食用菌母种制作技术.doc
食用菌母种制作的两种简易方法
食用菌母种制作的两种简易方法
一、灰树花母种制作
1. 收集准备
选择新鲜的床树花，将彩色的花芯拆开，将母种和母粉分离出来，然后收集并保存在干燥的玻璃杯中。
2.加工加工
将母粉放入清水中浸泡2~3小时，然后用手轻轻挤压，将母粉中的器官质质因子都细化拌和均匀，待水质变得透明后即可取出。
3.蒸煮蒸煮
将母粉放入不锈钢锅中，将水添加到母粉的一半位置，然后加入适量盐及其他调料，浓度不应过于浓稠，并将温度调节到90~100℃，蒸煮数小时，直到母粉颜色发生变色，再加入适量的植物油使其更加香，即熟母粉即可回收。
二、松露母种制作
1.收集准备
选择新鲜的松露，将其细切粉末，并加入少量水混合成浆，导出松露的母种。
2.提取精粹
将提取的母种放在碗里，过滤掉母粒状的淤泥，然后将其加入少量水重复搅拌，分离母粉与母粒，然后用一滤纸将母粉过滤至精粹完成。
3.蒸煮母粉
将精粹放入不锈钢锅中，然后加入水、盐、酱油等调料，并加入植物油以香，将温度控制在90~100℃，不时的翻动内容物蒸煮30分钟，再加入少量冷水即可取出。
做出的母粉可直接拌入食物中食用。
组织培养法制备食用菌母种
组织培养法制备食用菌母种一、实验目的1、学会母种培养基的配制方法。
2、掌握组织分离的方法和技术。
3、掌握无菌操作技术。
二、实验内容1、母种培养基（马铃薯综合培养基）的配制。
2、菌种分离和培养。
三、实验材料材料：白玉菇、杏鲍菇、金针菇。
仪器：超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、培养皿、解剖刀、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管、止水夹、牛角勺、棉花、纱布、酒精灯、镊子。
试剂：75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1等。
四、实验步骤1、母种培养基的配制培养基配方：马铃薯200g、葡萄糖20g、磷酸—二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B1 5mg~10mg、琼脂18～20g、水1000ml，Ph5.5～6。
培养基配制：（1）首先给马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200g，放入铝锅中用1000ml 清水加热煮沸，维持20min左右，煮到软而不烂为止，用双层湿纱布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。
再加入琼脂继续加热，待琼脂熔化后，添加葡萄糖及其他成分，搅拌均匀后装入三角瓶中，塞上棉塞，棉塞上方用牛皮纸包好，用高压灭菌锅进行灭菌。
用牛皮纸包好9个培养皿，一起进行灭菌。
0.1MPa,121℃,30min.（2）在超净工作台上，将已灭菌的三角瓶中的培养基趁热倒入9个已灭菌的培养皿中，等待凝固之后就可以进行接种了。
2、菌种的分离与培养（1）种菇的选择与消毒：选择出菇早，菇形正，菇盖肥厚，具有该品种特征，无病虫害，无杂菌污染，子实体八九分成熟的作为种菇。
种菇选定后，用75%酒精进行表面消毒。
（2）组织块的切取：将平板培养基放进超净工作台内，用紫外灯（或化学药品）消毒0.5小时以上，关闭紫外灯20min后，再开始进入接种室内进行接种。
用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀，然后用手将菇体掰成两半，在菌柄和菌盖交界处用刀切取0.3—0.5cm3的小方块组织，将其移接到平板培养基上，移植3—4块组织块，要分布均匀。
一般食用菌母种(一级种)制作
一般食用菌母种(一级种)制作母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品。
(一)常用培养基及配方培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。
培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等。
第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用。
如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2％左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等。
第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.0～6.5。
第四，经过严格灭菌，保持无菌状态。
这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH。
这一点必须在配制时就考虑到。
这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度。
一般高压蒸汽灭菌0．1～0．12兆帕30分钟，培养基的pH下降0．1～0．3。
高压灭菌切勿压力过高，时间过长，以利培养基保持良好的营养和适宜的pH。
目前食用菌母种生产上使用的都是固体培养基，以琼脂(洋菜)为凝固剂，琼脂的用量从10～24克不等，这依琼脂的质量而定，使用时用量要参考产品使用说明书。
此外，当制作相同培养基时，高温季节要较常量多用些，以利凝固，低温季节可按常量使用；较酸的培养基也要较pH较高的培养基琼脂用量多些。
1．通用培养基通用培养基有多种配方，几乎通用于各类食用菌，常用的配方如下：(1)PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基) 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，琼脂10或20克，水1升。
(2)综合马铃薯培养基马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。
(3)马铃薯麦麸综合培养基马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。
食用菌母种生产技术
食用菌母种生产技术食用菌母种生产技术母种生产主要包括培养基制备、纯种分离或转管扩大、培养等环节。
一、母种培养基制备1.母种培养基常用配方（1）PDA培养基：马铃薯(去皮，下同)200克，葡萄糖20克，琼脂18-20克，水l000毫升。
（2）加富PDA培养基①综合PDA培养基：马铃薯200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，维生素B110毫克，琼脂18-20克，水1000毫升。
②蛋白胨－综合PDA培养基：在加富PDA培养基①中添加5克蛋白胨。
③麦麸－PDA培养基：在培养基（1）中添加100克麦麸。
④麦芽汁－PDA培养基：在培养基（1）中添加50克大麦芽。
（3）鲜蘑菇浸出液培养基：鲜蘑菇200-250克，葡萄糖20克，琼脂18-20克，水1000毫升。
将蘑菇切碎，煮30分钟，取其液汁。
（4）粪汁培养基：干马粪或牛粪150克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升。
将马粪或牛粪打碎，煮沸30分钟，取其溶液。
（5）完全培养基（CM）培养基：蛋白胨2克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾0.46克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾1克，琼脂18-20克，水1000毫升。
2.母种培养基制作方法不同配方培养其制作方法基本相同，现以综合PDA培养基为例介绍其制作方法。
（1）培养基制作。
将土豆洗净、去皮、挖去芽眼及变青绿部分，称取200克，切成约长宽各2厘米厚3毫米左右的薄片，在1200毫升水煮沸10－15分钟，然后用4－6层纱布过滤，倒掉残渣并洗净铝锅。
将滤液倒入锅内，加清水补足 1000毫升，同时放入琼脂并重新开始加热，最好小火加热，不断搅拌至琼脂完全溶化，再用纱布过滤一次，补水至1000毫升。
最后依次将称好的葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和维生素加入，继续加热并搅拌至全部溶化，停止加热。
如果要加入蛋白胨需将蛋白胨用冷水溶化后加入，可以避免蛋白胨因结块而分散不均。
图3－11 试管分装（2）分装试管。
左手持3-4支试管，管口朝上，令下端整齐，上移试管至漏斗软管，插入试管内约3厘米。
食用菌制种技术（五）
食用菌制种技术（五）人们采取无菌操作的方法，把某种食用菌从混杂的微生物中，单独地分离开来，这个过程叫做菌种分离。
从分离过程中得到的菌丝体纯化后，就是纯菌种。
在实验室条件下，以人工使纯菌种大量生长和繁殖的方法，叫做培养。
一、母种培养(一)菌种分离菌种分离通常采用的方法有孢子分离法、组织分离法和寄主分离三种方法，三种方法各有特点，可根据不同的菌类和生产条件选择使用。
1.孢子分离法孢子分离法，是利用成熟子实体的有性孢子能自动从子实体层中弹射出来的特性，在无菌条件下和适宜的培养基上，使孢子萌发成菌丝，而获得纯种的一种方法。
(1)孢子的采集①种菇的选择用作分离菌种的种菇，应选择出菇早、朵型好、个体肥大、生长健壮、无病虫害、八成熟的菇体。
一进入出菇期，就要注意观察选择，并作好标记。
不同的食用菌选择的具体要求是：香菇菇型圆整，菇体肥大，柄细而短，菌盖呈深褐色，出菇早，无病虫害，一般为八成熟的子实体。
双孢蘑菇菇型圆整，光滑直立，颜色洁白，柄粗盖厚，无病虫害，生长快而健壮的单生菇。
草菇菇型端正，肥大健壮，包被未破，无病虫害的单生菇。
平菇出菇早，菌盖厚实，重叠丛生，菌柄粗短，色泽鲜亮，尚未散发孢子，八成熟而无病虫害的子实体。
木耳选朵大、耳片厚、色黑、生长健壮、褶皱多、无病虫害的春耳。
银耳朵大肉肥、色泽洁白、展片良好、朵型美观、八成熟、无病虫害的子实体。
猴头形状正常、颜色洁白、出菇早、生长健壮、菌刺丰满、无病虫害的子实体。
金针菇出菇早而均匀、生长健壮、朵型正常、菌柄长短适中、无病虫害的子实体。
②种菇的消毒子实体采回后要及时切除基部，并进行表面消毒。
对子实体层未外露的种菇(如蘑菇等)，可浸入0.1%升汞溶液中消毒约1分钟，用镊子捏出后经无菌水冲洗数次，再用无菌纱布将表面水吸干；对于子实层裸露的种菇(如香菇等)，只能用75%酒精揩擦菌盖及菌柄表面；而对于银耳、木耳类子实体，却千万不能接触消毒剂，只能置于烧杯中用无菌水洗涤，然后捏起再经无菌水冲洗数次，同样用无菌纱布吸干表面水。
食用菌母种的制作技术
e 分装试管，培养基配好后应趁热用漏斗分装试管，装
入试管高度的1/5～1/4.分装时应注意不得使培养基沾在试管 的口壁上,以防杂菌污染。剩余的培养基分装到三角烧瓶中灭 菌。 f 将分装好的试管塞好塞子，7或9支扎成一把，灭菌。 （若使用棉塞，外面应包一层防潮纸，在用线绳扎紧，防止 灭菌时棉塞被冷凝水浸湿）
（二）灭菌
1．具体灭菌要求：1.1kg/cm2，121℃，保持20~30min。
2．操作过程
加水装锅盖盖加热当压力升为0.5kg/cm2时排
放冷空气正式升压保压（1.1kg/cm2，121℃，保持2030min）停止加热自然降压至零排放余汽开盖取 出灭菌物品趁热摆斜面检验灭菌效果（32℃空白培养 48h）
常用的母种培养基有： 1 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），广泛用于多种食 用菌母种的分离、培养和保藏； 2 玉米粉蔗糖培养基，适用于多种食用菌，特别是香菇、 金针菇菌丝生长； 3 稻草浸汁培养基，适用于草菇菌丝生长； 4 马铃薯棉籽壳综合培养基，广泛用于培养和保藏多种 食用菌母种。
一 实验目的
食用菌学实验
实验一 食用菌母种的制作技术
中南民族大学工商学院实验教学 中心环境与生物工程分中心
母种制作技术
母种即一级菌种，多用试管作为容器，因此又称试管 种。是第一次用孢子分离法、组织分离法或基内菌丝分离 法获得的纯菌丝体及其经过转管扩大后的菌丝体。 一级菌种是菌种生产的基础，一级菌种质量的优劣， 直接关系到二级菌种和三级菌种的质量，对食用菌生产产 生根本的影响。 母种培养基是菌丝体生长繁殖的基础，不同食用菌菌 丝体的生长发育对培养基营养成分的要求是不同的。
（三）接种和培养
(1) 左手拿两支试管，一支为已经灭菌的斜面，另一支 为已长好的菌种。右手拿接种钩(已在火焰上灼烧灭菌又冷 却)，并同时用右手轻轻拔下两支试管的塞子。 (2) 将试管口通过火焰数次，并稍转动，以防环境中的 微生物落入。
食用菌母种制作技术
食用菌母种制作技术母种是从子实体中提纯，复壮获得母种，人工栽培蘑菇成功的关键是菌种，只有优良的菌种才能达到优质高产，这是种植蘑菇高产的第一个要素。
母种制作：母种培养基配制：母种培养基的原料是马铃薯，葡萄糖，蛋白胨，水，琼脂粉，以配制一千毫升的母种培养基为例，将马铃薯去皮后称重200克，葡萄糖20克，琼脂粉20克，蛋白胨10克，用量杯量取1000毫升的水倒入锅中，用刀将马铃薯切成片加入锅中，用文火煮沸，煮至用筷子轻轻一插既可插入，这时可以用四层的纱布过滤煮好的马铃薯汁，然后倒在量桶里，看一下，如果不足一千毫升可加水补足一千毫升，在倒入锅中煮，最后加入称好的葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨，为了防止锅底烧焦要边加热边搅拌，煮至完全溶化，母种培养基就配制好了。
母种培养基的分装：母种培养基配制好后要分装以试管中，这里用到的试管规格为18毫米X200毫米，每7根试管扎成一捆，分装培养基时用漏斗下面接一根塑料管，在通塑料管接装到试管内，分装量为试管高度的五分之一左右，分装完后及时用棉塞装试管口塞住，防止其它杂菌侵蚀。
要注意，母种培养基的温度降到45度以下时凝固，所以分装过程要在母种培养基凝固之前完成。
母种培养基的灭菌：用白纸包裹试管口，在用绳子将白纸扎紧，将试管放入高压来菌锅中高压来菌，盖上锅盖，压紧螺帽，在压力为0.5MPa条件下持续来菌30分钟，来菌完后在让其在锅内自然冷却一小时，待压力为零时就可以打开锅将试管取出来，这样母种的培养基就制作好了。
制作母种：母种接种：母种的接种也是在无菌工作室的无菌箱中进行的，另外要选取品质优，长势好的蘑菇来提取菌丝，分别用酒精棉球擦拭双手和蘑菇表面进行消毒，点燃酒精灯然后把长柄小刀放在酒精灯火焰上消毒2至3秒钟，用消毒后的小刀割开新鲜蘑菇的菌柄，在菌柄与菌盖连接处用小刀切割一小块蘑菇组织，打开母种培养基试管瓶塞，为了避免杂菌感染，要将试管口靠近酒精灯火焰，用长柄钩针钩取切割好的蘑菇组织带到试管中，放在试管培养基斜面的中部，退出长柄钩针，将棉塞在火焰上消毒，塞住试管口，母种的接种工作就完成了。
食用菌母种制作方法
食用菌母种制作方法一、食用菌种瓶的选择用100毫升医用盐水瓶代替试管作盛装培养基的容器。
二、培养基的配制1．配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18～20克，水1000毫升。
2．制作：马铃薯挖去芽眼，去皮洗净，切成薄片后加水，在铝锅中煮沸25～30分钟，用4层纱布过滤，取滤液放入铝锅中，加入琼脂，小火加热并不断搅拌，待琼脂溶化后加入葡萄糖，加开水补足1000毫升，搅匀，趁热装入盐水瓶中，每瓶装8～10毫升，塞上棉塞棉塞要求干燥、松紧、长度合适，再用牛皮纸包住棉塞及瓶口部分，用胶圈扎紧瓶口。
三、灭菌采用高压灭菌，若没有专用高压锅，可用家用高压锅进行灭菌。
方法是：将装好培养基的菌种瓶放置在高压锅中，瓶间留有空隙，不可堆放过紧，以利蒸汽循环，灭菌彻底。
当压力表指针指到0．05时，打开放气阀，集中排出冷空气，使压力降到零时，关闭排气阀进行升压灭菌，自动放气后保持30分钟家用普通高压锅灭菌1．5小时，让其自然冷却，取出放置在接种箱中备用。
四、菌种分离主要采用组织分离法。
通常是从食用菌子实体内部分离纯菌种，操作时，从子实体内切取一小块组织，放在培养基中培养可长出纯菌种，且菌丝萌发快，遗传性状稳定，后代不易发生变异。
1．种菇消毒：种菇采下后，切去菌柄，放入洗净的盘内，在装有紫外灯的接种箱内照射20～30分钟。
2．接种块切取：在已消毒的接种箱内，撕开子实体，用经酒精灯火焰杀菌冷却的小刀，在菌柄与菌盖交接处内部切取黄豆大小组织块，放入菌种瓶内培养基上培养。
3．接种块选择部位：接种块选择部位因食用菌种类不同而异，菇体肥厚的种菇，在菌盖外缘菌盖皮和菌褶交接处切取组织块进行分离。
菌体小、盖薄、柄空的菌类如金针菇，应快速击掉菌盖，用接种针钩取菌柄顶端生长点组织进行分离。
菌肉极薄菌柄中空孢子不易萌发的伞菌类，可采用子实层分离法，选取半破膜的子实体，移入培养基上，菌丝萌发后即转入新的培养基上。
对子实体较大、质地结实的多孔菌类，应取子实体外缘菌肉组织块。
食用菌制种技术
食用菌制种技术菌种生产程序，通常分为母种、原种和栽培种3个层次，也就是通常所说的一级、二级、三级菌种。
其中母种的分离选育技术性强，要求精化；而原种和栽培种的制作则相对比较简单。
下面介绍各级菌种的制作技术。
一、母种的分离选育母种主要采用人工选择、诱变育种、杂交育种和原生质融合等手段获得。
作为一般制种专业户，可以采用人工选择方式分离培育母种，具体步骤与操作方法如下。
1.采集种源从野生或人工栽培群体中，选择有代表性的优良菇体作为种源。
①种菇选择时间。
一般在11月上中旬，在第1批和第2批菇中挑选。
因为这段时间蘑菇生长正是旺盛时期，菌丝生活力强，子实体健壮，质量好，加之气温适宜，蘑菇能正常成熟。
②种菇的标准是：八成熟，朵形圆正，肉质肥厚，颜色洁白，无病虫害。
采集一二朵符合上述标准的种菇编上号码，作为分离母种的材料。
从栽培室采集的应标有原菌株代号。
2.培养基配制琼脂培养基又叫PDA培养基，常用配方为：马铃薯200克、琼脂16克～18克、葡萄糖20克、水1000毫升。
先将马铃薯洗净去皮，切成薄片，置于铝锅内加水煮沸15分钟～30分钟至薯块酥而不烂为止。
煮后用6层～8层事先浸湿拧干的纱布过滤，过滤后加入琼脂16克～18克（气温低时加16克，气温高时加18克）再煮，并不断搅拌，使固体琼脂完全溶化，再用4层～6层纱布过滤。
将滤液加水至1000毫升加入20克葡萄糖，搅拌溶化趁热分装试管。
装入量为试管高度的1/4～1/5，注意培养基不要粘着试管口，管口用棉塞塞紧，或将汁液装入玻璃三角瓶内，每瓶装量为20毫升。
然后置于高压锅内，在压力达108千帕，锅内温度为121℃灭菌30分钟左右。
灭菌后及时取出，趁热将试管斜排于桌上，冷却后即成为固体斜面培养基。
食用菌母种制作-实验一
实验一食用菌母种制作一、目的要求：1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理；2、掌握母种培养基的制备方法；3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。
4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤；5、熟练分离出栽培用菌种。
二、主要仪器设备及药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。
三、实验步骤与方法:①培养基的制作1 PDA培养基配方马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升.2. 母种培养基的配制(1)熬制。
马铃薯洗净，挖芽去皮。
称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。
量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。
四层纱布过滤于量杯中。
滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。
补足水量至1000毫升。
(2)分装试管。
将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。
培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。
分装完成后，盖紧硅胶塞。
（3）捆把。
7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。
贴上标签，准备灭菌。
（4）灭菌。
注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。
（5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。
斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。
①菌种分离与培养（1）种菇选择。
选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。
子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。
（2）母种分离（组织分离法）。
在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。
将分离的试管放在室内避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。
食用菌母种、原种、栽培种制作步骤
食用菌母种、原种、栽培种制作步骤食用菌菌种的质量对食用菌生产至关重要。
菌种的好坏，菌种的保存直接影响到食用菌的产品质量和产量、效益和成败，所以我们要制作优良的食用菌菌种，更要有优良的菌种保存方法，以保存菌种的生活力和优良性状，确保菌种纯种、无污染。
一、菌种制作食用菌菌种分三种即母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）1.制作母种（一级种）1.1菌种采集选择健壮无病虫害的食用菌子实体。
经表面消毒后，放在无菌的厚纸上，使子实体菌褶向下，在通风条件下经过12--24h，等子实体放出孢子后，将纸折叠起来风干，放入塑料袋中，里面放几粒干硅胶，封好口，放入2--4℃冰箱中，可保存起来长期备用。
1.2母种培养基制作配方：马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、纯净水1000ml。
先把马铃薯切成大约1cm大的小方块，放入1000ml 纯净水中煮30min，过滤后加入琼脂、0.2-0.3%的磷酸二氢钾、再加入20g葡萄糖，溶解后分别装入试管，每个试管装量1/5-1/4，用棉塞封好试管口，外加塑料膜扎紧，放入压力灭菌锅1.3㎏/cm灭菌30min，待温度降至60℃将试管摆成30-35度倾斜面，冷却后观察几天，无受到杂菌污染即可接种，孢子液用灭菌的自来水将孢子稀释，在无菌操作环境下将孢子悬浮液移到试管琼脂斜面上，在25℃下培养，很容易萌发生长成菌丝，然后用石蜡封口置于4-5℃恒温箱中可保存6个月。
2.制作原种（二级种）将木屑78%、麦麸20%、糖1%、石膏1%加入水拌匀（100kg料加125kg水），培养基原料拌匀后拿试纸测ph 值，ph值在6-7为宜，然后装入大口的罐头瓶至瓶肩部，将培养料压平压紧，抹干净瓶的培养料，拿完好无破损的塑料薄膜扎紧瓶口，放入压力灭菌锅1.4-1.5㎏/cm灭菌1.5-2h，冷却至25℃即可进行无菌接种，用接种针从母种试管斜面上挑取少量菌丝体接入瓶中，接种后在25℃恒温箱中培养30d菌丝可长满，即可作为原种（二级种）。
食用菌母种的制作培养
食用菌母种的制作培养用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种(保留种，并用于生产的母种即为生产母种，可用于扩接原种。
1．培养基配方配方一综合马铃薯培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克硫酸镁0.5克维生素B110毫克琼脂20克水1000毫升 PH值自然配方二合成培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸二氢钾2克蛋白胨10克牛肉膏5克酵母膏5克硫酸镁0.8克水1000毫升 PH值自然2．培养基制作方法先将马铃薯洗净去皮切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液并补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它配方中的药品。
培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一水段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，但不要碰到管壁，每支试管装入量为度管长度1/4。
装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。
3．灭菌将分装后的试管扎捆好，放入高压蒸气灭菌锅，在1公斤/厘米压力下(锅入温度达121℃)灭菌20分钟,使微生物包括芽子色全部杀死。
待压力降到0度时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。
4．接种与培养通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，12—15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。
原种的制作母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。
1．培养基配方配方一木屑麸皮培养基阔树木 78% 麸皮 20% 糖 1% 石膏粉 1% 水 65% PH值自然配方二棉籽壳木屑混合培养基棉籽壳 90% 糖 1% 麸皮 5% 过磷酸钙 3% 石膏粉 1% PH值自然2．拌料与装袋选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，计算配料总量，将麸皮、石膏粉均匀的混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水解后，按上述干料量加入水，比例为1：1、3拌匀，培养料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。
食用菌固体母种培养技术
食用菌固体母种培养技术食用菌固体母种培养技术1．培养基配方。
①木粒或木屑78%，麦麸20%，白糖、石膏各1%，适用于木腐菌类和需要储存的分离菌种；②高粱78%，麦麸20%，白糖、石膏各1%；③木屑或锯末60%，棉籽壳20%，麦麸18%，白糖、石膏各1%。
2．拌料装瓶。
合成培养基含水率在50%～55%，装入洗净的医用500毫升或250毫升的玻璃瓶至瓶肩或半瓶，在基料中心扎一个到底的透气孔，盛入少量清水，涮去瓶口内壁残留培养基后，倒出多余水分，洗涮时使培养料上层1厘米深度含水量大于55%。
盖上原来的胶盖（胶盖中心提前打直径5毫米的孔，并塞入透气棉塞），高压或常压灭菌。
3．子实体分离培养。
选优质未开伞的子实体，在无菌箱中用75%的酒精冲洗一遍（切勿津洗），把剃须刀片过火消毒后，削去酒精津蚀的菇蕾表面，分割成黄豆粒大小的碎块，放在无菌器皿上。
接种瓶口在酒精灯上烧一圈，将接种针灼烧消毒，稍凉后在酒精灯下粘（或扎牢）分离的接种块，并迅速放入培养基瓶中，瓶盖在酒精灯上烤一遍盖严，在室温24～26℃下按常规方法养菌。
需要长期保存的母种，在菌丝长过培养料四分之一时，用石蜡封住瓶盖中心的棉塞孔，避光、常温下可存放两年以上。
4．出菇试验。
菌丝长到瓶底后，按分离菌种品种的出菇特性催菇。
催菇时不要打开瓶盖，每天给予一次光亮和下行温差刺激，连续进行5～6天，再按子实体需要的温度培养，直到长出菇蕾或子实体成熟。
其中，晚熟型香菇品种，适宜在瓶内菌种的上沿出现黄褐色斑时进行出菇试验。
在封闭的无菌条件下做过出菇试验的菌种，仍然可以按照菌丝体分离法扩制第一代母种或零代原种。
出菇后的菌种，宜在子实体长成菇蕾之前扩种。
食用菌三级菌种制作技术
第二节 三级菌种制作技术
一、母种制作技术 （一）母种培养基制备 （二）组织分离法 （三）母种的扩大
二、原种制作技术 （一）原种培养基的制备 （二）原种的制作
三、栽培种制作技术 （一）栽培种培养基制备 （二）栽培种的制作
四、菌种污染的原因及防止措施
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一、母种制作技术
（一）母种培养基的制备 1. 培养基的概念 2. 常用的母种培养基配方 3. 母种培养基的制作
2020/3/30
二、原种制作技术
（一）原种培养基的制备 （二）原种的制作
2020/3/30
（一）原种培养基的制备
1.常用原种培养基配方(%)
编号 麦粒 棉子皮 木屑 麸皮 1 98
2 65 33
3
77-87
20-10
4
82
10
5
41
41 15
6
82 15
玉米面 5
蔗糖 石膏 2 2
12 12 12 12
磨口瓶、塑料绳、报纸以及pH试纸等。
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四、消毒药品
1. 75%酒精
2. 40%甲醛＋高锰酸钾
3. 汽雾消毒剂 4. 高锰酸钾（0.1%-0.2%）
5. 5%石炭酸(苯酚) 6. 1%-2%来苏儿
7. 2%-5%漂白粉 8. 硫磺
• 各种药品最好轮换使用，以防产生抗药性。
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2.常压灭菌特点：容量大(0.5-1吨料/次)，投资 小，但时间长，灭菌效果较差。 常压灭菌设备：常压灭菌灶、灭菌室或灭菌包 （可利用节能型多功能蒸汽炉或普通锅炉）。
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（三）接种设备
1. 洁净工作台：适合接母种和少量原种。 2. 接种箱：成本低，容量较大，适合各级菌种。 3. 接种帐：适于接栽培袋，但效果稍差。 4. 接种室：与接种帐类似。 5. 电炉和蒸汽接种：简易，成功率80%以上。
食品生物技术《食用菌母种制作技术》
食用菌母种制作技术
分装培养基高压灭菌一级菌种扩管
在食用菌生产中，母种的培养是至关重要的一环。
母种质量的优劣，直接影响到食用菌产量的上下和栽培的成败。
近日，本报记者采访了省农科院食用菌效劳站农技师刘素梅，她介绍了食用菌母种的制作要点：
制作培养基
先将新鲜无病害的马铃薯洗净，去皮后切成小薄片，称2021，加水1000毫升，煮沸2021后过滤，其滤汁为马铃薯煮汁。
然后在马铃薯煮汁中加琼脂2021蔗糖2021溶，后补足水至1000毫升，调节pH值在～6。
调好pH值后进行分装，一般将培养基装至试管的1/4处，而后加盖棉塞，再用牛皮纸将试管每10支捆成一捆。
分装时，注意培养基不可沾在近试管口的壁上，以免日后生霉菌。
分装后要立即进行高压灭菌，不可过夜。
高压灭菌
将用牛皮纸捆好的试管〔棉塞朝上〕竖直放入高压锅内进行灭菌。
在兆帕压力下维持30分钟，即可到达灭菌目的。
灭菌时，放汽要充分，否那么影响灭菌效果。
开锅取出试管后趁热摆
放，使培养基成斜面。
试管的斜面以距棉塞3厘米为宜，斜面摆成后，不宜再摆动。
一级菌种扩管
扩管要在无菌条件下进行，先将扩管工具、培养基及菌种放到扩管箱内，然后按每立方米用高锰酸钾5克、40%的甲醛溶液10毫升的量进行熏蒸消毒30分钟。
扩管方法：先将扩管铲在酒精灯火焰上灼烧消毒，然后拔掉母种管上的棉塞，铲一块米粒大的母种，在酒精灯火焰无菌区内迅速送入菌种试管内。
扩管后的母种培育10~15天即可投入生产。
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食用菌母种制作技术
食用菌母种制作技术
制作培养基
先将新鲜无病害的马铃薯洗净，去皮后切成小薄片，称200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后过滤，其滤汁为马铃薯煮汁。
然后在马铃薯煮汁中加琼脂20克和蔗糖20克煮溶，后补足水至1000毫升，调节pH值在5.5～6。
调好pH值后进行分装，一般将培养基装至试管的1/4处，而后加盖棉塞，再用牛皮纸将试管每10支捆成一捆。
分装时，注意培养基不可沾在近试管口的壁上，以免日后生霉菌。
分装后要立即进行高压灭菌，不可过夜。
高压灭菌
将用牛皮纸捆好的试管(棉塞朝上)竖直放入高压锅内进行灭菌。
在0.11兆帕压力下维持30分钟，即可达到灭菌目的。
灭菌时，放汽要充分，否则影响灭菌效果。
开锅取出试管后趁热摆放，使培养基成斜面。
试管的斜面以距棉塞3厘米为宜，斜面摆成后，不宜再摆动。
一级菌种扩管
扩管要在无菌条件下进行，先将扩管工具、培养基及菌种放到扩管箱内，然后按每立方米用高锰酸钾5克、40%的甲醛溶液10
毫升的量进行熏蒸消毒30分钟。
扩管方法：先将扩管铲在酒精灯火焰上灼烧消毒，然后拔掉母种管上的棉塞，铲一块米粒大的母种，在酒精灯火焰无菌区内迅速送入菌种试管内。
扩管后的母种培育10~15天即可投入生产。
食用菌母种怎么制作
母种制作：
母种培养基配制：母种培养基的原料是马铃薯，葡萄糖，蛋白胨，水，琼脂粉，以配制一千毫升的母种培养基为例，将马铃薯去皮后称重200克，葡萄糖20克，琼脂粉20克，蛋白胨10克，用量杯量取1000毫升的水倒入锅中，用刀将马铃薯切成片加入锅中，用文火煮沸，煮至用筷子轻轻一插既可插入，这时可以用四层的纱布过滤煮好的马铃薯汁，然后倒在量桶里，看一下，如果不足一千毫升可加水补足一千毫升，在倒入锅中煮，最后加入称好的葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨，为了防止锅底烧焦要边加热边搅拌，煮至完全溶化，母种培养基就配制好了。
母种培养基的分装：
母种培养基配制好后要分装以试管中，这里用到的试管规格为18毫米X200毫米，每7根试管扎成一捆，分装培养基时用漏斗下面接一根塑料管，在通塑料管接装到试管内，分装量为试管高度的五分之一左右，分装完后及时用棉塞装试管口塞住，防止其
它杂菌侵蚀。
要注意，母种培养基的温度降到45度以下时凝固，所以分装过程要在母种培养基凝固之前完成。
母种培养基的灭菌：
用白纸包裹试管口，在用绳子将白纸扎紧，将试管放入高压来菌锅中高压来菌，盖上锅盖，压紧螺帽，在压力为0.5MPa条件下持续来菌30分钟，来菌完后在让其在锅内自然冷却一小时，待压力为零时就可以打开锅将试管取出来，这样母种的培养基就制作好了。
制作母种：
母种接种：母种的接种也是在无菌工作室的无菌箱中进行的，另外要选取品质优，长势好的蘑菇来提取菌丝，分别用酒精棉球擦拭双手和蘑菇表面进行消毒，点燃酒精灯然后把长柄小刀放在酒精灯火焰上消毒2至3秒钟，用消毒后的小刀割开新鲜蘑菇的菌柄，在菌柄与菌盖连接处用小刀切割一小块蘑菇组织，打开母种培养基试管瓶塞，为了避免杂菌感染，要将试管口靠近酒精灯火焰，用长柄钩针钩取切割好的蘑菇组织带到试管中，放在试管培养基斜面的中部，退出长柄钩针，将棉塞在火焰上消毒，塞住试管口，母种的接种工作就完成了。
接种以后把试管放在摄氏25度的培养箱里进行培养。
蘑菇的种子在适宜的温度下开始了生长发育，长出了嫩嫩的菌丝，蘑菇一
生的大部分时间都是以菌丝体的形式积累和吸取营养，逐渐发育的。
5 10天左右，培养基里长满了菌丝体，这就是蘑菇的母种。
由于母种的数量少还需要扩大种源增加繁殖。
食用菌母种其他制作方法
母种多用半合成培养基培养。
母种的生产应有一个计划，即预计某一时期内所用生产种的数量，从而确定母种生产的数量。
母种第一代尽量多转出斜面管，减少转管的代次，避免造成菌丝生活力下降、出菇率低等现象。
斜面管在摄氏4度冰箱可保存3个月，但最好在一个月内使用。
加石蜡油的斜面在摄氏4度时保藏时间可长些。
母种扩大生产前要经严格检查是否污染病虫害、标签是否齐全，是否经过出菇试验等全面考核才能进行扩大生产。
第一次母种转管，每管可转出60-80管第二次母种。
第二次母种一部分用于转接原种使用，一部分保藏。
同样做法，一般母种经3-4次代转传为好。
斜面母种转管方法：转管过程应在无菌箱或无菌室进行。
工作人员、工作环境、一切器材要经严格消毒或灭菌。
接种前斜面试管用75%酒精抹擦，酒精灯旁用拿接种铲的手的指间拔下棉塞向外夹着，火焰轻轻烧过管口才转管，已灭菌后稍凉的接种铲先在母种斜面上纵向切成2毫米宽的长条，再用接种铲沿斜面的水平方向深约2-3毫米铲离，然后用接种锄将斜面横向切成宽2毫米、
长4毫米的小块。
用接种铲把斜面前段约1厘米的部分除去，其余菌种逐一小块接入空白斜面培养基内，菌种块放在空白斜面的中部为好。
把管口烧过，塞上棉塞。
以上操作在无杂菌条件下进行，称为无菌操作。
离开酒精灯，写上标签。
新接上的菌种立即进行适温培养。
当原菌丝块的菌丝萌发新菌丝时，可将原来温度调低摄氏2-3度，让菌丝缓慢生长，会更强壮，更有生命力。
至菌丝长满斜面即为菌种成熟。