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基因工程思考题答案

基因工程思考题答案

基因工程思考题答案【篇一:基因工程习题及答案】选题1. 在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指(b)a . i 类限制酶 b. ii 类限制酶 c. iii 类限制酶 d. 核酸内切酶e. rnaase2. 下列关于同裂酶的叙述错误的是 (b )a. 是从不同菌种分离到的不同的酶 , 也称异源同工酶。

b. 它们的识别序列完全相同。

c. 它们的切割方式可以相同,也可以不同。

d. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样,但切割位点间的序列一样。

e. 两种同裂酶的切割产物连接后,可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。

3. 多数限制酶消化 dna 的最佳温度是(a)a. 37 ℃b.30 ℃c.25 ℃d.16 ℃e.33 ℃4. 下列关于限制酶的叙述错误的是 (b)a. i 类限制酶反应需要 mg2+ 、 atp 和 s- 腺苷蛋氨酸。

b. ii 类限制酶反应需要 mg2+ 、 atp 。

c. iii 类限制酶反应需要 mg2+ 、 atp , s- 腺苷蛋氨酸能促进反应,但不是绝对需要。

d. i 、 iii 类限制酶对 dna 有切割和甲基化活性, ii 类限制酶对dna 只有切割活性而无甲基化活性。

e.ii 类限制酶要求严格的识别序列和切割点,具有高度精确性。

5. 如果一个限制酶识别长度为 6bp , 则其在 dna 上识别 6bp 的切割概率为 ( d )a. 1/44b. 1/66c. 1/64d.1/46e. 1/1066. 多数 ii 类限制酶反应最适 ph 是 (c )a. ph:2-4b. ph:4-6c. ph:6-8d. ph:8-10e. ph:4-107. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( d)a.限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后,可能会阻碍限制酶的酶解活性。

b.许多限制酶对线性 dna 和超螺旋 dna 底物的切割活性是有明显差异的。

c.有些限制酶对同一dna 底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。

基因工程思考题

基因工程思考题

《基因工程》思考题第一章绪论1. 简述基因操作、基因重组和基因工程的关系。

2. 为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物?3. 简述基因的结构组成对基因操作的影响。

4. 谈谈你对gene的认识,并简要说说gene概念的演变过程.5. 如何理解gene及其产物的共线性和非共线性?6. 试从理论和技术两个方面谈Gene Engineering诞生的基础.第二章基因工程的基本原理与支撑技术1. 试比较原核基因组与真核基因组的结构和功能特点2. 试比较原核基因和真核基因表达调控的主要方式和特点3. 分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点?4. 琼脂糖凝胶电泳中,简述影响DNA在凝胶中迁移速率的因素.5. 小量制备质粒DNA,用质粒中特定的酶切发现切割不动,试分析可能原因及克服方法?6. 在基因操作实践中有哪些检测核酸和蛋白质分子量的常规方法?7. 印迹分子杂交有哪些种类,并说明在什么情况下需要使用这些方法。

8. 核酸分子的标记有哪些方法,各有何特点?9. 由mRNA反转录成cDNA和DNA的PCR扩增是两个完全不同的酶催化反应过程,如何将两个过程联系在一起,实现由mRNA起始扩增出DNA?10. Primer是PCR反应体系的四大要素之一,PCR的许多应用都是通过primer设计来实现的,请问primer设计的一般原则是什么?11. 在PCR反应的后期,或者循环次数过多时,反应体系中就会出现一种所谓的平台效应(Plateau effect),请问什么叫Plateau effect?产生Plateau effect的原因有哪些?12. 在对PCR产物进行电泳检测时,有时会出现拖带或非特异性扩增条带,请分析其原因?如果检测结果是看不到DNA带或DNA带很弱,那又是为什么?13. 通过双向蛋白质电泳发现某蛋白质与某植物的一种表型密切相关,若要利用编码该蛋白质的基因来转基因植物,试问如何分离得到该基因?14. 现有一序列已知的DNA片段和一序列未知的DNA片段,你分别如何设计测序策略?15. 设想一下在什么情况下你希望知道一个基因或一段DNA的序列?16. 什么叫有性PCR?有性PCR导致DNA重组的分子机制跟体内重组有何异同?17. Explain the PCR. List the steps in carrying it out; include all the components and special conditions, explaining why each one is used. Illustrate the process with appropriate labels. Use the correct scientific terminology in your explanation.第三章基因工程操作的基本条件1. 试指出影响限制性内切核酸酶(Restriction endonuclease)切割效率的因素.2. 在酶切缓冲液中,一般需加入BSA,请问加入BSA的作用是什么?并简述其原理?3. 何谓Star activity?简述Star activity的影响因素及克服方法.4. 某DNA序列中存在DpnI酶切位点,以此DNA为模板,在体外合成DNA序列,当用该酶进行酶切时,发现切割不动,试分析可能原因?5. 天然的质粒载体(plasmid vectors)通常需经改造后才能应用,包括去除不必要的片段,引入多克隆位点等。

基因工程原理与技术思考题

基因工程原理与技术思考题

Chapter I Introduction1)什么是基因?基因有哪些主要特点?基因是一段可以编码具有某种生物学功能物质的核苷酸序列。

①不同基因具有相同的物质基础.②基因是可以切割的。

③基因是可以转移的。

④多肽与基因之间存在对应关系。

⑤遗传密码是通用的。

⑥基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。

2)翻译并解释下列名词genetic engineering遗传工程gene engineering基因工程:通过基因操作,将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物获得新的遗传性状的操作。

gene manipulation基因操作:对基因进行分离、分析、改造、检测、表达、重组和转移等操作的总称。

recombinant DNA technique重组DNA技术gene cloning基因克隆:是指对基因进行分离和扩大繁殖等操作过程,其目的在于获得大量的基因拷贝,在技术上主要包括载体构建、大肠杆菌遗传转化、重组子筛选和扩大繁殖等环节。

molecular cloning分子克隆3)什么是基因工程?简述基因工程的基本过程?p2 p44)简述基因工程研究的主要内容?p55)简述基因工程诞生理论基础p2和技术准备有哪些p3?6)基因表达的产物中,氨基酸序列相同时,基因密码子是否一定相同?为什么?否,密码子简并性7)举例说明基因工程技术在医学、农业、工业等领域的应用。

医学:人胰岛素和疫苗农业:抗虫BT农药工业:工程酿酒酵母Chapter Ⅱ The tools of trade1)什么是限制性核酸内切酶?简述其主要类型和特点?是一种核酸水解酶,主要从细菌中分离得到。

类型特点p112)II型核酸内切酶的基本特点有哪些p12-14?简述影响核酸内切酶活性的因素有哪些p14?3)解释限制酶的信号活性?抑制星号活性的方法有哪些?4)什么是DNA连接酶p15?有哪几类p16?有何不同p16?5)什么叫同尾酶、同裂酶p12?在基因工程中有何应用价值?同裂酶:识别位点、切割位点均相同,来源不同。

基因工程课后思考题

基因工程课后思考题

基因工程原理课后思考题第一篇:基因操作原理第一章:基因工程概述P(12):1 简述基因操作,基因重组和基因工程的关系?2 为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物?3 简述基因的结构组成对基因操作的影响?第二章:分子克隆工具酶P(38):1 限制性内切酶可分为哪几种类型,各有何特点?2 哪些酶可用于DNA片段的末端标记?3 DNA聚合酶有哪些类型,各有什么活性?4 在分子克隆中所用的酶主要作用于哪些底物?第三章:分子克隆载体P(69):1 作为一个最基本载体,它必须具备哪些功能元件?2 何为α-互补,在载体构建中有何作用?3 请简要描述λ噬菌体溶原状态和裂解循环的基因调控模式及其在构建载体中的作用?4 简述M13KO7辅助噬菌体的遗传学特性和生物学功能及其在制备单链DNA中的作用?第四章:人工染色体载体P(84):1 大容量克隆载体有哪些种类,各有何特点?2 简述用Y AC克隆载体构建基因文库的原理?3 BAC克隆载体有哪些显著的优点?第六章:基因工程操作中大分子的分离和分析P(116):1 在基因工程操作中有哪些检测核酸和蛋白质相对分子量的常规方法?2 印迹分子杂交有哪些种类,并说明在什么情况下需要使用这些方法?3 核酸分子的标记有哪些方法,各有何特点?4 DNA转化有哪些方法,各有何优点?第七章:基因芯片技术P(132):1 基因芯片技术与传统的Northern杂交技术相比有何异同?2 简述DNA在芯片上的固定原理及基因芯片的制作过程?3 简述mRNA反转录标记方法的类型及特点?4 结合自己的专业试述cDNA芯片技术的用途及前景?第八章:PCR技术及其应用P(154):1 如何理解PCR扩增的原理和过程?2 通过PCR技术扩增已知序列侧翼的未知序列的关键问题是什么?用PCR作染色体步查有何特点?3 PCR产物的克隆与一般的DNA片段克隆有何异同点?4 为什么在定量PCR中要引入Ct值的概念?第十章:DNA诱变P(186):1 DNA诱变有哪些种类,各有何特点?2 什么叫有性PCR?有性PCR导致DNA重组的分子机制与体内重组有何异同?3 简述Kunkel定点诱变的基本原理?第十一章:DNA文库的构建和目的基因的筛选P(209):1 基因组DNA文库有哪些类型?其相关的特点是什么?2 构建大片段基因组文库过程中需要注意哪些问题?3 均一化cDNA文库构建的基本原理是什么?4 扣除cDNA文库构建的基本原理是什么?主要用途是什么?5全长cDNA文库构建的基本原理和基本类型是什么?6 基因克隆筛选的几种方法和相关技术特征有哪些?第十二章:基因组研究技术P(225):1 简要叙述真核生物基因组物理图的构建方法和原理?2 鸟枪法和克隆重叠群法这两种基因组测序法各自有何优缺点,适用范围有何不同?3 如何对基因组测序获得的序列进行注解以确定哪些序列为编码序列?对这些预测的基因如何进行功能鉴定?4 讨论基因组研究作为平台技术在基因工程中的应用?5基因组工程利用了哪些技术手段?第二篇:基因工程应用第十三章:植物基因工程P(225):1 什么叫植物基因工程?试比较植物基因工程与常规植物育种的异同点?2 试阐述植物基因工程快速发展的原因?3 简述植物基因工程的方法及其原理和优缺点?4 转基因植株的鉴定方法有哪些,作为一组完整的转基因植株鉴定的数据至少包含哪些参数?5植物基因工程的发展向世界展现出了一幅壮丽画面,试进行阐述?第十四章:动物基因工程P(272):1 简述反转录病毒在动物基因工程中的作用?2 试述基因敲除与基因敲入的区别?3 质粒载体和病毒载体有何异同?4 试述转基因动物的鉴定方法?5谈谈你对转基因动物生物安全性的看法?6 真核细胞转染有哪些方法?7 简述转基因小鼠的制备过程?。

基因工程课后习题答案

基因工程课后习题答案

基因工程课后习题答案基因工程,也称为遗传工程,是一种通过直接操作生物体的基因来改变其遗传特性的技术。

这项技术在医学、农业、工业和环境科学等领域有着广泛的应用。

以下是一些基因工程课后习题的答案:1. 基因工程的定义:基因工程是利用分子生物学技术,将外源基因插入到宿主生物体的基因组中,使其表达出新的或改变的遗传特性。

2. 基因工程的基本步骤:- 目标基因的获取:通过PCR扩增、基因克隆等方法获得目标基因。

- 基因载体的构建:将目标基因插入到合适的载体中,如质粒、病毒等。

- 转化:将构建好的载体导入到宿主细胞中。

- 筛选:通过抗生素抗性标记等方法筛选成功转化的细胞。

- 表达:在宿主细胞中表达目标基因,产生所需的蛋白质或性状。

3. 基因工程在农业中的应用:基因工程可以用于培育抗虫、抗病、抗旱、耐盐碱等性状的作物品种,提高作物的产量和质量。

4. 基因工程在医学中的应用:- 生产药物:利用基因工程技术生产胰岛素、干扰素等生物药物。

- 基因治疗:通过修复或替换缺陷基因来治疗遗传性疾病。

5. 基因工程可能带来的伦理问题:基因工程可能引发生物安全、生物多样性丧失、基因歧视等伦理问题,需要在实施过程中进行严格的伦理审查和监管。

6. 基因工程的安全性问题:基因工程产品可能存在潜在的食品安全和环境安全问题,如转基因作物可能对非目标生物产生影响,需要进行长期的环境影响评估。

7. 基因工程的未来发展趋势:随着基因编辑技术如CRISPR-Cas9的发展,基因工程将更加精准和高效,有望在治疗遗传病、提高作物产量等方面发挥更大的作用。

8. 基因工程的法律和政策:不同国家和地区对基因工程的法律和政策不同,需要遵守当地的法律法规,确保基因工程的安全和合法性。

通过这些习题答案,学生可以更好地理解基因工程的基本概念、技术流程、应用领域以及面临的挑战和未来发展。

最新01基因工程复习题答案版

最新01基因工程复习题答案版

01基因工程复习题答案版基因工程原理复习题思考题基因工程绪论1、基因工程的定义与特征。

定义:在体外把核酸分子(DNA的分离、合成)插入载体分子,构成遗传物质的新组合(重组DNA),引入原先没有这类分子的受体细胞内,稳定地复制表达繁殖,培育符合人们需要的新品种(品系),生产人类急需的药品、食品、工业品等。

特征:1、具跨越天然物种屏障的能力。

2、强调了确定的DNA片段在新寄主细胞中的扩增。

2、试述基因工程的主要研究内容。

1)、目的基因的分离2)、DNA的体外重组(载体、受体系统等)3)、重组DNA分子转移到受体细胞及其筛选4)、基因在受体细胞内的扩增、表达、检测及其分析。

3、基因工程在食品工业上有何应用发展?主要是通过基因重组,使各种转基因生物提高生产谷氨酸、调味剂、酒类和油类等有机物的产率;或者改良这些有机物组成成分,提高利用价值。

4、转基因是一把双刃剑,请客观谈谈对转基因及转基因食品安全性的认识。

转基因技术所带来的好处是显而易见的,在人类历史进步和发展中起到了积极作用。

首先,通过该项技术可以提供人们所需要的特性,改良培育新品种;第二,延长食品保存时间或增加营养成分;第三,将抗虫防菌基因转入到作物中,使作物本身产生抵抗病虫害侵袭的能力,减少了农药的使用量,有利于环境保护;第四,转基因技术及基因食物在医学方面得到广泛研究和应用。

人们对转基因技术的主要担忧在于环境方面。

外源基因的导入可能会造就某种强势生物,产生新物种或超级杂草、损害非目标生物、破坏原有生物种群的动态平衡和生物多样性,也即转基因生物存在潜在的环境安全问题。

转基因作物的大面积种植已有数年,食用转基因食品的人群至少有10亿之多,但至今仍未有转基因食品对生命造成危害的实例;更何况目前每一种基因工程食品在上市前,都要经过国家法律认可,食品卫生部门和环境部门的严格检测。

只有测试合格了,才能投放市场。

因此公众完全可以安全地消费、大胆地食用转基因食品。

基因工程原理习题参考答案

基因工程原理习题参考答案

基因工程原理习题集参考答案一、名词解释1、DNA分子克隆技术:克隆,指含有单一的DNA重组体的无性繁殖系,或指将DNA重组体引入宿主细胞建立无性繁殖系的过程。

DNA分子克隆技术也称基因克隆技术,是在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接,转入细胞获得大量拷贝的过程。

其基本步骤包括:制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接,制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。

载体在细胞内自我复制,并带动重组的分子片段共同增殖,从而产生大量的DNA分子片段。

主要目的是获得某一基因或DNA片段的大量拷贝,有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆,就可以深入分析基因的结构与功能,随着引入的DNA片段不同,有两种DNA库,一种是基因组文库,另一种是cDNA库。

2、分子杂交:两条不同来源的DNA(或RNA)链或DNA与RNA之间存在互补顺序时,在一定条件下可以发生互补配对形成双螺旋分子,这种分子称为杂交分子。

形成杂交分子的过程称为分子杂交。

3、限制性片段长度多态性:从不同个体制备的DNA,使用同一种限制性内切酶酶切,切得的片段长度各不相同。

酶切片段的长度可以作为物理图谱或者连接图谱中的标记子。

通常是在酶切位点处发生突变而引发的。

4、报告基因:一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个表达产物非常容易被鉴定的基因、5、多聚酶链式反应(PCR):一种体外扩增DNA的方法。

PCR使用一种耐热的多聚酶,以及两个单链引物。

以过高温变性将模板DNA分离成两条链。

低温退火使得引物和一条模板单链结合,然后是中温延伸,反应液的游离核苷酸紧接着引物从5/端到3/端合成一条互补的新链。

而新合成的DNA又可以继续进行上述循环,因此DNA的数目不断倍增。

6、核酸的凝胶电泳:将某种分子放到特定的电场中,它就会以一定的速度向适当的电极移动。

某物质在电场作用下的迁移速度叫做电泳的迁移率,它与电场强度成正比,与该分子所携带的净电荷数成正比,而与分子的摩擦系数成反比(分子大小、极性、介质的粘度系数等)。

《基因工程》习题及参考答案

《基因工程》习题及参考答案

《基因工程》习题及参考答案一、习题:1. What are biotechnology and genetic engineering?2. What is a gene?3. What are genetically engineered medicines?4. What do genome research and human genetics deal with?5. What potentials are held out by genetic diagnosis?6. What options are given by gene therapy?7. What is an embryo - and what is a fetus?8 What is a genetic fingerprint?9 What does the term "therapeutic cloning" mean?10 What are stem cells?11 What is a transgenic organism?12 What does xenotransplantation mean?13 How will genetic engineering be used in agriculture?14 How are genetically modified organisms assessed?15 What does the German Embryo Protection Act regulate?16. What is a genome?17. Is there a risk of bioterrorism?18. How does genetic engineering affect the environment?19. Are genetically engineered crops good for farmers?20.What is the difference between restriction digestion and restriction mapping?21.Can you combine two different restriction enzymes in the same reaction tubes todigest the DNA molecules?22.Why should we need to generate restriction mapping data?23.How many restriction enzymes available now on the market?24.Why do you consider mutagenesis in vitro as one of the most critical techniquesfor us to understand in genetic engineering class?25.How do we choose the methods for DNA modification?26.How do we choose a gene expression system?27.How can we express eukaryotic gene in E.coli?28.What should we consider before we start the recombinant protein expressionexperiment?29.What is the advantage of yeast expression system?30.What is the advantage of insect expression system?31.Why there are so many different types of vectors available for cloning?32.What is the difference between cloning vector and expression vector?33.What is a genetic fingerprint?34. 基因具体分成多少种类?35. 什么叫印记基因?36.什么叫遗传漂变?37.人类基因组图谱和初步分析结果是在哪一年公布的?38.人类基因组共有多少基因?39. 克隆羊成功的技术关键是什么?40. 有人计划将两个不同物种的动植物体细胞进行融合,然后将融合体的核移植到其中一种生物的未受精卵细胞中,进行体细胞克隆。

人教版高二生物选修3教案:专题1 基因工程 Word版含答案 Word版含答案

人教版高二生物选修3教案:专题1 基因工程 Word版含答案 Word版含答案

专题1 基因工程20世纪70年代诞生的基因工程,已经成为生命科学中最具活力的前沿领域之一。

在必修课中已经学习过关于基因工程的基础知识,本专题在必修课基础上,引导学生深入了解基因工程的基本原理和技术流程,了解基因工程在农业、医疗、环境保护等方面的广泛应用及其发展前景,以拓展学生的科技视野,提高他们对生物科学技术的兴趣。

本专题教材分析一、教学目的要求知识方面1.简述基础理论研究和技术进步催生了基因工程。

2.简述基因工程的原理及技术。

3.举例说出基因工程的应用。

4.简述蛋白质工程。

情感态度与价值观方面1. 关注基因工程的发展。

2. 认同基因工程的应用促进生产力的提高。

能力方面1.运用所学DNA重组技术的知识,模拟制作重组DNA模型。

2.尝试运用基因工程原理,提出解决某一实际问题的方案。

3.通过讨论、进展追踪等活动,提高收集资料、处理资料、撰写专题综述报告的能力。

基因工程属于生物科技前沿的内容,这一专题的教学,首先要考虑基础性。

高中阶段的教学不是培养专家,而是要全面提高学生的科学素养,因此,着力点应瞄准对学生的发展起根本作用的知识、能力、思想情感上。

忽视了这一点,而一味追求知识的深和透,就会本末倒置,影响学生的全面发展。

本专题教学的另一个重要原则就是要在学生原有的知识、经验基础上提升。

违背了渐进性,易使学生认为“基因工程难学”而产生“危乎高哉”的想法,望而却步。

紧密联系学生已有的经验、生活阅历,尽量紧密联系必修课中的基础知识,一步步引领学生登上这一科技前沿的舞台,学生们才会心驰神往地投入到学习中来。

在学习本专题内容时,不能忽视知识与能力、情感态度与价值观的有机结合。

情感态度与价值观是学习的动力,要利用国际上重大科技成果的素材,开阔学生的视野,增强他们奋发图强的紧迫感;利用国内重大科技成果的素材,培养他们自强不息的民族精神,从而唤起他们学习的积极性。

二、教学内容的结构和特点(一)教学内容的特点本专题的内容由题图、《科技探索之路》和四节内容构成。

《基因工程》各章内容及参考答案(42页).docx

《基因工程》各章内容及参考答案(42页).docx

复习题1 (包括分子生物学基础知识)(请各位同学将所有题目翻译成英文后再做!)一、解释下列名词1.Gene manipulation2.Promotor3.Cloning:4.Subcloning二、填空题:将下列各题空缺部分的答案填在后面的方框内,两者用“;”隔开。

1.基因操作(Gene manipulation)的核心部分是基因克隆(gene cloning), gene cloning的基本要点有(),()和()。

2.()是遗传物质的基木单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。

它可以是连续的,也可以是();可以是(),也可以是RNA;可以存在于染色体上,也可以()3.基因操作并不是一个法律概念,除了包括基因克隆外,还包括基因的()、()、()和()等与基因研究相关的内容。

4.启动子(Promo(or)是指()。

通常一个Gene是否表达,()是关键的一步,是起决定作用的。

在转录过程屮,Promoter还是()的结合位点。

5.原核生物的RNApolymerase主要由两部分组成:()和(),其屮。

■因子并不参与RNA 的合成,它的作用主要是()。

6.从()到()的这一段距离称为一个转录单位,或者一个转录产物,其屮可包括一个或者多个Gene。

7.转录终止子主要有两种,一种是(),另一种是()。

8.重叠基因(Overlapping gene)是指(),间隔基因(Interrupted gene)是指()三、选择题:从备选答案中选出正确的结果,正确答案是唯一的。

四、简答题:1.简述基因克隆的两个基本特征?参考答案:基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸分子(一般情况下都是DNA)在不同宿主屮的繁殖,打破自然种的界限将来自于不相关物种的基因放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征,基因操作的另一个重要特征是繁殖。

2.什么是gene cloning ?什么是亚克隆(subcloning) ?参考答案:基因克降:一定程度上等同于基因的分离,即从复杂的生物体基因组中,经过酶切,消化等步骤,分离带有目的基因的DNA片段。

厦门大学基因工程课后思考题

厦门大学基因工程课后思考题

第一章核酸的制备1.名词解释:脱氧核糖核酸:核糖核酸:ccc-DNA:当两条多核苷酸链均保持着完整的环形结构时,称为共价闭合环形DNA(cccDNA)oc-DNA:如果两条核苷酸链中只有一条保持着完整的环形结构,另一条链出现一至数个缺口时,称为开环DNA(ocDNA)l-DNA,:发生双链断裂而形成线性分子(L—DNA),L构型DNA变性:双联变成单链DNA复性:单链又变成双链PCR, 模板,引物2.分别阐述用CTAB裂解法,SDS裂解法,碘化钠裂解法以及蛋白酶K裂解法和溶菌酶裂解法裂解细胞的依据。

溶菌酶:破坏细胞的细胞壁肽聚糖骨架,在内部渗透压的作用下使得细胞胀破。

CTAB裂解法:CTAB作为离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚SDS裂解法:利用中性去污剂NP-40破坏全血的红细胞膜,离心弃去溶血液,收集白细胞沉淀,加入去污剂SDS以破坏白细胞核膜,并使核蛋白解离,再加入高浓度的NaCl使DNA溶解,同时使蛋白盐析。

通过离心收集水相,加2——2.5倍体积的无水乙醇,沉淀DNA碘化钠裂解法:低渗破坏细胞,碘化钠破坏核膜蛋白酶K裂解法:蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,用于生物样品中蛋白质的一般降解3.用于检测样品纯度和浓度的方法有哪些?简述个各方法的基本原理。

电泳、OD值、荧光定量法第二章基因工程工具酶1.名词解释:限制性内切核酸酶:在DNA上核苷酸的特定连接处以特定的方式把DNA双链切开DNA连接酶:催化DNA上裂口两侧(相邻)核苷酸裸露的3'羟基和5'磷酸之间形成共价结合的磷酸二酯键,使断开的DNA•裂口连接起来逆转录酶:依赖于RNA的DNA聚合酶DNA聚合酶:是一类催化DNA合成的酶类,酶的作用需要DNA或RNA作为模板,合成DNA链的序列与模板的序列互补Klenow片段(Klenow酶):大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理,获得N端三分之二的大肽段,即Klenow 酶限制性图谱(物理图谱):描述染色体上限制性内切酶切割位点之间距离和顺序的图谱,通常以DNA的长度来代表距离,因此为遗传物质提供了物理图谱。

基因工程思考题答案

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基因工程思考㼵答案一、填空题1.702.(1)分子水平上的操作;(2)细胞水平上的表达3.克隆基因的类型;受体的选择;载体的选择4.限制性酶切图谱5.属名的第一个字母;种名的前两个字母;株名6.(1)减少酶量;(2)缩短反应时间;(3)增大反应体积7.EcoK;EcoRl8.GGCC;异源同工酶(同裂酶)9.枯草杆菌蛋白酶;(1)5'-3'合成酶的活性;(2)3'-5'外切核酸酶10.碱性磷酸酶;5’端的磷酸基团11.Ca2+13.DNA聚合酶I:5'一3'外切核酸酶;5'一3'合成酶14.S1核酸酶切割;DNA聚合酶补平15.核酸水解酶H;RNA16.质粒DNA;病毒DNA;质粒和病毒DNA杂合体17.复制区:含有复制起点;选择标记:主要是抗性基因;克隆位点:便于外源DNA的插入18.质粒消除(或治愈)19,pMBl;pSCl01;pSF2124(R质粒)20.1000kb;300kb21. 严紧22.pBR322和M13;pMBl;转座子23.它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DNA的扩增;对某些噬菌体(如λ噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽24.没有合适的限制性内切核酸酶识别位点;选择标记25.质粒;λ噬菌体;4526.(1)分子量大,(2)酶的多切点,(3)无选择标记27.复制区;IG区28.75%~105%29.螯合Mg2+离子,抑制核酸酶的活性30.中和DNA分子的负电荷,增加DNA分子间的凝聚力31.(1)合成探针;(2)合成cDNA;(3)用于PCR反应;(4)进行序列分析32.T—载体33.第二链合成时形成的发夹环34.乙醇使DNA分子脱水35.(1)保持正确的可读框(2)能够使其转录的启动子(3)具有翻译的起始和终止信号36.接受外源DNA的生理状态37.(1)黏性末端连接;(2)平末端连接;(3)同聚物接尾连接;(4)接头连接法38.基因组DNA克隆;基因组DNA文库39.cDNA克隆;cDNA文库40.聚合酶链式反应(PCR)41.0︒C;42︒C42.(1)遗传学方法;(2)物理筛选法;(3)核酸杂交法;(4)表达产物分析法43.插入外源片段的种类较多,大小又极为相似的重组体的筛选44.基因组DNA;cDNA45.Klenow酶填补的方法;T4DNA聚合酶46.(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针;(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针;(3)用不对称PCR合成单链DNA探针47.外源基因是否进行了转录48.两种不同的细胞群体能够表达不同的基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中不能表达这些基因49.Northern印迹50.Southern印迹51.5’→3’合成酶;3’ →5’外切核酸酶52.(1)克隆的是完整的基因;(2)使用的是表达载体;(3)不含内含子53.(1)印迹的对象不同:Northern是RNA,Southern是DNA;(2)电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条件54.(1)抗体能够被吸附到固体支持物上;(2)同一个抗原可以同几种抗体结合;(3)抗体能够被标记二、选择题(单选或多选)1.c;2.c;3.b;4.b 5.b,C,d,e;6.c;7.b;8.d;9.d;10.B;11.a;12.a;13.d;14.b 15.d;16.c;17.a,b;18.a;19.c;20.d;21.c;22.C;23.b;24.C;25.d;26.a,C,d;27.b;28.c;29.b;30.a;31.c;32.a,c,d,e,33.a,b,c;34.b;35.c;36.c;37.d;38.b;39.c;40.a;41.c;42.a,b,c;43.b;44.b;45.d;46.a;47.a;48.c;49.c;50.b;51.c;52.c;53.b;54.a,c,d;55.a;56.b;57.a,b;58.c;59.a;60.d;61.b;62.c;三、简答题1.答:Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上:(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5'端向3'端聚合(DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程);(2)可延伸的引物必须能提供游离的3'羟基末端,双脱氧核苷酸由于缺少游离的3'羟基末端,因此会终止聚合反应的进行。

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基因工程思考㼵答案一、填空题1.702.(1)分子水平上的操作;(2)细胞水平上的表达3.克隆基因的类型;受体的选择;载体的选择4.限制性酶切图谱5.属名的第一个字母;种名的前两个字母;株名6.(1)减少酶量;(2)缩短反应时间;(3)增大反应体积7.EcoK;EcoRl8.GGCC;异源同工酶(同裂酶)9.枯草杆菌蛋白酶;(1)5'-3'合成酶的活性;(2)3'-5'外切核酸酶10.碱性磷酸酶;5’端的磷酸基团11.Ca2+13.DNA聚合酶I:5'一3'外切核酸酶;5'一3'合成酶14.S1核酸酶切割;DNA聚合酶补平15.核酸水解酶H;RNA16.质粒DNA;病毒DNA;质粒和病毒DNA杂合体17.复制区:含有复制起点;选择标记:主要是抗性基因;克隆位点:便于外源DNA的插入18.质粒消除(或治愈)19,pMBl;pSCl01;pSF2124(R质粒)20.1000kb;300kb21. 严紧22.pBR322和M13;pMBl;转座子23.它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DNA的扩增;对某些噬菌体(如λ噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽24.没有合适的限制性内切核酸酶识别位点;选择标记25.质粒;λ噬菌体;4526.(1)分子量大,(2)酶的多切点,(3)无选择标记27.复制区;IG区28.75%~105%29.螯合Mg2+离子,抑制核酸酶的活性30.中和DNA分子的负电荷,增加DNA分子间的凝聚力31.(1)合成探针;(2)合成cDNA;(3)用于PCR反应;(4)进行序列分析32.T—载体33.第二链合成时形成的发夹环34.乙醇使DNA分子脱水35.(1)保持正确的可读框(2)能够使其转录的启动子(3)具有翻译的起始和终止信号36.接受外源DNA的生理状态37.(1)黏性末端连接;(2)平末端连接;(3)同聚物接尾连接;(4)接头连接法38.基因组DNA克隆;基因组DNA文库39.cDNA克隆;cDNA文库40.聚合酶链式反应(PCR)41.0︒C;42︒C42.(1)遗传学方法;(2)物理筛选法;(3)核酸杂交法;(4)表达产物分析法43.插入外源片段的种类较多,大小又极为相似的重组体的筛选44.基因组DNA;cDNA45.Klenow酶填补的方法;T4DNA聚合酶46.(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针;(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针;(3)用不对称PCR合成单链DNA探针47.外源基因是否进行了转录48.两种不同的细胞群体能够表达不同的基因,即在一个群体中能够表达一些基因,而在另一个细胞群体中不能表达这些基因49.Northern印迹50.Southern印迹51.5’→3’合成酶;3’ →5’外切核酸酶52.(1)克隆的是完整的基因;(2)使用的是表达载体;(3)不含内含子53.(1)印迹的对象不同:Northern是RNA,Southern是DNA;(2)电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条件54.(1)抗体能够被吸附到固体支持物上;(2)同一个抗原可以同几种抗体结合;(3)抗体能够被标记二、选择题(单选或多选)1.c;2.c;3.b;4.b 5.b,C,d,e;6.c;7.b;8.d;9.d;10.B;11.a;12.a;13.d;14.b 15.d;16.c;17.a,b;18.a;19.c;20.d;21.c;22.C;23.b;24.C;25.d;26.a,C,d;27.b;28.c;29.b;30.a;31.c;32.a,c,d,e,33.a,b,c;34.b;35.c;36.c;37.d;38.b;39.c;40.a;41.c;42.a,b,c;43.b;44.b;45.d;46.a;47.a;48.c;49.c;50.b;51.c;52.c;53.b;54.a,c,d;55.a;56.b;57.a,b;58.c;59.a;60.d;61.b;62.c;三、简答题1.答:Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上:(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5'端向3'端聚合(DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程);(2)可延伸的引物必须能提供游离的3'羟基末端,双脱氧核苷酸由于缺少游离的3'羟基末端,因此会终止聚合反应的进行。

基因工程课后习题答案

基因工程课后习题答案

2.质粒DNA和病毒(噬菌体)DNA作为载体的主要特征是什么为外源基因提供进入受体细胞的转移能力;为外源基因提供在受体细胞中的复制能力或整合能力;为外源基因提供在受体细胞中的扩增和表达能力;具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点,具有合适的选择标记3.如何理解质粒的不相容性及其在DNA重组克隆过程中的运用意义质粒的不相容性:具有相同或相似复制子结构及调控模式的两种不同的质粒不能稳定存在于同一受体细胞内.4.列举表达质粒、穿梭质粒、探针质粒和cos质粒的不同用途表达质粒:在多克隆位点的上下游分别装有两套转录效率较高的启动子、合适的核糖体结合位点序列(SD)序列以及强有力的终止子结构,使得克隆在合适位点上的任何外源基因均能在受体细胞中高效表达。

穿梭质粒:质粒分子上含有两个亲缘关系不同的复制子以及相应的选择性标记,能在两种不同的受体细胞中复制并检测。

探针质粒:用来筛选克隆基因的表达调控元件。

通常含有报告基因,但缺少相应的调控序列(如启动子或终止子),只有含有启动子或终止子的调控序列被克隆进入载体后,报告基因才能别表达,表达量的大小直接反应了克隆进入的调控元件的强弱。

cos质粒:人工构建的含有λDNA的cos位点序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体。

具有大的装载量,可以用于构建基因组文库。

5. II类限制性核酸内切酶的主要酶学特征是什么分子量较小的单体蛋白,双链识别和切割活性仅需Mg2+,识别位点为4-6个bp的回文序列,切割位点在识别序列中或靠近识别序列7. KLenow酶与大肠杆菌DNA聚合酶I在结构和功能上的主要区别DNA聚合酶I包括大片段(klenow片段)和小片段功能上:DNA聚合酶I比klenow酶多了5’→3’核酸外切酶活性,两者都具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性。

8.影响限制性核酸内切酶活性的主要因素有哪些?温度、盐度等物理因素,DNA样品纯度,DNA甲基化程度,限制性核酸内切酶的缓冲液性质,甘油和微量的金属离子会抑制限制性内切酶的活性9.如何理解粘性末端比平头末端更容易连接在退火条件下,粘性末端的连接为分子内反应,平头末端是分子间反应,平头末端的连接反应更加复杂,速度也慢。

(完整版)基因工程思考题答案--删减后学习

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(完整版)基因工程思考题答案--删减后学习第二章1. 名词解释(1)顺反子(cistron):基因所对应的一段核苷酸序列被称为顺反子(cistron),一个顺反子编码一种完整的多肽链。

它是遗传的功能单位。

(3)转位因子(transposable elements):是指可以从染色体基因组上的位置转移到另一个位置,甚至在不同的染色体之间跃迁的基因成分。

(4)基因组(genome):细胞中,一套完整单倍体的遗传物质的总合。

(5)启动子(promoter):是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并能起始转录的序列,其大小不等,具有转录目标基因的mRNA 的功能。

启动子是基因表达不可缺少的重要元件。

(6)基因(gene),基因是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。

(7)顺反子(cistron):基因所对应的一段核苷酸序列被称为顺反子(cistron),一个顺反子编码一种完整的多肽链。

它是遗传的功能单位。

(8)终止子(terminator),在基因3 端下游外侧与终止密码子相邻的一段非编码的核苷酸短序列,具有终止转录的功能,叫做终止子(terminator)。

(9)断裂基因(split gene),真核生物的结构基因是不连续的,编码氨基酸的序列被非编码序列所打断,因而被称为断裂基因(split gene)。

在编码序列之间的序列称为内含子(intron),被分隔开的编码序列称为外显子(exon)。

(10)顺式作用元件(cis-acting elements),指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的DNA序列。

包括启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件等。

(11)反式作用因子(trans-acting elements),可结合顺式作用元件而调节基因转录活性的蛋白质因子称为反式作用因子(trans-acting elements)。

《基因工程》思考题

《基因工程》思考题

基因工程》双语课每章思考题第一章1什么是基因工程?2基因工程的操作步骤有哪些?3基因工程的应用范围?基因操作可以应用在哪些领域?4什么是GMO?5在基因工程领域有重要贡献的科学家有哪些?试例举三位及其贡献。

6基因工程的三个发展阶段?第二章1 DNA、RNA勺主要区别?2 DNA (or RNA )的组成?3 DNA变性概念及诱发因素。

4中心法则的主要内容。

5遗传密码子的概念。

6基因的概念、类型。

7基因的表达。

8原(真)核生物基因的结构及区别。

9遗传物质及其相互联系。

10某研究小组对一个克隆的DNA序列(非模板)进行测序,其碱基顺序(假定)如下:5* ・CCGGCGGCAATGGCGGCGTCGGCGACCCAGGAGGCCGACTAA'CGGACCG ・3(1 )请写出模板链的碱基顺序及转录的碱基序列(2) 翻译从何处开始、何处结束(3) 可能编码的氨基酸序列(4) 如果基因突变,那部分区段变异会影响该基因编码和蛋白质功能(密码子见下表)1 DNA提取的三个基本条件。

2在DNA提取中,酚/仿提抽的目的是什么?3纯化DNA或RNA时,通常将DNA溶解在哪种物质中,为什么?4利用紫外分光光度比值来确定提取的DNA或RNA纯度时:当A26O=1时,相当于』有g?ml dsDNA或卩g?ml ddDNA'当AQ60/A280=1 .8时,为较纯的,当A260/ A 280 =2.0时,为纯当A260/ A 280>2.0有杂质,当A260/ A 280<1 .8有残留的物质5请简述Southern杂交的原理和过程6 请简述Southern Blotting、Northern Blotting 和Western Blotting 的区别?7请简述核酸电泳的原理。

第四章1限制性核酸内切酶三种类型的特点?为什么基因工程中需选II型酶。

2 Type II restriction endonucleases 的命名原则。

【人教版】生物选修三:1.3《基因工程的应用》课后习题(含答案)(K12教育文档)

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【人教版】生物选修三:1.3《基因工程的应用》课后习题(含答案)(word版可编辑修改)【优化设计】2018-2019学年高中生物 1。

3基因工程的应用课后习题新人教版选修3课时演练·促提升A。

黑麦与六倍体普通小麦杂交,杂种通过秋水仙素或低温处理得到八倍体小黑麦B.将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌,获得能产生人干扰素的菌株C.用紫外线照射青霉菌,使其DNA发生改变,通过筛选获得青霉素高产菌株D。

自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上解析:A选项八倍体小黑麦的培育利用的是染色体变异。

C选项利用的原理是基因突变。

D选项属于基因重组,但是发生在自然条件下,不符合基因工程“按照人们的愿望,进行严格的设计”的概念。

答案:B2。

下列关于基因工程的说法中,正确的是( )A.基因工程的设计和施工是在细胞水平上进行的B。

基因工程都是在生物体外完成的C。

基因工程是对蛋白质进行的操作D。

基因工程能打破物种间的界限,定向改造生物性状解析:基因工程是DNA分子水平上进行设计和施工的。

基因工程实验思考题---精品资料

基因工程实验思考题---精品资料

基因工程实验思考题---精品资料基因工程实验课程思考题1.如何正确使用微量移液器?2.如何准备基因操作中的吸头、eppendorf管等器具,在使用使这些东西时应注意什么?3.提染色体DNA的基本原理是什么?在操作中应注意什么?4.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么?5.进行DNA抽提,为什么用pH8.0的Tris水溶液饱和苯酚,显红色的苯酚可否使用,如何保护苯酚不被空气氧化?6.在基因工程操作中酚、氯仿的作用是什么?7.如何检测和保证DNA的质量?8.如果电泳中发现DNA几乎不移动,你认为可能是什么原因?9.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响?10.如何制备核酸琼脂糖凝胶,操作中应注意什么?11.核酸电泳中上样缓冲液主要成分与作用是什么?12.进行RNA凝胶电泳时应注意什么问题?13.说明在RNA电泳中添加甲醛的目的。

14.如何判断RNA的完整性?15.质粒的基本性质有哪些?质粒载体与天然质粒相比有哪些改进?16.抽提质粒的基本原理是什么?17.在碱法提取质粒DNA操作过程中应注意哪些问题?18.质粒抽提实验中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各有什么作用。

19.什么是质粒多克隆位点(MCS)?20.从溶液中回收DNA时,可以用酒精或异丙醇进行DNA的沉淀,酒精或异丙醇沉淀DNA各有什么不同。

21.用氯仿/异戊醇除去蛋白等作用时,其中异戊醇起什么作用?22.克隆质粒与表达质粒有什么异同点。

23.你认为抽提质粒的关键步骤是哪几步?24.在进行DNA重组实验中,有一同学试图利用提取染色体DNA 的试剂和方法从细菌细胞中提取质粒。

利用你现有的知识,请你给他参谋一下,他的这种设想是否可行?如果采用提取染色体DNA的试剂和方法,最后得到的是什么样品?25.有人利用转接后2小时的培养物进行质粒的提取,你认为会出现什么问题?26.什么是穿梭质粒,在遗传结构上有何特点?27.使用溴化乙锭时应注意什么?28.根据OD260/OD280值如何来判断DNA溶液的纯度?29.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响?30.细菌产生的限制性内切酶,为什么不对自己的DNA发生切割作用呢?31.影响限制性内切酶酶切的因素有哪些?在使用工具酶使应注意些什么?32.如果一个DNA酶解液在电泳后发现DNA未被切动,你认为可能是什么原因?33.简述II型限制性内切酶的命名与写法以及在基因工程中作用及特点。

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第二章1. 名词解释(1)顺反子(cistron):基因所对应的一段核苷酸序列被称为顺反子(cistron),一个顺反子编码一种完整的多肽链。

它是遗传的功能单位。

(3)转位因子(transposable elements):是指可以从染色体基因组上的位置转移到另一个位置,甚至在不同的染色体之间跃迁的基因成分。

(4)基因组(genome):细胞中,一套完整单倍体的遗传物质的总合。

(5)启动子(promoter):是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并能起始转录的序列,其大小不等,具有转录目标基因的mRNA的功能。

启动子是基因表达不可缺少的重要元件。

(6)基因(gene),基因是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。

(7)顺反子(cistron):基因所对应的一段核苷酸序列被称为顺反子(cistron),一个顺反子编码一种完整的多肽链。

它是遗传的功能单位。

(8)终止子(terminator),在基因3端下游外侧与终止密码子相邻的一段非编码的核苷酸短序列,具有终止转录的功能,叫做终止子(terminator)。

(9)断裂基因(split gene),真核生物的结构基因是不连续的,编码氨基酸的序列被非编码序列所打断,因而被称为断裂基因(split gene)。

在编码序列之间的序列称为内含子(intron),被分隔开的编码序列称为外显子(exon)。

(10)顺式作用元件(cis-acting elements),指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的DNA序列。

包括启动子、上游启动子元件、增强子、加尾信号和一些反应元件等。

(11)反式作用因子(trans-acting elements),可结合顺式作用元件而调节基因转录活性的蛋白质因子称为反式作用因子(trans-acting elements)。

(13)反应元件(response elements),是一类能介导基因对细胞外的某种信号产生反应的DNA序列,被称为反应元件(response elements)。

(14)增强子(enhancer),是一段DNA序列,其中含有多个能被反式作用因子识别与结合的顺式作用元件,反应作用因子与这些元件结合后能够调控(通常为增强)邻近基因的转录。

(15)转位因子(transposable elements):是指可以从染色体基因组上的位置转移到另一个位置,甚至在不同的染色体之间跃迁的基因成分。

(16)转座子(transposon,Tn),是一类较大的可移动成分,它是由几个基因组成的特定的DNA片段,除有关转座的基因外,至少带有一个与转座作用无关并决定宿主性状的基因(如抗药性基因)。

(17)假基因(pseudogene),假基因是多基因家族中的成员,因其碱基顺序发生某些突变而失去功能,不能表达或表达异常,生成无生物活性的多肽。

(18)重叠基因(overlapping genes),或嵌套基因(nested genes),是指基因的核苷酸序列(或阅读框)是彼此重叠的基因,称为重叠基因或嵌套基因。

(19)基因家族(gene family),就是指核苷酸序列或编码产物的结构具有一定程度同源性的一组基因。

(20)反向重复序列,是指两个顺序相同的拷贝在DNA链上呈反向排列。

有两种形式,一种形式是两个反向排列的拷贝之间隔着一段间隔序列;另一种形式是两个拷贝反向串联在一起,中间没有间隔序列,这种结构亦称回文结构(palindrome)。

(21)看家基因(housekeeping gene),在几乎所有细胞中或发育过程中持续表达的基因,被称为看家基因。

(22)锌指(zinc fingers)结构,由约30个氨基酸残基组成的一段多肽序列,其中 4个氨基酸残基(两个是半脱氨酸两个是组氨酸,或4个都是半脱氨酸)以配位键与Zn2+相互结合,形成指状结构,常存在于真核转录因子的DNA结合结构域中。

(23)亮氨酸拉链(leucine zippers),是指在一段肽链中每隔7个氨基酸残基就有一个亮氨酸残基,这段肽链所形成的α-螺旋就会出现一个由亮氨酸残基组成的疏水面,而另一面则是由亲水性氨基酸残基所构成的亲水面。

由亮氨酸残基组成的疏水面即为亮氨酸拉链条,两个具有亮氨酸拉链条的反式作用因子,能借疏水作用形成二聚体。

(24)基因重排(gene rearangement),是指某些基因片段改变原来存在顺序,通过调整有关基因片段的衔接顺序,重新组成为一个完整的转录单位。

(25)RNA编辑(RNA editing),是一种较为独特的遗传信息加工的方式,即转录后的mRNA在编码区发生核苷酸改变的现象,是在RNA分子上出现的一种修饰现象。

(26)分子伴侣(molecular chaperone),是指能帮助新生肽链折叠,使之成为成熟蛋白质,但本身并不参与共价反应的物质,大部分为蛋白质。

DNaseⅠ超敏位点(hypersensitive site):染色体DNA中转录较为活跃的区域,组蛋白相对缺乏,并对核酸酶(DNaseⅠ)高度敏感,故名。

2. 简述乳糖操纵子中CAP的正性调节作用机制。

降解物基因活化蛋白(catabolite gene activation protein,CAP)是一种同二聚体,其分子内有DNA结合区和cAMP结合位点。

CAP与cAMP 结合形成复合物才能刺激操纵子结构基因的转录。

当葡萄糖浓度低时,会使cAMP浓度升高,形成cAMP-CAP复合物,并与启动子上游的CAP位点结合,刺激RNA聚合酶的转录作用,使转录效率提高50倍,然而这种作用的前提条件是无阻遏效应存在。

当葡萄糖浓度较高时,cAMP浓度降低,cAMP 与CAP结合受阻,转录效率下降,由此可见,乳糖操纵子结构基因的高表达既需要有诱导剂的存在(消除阻遏效应),又要求无葡萄糖或低浓度葡萄糖的条件(促进cAMP-CAP复合物的形成,刺激转录)。

3. 比较原核基因组与真核基因组的结构与功能特点4. 简述真核表达调控的主要环节和调控方式。

(一)DNA水平的调控:(1)染色质结构对基因表达的调控作用,(2)基因修饰,(3)基因重排,(4)基因扩增。

(二)转录水平的调控(转录起始的调控)(1)反式作用因子的活性调节;(2)反式作用因子与顺式元件的结合;(3)反式作用因子的组合式调控作用(三)转录后水平调控(1)“加帽”和“加尾”的调控;(2)mRNA选择性剪接对表达的调控;(3)RNA编辑的调控;(4)mRNA转运调节(四)翻译水平的调控(1)翻译起始调控;(2)mRNA稳定性对翻译的影响(五)翻译后水平的调控(1)信号肽的切除;(2)新生肽链的修饰;(3) 肽链的剪接与正确折叠第三章1. 核酸分离纯化应注意哪些事项?一般的分离纯化分为哪些步骤?各步的要点是什么?分离纯化核酸应注意:①应保证核酸一级结构的完整性,防止降解;②排除其它分子的污染。

为了保证核酸结构与功能的研究,完整的一级结构是最基本的要求,因为遗传信息全部贮存在一级结构之内。

保持核酸的完整性,即保持其天然状态。

细胞内的核酸酶活力很高,在制取过程中必须防止核酸酶对核酸的降解。

③防止化学因素(酸碱等)和物理因素(高温或机械剪切等)引起核酸变性或破坏。

制备RNA要特别注意防止核酸酶的作用,因为RNase分布很广,活力很高;而对DNA更重要的是防止张力剪切作用,因为DNA分子特别长,容易断裂。

核酸的纯化:①首先是去除蛋白质。

要点:从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸,要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后,再用有机溶剂抽提。

从核酸溶液中去除蛋白质常用酚/氯仿抽提法,在氯仿中加入少许异戊醇的目的在于减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。

②用氯仿抽提处理,去除核酸溶液中的痕量酚。

要点:如果下一步骤中酶反应的条件要求严格,最可靠的方法是再用水饱和的乙醚抽提一次,以彻底去除核酸样品中的痕量酚与氯仿,然后在68℃水浴中放置10分钟使痕量乙醚蒸发掉。

6.PCR反应的基本原理是什么?每个循环包括哪些步骤?有何应用价值?PCR反应的基本原理:首先是双链DNA分子在临近沸点的温度下加热时便会分离成两条单链的DNA分子,然后DNA聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸(dNTPs)合成新生的DNA互补链。

此外,DNA聚合酶同样需要有一小段单链DNA来启动(“引导”)新链的合成。

每一个温度循环周期均是由高温变性、低温退火及适温延伸等三个步骤组成。

应用价值:PCR技术不仅可以用来扩增与分离目的基因,而且在临床医疗诊断、胎儿性别鉴定、癌症治疗的监控、基因突变与检测、分子进化研究,以及法医学等诸多领域都有着重要的应用。

9.PCR的引物设计应遵守哪些原则?如何对体系反应条件按优化?原则:①PCR引物合成的DNA片段通常长15~25碱基,其中G+C约占50%。

②在设计时必须特别注意引物之间不能互配形成双链结构,引物内部也不能形成发夹结构。

③引物的3’末端必须与目的片段完全相配。

④引物的5’末端可以不与目的片段互补,可以包含内切酶位点或启动子序列,但在下一轮反应中,这些序列会被同样合成。

有时在扩增仅知其表达产物的目的片段时,可以在引物中设计成简并密码子。

体系反应条件按优化:①首先是使模板DNA解离成为单链,这个过程可以通过加热完成,在90~95℃条件下,根据模板DNA复杂程度,调整变性温度和时间。

一般情况下选择94℃,30秒可使各种复杂的DNA分子完全变性。

过高温度或高温持续时间过长,会对Taq DNA聚合酶活性和dNTP 分子造成损害。

②变性后的DNA迅速冷却至40~60℃,可使引物和模板DNA 发生结合。

③复性温度的选择,可以根据引物的长度及其G+C含量确定。

长度在15~25bp之间时,引物的退火温度可通过Tm=4(G+C)+2(A+T)计算得到。

④PCR反应的延伸温度建议选择的70~75℃之间,此时,Taq DNA 聚合酶具有最高活性。

当引物在16个核苷酸以下时,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。

此时,可采用使反应温度缓慢升高到70~75℃的方法。

⑤PCR延伸反应的时间,可根据待扩增片段的长度而定,一般1kb 以内的片段,延伸时间1分钟即可;扩增片段在1kb以上则需加长延伸时间。

⑥其他参数选定后,PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。

理论上20~25次循环之后,PCR产物的积累即可达到最大值,实际操作中因此不管模板浓度是多少,20~30次是比较合理的循环次数。

10.解释以下名词:反向PCR,不对称PCR,反转录PCR,多重PCR反向PCR: 用于扩增位于靶DNA区段之外的两侧的未知DNA序列。

不对称PCR:可用于制备单链模板DNA。

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