越，因为相信而伟 大。20 20年1 2月30 日星期 三下午3 时51 分38秒1 5:51:3 820.12 .30
•
让自己更加强大，更加专业，这才能 让自己 更好。 2020年 12月 下午3时 51分2 0.12.30 15:51 December 30, 2020
•
这些年的努力就为了得到相应的回报 。2020 年12 月30日 星期三3 时51 分38秒1 5:51:3 830 December 2020
A、能复制
（ D）
B、有多个限制酶切点
C、具有标记基因
D、它是环状DNA
练习
3) 基因工程是在DNA分子水平上进行设计施
工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱
基互补配对的步骤是
（C ）
A、人工合成目的基因
B、目的基因与运载体结合
C、将目的基因导入受体细胞
D、目的基因的检测和表达
大肠杆菌的一种限制酶 （EcoRⅠ)能识别GAATTC序列， 并在G和A之间切开形成黏性末 端。
连接酶
分类
作用
连接E.黏co性li 末DN端A连接酶
连接黏性末端和平末端 T4DNA连接酶
DNA连接酶的作用过程
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核苷酸分子的连接： 连接酶连接磷酸二酯键
A
T
T
A
G
C
C
G
DNA聚合酶和DNA连接酶有何 相同点和不同点？
DNA连接酶 DNA聚合酶
连接DNA链 双链
单链
连接部位
在两DNA片 将单个核苷酸加 断之间形成 到已存在的核酸 磷酸二脂键 片断3’末端形成
整的，这样的切口叫平末端。
GAATTC
GAATTC
CTTAAG
CTTAAG
用同种限制酶切割
G AATTC
G AATTC
CTTAA G
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基因的针线：DNA连接酶
G AATTC CTTAA G
限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性 末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时， 所用DNA连接酶是否可以不加选择？
要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生 物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的 细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是载体。
基因工程的载体被喻为： 分子运输车
基因工程的载体来源： 质粒
噬菌体 动植物病毒
作为基因工程的载体需要怎样的条件呢？
议一议
1、从化学组成来看，载体应含有什么成分？ 双链DNA
SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并 在C和G之间切割形成平末端 。
5
A
磷
4
1
酸
3
2
二
酯
5
T
键
4
1
3
2
核苷酸分子的连接：
A
T
T
A
G
C
C
G
限制酶切割磷酸二酯键
A
T
T
A
G
C
C
G
复 制 分 步 解 说
核苷酸分子的连接：D把N单A个聚脱合氧酶核连苷接酸单连链接DN到ADNA片段上