胡继红-微生物检验的标准化是准确报告的重要保证

© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
组织或吸取物中革兰染色的评价
镜下所见 出现鳞状上皮细胞 大量中性粒细胞 大量的中性粒细胞，混合G和G+小细菌 少见或可见破损的中性粒细 胞和粗大G不定的或G+b 中性粒细胞罕见，无其他体 细胞 备注 标本采集技术不过关，培养提示皮肤菌群污染 长时间仔细寻找病原菌，这时菌有可能在细胞内 混合厌氧或兼性厌氧菌感染 可能是梭菌属细菌引起的组织坏死，手术应激，提示产期荚膜 梭菌引起的气性坏疽 病人没能产生足够的免疫反应，或细菌没有能激活中性粒细胞 （如球菌），仍然高度怀疑细菌感染
处理培养物应参考涂片的结果，应根据革兰染色所见炎
症细胞和细菌的形态与培养物进行对照，当培养与涂片 结果不相符时应重新读片。

当培养生长的细菌在涂片中亦和炎症细胞相关时，
报告以下两种病原菌：

肺炎链球菌，并报告药敏结果 流感嗜血杆菌，常规报告β-内酰胺酶
下呼吸道标本有意义的细菌浓度值（CFU/ml） 标本
卫生部临床检验中心 胡继红
类型
1类 标本来自“正 常无菌”部位
标本来源
血培养、CSF、 胸腹水、活检组织
出现的 正常菌群
NO
临床意义 阈值
NO
2类 其他标本
3类 含大量定植菌 标本
尿、呼吸道 皮肤、表皮、粘膜、 粪便、咽部
Yes
Yes
Yes
NO
European Manual Microbiology.1st edition. EMCM, 2012.
菌血症休克
先天性瓣膜 心内膜炎
心包炎 心肌炎
脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌 沙门菌属、肠杆菌科、耶尔森菌属 弧菌、假单胞菌属 草绿色链球菌、牛链球菌、马链球菌 粪肠球菌、屎肠球菌、耐久肠球菌 化脓链球菌、无乳链球菌 棒状杆菌属、李斯特菌属 嗜血杆菌属、假单胞菌属 金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌 大肠杆菌、变形杆菌、铜绿杆菌、沙门氏菌 脑膜炎奈瑟菌 荚膜组织胞浆菌、念珠菌属、曲霉菌属 肺炎支原体
沿中心线向下= 50,000 cfu/ml 长向边缘= 100,000 cfu/ml
Urine Culture尿培养
主要病原菌：大肠埃希菌，变形杆菌，克雷伯菌，其他革兰阴性杆菌，肠球菌，腐 生葡萄球菌，纯的金黄色葡萄球菌
#2 a b a
接种血平皿和麦康凯平 皿
b
0.001ml接种环
#3 #1
收集中段尿
可接受培养
提示感染 特征性
提示与感染相关 的病原菌
注意！
5.2.1 应报告的病原菌 化脓链球菌 B群β-溶血链球菌（儿童） 博德特菌属，特别是支气管博德特菌 奴卡菌属 新生隐球菌 弗朗西斯土拉菌（高致病菌） 鼠疫耶尔森菌（高致病菌） 炭疽芽孢杆菌（高致病菌） 丝状真菌（排除腐生菌污染）
#5
1-2 种病原菌。>2 种视为污染 100 纯培养的肠杆菌科菌 1000 Biblioteka Baidu在病原菌 100 个所有种类的潜在病原菌 任何数量（肉汤增菌，厌氧菌） 任何酵母菌
若 2 种菌生长，对 每种菌进行鉴定和药 敏试验； 若>2种菌生长，报 告“混合菌群”
100,000 cfu/ml
#4
菌落计数
© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
1、患者
无症状：>10万cfu/ml 有症状:1万cfu/ml,1-2种条件致病菌；>2种报告：标本污染 女性：100cfu/ml纯肠杆菌 男性：1000cfu/ml条件致病菌 清洁中段尿： 10万cfu/ml 内置导尿管： 10万cfu/ml或任意数量条件致病菌 直接导尿：100 cfu/ml条件致病菌 肾脏手术：任意数量 膀胱穿刺：任意数量（厌氧肉汤增菌）
类型/免疫状态
最常见病原菌
少见病原菌
社区获得性 典型肺炎1 社区获得性 非典型肺炎2 吸入性肺炎 医院获得性肺炎
肺炎链球菌，流感嗜血杆菌， 金黄色葡萄球菌，卡他莫 肺炎克雷伯菌 拉菌，脑膜炎奈瑟菌 肺炎支原体，呼吸道病毒， 流感病毒，肺炎衣原体， 军团菌属 厌氧菌，金黄色葡萄球菌， 需氧G-b 沙眼衣原体，结核分枝杆 菌，真菌等
药敏 试验
是
+
+
≤2
+
+
≤103
不 适用 不
+
-
≥105
≤2
a)免疫正常患者：重复尿细菌学及细 胞学检查（可能尿道感染初期） b)免疫抑制患者（化疗、移植）
是 不 不 不 适用
不 确定
不 确定 不 确定
103 - 104 ≥105 ≤103
≥1 ≥2
标本采集不好可能污染 定植 无尿路感染或定植
-
类型
细胞内微生物
小的、浅的、不规则、链状 排列G+c呈堆排列
活动性细菌感染
如果分离自脓肿,提示咽峡炎链球菌群(米勒链球菌)
很细小G-b
特别是如果标本为淋巴结或组织时，这些菌可能为生物恐怖病 原菌（布氏杆菌，耶尔森菌，弗朗西斯菌），标本须在安全柜 里处理。平皿需用胶带封起来，培养物只能在生物安全柜中进 行。不可闻平皿。
G-b ( 肠杆菌属 / 克雷伯菌属 / 军团菌，肺炎链球菌 不动杆菌属/假单胞菌属)， 金黄色葡萄球菌，厌氧菌， 社区获得性肺炎的典型菌 金黄色葡萄球菌，链球菌 需氧革兰阴性杆菌
血液播散性肺炎
注1：肺炎链球菌和流感嗜血杆菌是引起儿童和老年人肺炎的最常见致病菌；卡他莫拉菌、脑
膜炎球菌多发于: 基础病患者或病毒感染后的继发感染；金黄色葡萄球菌肺炎可引发肺脓肿； 肺炎克雷伯菌大叶性肺炎，常合并脓肿或肺粘连，死亡率较高。
b. 定量培养有临床意义的数量： BAL：菌落计数 ≥ 104 CFU/mL PSB：菌落计数 ≥ 103 CFU/mL 取最高稀释度平板，分别对不同菌落形态的细菌计数，乘上 稀释倍数即为菌落数。
血培养、CSF、 胸腹水、活检组织
出现的 正常菌群
NO
临床意义 阈值
NO
2类 其他标本
3类 含大量定植菌 标本
尿、呼吸道 皮肤、表皮、粘膜、 粪便、咽部
Yes
Yes
Yes
NO
European Manual Microbiology.1st edition. EMCM, 2012.
Organism 菌株 E.coli 大肠埃希菌 Entero/Prot 肠杆菌属/变形 杆菌属 Pseudo 假单胞菌属 Enterococci 肠球菌 Staph saprophyt 腐生葡萄 球菌 Yeast 酵母菌
2、标本采集方式
3、任何方式标本
金黄色葡萄球菌 酵母菌
临床 症状
白细胞 ≥104/mL
细菌 (CFU/mL) ≥103E.coli或 腐生葡萄球菌 ≥105其他种
菌种 数量
评价 尿路感染（急性膀胱炎） 急性肾盂肾炎：细菌≥104CFU/mL 急性前列腺炎：≥103CFU/mL 有意义 无菌炎症； 在抗菌药物治疗当中； 慢生长或难生长微生物； 非感染病因
有意义的浓度 CFU/ml
自然咳痰
诱导痰
气管内吸取物 支气管肺泡灌洗液 保护性毛刷
支气管灌洗液
107 不确定
106
104
103
不做培养
a. 定性培养生长的病原菌数量达到以下情况时，判断为有临床意义：



在平板第2区划线仍大量生长，或培养物生长量超过1/4平板； 培养少量生长且革兰染色涂片可见此形态细菌与炎症细胞相 关联的病原菌； 在平板划线第1区生长且纯度超过90%以上时，同时革兰染色 涂片可见此形态细菌与炎症细胞相关的病原菌。

除引起社区非典型肺炎的病原不能常规培养外，其他常见肺部感染的病
原菌均可常规培养方法分离；

但培养方法敏感性低，无法判断分离菌的来源。
涂片革兰染色方法：

宿主细胞、蛋白质和肺部炎症反应的分泌物等来自下呼吸道痰的组分，
可反映感染的状况； 痰经咳嗽从肺深部进入气道，未受损的粘膜纤毛运动将痰送人口腔，

#2
1500×g离心15分钟 （可能的话）
#7
将一大滴沉淀 滴在玻片上。 不要涂开。 自然干燥并进行革兰染色。 如见到大量多形核白细胞则 强烈支持感染
用吸管吸去 上清，留下 1cc的脑脊液沉淀
#3
注意：不要倾倒
#6
CO2中孵育 72小时
#5
滴一滴沉淀 于巧克力平皿和 血平皿
#4
上下吸取 10次以上 混匀沉淀
1类 标本来自“正 常无菌”部位
标本来源
血培养、CSF、 胸腹水、活检组织
出现的 正常菌群
NO
临床意义 阈值
NO
2类 其他标本
3类 含大量定植菌 标本
尿、呼吸道 皮肤、表皮、粘膜、 粪便、咽部
Yes
Yes
Yes
NO
European Manual Microbiology.1st edition. EMCM, 2012.
污染细菌
血培养污染定义—— 在几次血培养中，单个血培养瓶下列细菌阳性:
•凝固酶阴性葡萄球菌 •棒状杆菌 •微球菌 •丙酸杆菌 • 芽孢杆菌
引起中枢神经系统感染的常见致病菌
急性细菌性 脑膜炎 脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、无乳链球菌 产单核李斯特菌、流感嗜血杆菌
大肠杆菌、肠杆菌科、金黄色葡萄球菌 钩端螺旋体、厌氧菌（少)
苛养菌
肺炎链球菌、草绿色链球菌、牛链球菌 化脓链球菌、无乳链球菌 嗜血杆菌属、卡他莫拉菌、奈瑟菌属 JK棒状杆菌、产单核李斯特菌
G+c G-b
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌 粪肠球菌、屎肠球菌 肠杆菌科、假单胞菌属、嗜麦芽窄食单胞菌 洋葱伯克霍德菌、不动杆菌、黄杆菌属
厌氧菌 其他
拟杆菌属、梭杆菌属、普雷沃菌属、卟啉单胞 菌属、消化链球菌属 分枝杆菌属，念珠菌属，丝状真菌
痰标本会被上呼吸道和口腔定植菌污染；

评价痰标本是否合格； 提高病原菌诊断的特异性； 涂片还可发现培养不能生长的细菌。 涂片方法提高了培养方法的特异性及敏感性。
敏感性
当有大量炎症细胞，且： G+双球菌,诊断肺炎链球菌： 57%
特异性
97%
G-小杆菌,诊断流感嗜血杆菌：
82%
99%
不接受培养
空气孵育24小时
注意:
GPC
#6
病人 无症状 有症状但不需 卧床 有症状，性生 活活跃的女性 男性 所有 所有 所有
•革兰阴性杆菌在血平 皿和麦 康凯平皿上均 生长良好 •革兰阳性球菌仅在血 平皿上生长良好
GNR
50,000 cfu/ml 75,000 cfu/ml
尿培养的评估标准 标本类型 清洁留取或留置管留 取 清洁留取 清洁留取 清洁留取 从导尿管中直接留取 外科或膀胱吸取 有争议 有意义的病原菌 100,000 CFU/ml
类型/免疫状态
最常见病原菌
少见病原菌
免疫抑制宿主条件 社区获得性肺炎典型菌，奴 致病菌感染性肺炎 卡菌属，念珠菌属，条件致
病真菌，曲霉菌
环 境 暴 露 3 引 起 的 结核分枝杆菌、军团菌属、 鼻疽假单胞菌，假鼻疽 双相真菌、曲霉属、肺炎支 假单胞菌，鼠疫耶尔森 肺炎
原体、肺炎衣原体
菌，贝纳柯克斯体、图 拉热弗朗西斯菌
急性气管炎
病毒，百日咳博德特菌，肺 炎支原体和肺炎衣原体
注2：通常可用分子生物学方法快速诊断，也可在感染后期用血清学方法检测肺炎支原体、肺炎衣 原体和军团菌属抗体确诊。由生物恐怖病原菌，如和鼠疫耶尔森菌引起的感染，血清学检测 可作为辅助诊断方法。结核分枝杆菌可用罗氏培养基或快速结核杆菌液体培养仪培养，或分 子诊断方法检测。 注3：暴露在特殊气溶胶环境：与飞沫有关的结核分枝杆菌、与尘暴和鸟排泄物有关的双相真菌 等。
%Hosp-Acquired %Community Acquired %院内获得 %社区获得 30 60 12 12 14 4 11 6 3 4 7 2
尿菌落计数——尿培养的划线方式
第一区 = 50,000 cfu/ml 第二区= 75,000 cfu/ml 第三区= 100,000 cfu/ml
呈链排列的G+c和G-cb 缺乏鳞状上皮细胞提示混合厌氧菌感染
细胞内细菌
呈链排列的G+c？或G+分枝状杆菌？
肺中的结节吸出物，不规则“球菌”，分叉，无短链， 链的末端的呈尖状，都证明是分枝状的G+b，可能是放 线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织的标本）
类型
1类 标本来自“正 常无菌”部位
标本来源
脑脓肿 链球菌属、厌氧菌、金黄色葡萄球菌 肠杆菌科、洋葱伯克霍德菌、脑膜炎奈瑟菌 肺炎链球菌、无乳链球菌、 产单核李斯特菌、放线菌属、奴卡菌属、分枝 杆菌属
脑脊液（CSF)培养
主要病原菌：B群β 溶血链球菌（新生儿），流感嗜血杆菌（2月-2岁儿童）， 肺炎链球菌，脑膜炎奈瑟氏菌
#1
医生通过无菌皮肤 穿刺采集脑脊液 （腰椎穿刺）于无 菌管中。第二管和 第三管用于微生物 学检测。 最少1ml，最佳>5ml