小鼠发情周期观察与最佳超排时期的确定
自然发情和超排小鼠有腔卵泡发育的 动态模式比较 张利生 牛树理
自然发情和超排小鼠有腔卵泡发育的动态模式比较张利生 牛树理3(南京农业大学动物科技学院,南京210095)摘要:对自然发情和超排处理发情小白鼠的有腔卵泡进行观察,超排鼠于hCG 注射后不同时间取卵巢作切片,结果发现,自然发情和超排小鼠的卵泡进入有腔卵泡阶段(直径≥265μm )是一个连续的过程,但无论是卵泡被招募(recruit 2ment )(卵泡直径≥265μm )还是由小一级有腔卵泡进入大一级有腔卵泡,其转入的速度并不是恒定的;和自然发情相比,超排可促进卵泡的招募,使招募后的卵泡闭锁大大减少,但招募的数量未见增多。
关键词:小鼠;有腔卵泡;发育;动态模式;超数排卵中图分类号:Q49215 文献标识码:A 文章编号:1000Ο2030(2001)03Ο0053Ο04Comparison in dynamic patterns of ovarian antral folliclesbetw een natural and superovulated estrous ratsZhang Lisheng and Niu Shuli 3(C ollege of Animal Science and T echnology ,Nanjing Agric Univ ,Nanjing 210095,China )Abstract :Antral follicles were counted in ovaries from both natural and superovulated estrous y oung adult K M white rats.The ovaries of the superovulated estrous rats were collected after the injection of hCG at different time.The result indicated that the in flow of the follicles of both the natural rats and the superovulated estrous rats were continuous but not constant.As compared with natural estrous ,superovula 2tion could prom ote recruitment and reduce atresia.H owever there is no significant difference in the recruitment number between natural and superovulated estrous rats.K ey w ords :rat ;antral follicle ;development ;dynamic pattern ;superovulation成年哺乳动物的卵巢上有数以万计的卵子,但是这些卵子并未得到充分的利用,原因之一是其随着动物年龄的增长,褪化闭锁了。
小鼠饲养常见问题问答
小鼠饲养常见问题问答1. 小鼠的特点小鼠性情温顺，胆小易惊，易于捕捉，夜间比较活跃，尤其是傍晚时更为活跃，其进食、交配、分娩多发生在夜间。
喜欢群居于光线较暗的环境，多只一笼饲养时生长发育较单只饲养时快。
对外来刺激敏感，如强光、噪音，不同气味等刺激，可引发“吃仔”现象。
雄性好斗，性成熟的雄鼠放在一起时，易发生互斗并咬伤，但同窝雄性鼠离乳时放在同笼内，可避免互斗。
雄鼠分泌醋酸铵臭气，是引起室内恃异臭气的主要原因。
小鼠是啮齿动物，门齿终生生长，因此小鼠有啃咬习惯，以此来磨损门齿并保持其长短的恒定。
小鼠不耐饥饿，不耐热，对环境适应性差，对疾病抵抗力低。
实验小鼠自发肿瘤多。
白化小鼠怕强光。
2.小鼠的生殖生理小鼠发育速度较快，一般在14-20g之间可供进行动物实验。
但做种子的小鼠必须根据动物的生物学特性及育种要求进行选种。
小鼠性成熟早（雄鼠36日龄时，可在附睾精液中找到运动活泼的精子，雌鼠37日龄即可发情排卵），性成熟一般在36-42日龄，小鼠具有明显的性周期，性周期为 4-5天，雄性小鼠的体成熟为70-80日龄，雌性小鼠为65-75日龄。
因此，小鼠开始繁殖的适宜日龄在 65-90日之间。
小鼠一年四季均有性活动，分娩后24小时内又可受孕。
雌鼠的性活动一般可分为发情前期、发情期、发情后期和发情休息期，性周期各阶段的特征，可用阴道分泌物涂片和组织学检查加以区分。
雌鼠的这些变化，受卵巢机能所控制。
卵巢能分泌两类激素，一类是由卵巢上皮细胞分泌的雌激素；一类是由黄体细胞分泌的孕激素。
雌激素能促进子宫、输卵管的发育，促进副性征的出现和乳腺导管的发育，诱导动情，孕激素是黄体激素，在整个妊娠期中，都需要黄体的存在，其主要功能是保护受精卵的附植及维护妊娠，并促进乳腺的发育，它是子宫维持正常机能的主激素。
3.如何操作小鼠绝大多数品系的小鼠经过长期的驯养和人为的挑选，性格都是很温驯的，除了被受到攻击以外都不会咬人。
小鼠实验的操作过程中，要平稳快速，如果在操作中发现小鼠变的焦躁不安，此时应停止对小鼠的动作而等其平静下来后再重新开始操作小鼠。
不同交配时间对小鼠胚胎收集和发育的影响
不同交配时间对小鼠胚胎收集和发育的影响田静;赵刚;钟刚毅;郭建鑫;谢鑫;崔继红;杨艳红;李立文;陈富林;严兴荣【摘要】【目的】探索不同交配时间对小鼠胚胎收集和胚胎发育的影响,为小鼠的超排研究提供参考。
【方法】对小鼠进行超数排卵,分别于注射人绒毛膜促性腺激素（hCG）后9,10,11,12,13,14和15h,在输卵管膨大部收集卵母细胞,研究排卵情况;将超排雌鼠与雄鼠合笼,分别于合笼后2,4,6,8,10和12h观察小鼠是否见阴道栓,研究小鼠交配时间;为了控制小鼠的交配时间,将超排雌鼠分别于注射hCG后0,2,4,6,8,10,12,14,16和18h与雄鼠合笼,每个时间点合笼后2h观察交配情况,于注射hCG后98h从子宫角收集囊胚,统计胚胎收集率,观察胚胎发育情况。
【结果】小鼠排卵主要集中于注射hCG后12～14h,交配时间主要在注射hCG后的前6h。
人为控制交配时间发现,注射hCG后4,6,8,10和12h的交配率均较高,较高的胚胎收集率出现在注射hCG后8,10和12h;囊胚发育率在注射hCG后4h（56.0%）和8h（54.5%）较高;扩张囊胚发育率在注射hCG后12h（68.2%）和16h （58.0%）显著高于其他时间点（P〈0.05）。
【结论】交配时间影响小鼠交配成功率、胚胎收集率和胚胎发育;超数排卵后12h交配可提高小鼠的胚胎收集率和胚胎发育率。
%【Objective】 The effect of different mating time on mice embryonic collection and embryonic development by controlling mating time was investigated.【Method】 Ovulation was ensured by observing oocyte in oviduct at 9,10,11,12,13,14,15 h after injecting hCG.To observe the mating time,vaginal plug was recorded at 2,4,6,8,10,12 h after matingof superovulated female with male.To control the mating time,the female was caged with male mice at 0,2,4,6,8,10,12,14,16,18 h after injecting hCG.The mated mice were recorded at 2 h after caging,respectively.Theembryo was collected in uterus at 98 h after injecting hCG.The collecting and development rate of embryo were recorded.【Result】 In nature,the ovulation occurred at 12-14 h after injecting hCG.The mating rate was mainly concentrated at first 6 h after caging.In control of matingtime,mating rate was higher at 4,6,8,10,12 h after injecting hCG.The success of collecting embryo was higher at 8,10,12 h.Formation rate of blastocyst was higher at 4 h（56.0%） and 8 h（54.5%）;Development rate of expanded blastocyst was higher at 12 h（68.2%） and 16 h（58.0%）,respectively,which were significantly more than other points（P 〈0.05）.【Conclusion】 The mating rate,collection and development of embryo was improved by controlling the mating time,and the rates of embryonic collection and development were improved by mating at 12 h after superovulating.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(040)007【总页数】5页(P21-24,31)【关键词】小鼠;超数排卵;交配时间;胚胎收集;胚胎发育【作者】田静;赵刚;钟刚毅;郭建鑫;谢鑫;崔继红;杨艳红;李立文;陈富林;严兴荣【作者单位】西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;第四军医大学唐都医院妇产科,陕西西安710038;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069;西北大学生命科学学院,陕西西安710069【正文语种】中文【中图分类】Q954.4实验动物为人类健康研究贡献了生命，合理而高效地控制与调整实验动物的繁殖周期与交配行为[1-2]，对减少实验动物无序繁殖而实现有计划生产和按时供给具有重要意义。
C57BL／6小鼠繁殖性能的观察与研究
C57BL／6小鼠繁殖性能的观察与研究C57BL/6小鼠是一种常用的实验动物模型，广泛应用于多个领域的研究。
研究C57BL/6小鼠的繁殖性能对于了解其繁殖特性、优化实验设计以及提高实验数据的可靠性都具有重要意义。
本文将从配种、妊娠和产仔等方面对C57BL/6小鼠的繁殖性能进行观察与研究。
首先，对C57BL/6小鼠的配种性能进行观察和研究。
正常情况下，C57BL/6小鼠雄鼠的性成熟期在6-8周龄，雌鼠的性成熟期在8-10周龄。
在实验过程中，可以通过观察雄鼠的精液排出情况以及雌鼠的阴道闭锁情况来判断其性成熟情况。
通常情况下，C57BL/6小鼠的配种率较高，可以达到90%以上。
但是，也需要注意一些可能影响配种的因素，如异常的生理状态、缺乏足够的性行为活跃性等。
此外，需要避免连续配种造成的疲劳导致的交配率下降。
其次，对C57BL/6小鼠妊娠过程进行观察和研究。
一般来说，C57BL/6小鼠的妊娠期为19-21天，平均妊娠期为20天。
妊娠的早期可以通过观察雌鼠的体重增加和腹围增大来判断。
在妊娠晚期，雌鼠体内的血液中孕激素的水平会升高，可以通过血液或尿液的检测来确定妊娠情况。
同时，需要控制适当的环境温度和湿度，提供足够的饮水和营养物质，以保证雌鼠的健康和胎儿的正常发育。
最后，对C57BL/6小鼠的产仔情况进行观察和研究。
正常情况下，C57BL/6小鼠的雌鼠一胎产仔数一般为6-8只，最多可达12只。
产仔时需要保持较为安静的环境，以免引起雌鼠的紧张和恐惧情绪。
产仔后，需要及时清理产仔箱，为母鼠提供适当的食物和饮水，以提供良好的哺乳条件。
同时，需要对幼仔的存活率进行观察和记录，对于异常或畸形的幼仔及时处理，以保证健康的后代。
综上所述，对C57BL/6小鼠繁殖性能进行观察和研究对于优化实验设计、提高实验数据的可靠性以及了解其繁殖特性具有重要意义。
通过对配种、妊娠和产仔等方面进行观察和研究，可以为进一步深入开展相关研究提供可靠的数据基础。
确定小鼠动情周期的三种方法
第２４卷第３期２００７年６月实验动物科学ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＡＮＩＭＡＬＳＣＩＥＮＣＥＶ０１．２４Ｎｏ．３Ｊｕｎｅ２００７确定小鼠动情周期的三种方法李靖１李炫诚２吴云霞２。
（１．武警湖北总队医院急诊科，武汉４３００６０）（２．华中科技大学同济医学院药学院，武汉４３００３０）摘要：目的为选择确定小鼠动情期的最准确和方便的方法，取成熟雌性昆明小鼠，每日晨取阴道脱落细胞及宫颈黏液做涂片，置显微镜下观察，分别用宫颈黏液结晶法、阴道脱落细胞学检查法、阴道脱落角化细胞计数法三种不同方法来确定小鼠动情期。
结果显示：三种方法均可以确定小鼠动情期，但三种方法比较，宫颈黏液结晶法特异性差；阴道脱落细胞学方法较为准确，但有假阴性现象；角化细胞计数法直观方便，结果最为客观准确。
关键词：动情周期；宫颈黏液；阴道脱落细胞中图分类号：Ｑ９５．３３文献标识码：Ｂ文章编号：１００６—６１７９｛２００７）０３．００６３．０２雌性小鼠性成熟后，生殖器官发生增生、退化的周期性变化为动情周期。
一般分为四期：动情前期、动情期、动情后期和动情间期。
动情期是性欲冲动和接受交配的时间，本期末雌鼠排卵，此期间卵泡迅速生长，雌激素分泌达高峰，阴道涂片表现多数的多角形无核角化上皮细胞，宫颈黏液结晶可见典型羊齿状。
妇科、产科和计划生育等很多医学科学研究中，常需要准确确定实验动物的动情期以决定是否合笼，在动物体外受精中需要准确确定动情期以确保获得成熟卵子以利于受精。
据文献记录，动情期的确定方法有多种，主要有宫颈黏液结晶观察法和阴道脱落细胞学检查方法¨ｑ。
能否准确确定动情期直接影响到实验进程和实验结果的精确度和可靠性。
本文对确定动情周期的三种方法做了比较研究，旨在建立准确、简单而可靠的方法以供推广应用。
消毒棉签、注射器、９５％乙醇、医用生理盐水、苦味酸、苏木素一伊红（Ｈａｅｍａｔｏｘｙｌｉｎｅｏｓｉｎ，ＨＥ）染色试剂购自北京中山公司。
１．３主要仪器显微镜（ＯＬＹＭＰＵＳＣＨＫ，Ｊａｐａｎ），数码相机（ＬＥＩＣＡ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。
小鼠发情期卵泡发育动态影响
⼩⿏发情期卵泡发育动态影响2019-06-10⼩⿏因其繁殖率⾼、繁殖周期短等特点被常⽤于⽣物医学研究,尤其是胚胎⽣物学和胚胎⼯程研究(Brookeetal,2007;Dingetal,2007;Martín-Coelloetal,2008)。
超数排卵技术作为在同⼀时间段获得⾜够数量卵母细胞或胚胎的主要⼿段之⼀,是开展胚胎⽣物学和胚胎⼯程研究的基础(Chenetal,1991;Heetal,1999,2005)。
⼩⿏超排效果除受⼩⿏⽇龄和超排激素剂量影响之外(Cuietal,2012;Yang,2007),主要受超排注射促性腺激素时⼩⿏所处发情周期阶段的影响,但国内外对于⼩⿏超排的适合发情周期阶段所获得的研究结果并不⼀致，如Fuetal(2005)研究表明,发情前期ICR⼩⿏超排后,其见栓率、平均可⽤胚胎数均⾼于其他发情周期阶段的⼩⿏;Guoetal(2006)对昆⽩系⼩⿏的超排后,结论为在⼩⿏发情前期的初期和间情期后期超排效果较好且两者差异不显著;⽽Redianetal(1994)和Tarínetal(2002)在不同品系⼩⿏的超排中则证明,发情期超排⼩⿏效果最好,发情后期和间情期超排效果较差。
由于处于发情周期不同阶段的⼩⿏,其卵泡发育情况及体内激素分泌存在差异(Palermo,2007),根据⼩⿏发情周期的卵泡发育规律和⽣殖内分泌变化,可将⼩⿏发情周期分为发情前期、发情期、发情后期和间情期(Redianetal,1994),其外部表现为阴门状态的周期性变化(Nagyetal,2002)。
在⼩⿏超排研究中⼀般根据⼩⿏阴门状态的周期性变化对发情周期阶段进⾏判断,但由于⼩⿏的品系或个体差异,其发情周期各阶段长短、阴门状态变化存在差别,导致对其阴门状态的观察结果有所差异。
上述研究结果的差别,除了所⽤促性腺激素来源和⼩⿏品系的不同,各研究者所采⽤的判断发情周期阶段的⽅法和标准的不同可能是导致结果差异的主要原因。
小鼠交配繁殖常识及注意事项
小鼠交配繁殖常识及注意事项小鼠是最常见的实验动物，很多实验室买回小鼠后都涉及到繁殖的问题。
下面来给大家介绍一下小鼠后续交配繁殖的常识及注意事项。
•交配小鼠体成熟一般多为60〜90天，是适宜的配种日龄。
一般发情后2〜*i I「飞r-. 3小时即可排卵，排卵期3〜4天，但在排卵期仅数小时内才允许公3 ■ •卜. 'l I ■, I 沽鼠交配。
雌鼠交配后，在阴道口形成一个白色的阴道栓，是公鼠的精L 心歹汽 I 1液、母鼠的阴道分泌物和阴道上皮混合遇空气后变硬的结果，可防止精子倒流，提高受孕率。
阴道栓常视为交配成功的标志。
阴道栓在交配后12〜24小时自动脱落。
I、- 戈.b ^7%雌鼠产后12〜24小时可发情，此时交配可造成产后妊娠(边哺乳边怀孕)。
有时，由于延迟着床，此妊娠期要比一般妊娠期长，可达31〜35天。
此外雌鼠与不育雄鼠交配或用机械方法刺激宫颈可产生假性妊娠(pseudopregnancy )，—般可维持10〜12天，有时长达3周。
•妊娠',1妊娠期19〜21天，妊娠期的长短与小鼠品系及个体、环境因素、排卵数量、受精卵种植率、胎次等有关。
•分娩精心整理小鼠的分娩多在夜间进行。
产前不安，不停地整理产窝，约4分钟产仔一只，1分钟后胎盘产出，母鼠将胎盘嚼食。
整个过程约经1小时。
有时可出现因受精卵种植延迟导致的产后3〜5天又产仔的现象。
小鼠每胎产仔6〜15只，产仔数取决于品系、胎次、饲养条件、营养条件等。
第2〜6胎产仔数较多，一般7胎后产仔数逐渐下降。
•哺乳心一\ \ \\ !| I ; I 7 \哺乳期18〜23天，小鼠带仔数一般为8〜10只，因母鼠营养状况、L 心歹汽 I 1体质状况、生产能力等因素的不同而变化。
母鼠哺乳仔数太多可导致仔鼠发育不均。
如带仔数不足时可将其它多余的同龄仔鼠放入寄奶代乳，但放入前应使其感染新窝的气味，以免被代乳母鼠咬死。
留种仔鼠可适当延长哺乳期到23天。
•繁殖时限小鼠性活动可维持1年左右，作为种鼠使用时间一般为6〜8个月, 之后其繁殖能力下降，仔鼠质量越来越差，因此应予淘汰。
小鼠动情周期的检查
小鼠动情（性）周期的检查
实验目的
1.学习从小鼠阴道内采集标 本的方法。 2.了解小鼠阴道内分泌物及 上皮的组织学随动情周期的不同 阶段所发生的变化。
原
理
哺乳类的雌性动物性成熟后，在下丘脑、垂 体、卵巢的调节下，卵巢发生周期变化：卵细胞 发育、排卵、黄体和白体和／与之相应的卵巢激 素周期性的变化。在激素的作用下，子宫及阴道 粘膜发生周期性的变化。这种周期性的变化被称 为动情周期。因此，根据阴道涂片的细胞学变化， 可以推断卵巢功能的状态。
未成熟的大、小白鼠尚无自然的动情周期， 但当注射绒毛膜促性腺激素(hCG)后,则可使其提 前出现。
实验用品
显微镜、棉签、滴管、小勺、载玻片、 盖玻片、生理盐水、碱性美蓝溶液（配制： 美蓝0.3g，溶于95%的乙醇30ml中，再加 蒸馏水至100ml，另加10%NaOH溶液0.1ml） 等。
实验动物
2. 涂片 将带有阴道内含物的细棉签等在载玻片 上均匀的转动做成涂片，然后将涂片放在空 气中自然干燥（以载玻片上发白为准）。
3. 染色 用碱性美蓝溶液染色8-10min左右，用 蒸馏水冲洗剩余的溶液（注意：应从涂片边 缘慢慢冲洗，切不要把细胞冲洗掉），并使 之干燥。
4.结果观察
在显微镜下观察阴道涂片的组织学变化，确定动 情周期变化的不同阶段。
表 小白鼠性周期阴道分泌物涂片变化
阶段 动情 前期 动情期 动情 后期 动情 间期 持续 时间/h 9-18 6-12 30-48 36-42 卵巢变化 卵泡加速 生长 卵泡成熟、 排卵 黄体生成 黄体退化 涂片可见 大量有核上皮细胞，少量 角化细胞 满视野角化上皮细胞，少 量有核上皮细胞 角化上皮细胞及白细胞 大量白细胞及少量黏液
注意事项
不同时间注射PMSG和HCG对小鼠超排卵效果的影响
不同时间注射PMSG和HCG对小鼠超排卵效果的影响陈喜英;郭永昌;刘田福【摘要】目的探讨不同时间注射孕马血清激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)对小鼠超排卵效果的影响. 方法选用40只6周龄F1昆明小鼠,随机分成4组,分别在同一天的11:00,13:00,15:00,17:00注射PMSG 5 IU,48 h后注射HCG5 IU,然后与公鼠合笼;次日晨检查阴栓,阳性者于当日10:00处死取卵,计数受精卵的数量. 结果 11:00,13:00,15:00和17:00组平均每只获取可用受精卵9.8枚、24.8枚、11.5枚、4.7枚. 结论在13:00注射PMSG,48 h后注射HCG对小鼠超排效果最好.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2014(045)001【总页数】3页(P23-25)【关键词】孕马血清;人绒毛膜促性腺激素;超排卵;注射时间【作者】陈喜英;郭永昌;刘田福【作者单位】山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西医科大学实验动物中心,太原 030001【正文语种】中文【中图分类】R-33近年来，随着转基因技术的迅速发展和成熟，转基因动物在生物医药、生命科学研究领域得到越来越广泛的应用。
国际上报道了多种得到转基因动物的方法，目前真正成熟并可以稳定得到转基因动物的方法主要有三种，即原核显微注射法、精子介导的基因转移法和核移植。
其中，显微注射法是转基因最简单、最常用的的方法，其操作步骤包括受精卵的采集、显微注射和胚胎移植。
要取得原核显微注射的高成功率首先要得到质量好、数量多的原核期受精卵。
小鼠在生理状态下一次排卵10－15颗，远不能满足实验的需要。
为了增加可获得的卵子数量，用孕马血清(PMSG)模拟促卵泡激素，用人绒毛膜促性腺激素(HCG)模拟黄体生成素(LH)可以诱发交配雌鼠排卵多于正常排卵数即超排卵。
超排反应是一个由一系列极其复杂的生理过程累积而产生的结果，影响因素诸多［1］，包括动物遗传特性、体况、营养状态、年龄、发情周期的阶段、卵巢的功能状态、季节、温度以及激素剂量等。
小鼠动情周期的检查
注意事项
1. 采取阴道（下口）内分泌物，不是肠道内容物（上 口）；
2. 制作涂片要均匀；
3. 自然干燥后，再染色8-10min；
4. 用蒸馏水冲洗剩余的美蓝溶液时，应从涂片边缘慢慢 冲洗； 5. 在镜下镜检（如用高倍镜，必须加盖薄片！！）。
2. 涂片 将带有阴道内含物的细棉签等在载玻片 上均匀的转动做成涂片，然后将涂片放在空 气中自然干燥（以载玻片上发白为准）。
3. 染色 用碱性美蓝溶液染色8-10min左右，用 蒸馏水冲洗剩余的溶液（注意：应从涂片边 缘慢慢冲洗，切不要把细胞冲洗掉），并使 之干燥。
4.结果观察
在显微镜下观察阴道涂片的组织学变化，确定动 情周期变化的不同阶段。
性成熟雌性小白鼠若干只。
方法与步骤
1.小鼠阴道内液体取法 （有以下三种方法）： （1）冲洗法 将装有生理盐水的滴管轻轻 插入到动物阴道内，按压滴管橡皮头，将生理 盐水打入阴道，然后吸出，如此2-3次。最后 将滴管内的阴道冲洗液滴在载玻片上。 （2）沾取法 将消毒的细棉签用生理盐水 润湿，轻轻插入动物阴道内0.5cm，慢慢转动 一下取出。 （3）刮取法 用光滑的玻璃小勺或牛角制 的小刮片慢慢插入阴道内，在阴道壁轻轻刮取 一点阴道内含物。
实验内容
小鼠动情（性）周期的检查
实验目的
1.学习从小鼠阴道内采集标 本的方法。 2.了解小鼠阴道内分泌物及 上皮的组织学随动情周期的不同 阶段所发生的变化。
原
理
哺乳类的雌性动物性成熟后，在下丘脑、垂 体、卵巢的调节下，卵巢发生周期变化：卵细胞 发育、排卵、黄体和白体和／与之相应的卵巢激 素周期性的变化。在激素的作用下，子宫及阴道 粘膜发生周期性的变化。这种周期性的变化被称 为动情周期。因此，根据阴道涂片的细胞学变化， 可以推断卵巢功能的状态。
昆明鼠超数排卵影响因素研究
Ｐｒ ｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｅ ｉ ｉ ｅ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｖｅ ｅ ｉ ｒ ｄｃｎ
昆 明 鼠超 数 排 卵 影 响 因素 研 究
崔 元 戎 金 辉 杜 春 艳。 ， ， ，王 纯 耀 。 辉 ，张钦 宪 ，陈
摘 要 ： 为探 讨 昆明 鼠超数 排 卵 的最佳 条件 ， 高超排 效 果 ， 提 比较促 性腺 激 素使 用剂 量 、 孕马 血清促 性腺 激素 （ ＭＳ 与人 绒 毛膜促 性腺 激 素 （ Ｃ 注射 间 隔 时 间、 排 小 鼠 所 处发 情 周期 阶段 及 小鼠周 龄 等 因素 Ｐ Ｇ） ｈ Ｇ） 超 对 昆明 鼠超数 排 卵结 果的 影响 。Ｐ Ｇ ８Ｉ ＋ｈ Ｇ ８Ｉ 间 隔 ４ ～ ４ ＭＳ Ｕ Ｃ Ｕ、 ６ｈ ８ｈ注射 组超 排 效 果 最好 ； ３周 龄 、 ８ 周龄 ～ １ Ｏ周龄雌 鼠较 ４周龄 ～７周 龄雌 鼠超 排 效果好 ， 鼠发 情 间期 或 发情 前 期 开始 超 排 的 效 果显 著 高于 小 发 情 周期 的其他 时期 。 关键 词 ： 明鼠 ； 数排 卵 ； 昆 超 激素 剂 量 ； 情周 期 阶段 发
自宁波 市 三 生药 业 有 限 公 司 ；Ｍ２ Ｍ１ 、 ６培 养 基 、 透
明质 酸酶 、 石蜡 油 均为 Ｓｇ ｉｍａ公 司产 品 。 １ １ ２ 仪 器设 备 与 器材 ．． 一次 性 塑料 培 养皿 ， 体视
卵母 细胞 数显 著 高于第 １组与第 ３组 （ １ 。 表 ）
２ ２ 促 性腺 激 素注射 间隔 时间对 超排 效果 的影 响 ． ６ Ｏ只 ８周 龄雌 性 鼠随机 分 为 ３组 ， 分别 于 注射 ８Ｉ ＭＳ 后 ４ 、 ８ ５ Ｕ Ｐ Ｇ ６ ４ 、０ｈ注 射 ８Ｉ Ｃ Ｕ ｈ Ｇ。结 果相 隔 ４ 、 ８ｈ注射 激 素 回收 的卵母 细 胞无 显 著 性差 ６ｈ ４
影响小鼠超数排卵的若干因素
影响小鼠超数排卵的若干因素李聚学;魏雁;魏庆信;郑新民;曹斌云【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2004(000)004【摘要】分析了激素剂量、激素注射间隔时间、发情周期、季节和温度等因素对小鼠超排效果的影响.结果表明:PMSG与HCG剂量为10IU时,见栓小鼠平均获卵数(39.6枚),显著高于5IU(27.2枚)和15IU(25.5枚)激素剂量;PMSG与HCG注射间隔时间46h与48h见栓小鼠平均获卵数(分别为35.7枚和38.0枚)差异不显著;当激素注射时间间隔为50h时,见栓小鼠平均获卵数(20.3枚)显著下降;发情周期不同阶段开始超排效果不同,发情前期开始超排,其见栓率(82%)、见栓小鼠平均获卵数(37.9枚)均显著高于其他情期;当环境温度维持在(20±5)℃时,不同季节小鼠超排效果无显著差异;冬季鼠房温度在(20±2)℃时,小鼠超排见栓率(77%)和见栓小鼠平均获卵数(33.2枚)均极显著高于环境温度为(10±2)℃的超排效果.【总页数】3页(P120-122)【作者】李聚学;魏雁;魏庆信;郑新民;曹斌云【作者单位】西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100;湖北省农业科学院生物技术研究所,湖北,武汉,430064;湖北省农业科学院生物技术研究所,湖北,武汉,430064;湖北省农业科学院生物技术研究所,湖北,武汉,430064;西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】S814.4【相关文献】1.影响小鼠超数排卵效果的因素 [J], 孙玉成;张建芳;孟令君;高建明2.影响小鼠胚胎显微注射成功率的若干因素 [J], 张德福;陈茵;王英;王凯;张平;李震3.影响小鼠显微注射胚胎质量的若干因素 [J], 王英;刘丽君4.影响小鼠转基因原核胚体外发育的若干因素 [J], 张德福;陈茵;王英;王凯;张平;李震5.影响昆明小鼠和BALB/c小鼠胚胎干细胞分离、克隆、传代的若干因素 [J], 郭志林;王新庄;王木;张涌;王轶敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
C57BL／6小鼠繁殖性能的观察与研究
实验动物科学设计大纲实验名称:C57BL/6小鼠繁殖性能的观察研究主题来源:可选设计类:设计师:XXX日期:2指导老师:XXXX5.实验技术和方法:5.1.C57BL/6纯系小鼠的选择:选择性成熟未交配的小鼠。
母熊60-70天，体重20-25克。
公熊60-70天，体重20-30克。
5.2.确定小鼠性周期的发情期:选择适龄的雌雄小鼠，交配前检查雌鼠的外阴和阴道口。
当外阴肿胀，阴道口张开且干燥时，可确认为发情雌鼠。
同时可以通过阴道涂片观察。
涂片上有大量角化上皮细胞和少量有核上皮细胞，细胞散在分布，不聚成堆，为发情雌鼠。
通过观察阴道涂片的细胞学变化和阴道口的变化，可以确定发情的不同阶段。
5.3.动物交配及孕鼠检查:将已确定发情的雌性大鼠分为实验组和对照组。
实验组采用自然交配法，按雌雄1: 1的比例于晚上8点关笼，次日早晨检查阴道涂片和阴道栓剂。
对照组采用超数排卵法，配种孕马血清促性腺激素(PMSG)联合人绒毛膜促性腺激素(HCG)。
中午12: 00雌性小鼠腹腔注射PMSG 10U ，48小时后腹腔注射HCG10U 。
他们晚上8点和公老鼠1: 1关在一起。
阴道涂片检查:如果镜检发现精子，则为阳性，记录为妊娠0.5d 。
阴道栓的检查:检查雌鼠是否有阴道栓，必要时用眼钳插入阴道，打开阴道口，看是否有阴道栓。
有阴道栓剂的确定怀孕。
记录为怀孕0.5d 。
5.4.动物交配与妊娠的鉴别:小鼠交配后，雌鼠阴道口内形成白色阴道栓，呈“Y”形，表面有细横纹，“分叉”段连接阴道深部。
一般小鼠雌栓在交配后12 ~ 24h 自动脱落。
尹畅栓的有无被视为判断是否交配的重要标志。
鉴别小鼠是否怀孕，可以通过观察C 、BL/6小鼠发情周期是否消失，观察阴道粘膜颜色、粘液性质、阴道口径变化等来判断。
5.5.统计:大约19-21天后，会有婴儿出生，观察并统计他们的数量。
(3)可行性分析:3.1本实验操作简单，实验指标易于观察。
3.2小鼠容易获得和饲养。
小鼠受孕知识
.小鼠性成熟早，35 日龄雄性附睾精液中有运动的精子，雌鼠在35 日龄即可发情排卵、受孕．雌鼠在正常情况下，每隔4～5 d为一个性周期，发情后2～3 h即可排卵．雌鼠产后还可出现一次动情期，即分娩后24 h内排卵，此时交配可受孕，俗称“血配”，出现边哺育边妊娠的现象．2.实验动物的选择选用性成熟未交配过的健康小鼠进行．实验发现，体形和体重较大动物交配比较容易受孕．3.掌握小鼠性周期时间镜检阴道涂片，低倍镜下观察细胞的类型，然后换上高倍镜，细胞可能是有核上皮细胞、角化(老的、无核的)上皮细胞．观察阴道涂片的组织细胞学变化，可确定动情期的不同阶段．4.把握交配季节小鼠生殖有关的实验，一般应在春秋季进行，因小鼠怕热畏寒，这二季节温度比较适宜，动物的受孕率较高．若在夏冬季实验，动物房室温应控制在22±2~C，空气湿度为50％左右.5.动物交配，妊娠识别选择适龄雌雄小鼠，鉴定动情期，是确保小鼠受孕的关键．交配前查看雌鼠外阴和阴道口，外阴充血肿胀，阴道口张开且呈干燥状态，确认为动情期雌鼠.小鼠阴栓一般在交配后12～24 h自动脱落．由于小鼠交配后能产生阴栓，所以常把阴栓的有无作为判断是否交配的重要标志．6.受孕辅助方法及其影响为提高受孕率，可对动物进行动情周期诱导和同步化．常用两种方法：一种是物理方法，即“预接触”，经“预接触”处理后的雌鼠，60％～70％可查见阴栓．另一种是化学方法，即对小鼠进行“超数排卵”(supemvu lation)，腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)，48 h后结合HCG腹腔注射处理的雌鼠，当晚与雄鼠1：1合笼，一般均可受孕，80％可见阴栓．自然同步发情的生殖是理想的，副作用少，效果好，而超排卵质量较差，胚胎生活力较差，体外培养增殖缓慢．7.合理管理，精心饲养动物饲养应在开放系统动物房进行．由于光照能刺激小鼠性激素的分泌，对雌鼠性周期有一定的影响，因而采用12 h：12 h明暗光照，温度18～25℃，空气相对湿度40％～60％，噪音≤60分贝．8.昆明小鼠系远交系，l945年由印度Haffikine研究所引入云南昆明。
周龄·初始注射时间对小鼠超数排卵的影响
周龄初始注射时间对小鼠超数排卵的影响巩雪洁;臧敦安;许文豪【摘要】[目的]探讨不同周龄、不同初始注射时间对小鼠超数排卵效果的影响.[方法]用10 IU PMSG+10 IU HCG 间隔48 h 处理C57BL/6J小鼠,收集并统计合子数.[结果]4周龄超排效果优于于8周龄,可达26.86枚∕只;4周龄C57BL/6J小鼠PMSG和HCG注射时间为12:00—13:00,超排后收集合子数可达30枚∕只以上,而且体外培养的发育状况良好.[结论]4周龄C57BL/6J小鼠适宜超数排卵;PMSG和HCG注射时间为12:00—13:00,超排效果相对理想.%[Objective]To discuss the influence of week-age and initial injection time on superovulation in mice.[Method]The C57BL/6J mice were treated with 10 IU PMSG+10 IU HCG interval 48h,and the number of zygotes was collected and counted.[Result]The effect of the four week age superovulation was better than that of eight weeks,and it could reach 26.86.The time of PMSG and HCG injection of C57BL/6J mice at 4 weeks old was 12-13 at noon,and the number of zygotes collected was up to 30 and in vitro culture of the fertilized ovum was in good condi-tion.[Conclusion]The 4-week oldC57BL/6J mice are suitable for superovulation.When the injection time of PMSG and HCG is 12-13 at noon, the superovulation effect is relatively ideal.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2018(046)015【总页数】3页(P72-74)【关键词】小鼠;超排卵;激素;周龄;初始注射时间【作者】巩雪洁;臧敦安;许文豪【作者单位】中南民族大学生命科学学院医学生物研究所,湖北武汉430074;中南民族大学生命科学学院医学生物研究所,湖北武汉430074;中南民族大学生命科学学院医学生物研究所,湖北武汉430074【正文语种】中文【中图分类】S865.1以各种外源促性腺激素诱发动物卵巢的许多卵泡发育并排出具有受精能力的卵子的过程称为超数排卵(Superovulation),简称“超排”。
小鼠繁育过程经历哪些阶段？
小鼠繁育过程经历哪些阶段？小鼠繁育过程主要包括选择种鼠，合笼，受孕检测和孕鼠饲养等几个阶段。
第一步：选择最佳年龄的小鼠进行繁殖随着年龄的变化，小鼠的身体机能和繁殖能力一直在变化，如雄性小鼠的精液质量、数量和交配母鼠的受胎率，母鼠亦是如此。
了解到小鼠的各年龄段的生长状况，因此选择合适年纪的小鼠就变得非常简单了。
1. 性成熟小鼠：6~8周的成年小鼠（雌鼠5~7周，20±1.5克；雄鼠较晚，9周，25±1.5克）2. 发情雌鼠：只有在发情的时它们才会允许雄鼠进行交配。
观察到雌鼠阴道口若呈温湿红肿，褶皱明显多为发情期，此时合笼受孕率高。
雌鼠有五对乳头（胸部3对，腹部2对）；外雌性小鼠的肛门和外生殖器的距离要更短。
第二步：合笼挑选性成熟、状态好的雌雄鼠进行交配。
为了增加受孕率，合笼雄雌比例可为1:2到1:3合笼方式主要有两种：1. 连续合笼：雌鼠雄鼠连续几天内一直在同一个笼子中；2. 间断合笼：一只雌鼠和一只雄鼠相处一天，然后就换另外的一只雌鼠进来合笼；常规采用连续合笼方法，待确定母鼠怀孕后可将公鼠取出与其他母鼠进行交配，并留孕鼠单独饲养照养子代第三步：受孕检测1. 查阴拴：用镊子直接查阴道内有无阴拴（阴门口处乳白色、固态胶状物，是由雄性小鼠精囊腺和凝固腺的分泌物在阴道内凝固而形成的产物）。
缺点：容易出现漏检和假孕2. 阴道涂片查精子：合笼第二天早上检查，用一次性的吸管沾取少量生理盐水，插入雌鼠阴道抽吸几下，涂在载玻片上，加一滴生理盐水后加盖玻片镜下观察，看到大量活精子在游动则代表受精。
第四步：孕鼠饲养孕检发现怀孕小鼠后，应及时给予特殊照顾。
1. 首先要给予充足的营养，除供给足够的块料外，还要定时饲喂少量瓜子、麦芽和拌有鸡蛋的软料等食物。
2. 如果雌鼠多的话，可以把孕鼠妈妈和鼠爸分出来一起分娩，过了21天分娩期后，再分笼。
期间要密切注意孕鼠及仔鼠的生长情况。
3. 小鼠的健康状况与母鼠妈妈的哺乳能力、生产胎次有密切关系。
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２０北京农学院学报第２０卷
１材料与方法
１．１实验动物以ＩＣＲ系ＳＰＦ性成熟小鼠（购自北京实验动物中心）为实验动物。
雌鼠体重２９～３２ｇ，雄鼠体重３３～３５ｇ，雌雄分笼饲养在室温、自然光照、自由饮水的条件下，采用全价繁殖颗粒饲料饲养。
经７ｄ的适应性饲养后，按常规方法对雌鼠进行超数排卵处理。
１．２实验方法
１．２．１阴道涂片法判断小鼠发情周期及外阴部特点的观察采用阴道涂片方法［２］对小鼠进行发情周期观察。
首先将小鼠保定，翻提起尾巴露出阴道口，观察外阴的变化并记录其特点。
然后右手持滴管吸少量生理盐水滴入阴道口，当稍放松尾部及腰部时，生理盐水即被吸入阴道，稍候三指轻压腰部，黏液随生理盐水流出，吸入滴管中，滴到载玻片上。
待稍干后用酒精（９５％）固定５ｍｉｎ，然后用伊红染液染色１５ｍｉｎ，随后冲片，干燥，镜检。
１．２．２外部观察法确定小鼠发情时期根据阴道涂片结果及小鼠在不同发情周期所表现出的外阴部特点，依次将其分为发情前期（实验１组）、发情期（实验２组）、发情后期（实验３组）、问情期（实验４组）４个实验组别。
发情周期未观察小鼠作为对照组。
１．２．３小鼠超数排卵［３３雌性小鼠于１９：００腹腔注射ＰＭＳＧ（天津实验动物中心，批号：０４３２９）１０ＩＵ／只，间隔４８ｈ腹腔注射ｈＣＧ（国营南京动物激素厂，批号：９８０１０９）１０ＩＵ／只，注射ｈＣＧ后即与公鼠按１：１合笼。
次日８：ｏＯ检查阴栓，凡阴门处有阴道栓，合笼后４７ｈ脱臼处死小鼠，获取２一细胞胚胎。
１．３数据统计采用卡方检验。
２实验结果
２．１小鼠阴道涂片上皮细胞变化及外阴部特点观察‘２３见表１和图１、图２。
表１小鼠阴道涂片上皮细胞变化及外阴部特点
图１不同发情时期阴道上皮细胞变化
２．２不同发情周期小鼠超排效果由表２可知，（１）不同发情周期超排成功率，实验１组、２组和４组极显著高于３组和对照组（Ｐ＜ｏ．０１）。
（２）平均
图２不同发情时期外阴部特征
每组可用胚胎率，实验ｌ组、２组、４组与对照组无显著差异（Ｐ＞ｏ．０５），但与实验３组差异极显著（Ｐ＜
ｏ．０１）。
（３）平均每只小鼠获可用胚数，实验１组、４
小鼠发情周期观察与最佳超排时期的确定
作者：傅文栋， 孙玉成， 索伦， 高建明， FU Wen-dong， SUN Yu-cheng， Suo Lun， GAO Jian-ming
作者单位：北京农学院动物科学技术系,北京,102206
刊名：
北京农学院学报
英文刊名：JOURNAL OF BEIJING AGRICULTURAL COLLEGE
年，卷(期)：2005,20(2)
被引用次数：9次
1.Smith P E;Engle E T Experimental evidence regarding the role of the anterior pituitary in the development and regulation of the genital system[外文期刊] 1927
2.俞慧珠;叶百宽小白鼠胚胎发生 1985
3.严云勤;李光鹏;郑小民发育生物学原理及胚胎工程 1995
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1.刘维俊.高珊.唐菲.张一云.刘牧.薛孝先小鼠超数排卵相关问题的探讨[期刊论文]-黑龙江动物繁殖 2011(1)
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5.张建芳.高建明.陈武.于同泉.穆祥.李杗.邸冉.孟令君黄芪多糖对小鼠1-细胞胚胎体外发育效果的初步研究[期刊论文]-中国比较医学杂志 2007(6)
6.高建明.傅文栋.陈武.穆祥.索占伟中药成分小檗碱对小鼠2-细胞胚胎体外培养及移植效果的研究[期刊论文]-中国畜牧杂志 2006(15)
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8.孙玉成三种中药有效成分对小鼠2-细胞胚胎体外培养抗氧化作用及冷冻胚胎移植效果研究[学位论文]硕士 2006
9.孙玉成.张建芳.孟令君.高建明影响小鼠超数排卵效果的因素[期刊论文]-北京农学院学报 2005(4)
10.刘维俊.高珊.唐菲.张一云.刘牧.薛孝先小鼠超数排卵相关问题的探讨[期刊论文]-黑龙江动物繁殖 2011(1)本文链接：/Periodical_bjnxyxb200502005.aspx。