基因扩增实验室常用仪器设备的使用和维护-51页精选文档

LightCycler (Roche) Rotor-Gene (Corbett Research) ABI Prism (Applied Biosystems)
GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪
仪器特点
外标定量，熔点曲线分析。
5700采用基于CT值之实时动态荧光定量PCR方 法，结果重复性好，线性范围广，可分别用于 TaqMan 荧光探针技术作定量PCR和SYBR Green荧光染料作定量PCR。
用 T aqm an探 针 进 行 HCV检 测 (深 圳 Ｐ Ｇ 试 剂 盒 )
Lightcycler 荧光定量PCR系统
原理和特点
可使用外标法定量，可加内对照，可做熔点曲线分析。 单一光路的三个检测点对样本同时进行三个波长的荧 光检测，扩赠与检测同时进行，提供实时分析和在线 监测。引入独特的颜色补偿试剂和软件以消除个检测 通道其它染料荧光的干扰。 一次可做32个样本。 公用热室，保证单次PCR个样本的状况连续一致。循环 速度快，20-30分钟完成30-40个循环，一次检测样本数 32个。
PTC-200 热循环仪（MJ公司产品）
最大样本数：多样本载板可选择，其中包括扩 增96个0.2ml PCR反应管。 温度范围：-5-105℃ 加热速度：样本实际升温速度为3.5℃/秒。 温度精度：孔间温度差异小于0.3℃。 特点：采用可调压力和高度的热盖，防止样品 蒸发，无需加石蜡油操作；三种温控选择：模 块、样本内参或电脑模拟计算。
基因扩增实验室常用仪器设备 的使用和维护
卫生部临床检验中心
王露楠
PCR热循环仪（DNA扩增仪） 高速( 冷冻)离心机 漩涡振荡混旋器
恒温水浴箱/恒温金属浴 洗板机（PCR-ELISA) 酶标仪(PCR-ELISA) 加样器
PCR热循环仪（DNA扩增仪）
PCR扩增仪的原理及发展状况： PCR扩增仪原理 国内常见扩增仪简介 国内常见荧光定量PCR仪简介
PCR扩增仪的使用与保养
实验结束后应及时擦干孔位内呆能存在 的水分，盖上机盖。 应定期使用电子测温仪校准温度。 水浴式扩增仪应及时补充水，以免水量 过少，影响温度稳定性。 定期清洁热盖和反应孔。
国内常见荧光定量PCR仪简介
GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪 Lightcycler 荧光定量PCR系统 ABI 7000型荧光定量PCR仪 杭州博日 Line-gene
Eppendorf梯度PCR仪
最大样本数：是唯一可同时防置0.2ml和0.5ml 反应管的扩增仪，可同时扩增96个0.2ml PCR 反应管和77个0.5ml反应管。 温度范围：4-99℃ 加热速度：3℃/秒。冷却速度： 2℃/秒。 温度准确性： 0.2℃ 。 特点：循环时可对变性、退火和延伸同时设温 度梯度。
PCR扩增仪的使用与保养
PCR扩增仪的原理及发展状况
（1）梯Biblioteka Baidu水浴法
变性: 退火: 延伸: 如94C 如55C 如72C
温 度 变 化 快 ， 时 间 准 确 ， 温 度 可 调 ， 合 适 于 试 验 研 究 ， 省 时 、 省 力 效 果 明 显 。
（2）空气驱动循环恒温装置
本系统力求降低部件的成本，用空气作为热 传导媒介。装置包括机箱（外壳）、热源、 冷空气源、控制器和辅助电器元件等部分。 优点：不用金属的精密加工，成本降低。整 个系统没有液体流动，不用致冷液，因而安 全程度高。恒温精度可达1℃ 。 缺点：单纯靠外部空气制冷，受环境温度影 响。
（3）变温金属块作恒温装置
加热方式有电热发热、半导体发热，制 冷方式有半导体制冷和压缩机制冷等多 种方式。
国外产品的特点是产品质量和性能较稳 定。
机型：适用，建议 8*12孔德模式。
国内常见扩增仪简介
T11-II型基因扩增仪（华美生物工程 公司）
温度设定范围： 室温-99C 样品批量能力：480.5ml或161.5ml离心管 动态显示内容: 实时温度、到计数时间、到计 数循环数 主要功能：整机全自动化运行，线性运动臂同 时具有自动和手动功能；具有断 电恢复功能；可贮存128个用户文件。
PCR扩增仪的使用与保养
PCR仪应放在临床基因扩增实验室的第三区。
仪器应放置水平台上，电源电压须与仪器要求 电压相一致，并连接可靠的地线。仪器远离水 源、明火及腐蚀性物质。
工作室温要求：15-25 ℃，通风保证散热。 接稳压电源。尤其是半导体升温降温的设备。
每次实验时，最好能将扩增仪内的孔位全部放 置样品管，若样品管少时可用空管代替，以保 证实验的一致性和重复性。
2400型DNA扩增系统( 美国应用生物系统公司）
最大样本数：可同时扩增3*8个0.2ml PCR反应 管。
温度范围：4-99.9℃
加热冷却速度：样本实际升降温速度平均为 1℃/秒。
静态样本均衡性：0.5℃，35-100℃范围。
温度精度：35-100℃间误差小于0.75℃。
特点：所附加热盖保证防止样品蒸发，无需加 石蜡油操作，满足最小5l体积；扩增反应的 要求；可储存68个PCR方法，每个方法包括PCR 前处理，保温，PCR循环及PCR扩增后保温条件； 断电后有自动启动功能。
Lightcycler 荧光定量PCR系统
清洁和维护
反应槽和内壁均可用家用洗涤剂清洁， 但反应槽必须在取出后才能进行清洁。
当毛细管破碎时，首先用仪器厂家提供 的毛刷将碎片去除，再用70%乙醇清洗 反应槽。
光路部分须用无水乙醇清洁
ABI 7000型荧光定量PCR仪
检测原理和特点
采用精确的化学原理和多组分计算方法，可准 确检测和处理PCR指数级扩增的数据，得出高 精度重现的Ct值，多色荧光检测，实时数据监 控，并有熔点曲线分析。
一次最多可同时分析96个样品，荧光检测波长 范围530-590nm。
GeneAmp 5700型荧光定量PCR仪
影响测定结果的因素
域值设定 光路维护 加样的准确性和反应体系的均一性 反应管中是否有气泡 反应管不符合荧光检测要求或疏水性差 反应管或反应槽被荧光物质污染 反应管用记号笔做标记
用 T aq m an 探 针 进 行 HBV检 测 (深 圳 Ｐ Ｇ 试 剂 盒 )