植物组织培养的培养基配制

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植物组织培养实验报告

植物组织培养实验一：培养基的配制学院：风景园林院学号：131001226 姓名：张晟菓一、实验目的1. 掌握植物组织培养实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。

2. 掌握培养基的配置方法。

3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。

二、实验原理鉴于微生物种类及代谢类型的多样性，用于培养微生物的培养基的种类也很多。

培养基的配置的程序有器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，以及培养基的无菌检查等。

此次配制400mL MS培养基。

三、实验材料1.药品：激素：BA 1.0L（200mg/L）NAA 0.2L（200mg/L）母液：MS1（大量元素）20mL——浓缩20倍MS2（微量元素）2mL——浓缩200倍MS3（铁盐）2mL——浓缩200倍；MS4（维生素和氨基酸）2mL——浓缩200倍琼脂：2.2g蔗糖：12g（3%）无菌水2.玻璃器皿：移液管、试管、烧杯、量筒、玻璃棒、培养皿3.仪器设备：电子天平4.其他物品：药匙、滤纸、称量纸、pH计、记号笔、棉花等四、实验步骤1.玻璃器皿清洗：将试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷洗，然后用自来水和蒸馏水冲净。

移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。

晾干后备用。

2.量取母液：MS1（20mL），MS2（2mL），MS3（2mL），MS4（2mL）；加激素：BA（1.0mL），NAA（0.2mL）；加蔗糖：12g。

3.加水定容至400mL。

4.搅匀后用pH计、烧碱溶液及硫酸溶液调pH值至5.8。

5.加琼脂2.2g，用电磁炉加热溶解并搅拌5-6分钟，冒泡即可拿出。

6.趁热分装，包扎，贴标签。

五、实验结果培养基配置完成。

培养基配制

（2）无机微量(100倍液，配制500ml）无机微量(100倍液，配制500ml）倍液 500ml 药品名称 MnSO4 ·4H2O 4H ZnSO4 ·7H2O 7H CuSO4 ·5H2O 5H H3BO3 Na2MoO4 ·2H2O 2 KI CoCl2· 6H2O 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 50倍称量配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 1150 22.3 8.6 0.025 6.2 0.25 0.83 0.025 430 1.25 310 12. 12.5 41. 41.5 1.25 定容于500ml 定容于500ml 蒸馏水中。蒸馏水中。每升培养基吸此液10ml
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等；接种室的准备（超净台的准备） 2 2、培养材料表面灭菌：洗涤、清理；（此处开始在超净台上操作）75%酒精浸泡30秒，倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒出升汞；无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备用。
四、实验步骤
3、接种：取出叶片置于培养皿中的滤纸上，吸取水分，剪去被升汞杀死的叶片边缘，将叶片剪成适当大小（3-5mm见方），接种到适当培养基中。重新包扎好瓶口，写好标签（时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养，温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
实验三月季的快繁
一、实验目的：对月季茎段进行快繁，掌握利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水三、实验材料：植物茎段（月季）

主要培养基配方

培养基培养基是植物组织培养的重要基质。

在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。

因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。

一主要培养基配方:1．CC培养基(mg/L)2．NB培养基3．N6培养基是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。

其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。

在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。

4．MS培养基是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。

特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。

其养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。

它的硝酸盐含量较其他培养基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。

有些培养基是由它演变而来的。

5．MSM培养基6.改良怀特培养基是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。

1963年又作了改良，称作White改良培养基，提高了MsSO4的浓度和增加了硼素。

其特点是无机机盐数量较低，适于生根培养。

二培养基的配置在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。

为简便起见，通常先配制一系列母液，即贮备液。

所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。

一般母液配成比所需浓度高10-100倍。

母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。

配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042+，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。

配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。

药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。

药品的称量及定容都要准确。

植物组织培养基母液的配制

植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基是培养植物细胞、组织和器官的基础培养介质。

配制
植物组织培养基的母液可以按照以下步骤进行：
1. 准备所需的化学品和试剂，包括无机盐、有机添加剂、维生素和其
他辅助物质。

这些化学品可以根据不同的植物种类和培养目的进行选择。

2. 称取所需的化学品，并依次加入无菌蒸馏水中。

搅拌溶解，直到所
有化学品完全溶解。

3. 调节pH值。

使用pH计测量溶液的pH值，如果需要，可以使用酸
或碱来调节pH值，直到达到所需的pH范围。

4. 向溶液中添加琼脂糖或琼脂糖替代物，作为凝胶剂。

溶解并搅拌直
到完全溶解。

5. 过滤溶液，以去除悬浮固体和杂质。

使用无菌滤纸或滤器进行过滤。

6. 灭菌。

将过滤后的溶液装入无菌烧瓶或容器中，使用高压灭菌器或
自动压力锅进行灭菌，通常在121℃高压下灭菌20-30分钟。

7. 灭菌后，将培养基倒入无菌培养瓶中，密封并保存在冰箱中或低温
环境中。

以上是植物组织培养基母液的配制步骤，具体的操作和配方可以根据
不同的要求和实验目的进行调整。

植物组培培养基及其配制

植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。

因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。

一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。

磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。

钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。

而钙、钠、镁的需要则较少。

培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。

微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。

培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。

2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。

因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。

培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。

蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。

3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。

培养基中的维生素属于B 族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。

4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。

最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。

另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。

5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。

如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。

(2)细胞分裂素。

如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。

(3)赤霉素。

组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。

二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。

植物组织培养基的配制—培养基制作方法

• 6-BA:7.5ml
• NAA:5ml
• 大量Ⅰ母液吸取量（20倍）：6.25ml
• 大量Ⅱ母液吸取量（20倍）：6.25ml
• 微量母液吸取量(200倍)：1.25ml
• 铁盐母液吸取量（100倍）：2.5ml
• 有机物母液吸取量：甘氨酸（200倍）：1.25ml
•
盐酸硫胺素+盐酸吡哆醇+烟酸：1.25ml
• 2、取少量蒸馏水或去离子水（培养基总量的1/2-2/3的蒸馏水）加入烧杯中。
• 3、按需称取琼脂后加入（2）水中加热搅拌均匀。加入称好的糖。
如何配置1mol/LNaOH100ml?
• 4、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。（一般最后加激素母液）
• 5、定容。
• 6、调PH值。用0.1mol/L、0.5mol/L、1mol/LNaOH和HCl调至所需数值。
分化：1/2MS+2.5mg/L6BA+0.2mg/LNAA+20g/L白糖+4g/L琼脂
• 大量Ⅰ母液吸取量：
• 大量Ⅱ母液吸取量：
• 微量母液吸取量(200倍)：
• 铁盐母液吸取量（100倍）：
• 有机物母液吸取量：甘氨酸（200倍）：
•
盐酸硫胺素+盐酸吡哆醇+烟酸：
• 肌醇母液吸取量（50倍）：
• 2、取少量蒸馏水或去离子水（培养基总量的1/2-2/3的蒸馏水）加入烧杯中。 • 3、按需称取琼脂、糖。 • 4、按母液顺序和规定量，用量筒、移液管或微量移液器取母液，依次放入烧杯中。
（一般最后加激素母液） • 5、定容。 • 6、调PH值。用0.1mol/L、0.5mol/L、1mol/LNaOH和HCl调至所需数值。 • 7、分装。 • 8、封口。 • 9、灭菌 • 10、冷却备用。书写标签（培养基类型代码、配制日期、配制人）

植物组织培养步骤

植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。

植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。

组织培养的步骤一、培养基配制配制培养基有两种方法可以选择，一是购买培养基中所有化学药品，按照需要自己配制；二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂，如MS、B5等。

自己配制可以节约费用，但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题，给实验带来麻烦。

就目前国内的情况看，大部分还是自己配制。

为了方便起见，现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要过程。

1、配制几种母液（1）配制MS大量元素母液一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。

分别称取NH4NO3 165g KH2PO4 17gKNO3 190g CaCl2·2H2O 44gMgSO4·7H2O 37g各自配成1L的母液。

倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。

（2）配制MS微量元素母液一般将微量元素配制成100倍母液。

依次称取KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025gH3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025gMnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025gZnSO4·7H2O 0.86g配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。

CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。

分别称取CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。

植物组织培养培养基的配制与灭菌

★★★★★实验二植物组织培养培养基的配制与灭菌一、实验目的1.培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。

植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。

2.学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。

二、实验用具和药品1. 实验用具：电子天平（1/10、1/1000）、烧杯（100ml、1000ml）、量筒（50ml、100ml）三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。

2. 药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、 0.1mol/L HCl、各种培养基母液、激素母液三、实验内容与步骤（一）分组配制培养基。

各类培养基组成如下：1. 水琼培养基。

2. MS0培养基。

3. 1/2MS培养基。

4. MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。

5. MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L。

6. MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 2.0mg/L。

7. MS+KT 0.5mg/L+6-BA0.5mg/L。

8. MS+NAA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L。

（二）湿热灭菌培养基1.称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。

2.根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。

3.用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。

4.分装培养基，包好或盖好，标明编号。

5.121℃(103kPa)灭菌15-20min。

（三）作好植物组织培养的各项准备工作1. 制备无菌水：121℃(103kPa)灭菌40min 。

2. 配制 0.1%HgCl2溶液（放置棕色瓶中）。

3. 准备接种用培养皿、金属器械等用具。

四、注意事项1. 实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。

2. 用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。

植物组织培养基配制

培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。

MS培养基的配制包括以下步骤。

培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。

这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。

现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。

大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。

其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。

母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O 分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。

各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。

植物组织培养MS培养基配方

植物组织培养MS培养基配方（一）母液配制与保存配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。

为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。

母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。

基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍）1大量元素配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。

倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。

表1大量元素母液（配1L20倍的母液）2微量元素母液在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。

倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。

由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。

配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存注意配制时，应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。

混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中4、有机物母液按表4中的量分别称取各种有机物，分别溶解后，用蒸馏水或去离子水定容于1000mL，放入细口瓶中备用，贴好标签于4℃冰箱中低温保存。

植物组织培养培养基及其配制

• 水解乳蛋白或水解酪蛋白：它们是牛乳用酶法等加工的水解产物，是含有约20种氨基酸的混合物，用量在10-1000mg／L之间。由于它们营养丰富，极易引起污染。如在培养中无特别需要，以不用为宜。
（四）天然复合物
• 其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、
酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，
于双子叶植物特别是木本植物。
• (3) White培养基 1943年，White，培养番茄根尖。 • 特点：无机盐数量较低，适于生根培养。
（养4。）N6培养基 1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培
广特泛点应：用成于分小较简麦单、，水K稻N及O其3和他（植N物H4的）花2S药O4培含养量和高其。他在组国织内培已养。
种代谢活动，对生长、分化等有很好的促进作用。
• V活B力l(盐有酸重硫要胺作素用)。：对愈伤组织的产生和生
• VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。 • Vpp(烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定
关系。
• Vc（抗坏血酸）：有防止组织变褐的作用。 (酚类物质-醌)
一般用量：0．1—1．0mg／L。有时用量较高。有时还使用生物素、叶酸、VB12等。
提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。
• (3)K • 作用：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代
谢等有密切关系。一般为1—3mg／L为好。 • 供应物质：KCI、KN03等盐类提供。
• (4)Mg、S和Ca • Mg-是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；
S-是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。 • Ca-是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、
常用的培养基及特点如下：
• (1) MS培养基 1962年，Murashige和Skoog，培养烟草细胞。 • 特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸

植物组织培养基的配制—母液的配制

• 大量2：2水氯化钙）
•
2、配制铁盐母液250mL，母液倍数100倍
• 三、实训材料：1、实训设备
•
2、实训药品
• 四、实验步骤
• 五、注意事项
• 3、MS培养基配制有机物母液时，已知母液浓缩倍数为50倍，母液体积为 2000ml，则有机物中，烟酸、肌醇的称取量分别为多少克？
计算：
• 1、MS培养基配制大量元素母液时，已知母液浓缩倍数为50倍，母液体积为 500ml，则大量中，KNO3、NH4NO3、MgSO4•7H2O的称取量分别为多少克？
（2）称量电子天平注意事项：干净、干燥、水平、校正、量程、归零、读数电子天平使用方法：
开机-检查-放烧杯-归零-放药品-读数-关机
• （3）溶解 • 将蒸馏水或去离子水倒入烧杯中，用玻璃棒轻轻搅动使其溶解，使其沉淀后
将上清液倒入容量瓶，反复操作，直至全部药品完全溶解。
• 注意事项： • 用温水、酸、碱或醇等助溶 • 加水宜少不宜多 • 多次反复溶解
配置体积根据生产产量来定。计算时带单位如：七水硫酸亚铁(FeSO4.7H2O)称取量=27.8mg/L*100*1L
=2780mg =2.78g 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）的称取量=37.3mg/L*100*1L
=3730mg 3.73g
计算：母液各成分称取量=培养基配方用量（mg/L）*浓缩倍数*所配制母液体积(L)
• （4）定容： • 将已完全溶解的药品倒入容量瓶定容至所配制母液的体积（1L）。 • 母液成分比较多时要注意顺序， • 容量瓶定容后要充分摇匀再倒入广口瓶内保存 • 注意容量瓶的使用：干净、平视凹液面
• （5）保存：
• 将定容好的母液充分摇匀后倒入干净棕色瓶或无色试剂瓶内，贴上标签放入试剂柜或冰箱内保存。

植物组织培养基的配制

植物组织培养基的配制母液的配制和保存基本培养基母液在植物组织培养过程中，配制培养基是日常必备的工作。

为减少工作量，经常使用的培养基，可先将各种药品配成浓缩一定倍数的母液，放入冰箱内保存，用时再按比例稀释，这样比较方便，且准确度高。

母液要根据药剂的化学性质分别配制，一般配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物质等母液。

在配制大量元素母液时，要防止在混合各种盐类时产生沉淀，为此各种药品必须在充分溶解后才能混合。

在混合时要注意参加的先后次序，把Ca2+、Mn2+、Ba2+、S042-、P043-错开，以免KH2P04和MgS04与CaC12等发生化学反应，相互结合生成CaSO4、BaSO4、Ca3(P04)2沉淀。

另外在混合各种无机盐时，其稀释度要大，慢慢混合，同时边混合边搅拌。

在配制微量元素母液时也要注意药品的添加顺序，以免产生沉淀。

铁盐容易发生沉淀，需要单独配制。

一般用FeS04∙7H20和Na2-EDTA配成铁盐螯合剂比较稳定，不易沉淀，铁盐放在棕色瓶中保存比较稳定。

母液要用蒸僧水配制，药品应选用纯度较高的化学纯CP或分析纯AR,以免有杂质对培养物造成不利影响。

药品的称量及定容都要准确，在称量时不同的化学药品需使用不同的药勺，防止药品的交叉污染和混杂，每称好一种药剂应立即作一记号，以免重复或遗漏。

各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。

配制好的母液应分别贴上标签，注明母液种类、倍数、配制时间，并在记录本上详细记载配制及称取量，以便工作的准确及日后检查。

母液最好在2-4。

C 的冰箱中保存，特别是有机物质要求更严，储存时间不宜过长，如发现母液有霉菌污染或沉淀变质时，应重新配制。

多数植物生长调节剂不溶于水或难溶于水，IAA、NAA、IBA、2,4-D等生长素类和GA3,可先用少量O.ImolNaOH或95%酒精溶解，然后再用蒸储水定容到所需要的体积。

KT、6-BA等细胞分裂素类则可用少量lmol∕LHCl加热溶解，然后加水定容。

植物组织培养基的配制—培养基种类及成分

培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。
有时应用水解乳蛋白或水解酪蛋白，它们是含有约20种氨基酸的混合物，用量在10～1000mg／L之间。由于它们营养丰富，极易引起污染。
• 天然有机添加物
其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。
（四）、生长调节物质
• 是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠以及萌发等许许多多的生理生化活动。
• 在培养基的各成分中，植物激素是培养基的关键物质，对植物组织培养起着决定性作用
• 常用的有生长素类和细胞分裂素类。
锰：参与植物的光合、呼吸代谢过程，影响根系生长。锌：是各种酶的构成要素，能增强光合作用效率，参与生长
素的代谢，促进生殖器官发育和提高抗逆性。铜：有促进离体根生长的作用。硼：能促进生长器官的正常发育，参与蛋白质合成或糖类运输。钼：参与氮素代谢
（三）、有机营养成分
• 主要包括：各种维生素、肌醇、氨基酸和天然有机添加物。
维生素具有热易变性，易在高温下降解，可进行过滤灭菌
• 肌醇
使用浓度一般为l00mg／L，适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。
• 氨基酸
是很好的有机氮源，是蛋白质的组成成分，可直接被细胞吸收利用，对外植体的芽、根、胚状体的生长、分化均有良好的促进作用。
• 维生素
主要有盐酸硫胺素（VB1）、盐酸吡哆醇(VB6)、烟酸（VB3）、抗坏血酸（VC）、泛酸钙、生物素（VB7）、叶酸（VB11）、钴胺素、VB2等。一般用量为0.1～1.0mg／L。

植物组织培养基的配制

植物组织培养基的配制一、母液的配制和保存在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。

为简便起见，通常先配制一系列母液(stockso1utlon)，即贮备液。

所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但刊以侏让各物质成分的精确性及配制时的迅速移取，而且还便于低温收藏。

普通母液配成比所需浓度高10～100倍。

母液配制时可分离配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。

配制时注重一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-、Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。

配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。

药品应选职等级较高的化学纯或分析纯。

药品的称量及定容都要精确。

各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。

普通配成大量元素、微量元素、铁盐、维生索等母液，其中维生素、氨基酸类可以分离配制，也可以混在一起。

母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。

下面以MS培养基制备为例，概述其制备办法，为MS基本培养基4种母液成分配制。

(1)大量元素母液可配成浓度10倍母液。

用分析天平按表25称取药品，分离加100mL左右蒸馏水溶解后，再用磁力搅拌器搅拌，促进溶解。

注重Ca2+和PO3-4易发生沉淀。

然后倒入1000mL定容瓶中，再加水定容至刻度，成为10倍母液。

(2)微量元素母液可配成100倍的母液。

用分析天平按表精确称取药品后，分离溶解，混合后加水定容至1000mL。

(3)铁盐母液可配成100倍的母液，按表称取药品，可加热溶解，混合后加水定容至1000mL。

(4)有机物母液可配成l00倍的母液。

按表分离称取药品，溶解，混合后加水定容至1000mL。

(5)激素母液每种激素必需单独配成母液，浓度普通配成1mg／mL。

用时按照需要取用。

由于激素用量较少，一次可配成50mL或100mL。

另外，多数激素难溶于水，要先溶于可溶物质，然后才干加水定容。

激素的配法如下：将IAA、IBA、GA等先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容至一定浓度。

植物组织培养培养基的配制步骤

植物组织培养培养基的配制步骤嘿，咱今儿个就来讲讲植物组织培养培养基的配制步骤，这可真是个有趣又神奇的事儿呢！你想想看，那些小小的植物组织，就像是一个个小生命等待着被唤醒和滋养。

要配制出适合它们生长的培养基，就像是给它们打造一个温馨舒适的家。

首先，咱得准备好各种材料。

就好比建房子得有砖头、水泥一样，培养基也需要各种“建筑材料”。

什么大量元素啦、微量元素啦、有机成分啦等等。

这些东西就像是房子的根基和框架，可不能马虎。

然后呢，把这些材料按照一定的比例混合起来。

这就像是做菜，调料放多了或少了味道可就不对啦！得精确地称量，小心翼翼地搅拌均匀，让它们完美融合。

接下来，调节酸碱度也是很关键的一步。

植物们也有自己喜欢的“居住环境”呢，太酸太碱可都不行。

就像咱人一样，喜欢不冷不热、舒舒服服的环境。

在这个过程中，可不能粗心大意哦！要是弄错了一点，那可能就会影响到植物组织的生长发育啦。

你说这像不像照顾一个小婴儿，得处处精心呵护呀。

再然后，把配好的培养基进行灭菌处理。

这就好比给家里来个彻底的大扫除，把那些有害的细菌、病毒啥的都消灭掉，给植物们一个干净、安全的生长空间。

等一切都准备好了，就可以把植物组织放进去啦。

看着它们在培养基里一点点生长、分化，那种感觉真的是太棒啦！就好像看着自己精心培育的花朵慢慢绽放一样。

哎呀呀，植物组织培养培养基的配制步骤虽然不复杂，但每一步都很重要呢！要是有一步没做好，可能就会前功尽弃呀。

所以啊，咱可得认真对待，就像对待自己最宝贝的东西一样。

总之呢，植物组织培养培养基的配制就是这么一回事儿，有趣又充满挑战。

只要咱用心去做，就一定能让那些小植物们茁壮成长，给我们带来惊喜呢！你说是不是呀？。

植物组织培养培养基及其配制

微量元素指小于0.5mmol/L的元素，Fe,B,Mn,-Zn、Cu,Mo,-Co等-铁是一些氧化酶、细胞素氧化酶、过氧化氢酶-等的组成成分；是叶绿素形成的必要条件。对胚-的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用-供物：鳌合铁FeSO4·7H,0+Na2一EDTA在-制做培养基时不用Fe2SO43,-和FeCl,因其在H值5.2以上，易形成FeOH田3的不溶性沉淀-B,Mn,Zn,Cu,Mo,Co等：也是植物组织培-养中不缺少的元素，缺少这些物质会导致生长、-发育异常现象
3K-作用：对碳水化合物合成、-转移、以及氮素代-谢等有密切关系。一般为1一3mg-/L为好-供应物质：K I、KNO,等盐类提供-4Mg、S和Ca-Mg是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；-S-是含S氨基酸和蛋质的组成成分。-Ca-是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂-保护质膜不受破坏有显著作用
二、培养基的成分-水、无机盐、有机物、天然复合物、-植物激素、培养体的支持材料、抗生素、-活性炭等。
一水-是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过-程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺-少的物质-配制培基母液时要用蒸馏水，以保持母液及-培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质-大规模生产时可用自来水。但在少研究上尽-量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。
肌醇yo-inosltol又叫环己六醇-作用：-能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽-的形成-对组织和细胞的殖、分化有促进作用。-对细胞壁的形成也有作用。-使用浓度：一般为1OOmg/L,
氨基酸almino acide是很好的有机氮源-可直接被细胞吸收利用-常用的氨基酸：甘氨酸，-其他的如精氨、谷-氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸-等也常用-水解乳蛋白或水解酪蛋白：它们是牛乳用酶法-等加工水解产物，是含有约20种氨基酸的混-合物，用量在10-1000mg/L之间。由于它们-营养丰富，极易引起污。如在培养中无特别-需要，以不用为宜

植物组培培养基及其配制

植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。

因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。

一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。

钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。

而钙、钠、镁的需要则较少。

培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。

微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。

培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。

2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。

因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。

培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。

蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。

3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。

培养基中的维生素属于B 族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。

4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。

最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。

另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。

5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。

如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。

(2)细胞分裂素。

如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。

(3)赤霉素。

组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。

二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。

植物组织培养基配制

培养基的配‎制植物组织培‎养中常用的‎一种培养基‎是MS培养‎基。

MS培养基‎的配制包括‎以下步骤。

培养基母液‎的配制和保‎存MS培养基‎含有近30‎种营养成分‎，为了避免每‎次配制培养‎基都要对这‎几十种成分‎进行称量，可将培养基‎中的各种成‎分，按原量的2‎0倍或20‎0倍分别称‎量，配成浓缩液‎，这种浓缩液‎叫做培养基‎母液。

这样每次使‎用时，取其总量的‎1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液‎。

现将制备培‎养基母液所‎需的各类物‎质的量列出‎，供配制时使‎用。

大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO‎333 000KNO3 38 000CaCl2‎·2H2O 8 800MgSO4‎·7H2O 7 400KH2PO‎4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3‎ 1 240MnSO4‎·4H2O 4 460ZnSO4‎·7H2O 1 720Na2Mo‎O4·2H2O 50CuSO4‎·5H2O 5CoCl2‎·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4‎·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇‎(维生素B6‎)100盐酸硫胺素‎(维生素B1‎)100甘氨酸400以上各种营‎养成分的用‎量，除了母液Ⅰ为20倍浓‎缩液外，其余的均为‎200倍浓‎缩液。

上述几种母‎液都要单独‎配成1 L的贮备液‎。

其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法‎是：每种母液中‎的几种成分‎称量完毕后‎，分别用少量‎的蒸馏水彻‎底溶解，然后再将它‎们混溶，最后定容到‎1 L。

母液Ⅲ的配制方法‎是：将称好的F‎e SO4·7H2O和‎N a2-EDTA·2H2O 分‎别放到45‎0 mL蒸馏水‎中，边加热边不‎断搅拌使它‎们溶解，然后将两种‎溶液混合，并将pH调‎至5.5，最后定容到‎1 L，保存在棕色‎玻璃瓶中。

植物组织培养实验指导

植物组织培养实验指导2012.3附录培养基母液的配制一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。

二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。

以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。

另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。

三、实验器具与药品：电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。

配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。

植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。

四、培养基母液的配制过程首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。

母液种类成分规定用量ml/L 扩大倍数称取量mg母液定容体积ml配1LMS培养基吸取量ml大量元素KNO3NH4NO3MgSO4·7H2OKH2PO4CaCl2·2H2O 190016503701704402038000330007400340088001000 50微量元素MnSO4·4H2OZnSO4·7H2OH3BO322.38.66.2 10002230086006200 1000 1KINa2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 0.830.250.0250.0258302502525铁盐Na-EDTAFeSO4·7H2O 37.327.8 10037302780 1000 10维生素和氨基酸烟酸甘氨酸Vit.B1Vit.B6肌醇0.52.00.10.51001002510052550001000 10（1）MS大量元素母液的配制按照MS培养基配方的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。