中药粉末显微鉴别技术

中药粉末显微鉴别技术

第一节取样、制片、染色

一、取样

取样的代表性直接影响到结果的判断准确，因此必须重视取样的各个环节。

（一）对照品

对照品粉末是检定供试品的参照物，其制备是显微鉴别的先决条件。有经验者，可自取标本，鉴定后制作，或购买药材经品种基原鉴定。还应注意有些药材的显微特征受生长年限及环境的影响，会产生一定的波动，所以对于供试品的产地、采收期、加工方法等也应当认真记录。

（二）供试品

中药材原药材应注意基原、产地、规格的完整性、清洁程度以及有无水迹、霉变或其他物质污染等情况，并详细记录。

（1）从同批药材包件中抽取有代表性的检定用样品。

（2）对破碎的、粉末状的或大小在1cm以下的药材，一般药材100g-500g；粉末状药材25g；贵重药材5g-10g；个体大的药材，根据实际情况抽取代表性的样品。

（3）将所取有代表性样品混合均匀，即为总样品量。

（4）前处理：将供试品捡净后，用量较小时，可以用乳体或小型电磨粉碎过《中国药典》6号筛（1.0μm-250μm）备用。

1、中成药

（1）取样：从各批号的箱、包、瓶中随机取样，记录好厂家、批号，从各包装盒中任意取1丸，每批号不得少于3次。各供试品留样保存，保存期限至少1年。

水丸无包衣时，可直接取2丸-3丸，乳钵中研成细粉后，取少量置裁玻片上，滴加规定的试液，搅拌均匀，使粘结的细胞、组织分离，再按粉末特征加水合氯醛试液或其他适当试液处理后观察。

水蜜丸或大蜜丸；可直接用刀片横向切开取一薄片，或用小钢铲取一小块（约15mg）放置在载玻片上制片观察。

（1）去包衣：中药片剂常见包衣为糖衣，隔离层常使用胶浆、糖浆和滑石

粉。水丸和糊丸等（挂）衣的材料有滑石、蔗糖、朱砂、雄黄、青黛、百草霜、礞石、赫石等。可用刀片将包衣剥去，简单的办法也可将片剂或丸剂断为两半，直接取内心，粉碎进行观察。

（2）添加剂：为便于观察，可对中成药的制造过程中使用的添加剂做适当

的前处理。

除去水溶性干扰物：将检品置于蒸馏水中研匀，离心处理，取沉淀物检查。

除去脂溶性干扰物：将检品滴加适量氯仿，离心处理，取沉淀挥干氯仿后检查。

除去淀粉，糊化淀粉的干扰：将检品滴加蒸馏水研匀，置烧杯中煮沸、冷却，离心处理，取沉淀检查。

以上操作中，为防止某些显微特征的流失，应进行留样观察。

二、制片

（一）制片

1、载玻片与盖玻片载玻片与盖玻片是影响图像质量的因素之一。因载物台下的聚光器是按使用一定厚度的载玻片设计的。首先应选择规格统一的载玻片（厚0.9mm-1.2mm）与盖玻片（厚0.12mm-0.17mm）。使用前，将载玻片与盖玻片用无水乙醇浸泡后，用柔软的绸布或无纤维人造纸揩擦，至表面洁净无暇。

2、制片将供显微观察的粉末药材或样品置于载玻片上，然后加入适宜的试液1滴，用玻璃棒搅匀，用镊子将盖玻片沿一侧轻轻放下，使液体自然展匀即可。可用滤纸吸拭溢出的液体或从盖玻片边缘补充液体不足的空隙。

（二）制片按使用试剂分类

1、稀碘液制片主要用于观察含淀粉粒。

2、斯氏试液制片试液由醋酸：甘油：水（1：1：1）组成。用于观察

包括淀粉粒在内的所有显微鉴别特征。

3、水合氯醛制片水合氯醛试液能渗透组织，使皱缩的细胞膨胀并能溶

解淀粉粒、蛋白质、树脂、挥发油和叶绿素等，使细胞组织变得透明而清晰。

4、乙醇装片在观察的切片中有菊糖、粘液、树胶等时，使用95%以上

的乙醇。

（三）制片按保存时间分类

1、临时制片封藏介质一般为流动性液体，不耐久藏。但制作简易、适

用于一般的显微观察及显微化学反应。

2、半永久性制片在上述临时制片周围，直接使用加拿大树胶，将盖玻

片周围封严，室温放置1天干燥后，置冰箱内，一般可供10年以上观察使用。封藏介质还可以选用半固体的甘油明胶。

3、永久性制片封藏介质一般呈固态，可长期保存，但制作费时，多用

于教学标本。制作方法一般是先将粉末用无水乙醇浸润，随后沥去乙醇，用二甲苯浸润，再沥去二甲苯，滴加加拿大树胶的二甲苯溶液后，自然挥发干燥固定后即可。

三、染色

为使标本片特征显著，可根据细胞壁及细胞内含物的性质，加入不同染色剂染色。常见的显微化学反应如下（所有试液的配制方法参见《中国药典》）。

（一）细胞壁性质的检定

1、木化细胞壁，加间苯三酚试液1滴-2滴，稍放置，加盐酸1滴，因木化程序不同，显粉色、红色或紫红色。此操作最好在水合氯醛透化后再进行，其效果较好。

2、木栓化或角质化细胞壁，加苏丹III试液，稍放置或微热，呈橘红色至红色。

3、纤维素细胞壁加氯化锌碘试液，或先加碘试液湿润后，稍放置，再加硫酸溶液（33-50）显蓝色或紫色。

（二）细胞内含物性质的检定

1、淀粉粒加稀碘试液，呈蓝色或紫色。

2、糊粉粒（1）加碘试液，呈黄棕色。（2）加硝酸汞试液，呈砖红色（材

料中如含有多量脂肪油，宜先用乙醚或石油醚脱脂后进行）。

3、脂肪油、挥发油和树脂（1）加苏丹III试液，呈橘红色，红色或紫红色。

（2）加90%乙醇、脂肪油和树脂不溶解（蓖麻油及巴豆油例外），挥发油则溶解。

4、菊糖加10%α-萘酚乙醇溶液，再加80%硫酸1滴-2滴，显紫红色并很

快溶解。

5、粘液加钌红试液，呈红色。

6、草酸钙结晶（1）加稀醋酸不溶解，加稀盐酸即溶解但无气泡发生。（2）加硫酸（1-2）逐渐溶解。片

刻后析出针状硫酸钙结晶。

7、碳酸钙（钟乳体），加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。

8、硅质加硫酸不溶解。

第二节显微镜及显微摄影

为能如实地记录，客观地反映中药材粉末的显微鉴别特征，掌握显微镜摄

影技术是十分重要的。

一、显微镜

显微镜主要是由机械部分与光学部分组成，虽然新型显微镜不断面市，但

其原理及各部分的构造均大同小异。

（一）机械部分

主要包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换盘、焦距调节装置等。

1、镜座用于保持显微镜的稳定与平衡。

2、镜臂用于支持镜筒及取放显微镜时便于握持之用。

3、镜筒为一中空的金属圆筒，用以固定物镜与目镜用的距离。现以双筒

倾斜式为常见。

4、载物台用于放置载玻片之用，并有夹压片固定。装置较完善的显微镜，载物台一侧附有旋钮，可控制载玻片前后左右的移动。