无菌检验验证方案

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无菌检验方法验证

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1.验证目的

1.1确认所用的检查方法适用于一次性活检钳的无菌检查。

1.2确认检查结果的准确性、可靠性、重复性和可操作性及检查方法的完整性。

2.验证范围

适用于我公司生产的一次性活检钳无菌检验。

3.检验依据

《中国药典》2010版附录无菌检查法

ISO11737-2:2009 医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：确认灭菌过程的无菌试验 GB/ 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法

4.验证器材

检验环境：无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部100级的单向流空气区域内进行操作。

设备：医用净化工作台、生物安全柜、无菌检查膜过滤器、电动吸引器、电热干燥箱、霉菌培养箱、数显生化培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、pH计、冰箱、恒温水浴锅、显微镜等。

培养基及稀释液：硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、氯化钠-蛋白胨缓冲液、%蛋白胨水溶液、营养琼脂。

其他实验材料：微孔滤膜（孔径≤，直径约50mm）、无菌过滤杯、无菌剪刀、无菌镊子、无菌钳子、无菌手套、吸管（1ml和10ml）、酒精灯、三角烧瓶、接种环、培养皿。

5.验证方案

原理：活检钳的形状为不溶物，为微生物转移更彻底，特选用无菌检查法中的薄膜过滤法。

设备器材：验证中所用器材、设备已通过国家计量单位鉴定合格并有鉴定证书。

培养基：验证中所用培养基以通过培养基灵敏度实验检测合格。

操作步骤：

供试品的取样按照GB/T 相关规定进行逐批取样。

将所需物品，供试品表面消毒，通过传递窗，紫外线照射半小时.无菌室紫外线消毒半小时。

操作人员用洗手液、自来水清洗双手，关闭紫外灯，换拖鞋，脱外衣放入衣柜，穿洁净白大衣，进入缓冲间，再用洗手液、纯化水清洗双手，用75%乙醇对手进行消毒，穿戴无菌衣、帽、口罩、手套等。

进入菌检室，打开医用洁净工作台风机，运行至少15分钟以上。

将所需物品由传递窗取出，两只消毒液桶分别放置于菌检洁净工作台一侧，其余物品放置于传递窗一侧的方形桌上，剥去牛皮纸外包装。

医用洁净工作台内点燃酒精灯。打开3个养琼脂平板，置于医用洁净工作台的不同位置。

取供试品，在医用洁净工作台内，打开包装袋，小心将供试品取出，将其剪成约10cm的小段，浸入500ml %无菌蛋白胨水溶液中，充分振摇作为供试液。

将供试液平均转入三个薄膜过滤器的滤杯中，开启电动吸引器开关进行过滤，用蛋白胨-氯化钠缓冲液每次100ml冲洗滤膜三次，用平口镊子夹取滤膜（过程保持滤膜的完整性），一张转移到100ml改良马丁培养基，另两张转入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，其中一只做阳性对照，内并用记号笔在各试管上做好标记。

用同批的冲洗液和浸提介质各100ml通过两个集菌仪过滤，同法一张加硫乙醇酸盐培养基100ml，另一张加改良马丁培养基100ml分别作阴性对照。

用记号笔在试管上标明供试品名称、批次、检验日期。

依照上述方法，在同一条件下，重复上述实验步骤，作为平行样品。

用%新洁尔灭溶液或75%乙醇溶液对菌检室医用洁净工作台、地面进行消毒。

操作人员离开菌检室，换掉无菌衣、口罩、手套，穿着白大衣，更换拖鞋，进入菌检准备间。

将菌检实验物品由传递窗取出，将待加阳性对照的供试品转入阳性对照间，置于生物安全柜内并打开风机。制备金黄色葡萄球菌菌悬液（约含金黄色葡萄球菌50～100cfu/ml），取1ml加入作为阳性的硫乙醇酸盐流体培养基中，作为阳性对照。

培养条件：

凡硫乙醇酸盐流体培养基、营养琼脂培养基培养物，置于30～35℃数显生化培养箱内培养，改良马丁流体培养基培养物置于23～28℃霉菌培养箱内培养，培养时间均为14天。每天观察结果并记录。

6.结果判定

阳性对照管中应生长良好，阴性对照管不得长菌。否则，验证无效。

若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判断供试品符合规定；若供试品管中任何1管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效即生长的微生物非供试品所含。

当符合下列至少一个条件时，方可判断验证结果无效：

无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查的要求。

回顾无菌试验过程，发现可能有引起微生物污染的因素。

阴性对照管有菌生长。

供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和无菌操作技术不当引起的。

验证若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法重试，若无菌生长，判供试品验证方案有效，若有菌生长，判定供试品验证方案无效。

7.相关记录

检验人/日期：复核人/日期：