硕士生物仪器分析之液相色谱精品PPT课件
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《仪器分析》教案课件PPT-第5章 高效液相色谱法PPT文档
四、尺寸排阻色谱法（SEC） （sizeexclusionchromatography）
2017-动相为液体，固定相为固体吸附剂。根据不同组分在固定 相上的吸附能力不同而加以分离。
吸附剂
溶质 溶剂
2017-6-620
吸附剂
二、液液分配色谱法（LLC）
流动相和固定相都是液体。 分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异
第五章高效液相色谱法
HighPerformanceLiquidChromatography HPLC
气相色谱中的“气相”代表什么意思？ 气相色谱：流动相是气体 液相色谱：流动相是液体
2017-6-62
第一节高效液相色谱法的特点
一、高效液相色谱法（HPLC） 特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色 谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离 柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分
尺寸排阻色谱法的分离机制：体积排阻效应
样品分子 凝胶珠
流动相
溶质在两相间不 是靠其相互作用 力的不同来进行
分离； 而是按照分子大 小进行分离的； 大分子物质先洗 脱出来，小分子
2017-6-626物质后洗脱出来
孔道
凝胶珠内具有一定大小的孔穴， 体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早地被淋洗出 来； 中等体积的分子部分渗透；
2017-6-611
2017-6-612
2017-6-613
六通阀
高压泵
进样前
色谱柱
进样中 （Load）
进样后 （Inject）
4.色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件，柱内径 4.6mm或3.9mm，长度15～30cm，不 锈钢柱，填料颗粒5～10μm，柱效为 7000～10000理论塔板数/m。
2017-动相为液体，固定相为固体吸附剂。根据不同组分在固定 相上的吸附能力不同而加以分离。
吸附剂
溶质 溶剂
2017-6-620
吸附剂
二、液液分配色谱法（LLC）
流动相和固定相都是液体。 分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异
第五章高效液相色谱法
HighPerformanceLiquidChromatography HPLC
气相色谱中的“气相”代表什么意思？ 气相色谱：流动相是气体 液相色谱：流动相是液体
2017-6-62
第一节高效液相色谱法的特点
一、高效液相色谱法（HPLC） 特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色 谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离 柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分
尺寸排阻色谱法的分离机制：体积排阻效应
样品分子 凝胶珠
流动相
溶质在两相间不 是靠其相互作用 力的不同来进行
分离； 而是按照分子大 小进行分离的； 大分子物质先洗 脱出来，小分子
2017-6-626物质后洗脱出来
孔道
凝胶珠内具有一定大小的孔穴， 体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早地被淋洗出 来； 中等体积的分子部分渗透；
2017-6-611
2017-6-612
2017-6-613
六通阀
高压泵
进样前
色谱柱
进样中 （Load）
进样后 （Inject）
4.色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件，柱内径 4.6mm或3.9mm，长度15～30cm，不 锈钢柱，填料颗粒5～10μm，柱效为 7000～10000理论塔板数/m。
液相色谱分析仪法ppt课件
2021/6/6
精选课件
11
2. 液-液分配色谱 （liquid- liquid partition chromatography）
固定相与流动相均为液体，流动相与固定相之间应互不相溶（极性不 同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱 ，溶质在两相间进行分配。达到平衡时，服从于下式：
反相色谱法；由非极性固定相和极性流动相所组成的HPLC
体系，与正相HPLC体系正好相反。其代表性的固定相是 十八烷基键合硅胶(ODS柱、 C18、C8 ），代表性的流动 相是甲醇-水和乙腈-水或水的缓冲液。是当今液相色谱的最 主要分离模式。 适用于分离非极性和极性较弱的化合物。为控制样品在分 析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注 意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5（2~8），太 高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。
➢漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。主要由 于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳 定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下 来也会产生漂移。
➢拖尾因子(tailing factor，T)—T＝，用以衡量色谱 峰的对称性。也称为对称因子(symmetry factor) 或不对称因子(asymmetry factor)。《中国药典》 规定T应为0.95~1.05。T＜0.95为前延峰，T＞ 1.05为拖尾峰。
式中Cs、Cm分别是组分在固定相和流动相中溶 质的浓度。
2021/6/6
精选课件
25
2021/6/6
精选课件
9
按固定相性质及外形分类
• 柱色谱: 固定相装在柱管内的色谱分析法
• 纸色谱: 固定相为滤纸的色谱分析法
液相色谱PPT课件
11
溶剂等级
水的等级
纯化水 蒸馏水 去离子水
吸 光
去离子水
率 纯化水
波长 (nm) 因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高
纯化水中去除了无机和有机的污染物
12
HPLC用水可以通过以下几个方面来得到：
• 1 专门的纯水机或超纯水机； • 2 去离子水重蒸； • 3 二次或三次重蒸水； • 4 采用类似家用的纯水机； • 5 市场上瓶装的纯净水或蒸馏水； • 6 其它途径；
Modified Si
9
反相HPLC 色谱柱
C18 (ODS) type
C8 (octyl) type Non-polar property
C4 (butyl) type Phenyl type
-Si-C18H37
TMS type
Si
Cyano type
10
流动相
流动相选择注意事项： ▪纯度：采用“ HPLC ”级溶剂 ▪避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 ▪对试样有适宜的溶解度 ▪溶剂粘度要小 ▪与检测器相匹配 ▪流动相配制时的顺序
26
进样体积与响应值关系
检
测
器
响 应
部分注入
值
定量管体积的一半
18
进样器
▪ 自动进样器 ▪ 手动进样器
原理：（六通阀） 注入方式：
1）全量注入 2）部分注入
返回
19
HPLC六通阀进样器的使用及保养
• 六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是 由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。美国Rheodyne 公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以 此产品作为仪器的进样器。
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溶剂等级
水的等级
纯化水 蒸馏水 去离子水
吸 光
去离子水
率 纯化水
波长 (nm) 因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高
纯化水中去除了无机和有机的污染物
12
HPLC用水可以通过以下几个方面来得到：
• 1 专门的纯水机或超纯水机； • 2 去离子水重蒸； • 3 二次或三次重蒸水； • 4 采用类似家用的纯水机； • 5 市场上瓶装的纯净水或蒸馏水； • 6 其它途径；
Modified Si
9
反相HPLC 色谱柱
C18 (ODS) type
C8 (octyl) type Non-polar property
C4 (butyl) type Phenyl type
-Si-C18H37
TMS type
Si
Cyano type
10
流动相
流动相选择注意事项： ▪纯度：采用“ HPLC ”级溶剂 ▪避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 ▪对试样有适宜的溶解度 ▪溶剂粘度要小 ▪与检测器相匹配 ▪流动相配制时的顺序
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进样体积与响应值关系
检
测
器
响 应
部分注入
值
定量管体积的一半
18
进样器
▪ 自动进样器 ▪ 手动进样器
原理：（六通阀） 注入方式：
1）全量注入 2）部分注入
返回
19
HPLC六通阀进样器的使用及保养
• 六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是 由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。美国Rheodyne 公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以 此产品作为仪器的进样器。
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《液相色谱分析法》课件
液相色谱分析法
,
汇报人：
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理：对检测到的信号 进行处理，得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定 量结果，对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的 质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降 低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当 的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色 谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱 中分离，根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检 测器时，检测器对样品进 行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்
,
汇报人：
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理：对检测到的信号 进行处理，得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定 量结果，对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的 质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降 低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当 的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色 谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱 中分离，根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检 测器时，检测器对样品进 行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்
液相色谱仪ppt课件
2、高效液相色谱仪主要由高压输液泵、进样阀、柱子和检 测器等组成。
3、柱子的柱效（以理论板数计）很高，每米可达3万块以上。 一般只使用20～25cm长的柱子。由于填料的不断发展和 改 进 ， 目 前 最 短 的 柱 子 只 有 3 cm 长 ， 板 数 可 达 3 0 0 0 ～ 4000。已能够满足一般分析的需要，并具有很高的分析速 度。
①储液槽
储液槽是盛装溶剂的容器。它可以是一个普通的溶剂瓶，或是一个专门设 计的储液槽，用于除去溶剂中的气体。
②过滤器
各种泵的柱塞、进样阀的阀芯加工的精密度都非常高，微小的机械杂质将 导致这些部件的损坏，而不能很好的工作。同时杂质在柱头的积累还影响 柱子的使用，增大柱压，因此过滤溶剂，设置过滤器是必须的。
断更新，高效液相色谱目前已成为许多学科科学研
究和日常分析的重要手段。
可编辑课件PPT
2
பைடு நூலகம்、高效液相色谱法的特点
1、高效液相色谱可以分离分析高极性，高分子量和离子型 的各种物质，只要被分析对象能够溶解于可作为流动相的 溶剂中并能够被检测，就可以直接进行分析。某些目前尚 不能被直接检测，或检测灵敏度不够的，也可以采用各种 衍生技术，实现这些物质的检测。
过滤器的芯子通常是一个由多孔聚四氟乙烯制成的具有一定空隙度的圆柱 体，镶嵌在一个不锈钢的壳体中，形成一个完整的、安装方便的部件。
可编辑课件PPT
6
③高压输液泵
高压输液泵是现代液相色谱装置中最关键的设备，输 出高压溶剂是实现快速分析的前提。除了最高使用压 力外，还有线性流量范围，输出流量的精确度，泵的 操作方式，流量输出或压力恒定的稳定性，以及易于 操作和维修等。
的流动相一致，以防止溶剂变化出现不溶物而堵塞柱子。
3、柱子的柱效（以理论板数计）很高，每米可达3万块以上。 一般只使用20～25cm长的柱子。由于填料的不断发展和 改 进 ， 目 前 最 短 的 柱 子 只 有 3 cm 长 ， 板 数 可 达 3 0 0 0 ～ 4000。已能够满足一般分析的需要，并具有很高的分析速 度。
①储液槽
储液槽是盛装溶剂的容器。它可以是一个普通的溶剂瓶，或是一个专门设 计的储液槽，用于除去溶剂中的气体。
②过滤器
各种泵的柱塞、进样阀的阀芯加工的精密度都非常高，微小的机械杂质将 导致这些部件的损坏，而不能很好的工作。同时杂质在柱头的积累还影响 柱子的使用，增大柱压，因此过滤溶剂，设置过滤器是必须的。
断更新，高效液相色谱目前已成为许多学科科学研
究和日常分析的重要手段。
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2
பைடு நூலகம்、高效液相色谱法的特点
1、高效液相色谱可以分离分析高极性，高分子量和离子型 的各种物质，只要被分析对象能够溶解于可作为流动相的 溶剂中并能够被检测，就可以直接进行分析。某些目前尚 不能被直接检测，或检测灵敏度不够的，也可以采用各种 衍生技术，实现这些物质的检测。
过滤器的芯子通常是一个由多孔聚四氟乙烯制成的具有一定空隙度的圆柱 体，镶嵌在一个不锈钢的壳体中，形成一个完整的、安装方便的部件。
可编辑课件PPT
6
③高压输液泵
高压输液泵是现代液相色谱装置中最关键的设备，输 出高压溶剂是实现快速分析的前提。除了最高使用压 力外，还有线性流量范围，输出流量的精确度，泵的 操作方式，流量输出或压力恒定的稳定性，以及易于 操作和维修等。
的流动相一致，以防止溶剂变化出现不溶物而堵塞柱子。
《液相色谱技术》课件
通过液相色谱技术，可以检测环境中的有毒有害物质，如农药、酚类等，为环境治理和保护提供科学依据。
生态毒理学研究
液相色谱技术可以用于研究环境污染物对生物体的毒理学效应，有助于了解环境污染对生态系统的危害。
液相色谱技术的未来发展与挑战
高效液相色谱法（HPLC）
HPLC是液相色谱技术中的一种，具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点，被广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。随着技术的不断发展，HPLC的分离柱、检测器等关键部件也在不断改进，提高了分离效果和检测灵敏度。
智能化与自动化：随着机器人技术和自动化控制技术的发展，液相色谱技术的操作将更加智能化和自动化。未来的液相色谱仪将更加便捷、高效，能够实现自动化进样、自动优化分离条件等功能，大大提高分析效率。
感谢观看
THANKS
流动相的准备与更换
根据实验要求，准备好适量的流动相，并定期更换以保证实验结果的准确性。
定期清洗进样器、色谱柱和检测器，保持仪器表面清洁。
日常保养
定期校准
常见故障排除
对仪器进行定期校准，确保检测结果的准确性。
遇到问题时，应先检查电源、管线连接等基本情况，再根据仪器手册排查故障。
03
02
01
液相色谱技术的实验设计
色谱柱
检测色谱柱流出的组分，并将其转化为电信号，便于记录和检测。
检测器
用于采集、处理、分析和存储色谱数据。
数据处理系统
数据处理与分析
采集色谱数据，进行峰识别、定量和合适的流速、检测波长等参数，开始色谱分离。
进样
将样品注入进样器，设定进样量，启动进样程序。
准备工作
检查仪器是否正常，准备好流动相、色谱柱和样品。
样品前处理的挑战：液相色谱技术对于样品的要求较高，需要进行适当的前处理以去除杂质、提高分离效果。目前常用的样品前处理方法包括沉淀、萃取、吸附等，但这些方法操作繁琐、耗时长且效果不稳定。为解决这一问题，新型的样品前处理技术如固相萃取、免疫吸附等正在不断发展，以提高样品处理的效率和效果。
生态毒理学研究
液相色谱技术可以用于研究环境污染物对生物体的毒理学效应，有助于了解环境污染对生态系统的危害。
液相色谱技术的未来发展与挑战
高效液相色谱法（HPLC）
HPLC是液相色谱技术中的一种，具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点，被广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。随着技术的不断发展，HPLC的分离柱、检测器等关键部件也在不断改进，提高了分离效果和检测灵敏度。
智能化与自动化：随着机器人技术和自动化控制技术的发展，液相色谱技术的操作将更加智能化和自动化。未来的液相色谱仪将更加便捷、高效，能够实现自动化进样、自动优化分离条件等功能，大大提高分析效率。
感谢观看
THANKS
流动相的准备与更换
根据实验要求，准备好适量的流动相，并定期更换以保证实验结果的准确性。
定期清洗进样器、色谱柱和检测器，保持仪器表面清洁。
日常保养
定期校准
常见故障排除
对仪器进行定期校准，确保检测结果的准确性。
遇到问题时，应先检查电源、管线连接等基本情况，再根据仪器手册排查故障。
03
02
01
液相色谱技术的实验设计
色谱柱
检测色谱柱流出的组分，并将其转化为电信号，便于记录和检测。
检测器
用于采集、处理、分析和存储色谱数据。
数据处理系统
数据处理与分析
采集色谱数据，进行峰识别、定量和合适的流速、检测波长等参数，开始色谱分离。
进样
将样品注入进样器，设定进样量，启动进样程序。
准备工作
检查仪器是否正常，准备好流动相、色谱柱和样品。
样品前处理的挑战：液相色谱技术对于样品的要求较高，需要进行适当的前处理以去除杂质、提高分离效果。目前常用的样品前处理方法包括沉淀、萃取、吸附等，但这些方法操作繁琐、耗时长且效果不稳定。为解决这一问题，新型的样品前处理技术如固相萃取、免疫吸附等正在不断发展，以提高样品处理的效率和效果。
仪器分析科目学习PPT-液相色谱基础知识
液相色谱基础知识哈工大市政环境工程学院陈忠林色谱原理谱原Concentration in Phase A K=DConcentration in Phase B谱原色谱原理固定相流动相高效液相色谱是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借助溶质在两相之间的分配系数、亲和力、吸附能力、离子交换、分子大小引起的排分系数亲附能离子交换分子大引起排阻作用等差别使不同溶质进行分离（分离条件）。
分离过程受溶质在两相的扩散系数、固定相填料的颗粒大小、填充密度、流动相组成及流速等因素影响。
色谱原理--分离过程ISDC色谱参数--保留值保留时间t t R保留体积V R= t R ×,F, 死时间t M调整保留时间t`R= t R-t M调整`整保留体积V`R=`t`R ×F&提高选择性—改变色谱峰的间距&提高柱效—改变色谱峰的宽窄高峰窄液相色谱分析基本概念液相色谱(LC or HPLC)——以液相为流动相的色谱，或流动相为液体的色谱。
液液色谱——以一种液体作流动相，另种液体作固定相的色谱另一种液体作固定相的色谱。
——液固色谱以液体作流动相，以固体作固定相的色谱。
（俄国植物学家）液相色谱分析基本概念柱色谱——把固定相装在一根管把固定相装在根管子里（色谱柱），液体流动相流过色谱柱中的固定相过色谱柱中的固定相。
液相色谱分析基本概念平面色谱——纸色谱和薄层色谱(TLC:Thin Layer Chromatography)。
用滤纸或是涂在玻璃板（或铝箔）上的硅胶（或三氧化二铝等）作固定相利用滤三氧化二铝等）作固定相，利用滤纸或硅胶层的毛细管作用把流动相（溶剂或叫展开剂）从底端吸上来（溶剂或叫展开剂）从底端吸上来，使混合物得到分离。
液相色谱分析基本概念凝胶渗透色谱（GPC：Gel Permeation Chromatography）——是液相色谱的一Ch t h是液相色谱的个分支，以一定尺寸的多孔固体（凝胶）作固定相，以液体作流动相，按样品分作定液体作流动按样子尺寸大小进行分离的方法。
《液相色谱》PPT课件
HPLC Busin2e0s2s1D/e7p/t21
34
Shimadzu Corporation
色谱柱
ODS柱的使用注意点：
1）柱压低于150kgf/cm2（15cm色谱柱） 2）柱温在40℃左右，最高使用温度为50℃ 3）流动相PH使用范围为2～7.5
HPLC Busin2e0s2s1D/e7p/t21
Shimadzu Corporation
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30
进样器
▪ 自动进样器 ▪ 手动进样器
原理：（六通阀） 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入
HPLC Busin2e0s2s1D/e7p/t21
Shimadzu Corporation
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31
手动进样器的原理图
HPLC Busin2e0s2s1D/e7p/t21
HPLC Busin2e0s2s1D/e7p/t21
( column : ODS type )
26
Shimadzu Corporation
梯度洗脱
95%
浓 度
MeOH
30%
HPLC Busin2e0s2s1D/e7p/t21
27
Shimadzu Corporation
梯度洗脱：
优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和 提高分离精度
Shimadzu Corporation
装填状态
进样状态 返回
32
进样体积与响应值关系
检
测
器
响 应
部分注入
值
定量管体积的一半
全量注入 3倍定量管体积
HPLC Busin2e0s2s1D/e7p/t21
Shimadzu Corporation
《液相色谱法S》课件
根据分析需求，选择合适的流动相，并进行安装 。
调试仪器参数
根据实验条件，调整仪器参数，如流速、检测波 长等。
液相色谱法的实验操作
泵压设置
根据流动相的特性，设置 合适的泵压，确保流动相 稳定流动。
进样操作
将处理好的样品注入色谱 柱，开始进行分析。
数据采集
实时监测色谱图，记录所 需数据。
数据处理与分析
兽药残留检测
液相色谱法可检测动物性食品中兽药残留，防止兽药过量使用对人 体造成危害。
在环境监测中的应用
水质检测
01
液相色谱法可用于检测水体中的有机污染物、重金属离子等有
害物质。
大气污染监测
02
液相色谱法可分析空气中的挥发性有机物、气态污染物等，评
估大气环境质量。
土壤污染检测
03
液相色谱法可检测土壤中的农药残留、重金属等有害物质，为
固定相的粒径和装填密度也会影响分离效果，粒 径越小，装填密度越高，分离效果越好。
检测器
检测器用于检测色谱柱流出的组 分。
常用的检测器有紫外可见吸收光 谱、荧光光谱、质谱等，根据不 同检测需求选择合适的检测，需要选择 高灵敏度和宽线性范围的检测器
。
食品工业
用于检测食品中的添加剂、农药残留和营养 成分等。
CHAPTER 02
液相色谱法的基本构成
色谱柱
色谱柱是液相色谱法的核心部件，用于分离样品中的不同组分。
常用的色谱柱材料有硅胶、氧化铝、活性炭等，根据不同分离需求选择合适的色谱 柱。
色谱柱的粒径和长度也会影响分离效果，粒径越小，长度越长，分离效果越好。
流动相
流动相是携带样品通过色谱柱 的介质，其性质会影响分离效 果。
调试仪器参数
根据实验条件，调整仪器参数，如流速、检测波 长等。
液相色谱法的实验操作
泵压设置
根据流动相的特性，设置 合适的泵压，确保流动相 稳定流动。
进样操作
将处理好的样品注入色谱 柱，开始进行分析。
数据采集
实时监测色谱图，记录所 需数据。
数据处理与分析
兽药残留检测
液相色谱法可检测动物性食品中兽药残留，防止兽药过量使用对人 体造成危害。
在环境监测中的应用
水质检测
01
液相色谱法可用于检测水体中的有机污染物、重金属离子等有
害物质。
大气污染监测
02
液相色谱法可分析空气中的挥发性有机物、气态污染物等，评
估大气环境质量。
土壤污染检测
03
液相色谱法可检测土壤中的农药残留、重金属等有害物质，为
固定相的粒径和装填密度也会影响分离效果，粒 径越小，装填密度越高，分离效果越好。
检测器
检测器用于检测色谱柱流出的组 分。
常用的检测器有紫外可见吸收光 谱、荧光光谱、质谱等，根据不 同检测需求选择合适的检测，需要选择 高灵敏度和宽线性范围的检测器
。
食品工业
用于检测食品中的添加剂、农药残留和营养 成分等。
CHAPTER 02
液相色谱法的基本构成
色谱柱
色谱柱是液相色谱法的核心部件，用于分离样品中的不同组分。
常用的色谱柱材料有硅胶、氧化铝、活性炭等，根据不同分离需求选择合适的色谱 柱。
色谱柱的粒径和长度也会影响分离效果，粒径越小，长度越长，分离效果越好。
流动相
流动相是携带样品通过色谱柱 的介质，其性质会影响分离效 果。
液相色谱基本原理与应用ppt课件
一、液相色谱定义
高效液相色谱是在经典液相色谱基础上， 引入了气相色谱的理论，在技术上采用了 高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器， 因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操 作自动化的特点。
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
三、HPLC在各领域的主要应用
• 环境：常见多环芳烃、多氯联苯、硝基化 合物、酚类化合物、邻苯二甲酸脂、有机 农药等。
• 农业：土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、 茶叶等农产品中无机和有机成分等。
• 食品：有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂 肪酸、香料、甜味剂、防腐剂、人工色素、 病原微生物、霉菌毒素、多核芳烃等。
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
多环芳烃标准品色谱图
mV 900
萘 苊
800
700
600
二 苯 并a，h蒽 苯 并g，h，i苝 茚 苯1，2，3-cd苝
苯 并a蒽 屈 苯 并b荧 蒽 苯 并k荧 蒽 苯 并a芘
500
荧蒽
苊烯
400
芴 菲
蒽 芘
300
200
100
0
3 -100
6
9
12
15
18
高效液相色谱是在经典液相色谱基础上， 引入了气相色谱的理论，在技术上采用了 高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器， 因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操 作自动化的特点。
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
三、HPLC在各领域的主要应用
• 环境：常见多环芳烃、多氯联苯、硝基化 合物、酚类化合物、邻苯二甲酸脂、有机 农药等。
• 农业：土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、 茶叶等农产品中无机和有机成分等。
• 食品：有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂 肪酸、香料、甜味剂、防腐剂、人工色素、 病原微生物、霉菌毒素、多核芳烃等。
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
病原体侵入机体，消弱机体防御机能 ，破坏 机体内 环境的 相对稳 定性， 且在一 定部位 生长繁 殖，引 起不同 程度的 病理生 理过程
多环芳烃标准品色谱图
mV 900
萘 苊
800
700
600
二 苯 并a，h蒽 苯 并g，h，i苝 茚 苯1，2，3-cd苝
苯 并a蒽 屈 苯 并b荧 蒽 苯 并k荧 蒽 苯 并a芘
500
荧蒽
苊烯
400
芴 菲
蒽 芘
300
200
100
0
3 -100
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9
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《液相色谱法》课件
DATE
ANALYSIS
SUMMAR Y
REPORT
CATALOG
DATE
ANALYSIS
SUMMAR Y
05
液相色谱法的优化与注 意事项
实验条件的优化
1 2
流动相的选择
根据分析物的性质选择合适的流动相，如有机溶 剂、缓冲液等，以达到最佳分离效果。
流速的优化
流速对色谱分离效果有重要影响，需根据实际情 况调整流速，以达到最佳分离效果。
3
柱温的优化
柱温会影响物质的吸附和扩散速度，适当提高柱 温可以加快分析速度，但过高的温度可能导致柱 效降低。
液相色谱柱的维护与保养
使用前清洗
新柱子使用前需进行彻底清洗，以去除残留物和 污染物。
使用中维护
使用过程中应定期清洗和再生色谱柱，以保持其 性能和寿命。
储存条件
色谱柱应存放在干燥、避光的地方，避免直接阳 光照射和高温。
反相色谱法
总结词
反相色谱法是利用非极性固定相和极性流动相之间的相互作用来分离物质的分离 模式。
详细描述
反相色谱法中，固定相通常是烷基键合硅胶，流动相则是极性的溶剂，如水、甲 醇等。在分离过程中，非极性或弱极性的组分更容易被固定相吸附，因此会先被 洗脱出来。
离子交换色谱法
总结词
离子交换色谱法是利用离子交换剂与溶液中的离子之间的相互作用来分离物质的分离模 式。
动相。
流动相的流速和组成对分离效果 也有影响，需根据实际情况调整
。
固定相
固定相是色谱柱中的填料，用于吸附样品中的组分。
常见的固定相有硅胶、氧化铝、活性炭等，根据不同分离需求选择合适的固定相。
固定相的粒径和性质对分离效果有影响，粒径越小，性质越均匀，分离效果越好。
仪器分析― 高效液相色谱法PPT课件
填充的固定相颗粒直径多在150~200m范围内。即使这样，
流速仍然很低(<1mL/min)，分析时间仍然很长！ 当加压增加流速(真空或空气泵)时，尽管分析时间减少，
但柱塔板高度Hmin也相应增加了！或者说柱效下降了。
4
• 为了解决分析时间及柱效问题，人们认识 到：最为有效地增加柱效的唯一方法是减 小填充物的粒径（3~10 m ）！
HPLC仪器包括： 1. 高压输液装置; 2. 进样系统; 3. 分离系统; 4. 检测系统; 5. 此 外 还 配 有 梯 度淋洗、自动进样 和数据处理装置。
其工作过程如图 8-2所示。
图8-2 HPLC仪器工作过程示意图
9
高效液相色谱法 HPLC High Performance Liquid Chromatography
选择原则。
3
8.1 概 述
高效液相色谱(HPLC)是以溶剂液体为流动相的色谱方法。 按照固定相不同可分为：液液分配色谱；吸附色谱(液固色 谱)；离子交换色谱；尺寸排阻色谱(凝胶渗透色谱)。此外， 还有亲和色谱、平板色谱(薄层色谱)等。
早期液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径1~5cm, 长50~500cm的玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，
• 操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。
• 结论：从色谱分析的发展来看，HPLC比GC更为有
用、更具发展前途！
7
3. 应用 由于HPLC分离分析的高
灵敏度、定量的准确性、适 于非挥发性和热不稳定组分 的分析，因此，在工业、科 学研究，尤其是在生物学和
不溶于水 非极性
极性增加 非离子极性
16
高效液相色谱法 HPLC High Performance Liquid Chromatography
流速仍然很低(<1mL/min)，分析时间仍然很长！ 当加压增加流速(真空或空气泵)时，尽管分析时间减少，
但柱塔板高度Hmin也相应增加了！或者说柱效下降了。
4
• 为了解决分析时间及柱效问题，人们认识 到：最为有效地增加柱效的唯一方法是减 小填充物的粒径（3~10 m ）！
HPLC仪器包括： 1. 高压输液装置; 2. 进样系统; 3. 分离系统; 4. 检测系统; 5. 此 外 还 配 有 梯 度淋洗、自动进样 和数据处理装置。
其工作过程如图 8-2所示。
图8-2 HPLC仪器工作过程示意图
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高效液相色谱法 HPLC High Performance Liquid Chromatography
选择原则。
3
8.1 概 述
高效液相色谱(HPLC)是以溶剂液体为流动相的色谱方法。 按照固定相不同可分为：液液分配色谱；吸附色谱(液固色 谱)；离子交换色谱；尺寸排阻色谱(凝胶渗透色谱)。此外， 还有亲和色谱、平板色谱(薄层色谱)等。
早期液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径1~5cm, 长50~500cm的玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，
• 操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。
• 结论：从色谱分析的发展来看，HPLC比GC更为有
用、更具发展前途！
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3. 应用 由于HPLC分离分析的高
灵敏度、定量的准确性、适 于非挥发性和热不稳定组分 的分析，因此，在工业、科 学研究，尤其是在生物学和
不溶于水 非极性
极性增加 非离子极性
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高效液相色谱法 HPLC High Performance Liquid Chromatography
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• HPLC instruments consist of a reservoir of mobile phase, a pump, an injector, a separation column, and a detector.
Introduction
Understanding how a chromatographic column works - Bands
The HPLC System
GC system
气相色谱仪由以下五大系统组成：气路系统、 进样系统、分离系统、温控系统、检测记录系统。
HPLC system
气相色谱仪由以下五大系统组成：液路系统（ 梯度冲洗装置） 、进样系统、分离系统、温ห้องสมุดไป่ตู้系 统、检测记录系统。
HPLC system
• 高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的。 • 不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实
HPLC system - Solvents
化合物的极性是由分子中所含官能团的种类、数目及排列方式等综合 因素决定。
常见能团极性强弱顺序是：R–COOH > Ar–OH > H–OH > R–OH > –NHC=O–CH3 > R–NH2 > R–SH > R–CHO > R–CO–R’ > R–COOR’ > R–N(Me)2 > R–NO2 > ROCH3 > –CH=CH– > –CH2–CH2–
高效液相色谱量级
• 分析型 (analytical HPLC) • 半制备型 (semi-preparative HPLC) • 制备型 (preparative HPLC) • 工程级 (engineering level)
分析目的
• 定性分析 (qualitative analysis) • 定量分析 (quantitative analysis)
HPLC system - Principle
液相色谱法的分离机理是基于混合物中 各组分对两相亲和力的差别。
分配系数的差异
色谱柱
• 反相 (reverse phase, RP) • 正相 (normal phase, NP)
液相系统操作
• 等度 (isocratic) • 梯度 (gradient)
色谱分析
High Performance
Liquid Chromatography
• 简介 • 基本原理 • 特点 • 仪器流程及主要部件 • 分离模式 • 应用与发展动向
Introduction
• High-performance liquid chromatography (HPLC) is a form of liquid chromatography to separate compounds that are dissolved in solution.
凝胶色谱法 (空间排阻色谱法)
利用多孔固定相对不同大小的分子的排阻作用达到 分离的方法。包括凝胶过滤色谱（GFC）和凝胶渗 透色谱（GPC）
手性色谱法
利用化合物的旋光特性达到分离的方法
色谱法
吸附剂选择
洗脱剂选择
吸附色谱法
硅胶 酸性物质 氧化铝 碱性物质 聚酰胺 可与酚类/酸类等形成氢键 活性炭 分离水溶性成分
分离机理
色谱法
分离机理
吸附色谱法
分配色谱法 离子交换色谱法 (IEC) 亲和色谱法
利用组分在固定相（吸附剂）上的物理吸附能力的 差异而达到分离的方法
利用组分在固定相（固定液）中溶解度不同而达到 分离的方法
利用组分在固定相（离子交换剂）上的亲和力大小 不同而达到分离的方法
利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性 亲和力进行分离。常用于蛋白质的分离。
Protein Characterization
• Isoelectric Focusing
Protein Characterization
• Two-Dimensional Electrophoresis (2D-GEL)
二元溶剂 三元溶剂
离子交换色谱法
阳离子交换树脂 -SO3H, -PO3H2, -COOH, Ac-OH
阴离子交换树脂 -NH2, =NH, -N+(CH3)3OH-
酸、碱、盐 的水溶液或 缓冲溶液
凝胶色谱法 (GPC) (空间排阻色谱法)
离子交换色谱法的应用
1. 用于中药有效部位的分离（不同电荷离子的分离） 2. 用于同类型天然有机物的组分分离（相同电荷离子的分离） 3. 提纯抗生素 4. 提取分离生物碱 5. 分离纯化糖类化合物 6. 分离纯化核苷酸及核酸 7. 提取精制胆红素
Cation Exchange Chromatography (CEC) 阳离子交换色谱
Anion Exchange Chromatography (AEC) 阴离子交换色谱
Protein Characterization
• Electrophoresis
Protein Characterization
现了自动化操作。
• 经典的液相色谱法：常压，固定相柱效低，分析周期长。 • 现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送
（最高输送压力可达4.9 107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用 小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（ 每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检 测器，可对流出物进行连续检测。 • 因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等 特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。
• Compounds are separated by injecting a plug of the sample mixture onto the column.
Introduction
The different components in the mixture pass through the column at different rates due to differences in their partitioning behavior between the mobile liquid phase and the stationary phase.
Introduction
Understanding how a chromatographic column works - Bands
The HPLC System
GC system
气相色谱仪由以下五大系统组成：气路系统、 进样系统、分离系统、温控系统、检测记录系统。
HPLC system
气相色谱仪由以下五大系统组成：液路系统（ 梯度冲洗装置） 、进样系统、分离系统、温ห้องสมุดไป่ตู้系 统、检测记录系统。
HPLC system
• 高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的。 • 不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实
HPLC system - Solvents
化合物的极性是由分子中所含官能团的种类、数目及排列方式等综合 因素决定。
常见能团极性强弱顺序是：R–COOH > Ar–OH > H–OH > R–OH > –NHC=O–CH3 > R–NH2 > R–SH > R–CHO > R–CO–R’ > R–COOR’ > R–N(Me)2 > R–NO2 > ROCH3 > –CH=CH– > –CH2–CH2–
高效液相色谱量级
• 分析型 (analytical HPLC) • 半制备型 (semi-preparative HPLC) • 制备型 (preparative HPLC) • 工程级 (engineering level)
分析目的
• 定性分析 (qualitative analysis) • 定量分析 (quantitative analysis)
HPLC system - Principle
液相色谱法的分离机理是基于混合物中 各组分对两相亲和力的差别。
分配系数的差异
色谱柱
• 反相 (reverse phase, RP) • 正相 (normal phase, NP)
液相系统操作
• 等度 (isocratic) • 梯度 (gradient)
色谱分析
High Performance
Liquid Chromatography
• 简介 • 基本原理 • 特点 • 仪器流程及主要部件 • 分离模式 • 应用与发展动向
Introduction
• High-performance liquid chromatography (HPLC) is a form of liquid chromatography to separate compounds that are dissolved in solution.
凝胶色谱法 (空间排阻色谱法)
利用多孔固定相对不同大小的分子的排阻作用达到 分离的方法。包括凝胶过滤色谱（GFC）和凝胶渗 透色谱（GPC）
手性色谱法
利用化合物的旋光特性达到分离的方法
色谱法
吸附剂选择
洗脱剂选择
吸附色谱法
硅胶 酸性物质 氧化铝 碱性物质 聚酰胺 可与酚类/酸类等形成氢键 活性炭 分离水溶性成分
分离机理
色谱法
分离机理
吸附色谱法
分配色谱法 离子交换色谱法 (IEC) 亲和色谱法
利用组分在固定相（吸附剂）上的物理吸附能力的 差异而达到分离的方法
利用组分在固定相（固定液）中溶解度不同而达到 分离的方法
利用组分在固定相（离子交换剂）上的亲和力大小 不同而达到分离的方法
利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性 亲和力进行分离。常用于蛋白质的分离。
Protein Characterization
• Isoelectric Focusing
Protein Characterization
• Two-Dimensional Electrophoresis (2D-GEL)
二元溶剂 三元溶剂
离子交换色谱法
阳离子交换树脂 -SO3H, -PO3H2, -COOH, Ac-OH
阴离子交换树脂 -NH2, =NH, -N+(CH3)3OH-
酸、碱、盐 的水溶液或 缓冲溶液
凝胶色谱法 (GPC) (空间排阻色谱法)
离子交换色谱法的应用
1. 用于中药有效部位的分离（不同电荷离子的分离） 2. 用于同类型天然有机物的组分分离（相同电荷离子的分离） 3. 提纯抗生素 4. 提取分离生物碱 5. 分离纯化糖类化合物 6. 分离纯化核苷酸及核酸 7. 提取精制胆红素
Cation Exchange Chromatography (CEC) 阳离子交换色谱
Anion Exchange Chromatography (AEC) 阴离子交换色谱
Protein Characterization
• Electrophoresis
Protein Characterization
现了自动化操作。
• 经典的液相色谱法：常压，固定相柱效低，分析周期长。 • 现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送
（最高输送压力可达4.9 107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用 小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（ 每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检 测器，可对流出物进行连续检测。 • 因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等 特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。
• Compounds are separated by injecting a plug of the sample mixture onto the column.
Introduction
The different components in the mixture pass through the column at different rates due to differences in their partitioning behavior between the mobile liquid phase and the stationary phase.