血清葡萄糖的测定知识讲解
血清葡萄糖测定方法
血清葡萄糖测定方法
血清葡萄糖测定方法是一种常用的检测血清葡萄糖的方法。
它可以检测血清中的水溶性葡萄糖的含量，从而可以反映机体的糖代谢情况。
血清葡萄糖测定方法有多种，其中最常用的是酶联免疫法（ELISA）和磷酸二氢钾滴定法（HK）。
2、酶联免疫法（ELISA）
酶联免疫法（ELISA）是一种常用的血清葡萄糖测定方法。
ELISA技术利用免疫反应原理，把糖尿病患者血清中的葡萄糖水解酶以抗原或抗体的形式结合起来，然后用抗体识别，经过可见性染料和酶的底物分解，用放大效应得到明显的反应信号，通过测量信号来确定葡萄糖的浓度。
ELISA对葡萄糖的检测灵敏度很高，但是分析时间比较长，且需要有特殊的仪器。
3、磷酸二氢钾滴定法（HK）
磷酸二氢钾滴定法（HK）是另一种检测血清葡萄糖浓度的常用方法。
它是一种血清中葡萄糖的滴定法，用40-50℃的磷酸二氢钾溶液作为比色剂，通过比色分析得到血清中的葡萄糖含量。
这种方法分析速度快，结果准确，但是需要较高的技术要求。
4、结论
血清葡萄糖测定方法是一种常用的检测血清葡萄糖的方法，它可以准确反映机体的糖代谢状况。
目前最常用的血清葡萄糖测定方法有酶联免疫法（ELISA）和磷酸二氢钾滴定法（HK），它们具有自己的优缺点，根据实际情况选择合适的方法。
血液葡萄糖的测定方法
血液葡萄糖的测定方法血液葡萄糖测定方法是用于检测人体血液中葡萄糖含量的一种方法。
葡萄糖是人体重要的能量供应来源，它在体内的浓度与机体的代谢状态密切相关。
因此，对于糖尿病患者来说，监测血液葡萄糖水平非常重要，有助于他们控制血糖水平，维持身体健康。
血液葡萄糖的测定方法有很多种，根据实际需求和方法的可行性，可以选择不同的方法进行测定。
以下将介绍几种常见的血液葡萄糖测定方法。
首先是基于试纸的葡萄糖测定方法。
这种方法常用于家庭血糖监测，便携式血糖仪就是基于试纸原理的。
使用这种方法，只需将试纸置于一滴血液上，试纸上的葡萄糖酶会与葡萄糖发生反应，产生氧化还原反应，导致试纸变色，通过比色板或仪器来判断血糖水平。
这种方法操作简便，但准确度相对较低，适用于一般家庭血糖监测。
其次是荧光法葡萄糖测定方法。
这种方法是基于葡萄糖氧化酶的反应原理，葡萄糖氧化酶与葡萄糖反应生成辅酶还原型，再与辅酶反应产生荧光染料，测量荧光强度来计算血糖浓度。
这种方法灵敏度高，准确度较高，但需要专业的仪器和技术支持，适用于实验室中血糖测定。
此外，还有电化学法葡萄糖测定方法。
这种方法是将血液样品置于电极上，通过电化学反应来测量葡萄糖浓度。
常用的电极有电化学氧化酶电极和谐振速度电极。
电化学法测定血糖准确度高，但仪器复杂，需要专业的操作技术和维护。
最后是光学法葡萄糖测定方法。
这种方法是利用光学仪器，通过检测葡萄糖溶液对特定波长光的吸收或散射来测定葡萄糖浓度。
光学法测定速度快，操作简便，适用于实时监测。
总之，血液葡萄糖测定方法多种多样，每种方法都有其适用的场景和特点。
在选择合适的测定方法时，需要根据实际需求，考虑准确性、操作便捷性以及成本等因素。
对于糖尿病患者来说，定期监测血液葡萄糖水平非常重要，可以根据医生的建议选择合适的测定方法，并保持良好的血糖控制，以维持健康的生活。
血清葡萄糖浓度的测定ppt课件
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计算公式
血清葡萄糖浓度 =
A 测定 A 标准
葡萄糖标准液 5 mmol/L
X 5 mmol/L
参考值：
空腹血清葡萄糖浓度：3.89 ~ 6.11 mmol/L
11
注意事项
• 1、葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不
能直接测定尿酸葡萄糖含量。（因为尿液中等等尿酸等干扰性物
质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，而造成结果假性偏低。）
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操作步骤
先取3支试管，然后按表格操作
试剂/mL 血清 葡萄糖标准液 蒸馏水 酶酚混合试剂
空白管 -----
0.020 3.00
标准管 ---
0.020 --3.00
测定管 0.020
----3.00
混匀，置于37℃水浴中，保温25min，在波长510nm处比色， 以空白管调零，读取标准管及测定管的吸管度
以脱氢酶作指示酶系统： （略）
实验原理
葡萄糖氧化酶（GOD）
葡萄糖
O2
H2O
葡萄糖 酸Байду номын сангаас
7
2 H2O2
过氧化物酶（POD）
红色醌类化合物
4-氨基安替比林
H2O2氧化色素原
苯酚
8
实验器材与试剂
器材： 5mL移液管，微量可调式移液器，721E分光光度计，37℃恒温水浴。
试剂： 1、0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0） 2、酶试剂 4℃保存 3、酚溶液 用棕色瓶贮存 4、酶酚混合试剂 酶试剂与酚溶液等量混合 5、苯甲酸钠溶液（12mmol/L） 6、葡萄糖标准储存液（100mmol/L） 7、葡萄糖标准工作液（5mmol/L）
• 2、血液样品需及时分离血细胞。（因为红细胞的酵解将导致测
血清葡萄糖的测定GODPOD法专家讲座
2. 因红细胞酵解将造成测定结果偏低，提议测定样品以草 酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。
3. 严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液， 然后在进行测定。
血清葡8萄糖的测定GODPOD法专家讲座
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临床意义
生理性高血糖：可见于摄入高糖食物后，或担心情绪肾上腺素分泌增加时。
生理性低血糖：见于饥饿和猛烈运动时
病理性低血糖：特发性功效性低血糖最多见，依次是药源性，肝源性和胰岛素瘤 等。
血清葡9萄糖的测定GODPOD法专家讲座
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血清葡萄糖测定（GOD-POD法）
血清葡萄糖血的测清定G测OD定POD是法专临家讲床座生物化学检验中常规检测项目之一。
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试验分为以下部分
• 试验目标 • 试验原理 • 试验试剂 • 试验操作 • 数据分析 • 注意事项 • 临床意义
血清葡2萄糖的测定GODPOD法专家讲座
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血清葡萄糖含量=
ⅹ5mmol/dL
参考值：3.89-6.11mmol/L
血清葡7萄糖的测定GODPOD法专家讲座
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注意事项
1. 葡萄糖氧化酶法可直接用于测定脑脊液葡萄糖含量，但 不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰 性物质浓度过高，可干扰氧化酶反应，造成结果假性偏 低。
生物化学：葡萄糖测定(酶法)
【临床意义】
3.生理性或暂时性低血糖 见于饥饿、剧烈运动、注射胰岛 素后、妊娠和服用降糖药后。 4.病理性低血糖 见于(1)胰岛β细胞增生瘤等，使胰岛素分 泌过多；(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能 减退，肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、 肾上腺皮质激素分泌减小；(3)严重肝病患者，由于肝脏储 存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
8
【注意事项】
1、注意准确的加入所需要的液体量。 2、注意胆红素、谷胱甘肽、尿酸和维生素C等一些还 原性物质将使结果受到干扰。
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【打扫卫生】
1、实验结束后对自己用过的试管、移液管等物 品进行清洗。 2、打扫桌面与地面卫生。 3、带齐本人物品，离开实验室。
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谢 谢！
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3
【操作步骤】
加入物 / ml 待测血清
测定管 （U）
0.02
标准管 (S) －
空白管 (B) －
葡萄糖标准液
－
0.02
－
蒸馏水
－
－
0.02
GOD-POD试剂 2.0
2.0
2.0
立即充分混匀，37C°水浴10分钟，用520nm波长比色，0.5CM 比色杯，以空白管调零，读取各管吸光度。
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AU AS
【计算】
血清葡萄糖（mmol/L）＝ Au Cs As
Au:测定管吸光度 As:标准管吸光度 Cs:标准管浓度
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【参考范围】
血清葡萄糖：3.89～6.11 mmol/L
6
【临床意义】
1.生理性高血糖 见于饭后1～2h，注射葡萄糖或摄入高糖 食物后、情绪紧张肾上腺素分泌增加时，但不应超过 10mmol/L。 2.病理性高血糖 见于(1)内分泌腺功能障碍能引起高血糖， 如胰腺β细胞损害导致胰岛素分泌缺乏，血糖可超过正常， 临床上称为糖尿病。其他内分泌疾病引起的各种对抗胰岛 素的激素分泌增加也会出现高血糖；(2)颅内压增高：颅内 压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等； (3)由于脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等可使血 糖轻度增高。
血清葡萄糖测定
血清葡萄糖测定1.实验原理在己糖激酶（HK）催化下，葡萄糖和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸（G6P）与ADP。
前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）催化下脱氢，生成6-磷酸葡萄糖酸（6PG），同时使NADP还原成NADPH。
NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比。
NADPH在波长340nm有吸收峰，可监测吸光度升高速率，计算血清中葡萄糖浓度。
2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。
迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。
随机收集尿样。
3. 标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。
加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。
血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。
尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。
脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。
6. 试验材料：6.1 欧泰克血糖测定试剂盒，罗氏复合定标液，罗氏质控品I、II。
6.1.1 试剂组成：磷酸缓冲液，PH7.6 100 mmol/L三磷酸腺苷（ATP） 4 mmol/L醋酸镁10 mmol/LNAD+ 3 mmol/L己糖激酶（HK）≥25 KU/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）≥75 KU/L6.1.2试剂准备：6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：避免试剂与皮肤及粘膜接触。
6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：日立7060全自动生化分析仪8. 操作步骤：8.1 项目基本参数：参见7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见7060生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
血清葡萄糖浓度的测定解析
实验步骤
B
S
T
工作液
1.00 mL 1.0 mL 1.0 mL
dH2O
10 uL
-
葡萄糖标准液
-
10 uL
血清
-
-
混匀， 37C， 15 mins
10 uL
dH2O
0.50 mL 0.50 mL 0.50 mL
混匀，以B管调零，在510nm波长处读取S管和T管的吸光度.
✓ 计算:
葡萄糖 (mmol/L) =
本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，为葡萄糖测定参考方法，但试剂较贵。
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)
葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧 化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧，并将无色的4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应)，其红色深 浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
Schiff碱 (青色)
葡萄糖在酸性条件下加热可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩 合成青色的Schiff碱。Schiff碱的颜色深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。 评价：操作简便，特异性较高。
A E1 B E2 C
（三）酶法
• 单酶反应法：A
B
– 直接测定底物的含量，由酶的变化量来测定底物量
• 酶偶联反应法：A
B
C
– 常以脱氢酶或者过氧化物酶作指示酶
1. 己糖激酶法 (Hexokinase, HK)
葡萄糖 + ATP HK 葡萄糖-6-磷酸 + ADP 葡萄糖-6-磷酸 + NADP+ 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 6-磷酸葡萄糖酸内酯 + NADPH
血清葡萄糖含量测定
试剂（mL） 空白管 1 2 3 4 5
H2O稀释 至刻度
6 测定管
葡萄糖稀释液
酶酚混合试剂
水0.2
3.0
0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 血清0.2
3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 15 min, 空白管液体调零， 505 nm处测定各管的吸光度
2、绘制标准曲线
葡萄糖标准曲线
A 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
2
4
6
8
10 12 葡萄糖浓度 （ ）
未知葡萄糖含量
722光电比色计使用
1.调波长
2.放入液体
3. 模式 “透射比”，开盖，调“0%”
4.将对照管对准光路， 关盖，调“100%” 5.将“模式”选定为“吸光度”，拉动拉杆依次读各 管吸光度，并记录。
血清葡萄糖含量测定
原理 葡萄糖 2H2O2 (葡萄糖氧化酶法)
葡萄糖氧化酶
葡萄糖酸 ＋ H2O2 2H2O ＋ O2 醌类（红色）
过氧化氢酶
O2 ＋ 4-氨基安替比林 ＋ 苯酚
正常血清葡萄糖含量：3.89～6.11 mmol/L。
1.标准曲线的绘制及待测血清样品测定
1ml 2ml 4ml 6ml 8ml标准葡萄糖 5个容量瓶 8支试管
血液中葡萄糖含量的测定
血液中葡萄糖的测定（邻甲苯胺法）一目的掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法。
二原理血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺（Schiff碱）。
血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。
将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在630nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。
邻甲苯胺法测得正常空腹血糖值为3.9～6.11mmol / L (即100ml血清中葡萄糖的正常值为70～100mg)。
邻甲苯胺法对葡萄糖特异性高，测定结果为真糖值，为临床上常用的血糖测定方法。
此方法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质。
由于血液葡萄糖在进食后明显升高，所以必须采取空腹血做血液葡萄糖测定，血细胞糖酵解作用会降低血液葡萄糖浓度，所以血液抽出后应及时测定，或用含氟化钠的抗凝剂抑制糖酵解，可稳定24小时。
三操作1.采得待测血样（抗凝）后立即离心以分离血浆（3,000转离心15分钟）。
2.取干燥试管4支，分别标出号码，按下表添加试剂。
3.混匀各管内容物置沸水浴中加热15分钟后取出用流水冷却。
4.以空白管调零，读取各管630nm处吸光度值。
5.计算血糖mmol/L = 测定管吸光值× 5标准管吸光值四实验器材与试剂分光光度计、沸水浴、试管、移液管、电炉、烧杯、洗耳球、试管夹。
邻甲苯胺试剂：称取硫脲(AR)级1.5g，溶于940ml冰醋酸(AR级)中，加邻甲苯胺60ml。
置棕色瓶中至少可用两个月。
此试剂腐蚀性极强，应避免接触皮肤。
12 mmol/L苯甲酸溶液：900ml蒸馏水中加入1.4g苯甲酸，加热助溶，冷却后定容到1L。
葡萄糖标准储存液（100 mmol / L）：称取无水葡萄糖（烘箱80烘干至恒重，干燥器中保存）1.802g，溶于80ml苯甲酸溶液中，再定容到100ml。
葡萄糖标准应用液（5 mmol / L）：取标准储存液5ml，加苯甲酸溶液至100ml。
血清葡萄糖测定
建议：临床实验室推荐以氟化钠抗凝血浆为标本测定血糖浓 度。
2.采集时间、部位 可取空腹血，餐后2小时血，或随机血，但意义不同。 对于住院病人尤其要注意采集部位。
3.标本处理 静脉血+2mg/ml草酸钾（EDTA或肝素）（抗凝） +2-5mg氟化钠/ml血（阻止糖酵解） 新鲜采集的全血室温下最初酵解 7% ，以后的酵解则减慢， 有白细胞增多或细菌时酵解增加。 分离出的血清，25℃下稳定8小时，4℃下稳定72小时。 建议：无防腐剂的全血必须在 1小时内分离出血清或血浆， 并及时测定。
2.邻甲苯胺法（O-T法）
原理：Glu + O-T Δ 缩合、脱水 化合物（630nm） 评价 Schiff碱 蓝绿色
1.此法受煮沸时间、比色时间、试剂存放时间等因素的影 响。一般不宜以校正曲线法进行计算，故每次应同时作标 准管。
2.邻甲苯胺在冰醋酸中并不十分稳定，易氧化产生棕色物 质而干扰比色，故在邻甲苯胺试剂中加入硫脲，使试剂有 抗氧化作用，减少棕色干扰，增加试剂的稳定性，降低空 白管的吸光度，并有一定的增色效应。 3.试剂腐蚀性大，邻甲苯胺被怀疑有致癌性。
·
糖是人体的主要能源,也是构成机体结构的重要组成成份。 体内的糖是在有关激素的调节下,维持与机体适应的代谢平 衡,血糖是反映体内糖代谢状况的常用指标。 临床上常见的糖代谢紊乱主要是血糖浓度过高和过低。
二、血糖的测定
（一）标本的采集及处理 1.标本类型： 全血Glu<血浆Glu 静脉Glu<动脉Glu 毛细血管Glu=静脉Glu（空腹），进食后则不一致 毛细血管Glu>静脉Glu（进食后）
操作步骤
加入物(ml) 血清 葡萄糖标准液 蒸馏水 空白管 0.02 标准管 0.02 测定管 0.02 -
血清中葡萄糖浓度
葡萄糖+O2+H2O
GOD
葡萄糖酸+2H2O2
2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚 POD 红色醌类化合物
操作步骤： 操作步骤：
取三只试管按表操作
项目 血清（ml） 葡萄糖标准液 （ml） 蒸馏水（ml） 酶-酚混合试剂 （ml） 空白管 —— —— 标准管 —— 0.020 测定管 0.020 ——
实验目的：
① 掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理。 ② 掌握血糖变化的临床生理意义
实验原理：
血清葡萄糖是用以过氧化物酶作指示酶的偶联酶反应 偶联酶反应定 偶联酶反应 量法测定的。 葡萄糖氧化酶利用氧将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，同时释 放出过氧化氢。过氧化物酶催化过氧化氢氧化色素原， 并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。
① 葡萄糖氧化酶对β-D-葡萄糖高度特异，葡萄糖 的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。 ② 此法可直接测定脑脊液葡萄糖的含量，但不能 直接用于测定尿液葡萄糖含量。 ③ 因红细胞的酵解将导致测定结果偏低，建议测 定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂抑制葡萄糖酵 解。 ④ 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先之辈无蛋白 血滤液，然后再进行测定。
临床意义： 临床意义：
1. 生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张 2. 病理性高血糖：
①糖尿病 ②内分泌腺功能障碍 ③颅内压增高 ④脱水引起高血糖
1.
2. 生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动 3. 病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源
性，肝源性和胰岛素瘤等。
思考题： 思考题：
a) 标准葡萄糖储存液与应用液中都含有苯甲酸钠， 苯甲酸钠起什么作用？ b) 列举几种血清葡萄糖定量测定的方法和原理。 c) 本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂 终止酶的反应？ d) 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸 酶活力测定中的显色反应有何异同？ e) 本实验在设计上存在缺陷，请指出。
血清葡萄糖(GLU)测定—GOD-POD(精)
正常参考范围:3.9~6.1mmol/L
注意事项
-葡萄糖有ɑ型和ß型之分，在溶液中可互相转 变。新配制的葡萄糖标准液须放置2小时以上 （最好过夜），使两者在溶液中达到平衡。
COD-POD 法初始反应特异性高，而指示反 应特异性较差，干扰往往发生在指示反应。血 液中的一些还原性物质，如维生素C、谷胱甘 肽及左旋多巴可与色原性氧受体竞争H2O2， 使结果出现偏差。
临床意义
血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定，当这些调节失去原有的 相对平衡时，则出现高血糖和低血糖。
高血糖： 1.生理性高血糖：见于饭后1~2h；注射葡萄糖后；情绪紧张时分泌肾上腺
素增加或注射肾上腺素后等。 2.病理性高血糖： ①内分泌功能障碍：如糖尿病等 ②颅内压增加刺激血糖中枢而使血糖升高，如颅外伤，颅内出血等。 ③严重脱水：引起血液浓缩而导致血糖升高，如呕吐、腹泻、高热等。 血糖降低.： 1.生理性的低血糖：有饥饿、剧烈运动等。 2.病理性的低血糖： 胰岛素分泌过多：如胰岛β细胞增生或肿瘤。 对抗胰岛素的激素分泌不足：如垂体前叶、肾上腺皮质和甲状腺功能减退等。 血糖来源减少：如长期营养不良，严重的肝病等。
血清葡萄糖（ＧＬＵ）测定—GOD-POD法
实验目的：
⒈掌握GOD-POD法测定血糖的原理及注意事 项。
⒉熟练进行实验操作并能够正确使用加样枪 ⒊了解血糖测定的主要临床意义。
实验原理：
ＧＯＤ催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过 氧化氢，过氧化氢被偶联的ＰＯＤ催化释放出 初生态氧，后者将色原性氧受体４-氨基安替 比林偶联的酚氧化，并与4-氨基安替比林结合 生成红色醌类化合物。
操作步骤：
1、配制酶工作液：
2、按下表操作：
实验一 血清葡萄糖的测定(精美课件)
4.当静脉空腹血糖介于6.1～7.0mmol／L之间，且OGTT 2小时血糖≤7.8mmol／L，说明 人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力尚好，但对空腹血糖调节能力轻度减退，可以诊断空腹
希夫氏碱 分子重排 蓝绿色化合物
（三）酶法
1.己糖激酶法（HK）
2.葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）
3.实验原理
葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法） 葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖氧化为葡萄糖酸酶，同时释放过氧化氢。
葡萄糖+O2+H2O
GOD
葡萄糖酸+2H2O2
过氧化氢酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和 苯酚），并使色素原氧化成红色醌类化合物，即Trinder反应。 2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚 POD 红色醌类化合物
②如空腹血糖大于6.1mmol/L，低于7.0mmol/L，可根据病情需要做葡
萄糖耐量试验或餐后2h血糖测定，以进一步了解病人糖耐量状况，明
确诊断。
案例分析
2.某患者女，55岁，身高158cm，体重68kg，用血糖仪数次自行测空 腹末稍全血血糖大于6.8mmol/L。近日感易疲乏，口渴，夜尿增多，并 出现胸闷、气短、视物不清、肢体麻木等症状。本次检查标本符合空腹 采血要求，测得其空腹血糖为。请问该患者是否可诊断为糖尿病？还需 做哪些检查？
4.实验器材和试剂
（二）试剂 1. 苯甲酸钠溶液（12mmol/L） 2. 酶酚混合试剂 酶试剂+酚溶液 1:1 3. 葡萄糖标准工作液（5mmol/L） 4、葡萄糖测定试剂盒：酶酚混合试剂（已配制）、葡萄糖标准液应用 液、蒸馏水。
七、血清葡萄糖的测定
空白管 (B)
— — 0.03 3.00
各管充分混匀置37℃水浴15分钟后，室温冷却测定
3. 分光光度计测定方法：波长510nm，以空白管调零，测定 标准管和样品管吸光度值，按公式计算测定结果。
4. 加血清0.2ml于上机试管中并标记，上机检测
三、计算
C样
A样 A标
C标
C标=5.5mmol/L
样品：血清
试剂：葡萄糖测定试剂盒（长春汇力）
R1：磷酸盐缓冲液pH7.4，苯酚，4-氨基安替比林 R2：葡萄糖氧化酶、过氧化物酶 标准液：葡萄糖 5.5mmol/L
加样
）
0.03
标 准液（ml）
—
反 渗水（ml）
—
工作试剂（ml）
3.00
标准管(S)
— 0.03 — 3.00
⑸严重的肝硬化使葡萄糖不能转化为肝糖原储存； ⑹胰腺病变。
3、生理性或暂时性低血糖：饥饿和剧烈运动。 4、病理性低血糖：胰岛β细胞增生或肿瘤引起的胰岛素分 泌过多；对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体、肾上腺皮质 或甲状腺机能减退而使生长素、肾上腺素分泌减少；严重肝 病使肝的生糖作用降低或肝糖原储存缺乏，肝脏不能有效地 调节血糖。
七、注意事项
1、样品为空腹血清、血浆； 2、制备血清时防止红细胞溶血； 3、样品应在低温条件下运输保存； 4、试剂使用后立即盖紧瓶盖，避免污染，R2若呈红 色，则说明试剂变质，应更换R2重做。
四、参考值
3.9~ 6.1mmol/L
五、临床意义
1、生理性或暂时性高血糖：餐后1~2h 、摄入高糖饮食、 情绪激动等。
2、病理性高血糖： ⑴糖尿病 ⑵其它内分泌系统的疾病：垂体前叶功能亢进（巨人症、 肢端肥大症）、肾上腺皮质功能亢进（库欣病）、甲状 腺功能亢进、嗜鉻细胞瘤等； ⑶应急性高血糖：如颅脑损伤、 颅内高压、脑卒中等； ⑷脱水引起的血液浓缩，如呕吐、腹泻、高热；
用GOD法测定血清中葡萄糖浓度
参考值： 空腹血清葡萄糖浓度:3.89～6.11mmol／L
注意事项：
① ②
③
本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂 中，再吸试剂反复冲洗试管。 此法可直接测定脑脊液葡萄糖的含量，但不能 直接用于测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿 酸等干扰物质浓度过高，可感染过氧化物酶发 硬，造成结果假性偏低。 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白 血滤液，然后再进行测定。
临床意义：
生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张 病理性高血糖：
①糖尿病 ③颅内压增高 ②内分泌腺功能障碍 ④脱水引起高血糖
生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动 病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，
肝源性和胰岛素瘤等。 调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮 质激素和肾上腺素。
思考题：
实验九
葡萄糖氧化酶法 测定血清葡萄糖
一、实验目的
(1)了解血糖的概念。 (2) 掌握血糖的测定方法——葡萄糖氧化酶法。
What？
血糖及正常血糖水平:
血糖：指血液中的葡萄糖.
正常血糖浓度：
空腹波动在3.89～6.7mmol/L（70～110mg/dl）
餐后2h内应≤7.8mmol/L（≤140mg/dl）。
血糖的来源、去路
血糖水平恒定的生理意义
保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以 葡萄糖供能的组织器官。 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡 萄糖供能； 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； 骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供 能。
血糖测定的常用方法
无机化学法： Folin-Wu法
定某种物质的方法。
偶联酶反应定量法：当单酶反应底物或产物反
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1.相关临床知识
OGTT操作步骤
1）.
试验前3天内，每日碳水化合物摄入量不少于150g。
2）. 空腹取血后，5分钟内口服溶于250~300ml水内的75g 无水葡萄糖粉的糖水，妊娠妇女用量为100g，儿童按1.75g/kg体重给
予，不超过75g.
3）. 服糖后半小时、1小时、2小时、3小时分别在前臂采血测血糖, 采血同时，每隔1小时取尿液作尿糖试验。试验过程中，受试者不喝茶
及咖啡，不吸烟，不做剧烈运动
4）. OGTT 2小时后血糖≥11.1mmol／L可以确诊糖尿病
1.相关临床知识
OGTT诊断
1.当静脉空腹血糖＜6.1mmol／L，OGTT 2小时血糖＜7.8mmol／L，说明人体对进食葡萄糖 后的血糖调节能力正常。
3.生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动时。
4.病理性低血糖 特发性功能性低血糖最多见，其次是药源性，肝源性和胰岛素 瘤等。
注意事项
1.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液 葡萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等干扰性物质浓度过高，可干扰过 氧化氢酶反应，而造成假性偏低。
2.对于血液样品需及时分离血细胞。因红细胞的酵解将导致测定结果偏低。 建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。
实验九
血清葡萄糖浓度的测 定
（GOD-POD法）
CONTENT S
1 相关临床知识 2 实验目的 3 实验原理 4 实验器材与试剂 5 实验操作
1.相关临床知识
血液中的葡萄糖称为血糖。
1.相关临床知识
餐后两小时 11.1mmol/L≦
糖尿病
7.0mmol/L≦
空腹
空腹血糖
3.9-6.1 mmol/L
3.严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。
THANKS
葡萄糖+O2+H2O
GOD
葡萄糖酸+2H2O2
过氧化氢酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和 苯酚），并使色素原氧化成红色醌类化合物，即Trinder反应。 2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚 POD 红色醌类化合物
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
4.实验器材和试剂
4.当静脉空腹血糖介于6.1～7.0mmol／L之间，且OGTT 2小时血糖≤7.8mmol／L，说明 人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力尚好，但对空腹血糖调节能力轻度减退，可以诊断空腹
血糖受损。
2.实验目的
1.掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理 2.掌握血糖变化的临床意义
3.实验原理
血糖测定的方法有哪些？
临床意义
1.生理性高血糖 可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。
2.病理性高血糖 ① 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 ② 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进，引
起各自对抗胰岛素的激素分泌过多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖 现已归入特异性糖尿病中。 ① 颅内压增高：可刺激血糖中枢，如脑膜炎，颅外伤，颅内出血等，引起血糖增高。 ② 脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
酶酚混合液
Hale Waihona Puke 空白管（B） -0.020 3.00
标准管（S） -
0.020 -
3.00
测定管（T） 0.020 3.00
混匀，置37℃水浴中，保暖25min,在波长510nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测 定管的吸光度。
计算公式
血清葡萄糖浓度=
A测定 A标准
×5mmol/L
参考值 空腹血清葡萄糖浓度：3.89~6.11mmol/L
(一）器材
5ml移液管，微量可调式移液管， 721E分光计，37℃恒温水浴
（二）试剂
防止氧化，葡萄糖为单糖,含醛基,易氧化成羧基
1. 苯甲酸钠溶液（12mmol/L）
2. 酶酚混合试剂 酶试剂+酚溶液 1:1
3. 葡萄糖标准工作液（5mmol/L）
5.实验操作
取试管3支，按表操作
试剂/ml 血清
葡萄糖标准液 蒸馏水
（一）无机化学法：Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的还原性
OH-
Cu2+
Cu+
磷钼酸
显色
特异性差
Glu
（二）有机化学法：邻甲笨胺法，联笨胺法等
邻甲笨胺 + Glu
缩合
脱水
葡萄糖基胺
希夫氏碱 分子重排 蓝绿色化合物
（三）酶法
1.己糖激酶法（HK）
2.葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）
3.实验原理
葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法） 葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖氧化为葡萄糖酸酶，同时释放过氧化氢。
2.当静脉空腹血糖≥7.0mmol／L或OGTT 2小时血糖≥11.1mmol／L，说明人体处理进食后 葡萄糖的能力明显降低，可以确诊糖尿病。
3.当静脉空腹血糖＜7.0mmol／L，并且OGTT 2小时血糖介于7.8～11.1mmol／L之间， 说明人体对葡萄糖的调节能力轻度下降，可以诊断糖耐量减低。
尿病
原因：自身能产生胰岛素， 但细胞无法对其做出反应。
易发病人群：中老年人， 肥胖者
治疗：需要胰岛素单独或 与口服药联合应用的治疗
有些患者血糖含量并不稳定，有什么办法进一步更准确诊断？
1.相关临床知识
口服葡萄糖耐量试验（OGTT）
概念：是一种葡萄糖负荷试验，用 以了解胰岛β细胞功能和机体对血 糖的调节能力，是诊断糖尿病的确 诊试验
正常餐后两小时 3.9-7.8mmol/L
1.相关临床知识
I 型糖尿病（T1DM） 别名：青年发病型糖尿
病
或胰岛素依赖性糖尿病。
原因：胰腺产生胰岛素 的细胞已经彻底损坏。
易发病人群：年龄轻， 大多<30岁
治疗：依赖胰岛素治疗
胰岛B 细胞
胰岛素
靶细 胞
II 型糖尿病（T2DM） 别名：非胰岛素依赖型糖