基因扩增实验室常用仪器设备的使用和维护-51页精选文档
PCR实验室常用设备、试剂和耗材使用管理
并大小合适。非金属转头不可用紫外照射。 如果被离心的物品密度大于说明书的规定范围，
应计算相对离心力。
•对于高致病性病原微生物，必须要高度警惕离心过程中 产生的气溶胶风险。
－大型离心机上应加装负压罩，以及时吸出离心机排出 的气体，并排至实验室的过滤通风系统，在BSL-3及以 上级别实验室尤其要注意。
GILSON eppendorf
0.5 -10
0.5 -10
2 -20
2 -20
20 -100 10 -100
20 -200 20 -200
200 -1000 100 -1000
加样器-技术指标
型号 P2
容量
(μL) 最小 0.2
0.5 最大 2
P10 最小 1
5 最大 10
P20 最小 2 5
10 最大 20
天平
天平
精密电子分析天平
天平
二、影响重现性的因素 1、潮湿 2、静电：最好用100%的玻璃容器。 3、空气浮力 4、温度 5、气流和通风 6、磁场和磁性样品 7、天平放置状态
天平
三、维护 1、避免振动。 2、在密闭容器内称量挥发性和腐蚀性
物品。 3、定时清洁。 4、避免移动仪器。 5、及时检修，不可带“病”工作。 6、不可过载，损坏天平。
破损。必须在安全柜内打开盖子。
4. 使用转头时应注意转头盖与转头型号是否匹配。离心桶的装载、平衡、密封和
打开必须在生物安全柜内进行。空离心桶配平时应该用蒸馏水或70％ 乙醇、异丙醇，不应使用盐水和次氯酸盐溶液。离心管内液面水平距 管口应留出一定空隙，以确保离心过程中液体不会溢出，尤其是 使用角转头时更要注意。（密封的离心桶/安全杯）
基因分析仪测序仪安全操作及保养规程
基因分析仪测序仪安全操作及保养规程随着基因分析的迅速发展，基因分析仪测序仪的使用越来越普遍。
为了确保仪器的可靠性和使用的安全，需遵守标准的操作规程和维护流程。
本文将提供测序仪的安全操作和保养规程的详细介绍，以帮助操作人员更好地保护仪器。
1. 安全操作基因分析仪测序仪使用时，需要遵循以下安全操作规程：1.1 工作环境•仪器使用时应放置在干燥、通风良好的室内环境中，避免阳光直射、潮湿和高温环境。
•要尽量避免在有液体、灰尘和化学物质等危险因素的环境下使用仪器。
•工作台周围不可以杂乱堆放物品，注意保持工作环境的整洁。
1.2 食品饮料•仪器使用者不得在使用仪器时食用或饮用。
•工作台上不得堆放食品或饮料。
1.3 操作规范•只有经过必要的培训和了解仪器操作规程的人员方可进行仪器的操作。
•操作之前应熟悉相关操作手册和注意事项。
•操作人员应穿戴适当的防护用品，包括实验服、口罩、手套等。
1.4 电源•使用前请检查电源是否接地，避免因电流泄漏等危险因素。
•请谨慎使用扩展插头和加长线等配件，避免因电压不稳定等原因导致仪器损坏。
1.5 急救预案•操作人员应熟悉急救预案，特别是电击、火灾等突发事件的预防与处理。
2. 仪器保养为确保基因分析仪测序仪的正常运行和延长仪器的使用寿命，需要进行定期的维护和保养。
以下是仪器保养规程的一些基本内容：2.1 保养周期•仪器的保养周期应按照厂家提供的说明书规定执行。
•通常情况下，仪器的保养周期需要在使用前进行检查，保养周期一般为每周或每月一次。
2.2 清洁•在每次使用后，要进行仪器的清洁，包括外壳、台面、键盘、触屏等。
•清洁可选择使用专业清洁剂或消毒液，避免使用含有腐蚀性和太强的化学物质或粉尘较大的抹布。
2.3 维护•仪器需要每隔一段时间更换零部件，包括滤芯、灯管、风扇等。
•应定期检查机械运转部位的润滑情况，避免过度磨损和磨损。
•在仪器出现故障时，应立即停机，并通过维修人员进行处理和修复。
PCR实验室仪器设备的维护保养程序及制度
PCR实验室仪器设备的维护保养程序及制度1. 目的：为保证PCR实验室内仪器设备安全、正常的运行，完善仪器的管理和维护，特制定该程序文件。
2. 范围：基因扩增仪、高速离心机、医用冰箱。
3. 职责：本室操作使用设备的工作人员负责该系统的日常维护保养及月保养，厂家工程师进行每年一次的全面保养。
4. 程序；4.1.仪器维护原则上由仪器厂家定期进行维护，并出具维护记录，厂家不负责维护的，应按自定的维护程序文件进行维护。
仪器由专人负责使用和维护，使用人应严格按《仪器设备操作程序》操作。
4.2. 仪器设备损坏后，必须就损坏的原因、损坏的程度局面报告给科主管人员，如确定为审核人员违反操作规程造成，应向审核人员追究经济责任。
4.3. 对于需要报废的仪器设备，负责人应提出书面申请，交医院有关科室处理。
4.4. 各种仪器设备的保养程序：4.4.1 荧光定量PCR仪的保养程序：(1)仪器应放置在水平台上，电源电压必须与仪器要求电压一致，并连接可靠的地线。
仪器远离水源、明火及腐蚀性物质。
(2)实验结束后应及时清除仪器内的样品（样品按要求进行处理）盖上机盖，作好仪器使用记录，清洁仪器外表并注意防尘。
(3)松下螺帽、取出扇叶、用75%酒精擦干（每月一次）4.4.2 高速离心机的保养和程序：(1)离心机应置于水平台面，使用时应检查转头是否牢固、机腔内有无异物。
(2)停机后方能取出离心管。
(3)运行中如有异常噪音或震动，应立即切断电源检查电源电压有无异常，各紧固件特别是转头是否紧固，离心管安装是否对称平衡，排除故障后再行启动，若仍不正常，应交专业人员维修。
(4)每次操作完毕，应清洁离心机机腔及外表面，并作好使用记录。
4.4.3 医用冰箱的保养程序：（1）冰箱放置于水平地面上，电源电压须与冰箱要求电压相一致，并连接可靠地线。
（2）冰箱使用过程中，门打开时间不要过长。
（3）定期给冰箱除霜。
（4）每天用干布清洁冰箱外表面，要经常清除冰箱背板及左右两侧板上的尘埃，以提高散热效果。
pcr扩增仪用途和注意事项
pcr扩增仪用途和注意事项PCR扩增仪，这可是分子生物学实验室里的一个“大宝贝”呢。
它就像一个超级复印机，不过复印的不是纸张上的文字或者图像，而是DNA片段。
PCR扩增仪的用途可真是广泛得很。
在医学领域，它就像是一个超级侦探。
比如说，当医生怀疑病人体内有某种病毒感染的时候，就可以把从病人体内提取的微量核酸样本放到PCR扩增仪里。
这个仪器就能像放大镜一样，把病毒那一点点的DNA片段不断地复制，直到数量足够多，这样就能轻松检测出来到底是哪种病毒在捣乱。
这就好比在大海里找一根针很难，但如果能把这根针复制成一大把针，那就好找多了吧。
在遗传学研究里，PCR扩增仪更是不可或缺。
它就像一把神奇的钥匙，能帮助科学家打开基因的大门。
科学家想要研究某个基因的结构或者功能，先把含有这个基因的DNA片段提取出来，然后交给PCR扩增仪。
它就会兢兢业业地把这个片段大量复制，这样就有足够的材料供科学家们去分析这个基因到底有什么特殊之处，就像要研究一个小零件，你得有足够多的这个小零件才能看清楚它的构造和工作原理呀。
在法医学上，PCR扩增仪也有着举足轻重的地位。
如果在犯罪现场发现了一点点血迹或者毛发，里面可能含有微量的DNA。
这时候PCR扩增仪就像一个魔法盒，把这些微量的DNA疯狂复制，然后就可以和嫌疑人的DNA进行比对，确定是否是同一个人。
这就如同从一粒沙子里找到曾经触摸过它的那只手的痕迹，是不是很神奇呢？不过呢，使用PCR扩增仪也有不少要注意的地方。
这仪器就像一个娇贵的小宠物，需要我们精心照料。
首先就是温度的控制。
PCR扩增过程有不同的温度阶段，每个阶段的温度要求都很严格。
就像烤蛋糕，不同的步骤需要不同的火候，如果温度不对，蛋糕就烤不好。
PCR扩增仪如果温度控制不好，那DNA复制可就乱套了。
有时候可能复制不完全，有时候可能会复制出一些错误的片段，这就像烤蛋糕烤出个四不像一样糟糕。
样品的准备也很关键。
样品就像是原材料，如果原材料有杂质，那最终的产品肯定好不了。
人民医院基因扩增实验室ABI7500实时荧光定PCR仪操作维护及校准操作规程
人民医院基因扩增实验室ABI7500实时荧光定量PCR仪操作、维护及校准操作规程1 ABI7500实时荧光定量PCR仪概述7500型荧光定量PCR仪是特异性靶基因检测与定量的一体化平台。
7500型将PCR热循环，荧光检测和各种应用分析软件结合在一起，可实时定量观察PCR每一循环各反应管中PCR扩增产物的情况。
PCR实验结束后即刻得到定量结果，无需凝胶电泳分析，无需纯化PCR产物，无需进行任何实验操作。
7500型实时荧光定量PCR仪具有节省时间，灵敏度高，准确性好和避免产物污染等优点。
2 主要技术参数样品孔数：96孔样品基座，温度范围：4.0-99.9℃温度显示：经计算机计算的实际样品温度，精确到0.1℃加热冷却速度：平均温度变化速度1℃/秒温度准确性：正负0.25℃，35－100℃范围升降温重现性：任意温度达到时间误差小于5秒3 操作说明3.1 实验程序运行：3.1.1 首先打开电脑，进入操作系统后，打开7500仪器电源；3.1.2 双击桌面上的7500快捷方式，进入以下界面：3.1.3 点击，进入以下操作界面，按照默认设置，直接点击“完成”（Finish）：3.1.4 在96孔板中选择所放置样本对应的区域，如下图：3.1.5 点击按钮，在弹出的对话框中选择FAM-TAMRA荧光-淬灭基团，点击“Add To Plate Document”：3.1.6 点击按钮，如图所示，在弹出的对话框中勾选FAM荧光，内参荧光选择，点击“Close”：3.1.7 在选项下，逐个双击所选样本，设置样本类型和标准点定量值：3.1.8 点击选项，按照试剂盒说明书设置相应的扩增程序：3.1.9 点击按钮，为使用结果文件设定保存路径和名称。
3.1.10 点击“Start”开始运行扩增程序。
3.2 实验结果分析：3.2.1 点击按钮，打开使用结果文件；3.2.2 点击选项，进入结果分析操作界面。
点击下面的选项，双击纵坐标，选择Linear项，调整为线性坐标，点击“OK”确定：3.2.3 选取所有样本，手动设定阈值为最大荧光值的5%左右为宜。
PCR基因扩增仪操作步骤
PCR基因扩增仪操作步骤
1、首先准备好反应管；
2、打开机盖，将反应管平稳、端正的置入，盖好机盖；
3、打开电源开关，按照机器屏幕显示的提示设定程序，用
proceed键启动扩增，结束时出现“complete”，待风机停止工作，关闭电源。
注意事项：
（1）使用PCR仪时要严格注意本机的使用环境条件和对电源的要求；
（2）打开PCR仪机盖要轻，防止损坏机锁；
（3）PCR基因扩增仪工作时严禁打开机盖；
（4）要定期使用肥皂水清洗仪器的样品槽，不能使用强碱，高浓度酒精和有机溶剂擦洗；
（5）产品出现故障时要请专业的维修人员或厂家维修人员维修
冷冻离心机操作步骤
1、登记离心机使用登记本，检查使用状况。
2、检查箱体内是否有水分。
3、物体离心时应平衡物品：将需要离心的液体导入专
用离心杯内，要求液体的装量不要超过总体积的4/5,
然后在相应的天平进行平衡，旋紧盖筒。
4、装转子：打开离心机上盖，将相应的转子装入，调
试转子直到转好为之，盖上转子上盖，旋紧。
5、设置参数，当温度指针移到设定温度时，绿灯亮，
按下“START”键，此时机器开始正式工作。
在预
设时间完成以后，“STOP”键指示灯闪烁，机器停
止工作。
6、等待机器完全停止下来，“STOP”灯熄灭，转速为
零，打开机器上盖，打开转子上盖，取出离心物体，此时离心工作完成。
注意事项：
（1）、离心物体必须平衡，对称放入离心机转子内。
（2）、注意加速度调整，转子大小与加速度成反比。
PCR室SLAN型核酸扩增实时荧光定量仪操作和维护程序
PCR室SLAN型核酸扩增实时荧光定量仪操作和维护程序1.目的保证SLAN型核酸扩增荧光定量检测仪的正确和正常使用。
2.适用范围本规程适用于SLAN型荧光定量PCR仪分析的所有实验过程。
3.制定依据SLAN型核酸扩增荧光定量检测仪器操作使用说明书4.职责由经培训合格的临床基因扩增实验室技术人员操作仪器。
5．操作程序5．1开机前的准备5．1．1确认电源线插头已可靠插入电源插座中；5．1．2电源线接地可靠。
5．1．3接口线两端插头已分别可靠插入。
5．1．4打开稳压器电源，打开电脑主机、显视器、打印机、SLAN电源开关。
5．2“核酸扩增检测系统”的启动☆可以在【开始】/【程序】菜单中点击“SLAN PCR检测系统”启动。
☆也可直接在桌面上双击快捷键启动。
计算机系统启动SLAN PCR检测系统程序，进入荧光定量PCR检测系统界面5．3样品容器的放置5．3．1如何正确打开机盖：用手向后推开机子顶端机盖。
5．3．2样品容器的放入：正确打开机盖后，将0.2ml管放入模块中。
注意：①为保证样本升温和降温的均一性，样本管必须与模块完全接触，②将0.2ml管放入模块前应先检查（样本中有气泡或粘在管盖、管壁上都会严重影响实验结果）5．3．3如何正确关闭机盖：用手向前拉动机盖5．4实验设计：5．4．1温度参数设置：设置一个由三个程序组合的DNA荧光检测程序如下：①进入[温度参数]界面，鼠标左键单击扩增程序中的程序名处，输入程序名A，循环数1。
②设置此程序的温度点，按[添加]键增加温度点，输入目标温度930C，恒温时间120秒，“读取荧光”选择“否”，其它参数按默认值不变。
这样第一个程序设置完成。
③设置第二程序，在扩增程序逻辑界面中，按[添加]输入程序名B，循环数10。
④设置第二程序的温度点，按[添加]增加温度点，输入目标温度930C，恒温时间45秒，“读取荧光”选择“否”，再按[添加]增加温度点，输入目标温度550C，恒温时间60秒，“读取荧光”选择为“否”。
PCR实验室仪器设备使用制度
PCR实验室仪器设备使用制度
1. 目的：保证仪器设备得到正确的操作使用以满足检测质量要求和延长使用寿命。
2. 范围：基因扩增实验室所有的仪器设备。
3. 职责：实验室操作仪器设备的工作人员应严格按仪器使用说明进行操作。
4. 程序：
4.1. 只有本室工作人员有权使用该实验室的仪器设备。
4.2. 本室工作人员在使用仪器设备前首先进行岗前培训，熟
悉仪器设备标准操作程序，并经室负责人考核认可。
4.3. 因科研活动的需要，使用本实验室仪器设备的非本室工
作人员，必须熟悉仪器设备标准操作程序，并经室负责人考核认可后，在本室工作人员的指导下方可使用。
4.4. 仪器的使用严格遵守分区原则，并严格按操作程序进行。
4.5. 主要仪器使用后应做好使用记录和日常维护。
5. 引用的文件及表格：
5.1. PCR日常工作核查表；
5.2. 仪器设备标准操作程序；
5.3.仪器维护保养程序；。
人民医院基因扩增实验室移液器使用维护校准操作规程
将移 人民医院基因扩增实验室移液器使用、维护、校准操作规程
1 产品名称及型号
Thermo Scientific
2 技术特性
可调节范围：0.5〜1000"
3 操作方法
3.1
根据所需取液量选择相应移液器及带滤塞的吸液头； 3.2
旋转移液器按钮设定移液量； 3.3 将移液器按钮压至第一点位置吸取液体，转移液体至目 的容器，轻轻压下按钮至第一点位置，约一秒钟后，继续将按钮 压至第二点位置将吸液嘴中液体全部放干；
3.4 弃去吸液嘴至 2000mg/L 有效氯消毒液的废液缸中， 液器放回移液器支架。
4 维护保养
4.1
定期使用 75％酒精消毒； 4.2
各区的加样器应有各自的标识，清洁和消毒时，应分别 处理； 4.3 可调式移液器在使用完毕后应放置于移液器支架上，远 离潮湿及腐蚀性物质。
5 校准
5.1 每年把移液器送到上海市计量测试研究院校准。
6 相关表格
移液器保养维护记录表，编号PCR(N)-SOP-203-01 7 批准记录。
pcr2
注意事项
机体应始终处于水平位置，外接电源系统的电 压要匹配，并要求有良好的接地线。 开机前应检查转头按装是否牢固，机腔有无异 物掉入。 样品应预先平衡。 离心机运行时，离心机周围30cm范围内不能有 人和危险物品。 挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离 心管，并确保液体不外漏以免腐蚀机腔或造成 事故。
P型移液器的型号和取液范围
型号
P2 P10 P20 P100 P200 P1000
所用量程范围（μ L） GILSON eppendorf 0.1 2 0.5 10 0.5 10 2 20 2 20 20 100 10 100 30 200 20 200 200 1000 100 1000
加样器
基因扩增实验室应 备有4套连续可调 加样器，分别用于 试剂准备、样本处 理、扩增和产物检 测四个试验区。
加样器
加样器的类型 P型移液器的型号和取液范围 加样器的使用 P型移液器的应用范围 P型移液器技术指标 加样器的校准
加样器的类型
单道连续可调式移液器 多通道连续可调式移液器 单道连续移液器 单道移液管配合使用的移液器
PCR扩增仪的使用与保养
实验结束后应及时擦干孔位内呆能存在 的水分，盖上机盖。 应定期使用电子测温仪校准温度。 水浴式扩增仪应及时补充水，以免水量 过少，影响温度稳定性。 定期清洁热盖和反应孔。
国内常见荧光定量PCR仪简介
GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪 Lightcycler 荧光定量PCR系统 ABI 7000型荧光定量PCR仪 杭州博日 Line-gene
Eppendorf梯度PCR仪
最大样本数：是唯一可同时防置0.2ml和0.5ml 反应管的扩增仪，可同时扩增96个0.2ml PCR 反应管和77个0.5ml反应管。 温度范围：4-99℃ 加热速度：3℃/秒。冷却速度： 2℃/秒。 温度准确性： 0.2℃ 。 特点：循环时可对变性、退火和延伸同时设温 度梯度。
人民医院基因扩增实验室ABI7500实时荧光定PCR仪操作维护及校准操作规程
人民医院基因扩增实验室ABI7500实时荧光定量PCR仪操作、维护及校准操作规程1 ABI7500实时荧光定量PCR仪概述7500型荧光定量PCR仪是特异性靶基因检测与定量的一体化平台。
7500型将PCR热循环，荧光检测和各种应用分析软件结合在一起，可实时定量观察PCR每一循环各反应管中PCR扩增产物的情况。
PCR实验结束后即刻得到定量结果，无需凝胶电泳分析，无需纯化PCR产物，无需进行任何实验操作。
7500型实时荧光定量PCR仪具有节省时间，灵敏度高，准确性好和避免产物污染等优点。
2 主要技术参数样品孔数：96孔样品基座，温度范围：4.0-99.9℃温度显示：经计算机计算的实际样品温度，精确到0.1℃加热冷却速度：平均温度变化速度1℃/秒温度准确性：正负0.25℃，35－100℃范围升降温重现性：任意温度达到时间误差小于5秒3 操作说明3.1 实验程序运行：3.1.1 首先打开电脑，进入操作系统后，打开7500仪器电源；3.1.2 双击桌面上的7500快捷方式，进入以下界面：3.1.3 点击，进入以下操作界面，按照默认设置，直接点击“完成”（Finish）：3.1.4 在96孔板中选择所放置样本对应的区域，如下图：3.1.5 点击按钮，在弹出的对话框中选择FAM-TAMRA荧光-淬灭基团，点击“Add To Plate Document”：3.1.6 点击按钮，如图所示，在弹出的对话框中勾选FAM荧光，内参荧光选择，点击“Close”：3.1.7 在选项下，逐个双击所选样本，设置样本类型和标准点定量值：3.1.8 点击选项，按照试剂盒说明书设置相应的扩增程序：3.1.9 点击按钮，为使用结果文件设定保存路径和名称。
3.1.10 点击“Start”开始运行扩增程序。
3.2 实验结果分析：3.2.1 点击按钮，打开使用结果文件；3.2.2 点击选项，进入结果分析操作界面。
点击下面的选项，双击纵坐标，选择Linear项，调整为线性坐标，点击“OK”确定：3.2.3 选取所有样本，手动设定阈值为最大荧光值的5%左右为宜。
临床基因扩增检测实验室加样器使用维护和校准标准操作程序
临床基因扩增检测实验室加样器使用、维护和校准标准操作程序1 目的保证移液器加样的准确性。
2 适用范围各种品牌、型号的固定、可调和多通道移液器。
3 操作人XXX4 操作方法4.1设定容量值根据所需取液量选择相应的加样器；可调式加样器应在允许容量范围内调节。
连续可调式加样器容量计读数由三位拨号数字组成（显示所转移液体容量），从上（最大有效数字）到下（最小有效数字）读取；利用底部刻度可将容量刻度调节到更精确的分度。
P型(Pipetman) 加样器是连续可调的、计量和移液的专用仪器，量度准确、操作安全。
共有八个型号，P右下角数字为加样器最大容量值，代表加样器的型号已标明在按钮上。
容量范围自0.1ul至10ml（各型号容量范围见括号内）。
P2(0.1—2ul) P10(1—10ul) P20(2—20ul) P100(20—100ul) P200(30—200ul)1.25ul 7.5ul 12.5ul 75ul 125ul注：其它型号P1000(200—1000ul) 、P5000(1000—5000ul)、P10ML(1000—10000ul)表1：P型加样器的应用范围4.2 吸液4.2.1首先选择一支合适的吸嘴安放在加样器套筒上。
使用大体积加样器（如5000ul以上）时必须在套筒上加插一过滤芯，稍加扭转地压紧吸头使之与套筒间无空气间隙。
未装吸头的加样器绝不可用来吸取任何液体。
4.2.2 吸液把按钮压至第一停点；垂直握持加样器，使吸嘴浸入液样中，浸入液体深度视型号而定：缓慢、平稳地松开按钮，吸液样。
等一秒钟，然后将吸嘴提离液面。
用药用吸纸抹去吸嘴外面可能附着的液滴。
小心勿触及吸嘴口。
4.2.3放液（1）将吸嘴贴到容器内壁并保持100—400倾斜。
（2）平稳地把按钮压到第一停点。
等一秒钟后把按钮压到第二停点以排出剩余液体。
（3）压住按钮，同时提起加样器，使吸嘴贴容器壁擦过。
（4）松开按钮。
（5）按吸嘴弹射器除去吸嘴。
核酸扩增仪及维护维修
Kary B. Mullis <<The Unusual Origin of the Polymerase Chain Reaction>> 1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大 科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣 获1993年度诺贝尔化学奖。
教学基本要求
●熟悉PCR技术的原理；PCR扩增仪的种类； 荧光实时定量PCR（RQ-PCR）技术原理。
▼了解PCR扩增仪的操作规程；PCR扩增仪常 见故障的排除；PCR扩增仪的应用。
第一节 PCR核酸扩增仪的工作原理
PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指 在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸 起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板 DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术， 能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆， 序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。 简单的讲：PCR是一项在短时间内体外大量扩增特定的DNA片 段的分子生物学技术
中国的状况 1991年出现三个水浴锅+机械手的原始PCR仪（华美，复日等） 现在以半导体（Peltier板）制冷式为主（杭州博日,上海天呈, 厦门安 普利等）
PCR核酸扩增仪的工作原理
控温方式
水浴锅控温
压缩机控温
半导体控温
离心式空气 加热控温
特点
水导热 温度均一性好 无边缘效应
金属导热 控温方便
PCR仪
PCR反应
• PCR反应条件 • PCR过程 • PCR的特点
临床基因扩增实验室仪器设备和试剂耗材使用与质检
临床基因扩增实验室仪器设备和试剂耗材使用与质检WUHAN UNIVERSITYWUHAN UNIVERSITYCONTENTSPCR简介离心机DNA扩增仪加样器生物安全柜试剂和耗材性能验证01070605040302WUHAN UNIVERSITYPart 01PCR简介数字化PCR 荧光定量PCRPCR1.1 PCR发明过程1983年由 Kary Mullis 发明成为分子生物学上最伟大的发明之一1993年获得诺贝尔奖金WUHAN UNIVERSITYPCR 是一种人为的DNA复制；一小段特异DNA片段被重新复制；PCR 复制过程包括三个阶段:1. DNA融解2. 引物的结合3. 核苷酸的聚集DNA 在每一次PCR 周期中都被加倍周期 0DNA 13824124165326641.3 PCR扩增理论产量WUHAN UNIVERSITYPCR 理论产量 = y × 2ny = 初始物量（最初拷贝数）n = 热循环次数= 107,374,182,400开始的100个拷贝经过30个PCR 周期产生了一 千亿个拷贝y ⨯ 2n = 230 ⨯ 100= 1,073,741,824 ⨯ 1001.4 实时荧光定量 PCR WUHAN UNIVERSITY实时荧光定量 PCR：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
1.5 PCR技术原理比较WUHAN UNIVERSITY常规PCR技术：对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析，无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测。
实时定量PCR技术：利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。
1.5.1 扩增曲线WUHAN UNIVERSITY扩增曲线图：横坐标：扩增循环数（Cycle）；纵坐标：荧光强度每个循环进行一次荧光信号的收集，通过Ct值和标准曲线对进行定量分析。
pcr仪的使用方法和注意事项
pcr仪的使用方法和注意事项PCR仪是一种广泛应用于分子生物学实验室的仪器，其主要用于DNA的扩增和复制。
PCR技术的发展对于生物学研究和医学诊断有着重要的意义。
在使用PCR仪时，必须遵守一定的使用方法和注意事项，以确保实验结果的准确性和可靠性。
一、PCR仪的基本原理PCR仪是基于聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）原理而设计制造的。
聚合酶链式反应是一种体外体系中DNA复制技术，能够在短时间内扩增特定DNA片段。
其基本原理是通过不断重复三个步骤：变性、退火和延伸，使目标DNA片段得以扩增。
二、PCR仪的使用方法1. 准备实验材料：包括目标DNA样本、引物、聚合酶、缓冲液等。
2. 设置反应体系：根据实验需求，在试管中加入适量目标DNA样本、引物和其他试剂，并保持反应体系中各组分浓度适当。
3. 设置PCR程序：根据目标DNA片段长度和引物特性等因素，在PCR 仪上设置相应程序。
主要包括变性温度、退火温度、延伸温度和延伸时间等参数。
4. 开始PCR反应：将试管放入PCR仪中，启动反应程序，使PCR仪按照预设的温度和时间变化进行反应。
5. 结果分析：根据实验目的，选择适当的方法对PCR产物进行分析和检测，如凝胶电泳、测序等。
三、PCR仪的注意事项1. 严格控制实验环境：PCR反应对环境要求较高，要保持实验室干净整洁，并严格控制空气中的污染物。
避免使用含有DNA污染的试剂和器皿。
2. 避免交叉污染：在每次操作前，使用漂白剂或紫外线照射等方法对操作台面、试管架等进行消毒。
每次使用新工具或器皿前都要进行彻底清洗，并避免交叉使用。
3. 严格控制反应体系中各组分浓度：各组分浓度过高或过低都会影响PCR反应的效果。
在设置反应体系时要根据实验需求选择适当浓度，并保持稳定性。
4. 避免样本污染：在提取DNA样本过程中，要避免外源DNA的污染，使用无菌技术操作，并在操作过程中避免接触皮肤和呼吸道。
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用 T aqm an探 针 进 行 HCV检 测 (深 圳 Ｐ Ｇ 试 剂 盒 )
Lightcycler 荧光定量PCR系统
原理和特点
可使用外标法定量，可加内对照，可做熔点曲线分析。 单一光路的三个检测点对样本同时进行三个波长的荧 光检测，扩赠与检测同时进行，提供实时分析和在线 监测。引入独特的颜色补偿试剂和软件以消除个检测 通道其它染料荧光的干扰。 一次可做32个样本。 公用热室，保证单次PCR个样本的状况连续一致。循环 速度快，20-30分钟完成30-40个循环，一次检测样本数 32个。
Eppendorf梯度PCR仪
最大样本数：是唯一可同时防置0.2ml和0.5ml 反应管的扩增仪，可同时扩增96个0.2ml PCR 反应管和77个0.5ml反应管。 温度范围：4-99℃ 加热速度：3℃/秒。冷却速度： 2℃/秒。 温度准确性： 0.2℃ 。 特点：循环时可对变性、退火和延伸同时设温 度梯度。
基因扩增实验室常用仪器设备 的使用和维护
卫生部临床检验中心
王露楠
PCR热循环仪（DNA扩增仪） 高速( 冷冻)离心机 漩涡振荡混旋器
恒温水浴箱/恒温金属浴 洗板机（PCR-ELISA) 酶标仪(PCR-ELISA) 加样器
PCR热循环仪（DNA扩增仪）
PCR扩增仪的原理及发展状况： PCR扩增仪原理 国内常见扩增仪简介 国内常见荧光定量PCR仪简介
PCR扩增仪的使用与保养
PCR仪应放在临床基因扩增实验室的第三区。
仪器应放置水平台上，电源电压须与仪器要求 电压相一致，并连接可靠的地线。仪器远离水 源、明火及腐蚀性物质。
工作室温要求：15-25 ℃，通风保证散热。 接稳压电源。尤其是半导体升温降温的设备。
每次实验时，最好能将扩增仪内的孔位全部放 置样品管，若样品管少时可用空管代替，以保 证实验的一致性和重复性。
一次最多可同时分析96个样品，荧光检测波长 范围530-590nm。
GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪
影响测定结果的因素
域值设定 光路维护 加样的准确性和反应体系的均一性 反应管中是否有气泡 反应管不符合荧光检测要求或疏水性差 反应管或反应槽被荧光物质污染 反应管用记号笔做标记
Байду номын сангаас
用 T aq m an 探 针 进 行 HBV检 测 (深 圳 Ｐ Ｇ 试 剂 盒 )
PCR扩增仪的使用与保养
PCR扩增仪的原理及发展状况
（1）梯度水浴法
变性: 退火: 延伸: 如94C 如55C 如72C
温 度 变 化 快 ， 时 间 准 确 ， 温 度 可 调 ， 合 适 于 试 验 研 究 ， 省 时 、 省 力 效 果 明 显 。
（2）空气驱动循环恒温装置
本系统力求降低部件的成本，用空气作为热 传导媒介。装置包括机箱（外壳）、热源、 冷空气源、控制器和辅助电器元件等部分。 优点：不用金属的精密加工，成本降低。整 个系统没有液体流动，不用致冷液，因而安 全程度高。恒温精度可达1℃ 。 缺点：单纯靠外部空气制冷，受环境温度影 响。
（3）变温金属块作恒温装置
加热方式有电热发热、半导体发热，制 冷方式有半导体制冷和压缩机制冷等多 种方式。
国外产品的特点是产品质量和性能较稳 定。
机型：适用，建议 8*12孔德模式。
国内常见扩增仪简介
T11-II型基因扩增仪（华美生物工程 公司）
温度设定范围： 室温-99C 样品批量能力：480.5ml或161.5ml离心管 动态显示内容: 实时温度、到计数时间、到计 数循环数 主要功能：整机全自动化运行，线性运动臂同 时具有自动和手动功能；具有断 电恢复功能；可贮存128个用户文件。
LightCycler (Roche) Rotor-Gene (Corbett Research) ABI Prism (Applied Biosystems)
GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪
仪器特点
外标定量，熔点曲线分析。
5700采用基于CT值之实时动态荧光定量PCR方 法，结果重复性好，线性范围广，可分别用于 TaqMan 荧光探针技术作定量PCR和SYBR Green荧光染料作定量PCR。
PTC-200 热循环仪（MJ公司产品）
最大样本数：多样本载板可选择，其中包括扩 增96个0.2ml PCR反应管。 温度范围：-5-105℃ 加热速度：样本实际升温速度为3.5℃/秒。 温度精度：孔间温度差异小于0.3℃。 特点：采用可调压力和高度的热盖，防止样品 蒸发，无需加石蜡油操作；三种温控选择：模 块、样本内参或电脑模拟计算。
Lightcycler 荧光定量PCR系统
清洁和维护
反应槽和内壁均可用家用洗涤剂清洁， 但反应槽必须在取出后才能进行清洁。
当毛细管破碎时，首先用仪器厂家提供 的毛刷将碎片去除，再用70%乙醇清洗 反应槽。
光路部分须用无水乙醇清洁
ABI 7000型荧光定量PCR仪
检测原理和特点
采用精确的化学原理和多组分计算方法，可准 确检测和处理PCR指数级扩增的数据，得出高 精度重现的Ct值，多色荧光检测，实时数据监 控，并有熔点曲线分析。
PCR扩增仪的使用与保养
实验结束后应及时擦干孔位内呆能存在 的水分，盖上机盖。 应定期使用电子测温仪校准温度。 水浴式扩增仪应及时补充水，以免水量 过少，影响温度稳定性。 定期清洁热盖和反应孔。
国内常见荧光定量PCR仪简介
GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪 Lightcycler 荧光定量PCR系统 ABI 7000型荧光定量PCR仪 杭州博日 Line-gene
2400型DNA扩增系统( 美国应用生物系统公司）
最大样本数：可同时扩增3*8个0.2ml PCR反应 管。
温度范围：4-99.9℃
加热冷却速度：样本实际升降温速度平均为 1℃/秒。
静态样本均衡性：0.5℃，35-100℃范围。
温度精度：35-100℃间误差小于0.75℃。
特点：所附加热盖保证防止样品蒸发，无需加 石蜡油操作，满足最小5l体积；扩增反应的 要求；可储存68个PCR方法，每个方法包括PCR 前处理，保温，PCR循环及PCR扩增后保温条件； 断电后有自动启动功能。