基因诊断与基因治疗培训课件

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本文档所利提供用的核信酸息仅双当供链之参处考的，之碱请用基联，系不互能本补作人为或、科网变学站性依删据除和，。复请勿性模的仿原。文理档，如有不 可以用已知碱基序列的单链核酸片段作为探针，与待
测样本中的单链核酸互补配对，以判断有无互补的同
源核酸序列的存在。
核酸探针
是指带有标记的某一特定DNA或RNA片断，能与 待测样本中单链核酸分子互补配对结合，进而检测同 源序列。
该法可从大量细菌中筛选含特异的DNA序列及基因工程重组体。
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（5）夹心杂当之交处法，请（联系sa本nw人i或ch网h站y删br除id。ization）
RE
RE
A
B
A
B
固
片段B捕捉探针
相 支
A
B
持 物
片断A 检测探针
本法优点： 特异性强，对样本纯度要求不高，定量较准确15 。
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（6）原位杂交当之（处n，u请cl联ei系c 本ac人id或h网y站br删id除iz。ation in situ）
将标记探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交， 进而检测特异的DNA或RNA序列。
三. 基当之因处，诊请联断系本人常或网用站删技除。术方法
核酸分子杂交技术 聚合酶链反应（PCR）技术 生物芯片 基因测序
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本（文档一所提）供核的信酸息分仅供子参考杂之交用，技不术能作为科学依据，请勿模仿。文档如有不 当之处，请联系本人或网站删除。 核酸分子杂交
是指单链核酸分子（DNA或RNA）在特定条件下， 与另一条互补的特异核酸链形成稳定双链的过程。
斑点杂交或狭缝杂交法 （Spot/ Slot blot hybridization）
菌落杂交（colony hybridization）
夹心杂交法（sanwich hybridization）
原位杂交（nucleic acid hybridization in situ）
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本文(档1)所提S供o的ut信h息er仅n当供印之参迹处考，之杂请用交联，系不法能本作人（为或S科网o学站u依删th据除e，。r请n勿b模lo仿tt。in文g档）如有不
（其基本过程类似于上述Southern法）
提取RNA样本→RNA变性→琼脂糖凝胶电泳分离→ 转移至膜→探针（标记DNA或RNA）与之杂交→显影 或显色→检测信号。
Northern法可用于检测组织细胞中总RNA或mRNA
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本文（档所3）提供斑的信点息杂仅当供交之参或处考，之狭请用联，缝系不杂能本作人交为或法科网学站：依删据除，。请勿模仿。文档如有不
液中的特异性探针进行杂交反应。
常用固相杂交支持物： 硝酸纤维素膜、尼龙膜等－－－
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• 2.核酸分子当之杂处，交请（联系固本人相或网杂站删交除）。 操作程序
制备待测核酸样品 分离、变性、转移、固化DNA片段
预杂交
制备核酸探针 标记核酸探针 加入标记核酸探针
的技术方法，直接检测基因结构及其表 达水平是否异常，从而对疾病作出诊断 的方法。
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二. 基因诊断特点：
针对性强，特异性高
检测灵敏度和精确性高
实用性强，诊断范围广
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主要依据： 碱基互补、变性和复性
碱基互补 变性：
DNA与DNA杂交： A=T、 G≡C ; DNA与RNA杂交: A=U、 G≡C ;
在一定温度下，使核酸双链解开为两条单链；
复性：
随温度逐渐恢复，变性的两条单链重新形成互补5双链
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限制性内切酶酶切 提取DNA
检测杂交信号
Southern 法可用于检测特异的DNA序列片断、
基因定位、分子量测定等。
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（2）Northern 印迹杂交法 （Northern blotting ）
杂交
漂洗去除未参与杂交的标记探针
检测杂交信号
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本文档所3提. 供常的信用息固仅当供相之参处考核，之酸请用联，杂系不交能本作人方为或科网法学站依删据除，。请勿模仿。文档如有不
Southern 印迹杂交法（Southern blotting ）
Northern 印迹杂交法（Northern blotting ）
探针标记物
有放射性核素或非放射性核素（生物素、地高辛、
荧光素等）两大类。
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• 1.核酸分子当之杂处交，请的联分系本类人或网站删除。
• 液相杂交： 待测核酸样本与特异性探针同时溶于杂交液中
进行杂交反应；
• 固相杂交： 待测核酸样本先结合到固相支持物上，再与溶
当之处，请联系h本yb人r或id网iz站a删ti除o。n • DNA:DNA 5’ A T G C C G A T
3’ T A C G G C
DNA:RNA
5’ A T G C G T A 3’ U A C G C A U
RNA:RNA
5’ A U G C U A C G 3’ U A C G A U G C
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本章讨论二大方面内容
基因诊断 基因治疗
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第一节 基 因 诊 断 当之处，请联系本人或网站删除。
一. 基因诊断概念 ： 利用现代分子生物学和分子遗传学
基本过程： 将变性的DNA或RNA直接点到固相支持滤膜上→ 用标记探针与之杂交→自显影或显色反应→检测杂 交信号→分析结果。 优点： 简便、快速、灵敏、样本用量少； 缺点： 特异性不高，有一定比例的假阳性。
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