血清总胆固醇浓度测定(精)
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(红色，500nm波长)
计算：
测定管浓度 测定管吸光度 =
标准管浓度 标准管吸光度
测定管吸光度
测定管浓度＝
× 标准液浓度
标准管吸光度
（血清TC）
操作步骤
1 按下表加样(试管应做好标记)
加入物(μl) 空白管
血清
—
胆固醇标准液 —
蒸馏水
20
酶试剂
1000
标准管 — 10 10 1000
测定管 20 —
1000
• 混匀，37oC保温5分钟
• 在试管中加入1ml蒸馏水
• 500nm波长比色，空白管调零，读出吸光度
• 计算：
血清TC(mmol/L)= A测定 ×5.17mmol/L
A标准
2
兔血清TC参考值：0.77～2.00 mmol/L
注意Байду номын сангаас项
1. 最后加酶试剂，各管反应时间应一致； 2.试管在操作前尽量保持干燥； 3.比色应及时，30min内完成; 4.若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂
第3次实验-1
胆固醇氧化酶法 测定血清总胆固醇
实验原理
游离胆固醇(FC) 血清总胆固醇(TC)
胆固醇酯(CE)
1. 胆固醇酯
胆固醇酯酶
37℃水浴
游离胆固醇 ＋ 游离脂肪酸
胆固醇氧化酶
2. 胆固醇
Δ4-胆甾烯酮＋ H2O2
3. 2H2O2＋4-氨基安替比林＋酚
过氧化物酶
37℃水浴
苯醌亚胺非那腙＋4H2O
成分中去掉胆固醇酯酶即可。
第3次实验-2 二乙酰一肟法测定血清尿素
实验原理
二乙酰一肟 + H2O H+ 二乙酰＋羟胺
二乙酰 + 尿素
H+
△
4,5-二甲基-2氧咪唑化合物
(红色，520nm波长)
操作步骤
1 按下表加样（试管先做好标记）
加入物(μl) 空白管 标准管
血清
—
—
尿素标准液 —
20
蒸馏水
20
—
试剂1
1000
1000
试剂2
1000
1000
测定管 20 — —
1000 1000
2 混匀，沸水浴15分钟 3 常温冷却5分钟 4 520nm波长比色，空白管调零，读出吸光度 5 计算：
血清尿素(mmol/L)= A测定 ×10 mmol/L A标准
参考范围：兔血清尿素2.86～8.20 mmol/L
注意事项
1. 煮沸显色经冷却后，应及时比色。 2. 注意试管洁净干燥，加量务必准确。 3. 水浴时注意打开水浴箱盖，以免水汽进
入试管。 4. 酸性试剂中酸的含量较浓，要小心使
用。 5. 尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度
高，需先用去离子水作50倍以上稀释。
计算：
测定管浓度 测定管吸光度 =
标准管浓度 标准管吸光度
测定管吸光度
测定管浓度＝
× 标准液浓度
标准管吸光度
（血清TC）
操作步骤
1 按下表加样(试管应做好标记)
加入物(μl) 空白管
血清
—
胆固醇标准液 —
蒸馏水
20
酶试剂
1000
标准管 — 10 10 1000
测定管 20 —
1000
• 混匀，37oC保温5分钟
• 在试管中加入1ml蒸馏水
• 500nm波长比色，空白管调零，读出吸光度
• 计算：
血清TC(mmol/L)= A测定 ×5.17mmol/L
A标准
2
兔血清TC参考值：0.77～2.00 mmol/L
注意Байду номын сангаас项
1. 最后加酶试剂，各管反应时间应一致； 2.试管在操作前尽量保持干燥； 3.比色应及时，30min内完成; 4.若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂
第3次实验-1
胆固醇氧化酶法 测定血清总胆固醇
实验原理
游离胆固醇(FC) 血清总胆固醇(TC)
胆固醇酯(CE)
1. 胆固醇酯
胆固醇酯酶
37℃水浴
游离胆固醇 ＋ 游离脂肪酸
胆固醇氧化酶
2. 胆固醇
Δ4-胆甾烯酮＋ H2O2
3. 2H2O2＋4-氨基安替比林＋酚
过氧化物酶
37℃水浴
苯醌亚胺非那腙＋4H2O
成分中去掉胆固醇酯酶即可。
第3次实验-2 二乙酰一肟法测定血清尿素
实验原理
二乙酰一肟 + H2O H+ 二乙酰＋羟胺
二乙酰 + 尿素
H+
△
4,5-二甲基-2氧咪唑化合物
(红色，520nm波长)
操作步骤
1 按下表加样（试管先做好标记）
加入物(μl) 空白管 标准管
血清
—
—
尿素标准液 —
20
蒸馏水
20
—
试剂1
1000
1000
试剂2
1000
1000
测定管 20 — —
1000 1000
2 混匀，沸水浴15分钟 3 常温冷却5分钟 4 520nm波长比色，空白管调零，读出吸光度 5 计算：
血清尿素(mmol/L)= A测定 ×10 mmol/L A标准
参考范围：兔血清尿素2.86～8.20 mmol/L
注意事项
1. 煮沸显色经冷却后，应及时比色。 2. 注意试管洁净干燥，加量务必准确。 3. 水浴时注意打开水浴箱盖，以免水汽进
入试管。 4. 酸性试剂中酸的含量较浓，要小心使
用。 5. 尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度
高，需先用去离子水作50倍以上稀释。