去除核酸方法总结

去除核酸(DNA/RNA) 常用方法

FDA、SFDA对重组蛋白、vero细胞疫苗等生物制品的DNA残留均有严格要求，近年来包括大牌进口产品在内的狂犬疫苗DNA残留超标问题，引起了社会和业界的广泛关注。

为什么一个看似简单的问题，却给众多专业人员带来如此大的困扰？一方面是由于DNA超强的化学稳定性，另一方面是由于DNA其带有大量的电荷易与其他生物大分子结合从而产生聚集（吸附）、包裹作用而难以完全除去。

DNA的去除方法主要有层析、膜过滤、离心、沉淀、酶解等方法。这里对工业上应该最广泛和有效的离子交换层析、鱼精蛋白沉淀、酶解三类方法进行比较。

1.离子交换层析

DNA带有大量的负电荷，可以被阴离子交换剂吸附而除去（或用阳离子交换剂负吸附）。离子交换层析在生物制品的生产中广泛使用，负载量大、成本低廉，尤其工艺中本身具有这些步骤的情况，不需单独增加去除DNA的步骤，通过控制吸附、洗脱条件，就能取得良好的去除DNA的效果。

其缺点是在DNA残留要求较高的情况下难以达到。原因在于，当目标产物与DNA带有同种电荷时，分离较为困难；而当目标产物与DNA带相反电荷时，两者会发生聚集和包裹现象，影响去除效果。

2.鱼精蛋白沉淀

鱼精蛋白为碱性蛋白，带有大量的正电荷，能够与DNA结合生产沉淀，从而将DNA去除。该方法操作简便、迅速，能有效降低DNA 残留量。

其缺点主要有两个方面：一方面是与离子交换层析具有相同的缺点，在DNA 残留要求较高的情况下难以达到；另一方面是需要使用大量的鱼精蛋白，容易造成鱼精蛋白残留。

3.酶解

①DNase Ⅰ

DNase Ⅰ具有DNA酶活性而不具有RNA酶活性，主要用于RNA去除DNA，用于重组蛋白等去除DNA活性偏低，效果不理想。

②非限制性核酸内切酶

直到非限制性核酸内切的出现，DNA残留这一问题才得到很好的解决。非限制性核酸内切酶的典型代表有默克公司的Benzonase和国产Biolonase核酸酶。该类核酸内切酶能够降解各种形式DNA和RNA，对单链、双链、线状、环状和超螺旋形式的DNA和RNA的磷酸二酯键均具有很高的活性，产生5’-磷酸核苷酸或5’-磷酸寡核苷酸，且对核酸没有序列要求。是目前最有效的核酸去除方法。

Biolonase核酸酶是经蛋白质工程技术改造的源于Anabaena sp.非特异性核酸内切酶，产品质量达到同类进口产品水平，价格远低于进口产品，是去除DNA 最有效、经济的方法。

Biolonase具有多种规格的产品，除满足于常规去除核酸的Biolonase（纯度≥90％）外，还有满足于特殊要求的超纯Biolonase（纯度≥99％），此外高活力Biolonase更是达到500U/μl以上，相当于同类进口产品的两倍以上。

我个人认为国产的Biolonase核酸酶用于去除核酸较为理想,主要是价格较低,加上去除核酸彻底.比较适合我们这样的学校或者研发机构.