生化试验观察血清中谷丙转氨酶的活力变化讲解
血清中谷丙转氨酶活力测定结果
血清中谷丙转氨酶活力测定结果血清中谷丙转氨酶（ALT）活力测定是一种常见的实验室检测方法，常用于评估肝功能和诊断肝病。
本文将介绍血清中谷丙转氨酶活力测定结果的相关知识。
血清中谷丙转氨酶活力（ALT）是指血液中存在的一种酶的活性，通常用于评估肝脏功能的状况。
正常情况下，谷丙转氨酶的活力是很低的，一般小于40单位/升。
当肝细胞受损或病变时，会释放ALT，使其活力升高。
高浓度的ALT通常与肝脏病变有关，例如肝炎、肝硬化、脂肪肝、药物性肝病等。
此外，高ALT水平还可能与其他疾病有关，例如急性胰腺炎、心肌梗塞、重型结核等。
因此，如果血清中ALT活力超过正常范围，应及时进行检查和诊断。
血清中ALT测定通常是使用血清学方法进行的。
一般情况下，医师会在胳膊上绑上一条缚带，并在手腕或肘部的静脉内取一小样血液。
样本会送到实验室进行分析。
实验室会使用化学试剂和仪器来测量血清中ALT的活力。
结果会以单位/升（U/L）的形式报告。
正常情况下，成人男性的ALT浓度应在10-40 U/L之间，女性的ALT浓度应在7-35U/L之间。
但这些数值还受到年龄、体重、性别和肝脏状态等因素的影响。
因此，在解读ALT浓度时，医生还需要考虑患者的其他情况。
ALT浓度的升高程度也是确定病情的重要指标之一。
一般来说，当ALT浓度超过正常范围的两倍以上时，就可以诊断为肝炎或其他肝病。
此外，还有一种称为谷草酰转移酶（AST）的酶，也与肝脏有关，但其升高程度不如ALT明显。
需要注意的是，虽然ALT浓度升高可能表明肝脏病变，但不能单独确定肝病的类型和严重程度。
医生还需要进行其他检查和评估，例如肝脏超声、CT扫描、肝组织活检等，以帮助确定具体的病情。
总之，血清中ALT活力测定是一种常见的实验室检测方法，通常用于评估肝脏功能和诊断肝病。
需要注意的是，结果需要结合患者的其他情况进行解读，以便更准确地诊断和治疗肝病。
谷丙转氨酶实验报告
一、实验目的了解谷丙转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义，学习谷丙转氨酶活性测定的原理和方法。
二、实验原理谷丙转氨酶（ALT）是一种广泛存在于生物体内的酶，主要存在于肝脏、心脏等组织中。
它催化丙氨酸与α-酮戊二酸在氨基转移过程中相互转化，生成谷氨酸和丙酮酸。
在正常情况下，血清中的ALT含量较低。
当肝细胞受损时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血清ALT活性升高。
因此，血清ALT活性的测定在临床诊断中具有重要意义。
本实验采用比色法测定血清ALT活性，通过观察反应体系中丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙（2，4-DNP-P）的生成量，来计算酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 血清样本- 2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）- α-酮戊二酸- 丙氨酸- 磷酸氢二钠（Na2HPO4）- 磷酸二氢钠（NaH2PO4）- 0.1mol/L氢氧化钠（NaOH）- 0.1mol/L盐酸（HCl）- 标准曲线样品2. 仪器：- 酶标仪- 移液器- 恒温水浴锅- 移液管- 试管四、实验步骤1. 标准曲线的制作：- 配制不同浓度的标准曲线样品，分别加入丙氨酸和α-酮戊二酸，混匀。
- 将标准曲线样品置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。
- 以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活性的测定：- 将血清样本按照一定比例加入反应体系中，加入2，4-DNPH和底物，混匀。
- 将反应体系置于恒温水浴锅中，反应一定时间。
- 反应结束后，加入0.1mol/L氢氧化钠终止反应。
- 将终止后的反应体系置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。
- 根据标准曲线，计算血清ALT活性。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：标准曲线呈线性关系，相关系数R²=0.998，表明本实验采用的方法具有良好的线性。
2. 血清ALT活性的测定：实验结果显示，本实验测定的血清ALT活性为XX单位/L。
血清谷丙转氨酶.ppt
由于NADH在波长340nm处有特异的吸收峰，因此ALT的活性可
通过NADH的消失量，即根据340nm处光密度值的减少量间接作出定
量测定。ALT活性的K洲an氏单位的定义是：在分光光度法规定的
条件(karman分光光度计，25℃，340nm，光径1km)下，1毫升血清
电化学法 同位素法
二、酶活力单位及比活
酶的活力单位
U：特定条件下1min内将1μmol底物转化为产物
所需要的酶量。（国际单位）
临床可以用约定成熟的惯用单位表示。
比活
每毫克蛋白含有的E的活力单位数 U/mg蛋白
转换数
每秒每个酶分子转换底物的微摩尔数 μmol/s
ALT活性测定的方法很多，主要有两类：一是卡门氏(Karman) 分光光度法，二是比色测定法。
实验讨论
1. 为什么设定标准空白和测定空白？
2. E活性的表示方法有哪些？
3. E活性测定的原理是什么？
在终止酶反应后，呈色反应中不仅产物丙酮酸能与2，4-二硝基苯肼 形成苯腙而呈色，而且底物α-酮戊二酸也能反应而呈色，尽管二者在 500－520nm处光吸收有较大差异，但这种非特异性的呈色反应对测定结 果影响较大，所以比色法使用的底物浓度很低，与最适底物浓度相差甚 远。在两种底物浓度中尤显偏低的是α-酮戊二酸（2mmol/L）,在此浓度 下酶促反应只能达到最大反应速度65%左右，由于底物浓度的明显不足使 的酶促反应产生丙酮酸的量与酶活性间不能呈现良好的线性关系。2，4二硝基苯肼本身在碱性溶液中也能显色，为了降低空白读数，反应时不 得不使用较低的2，4-二硝基苯肼（1mmol/L）,相当于反应液中酮酸的浓 度（丙酮酸和α-酮戊二酸总浓度为2mmol/L）的1/2。按反应方程式，一 分子酮酸与一分子2，4-二硝基苯肼生成相应的苯腙，但至少有半量的酮 酸没有与2，4-二硝基苯肼作用，在酶反应后丙酮酸和α-酮戊二酸与2， 4-二硝基苯肼形成苯腙呈色存在着一个人们无法控制的机率问题，据信 这是赖氏法重复性差的主要原因。另外，2，4-二硝基苯肼浓度低也是使 显色反应的工作曲线弯曲的原因之一。
实验十 血液转氨酶(谷丙转氨酶)活力的测定
实验十、血液转氨酶（谷丙转氨酶）活力的测定（实验：肝脏谷丙转氨酶活力测定）（本实验分2个实验完成：一、制作标准曲线二、测酶活力和总结。
或就做二就可以）【目的和要求】1、了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，2、学习转氨酶活力测定的原理和方法。
3、熟悉分光光度计的使用。
【原理】生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。
转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。
它们催化的反应如下。
正常人血清中只含有少量转氨酶。
当发生肝炎，心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。
测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。
谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。
丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，其吸收光谱的峰为439—530nm，因此在波长520nm处吸光度度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸的摩尔比基本呈线性关系，故可藉可用分光光度法测定。
从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可计算酶的活力。
【试剂和器材】一、试剂1.试管及试管架2.吸管3.恒温水浴4.分光光度计5、移液管6、电子天平7、研钵8、容量瓶9、冰箱二、器材1、标准丙酮酸溶液[标准丙酮酸（500μg/ml）]：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于pH7.4 0.1M 的PBS中，定容到100ml。
现用现配。
2、谷丙转氨酶底物：0.90g L-丙氨酸，29.2mg α-酮戊二酸，先溶于pH7.4 0.1M 的PBS中。
然后用1M NaOH调节pH到7.4，再用pH7.4 0.1mol/L的PBS定容到100ml，贮存于冰箱中，可使用1周。
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶的测定实验报告引言：血清谷丙转氨酶（AST）是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，主要参与氨基酸代谢过程。
AST的测定在临床上具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
本实验旨在通过酶促动力学方法测定血清中AST的活性，并分析实验结果。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 血清标本：从健康志愿者采集的血样。
- AST测定试剂盒：包括底物、辅酶、酶标试剂等。
- 酶标仪：用于测定底物的光吸收值。
2. 实验方法：- 步骤一：标定酶标仪将已知浓度的AST酶标溶液分别加入不同的试管中，测定其对应的光吸收值，建立标准曲线。
- 步骤二：制备样本将采集到的血清标本离心，取上清液，稀释至适宜浓度。
- 步骤三：测定AST活性将标定好的试剂和稀释后的血清标本加入试管中，混匀后，放入酶标仪中测定吸光度。
- 步骤四：计算AST活性根据标准曲线，计算出各个样本的AST活性。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了一系列样本的AST活性数据。
根据标准曲线，我们可以计算出每个样本的AST活性，并进行进一步的分析。
首先，我们可以观察到不同样本之间AST活性的差异。
正常情况下，AST活性在一个相对稳定的范围内，超出该范围可能提示肝脏功能异常或疾病存在。
因此，通过测定AST活性，我们可以初步判断一个人的肝脏健康状况。
其次，我们还可以对不同条件下AST活性的变化进行研究。
例如，我们可以比较不同性别、不同年龄段、不同体重指数的人群的AST活性是否存在差异。
这样的研究有助于进一步了解AST在人体内的生理变化和代谢过程。
此外，我们还可以将AST活性与其他临床指标进行关联分析。
例如，我们可以比较AST活性与肝功能指标、炎症指标等之间的关系。
这些关联分析可以为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。
总结：通过本实验，我们成功地测定了血清中AST的活性，并对实验结果进行了分析和讨论。
AST的测定在临床中具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
血清谷丙转氨酶测定设计实验ppt课件
注意事项
n 操作中加 0.4N NaOH液时，需以较慢速度 加入，并且边加边摇匀加快时则a一戊酮二 酸引起的发色增强。
n 本实验中各试剂加量都需要准确，并且要 注意控制条件，保温时间要严格
n 本法测定SGTP正常值为40单位以下。
实验讨论
n 分析实验误差产生的原因 n 血清GPT活性测定的意义
• 本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反 应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。
• 本法以lml血清与基质液在37℃，保温30分钟生 成2.5μg丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位
• 求酶活性单位的方法：
• 1、标准品对照法： 检品与标准丙酮酸液同样处
理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。
• 2、标准曲线法： 取含待测物的一系列标准溶液，
作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。
实验操作
一、标准品对照法
取试管4支，标号，按下表加试剂：
56℃放置5分钟。 加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入 (约1分钟)，边加边混匀。
室温放置 30分钟，
测OD值，波长 520nm，用蒸馏水调零点。
各管混匀，放37℃水浴5分钟 然后各加呈色试剂0.5ml，混匀
实验题目
血清谷丙转氨酶 活性的测定
实验目的
n掌握谷丙转氨酶活性测定的 原理和方法
实验原理
l血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊 二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸
l血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反 应出谷丙转氨酶活性的大小。
l丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸 二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱 性溶液中成醌型显棕红色。
56℃放置5分钟。
加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入 (约钟)，边加边混匀
生物化学实验谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定
谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定一、[实验目的]1.用纸层折法观察肝脏丙转氨酶ALT的转氨作用；2.用分光光度法测定血清丙转氨酶的活力；3.学习治疗检测SGPT的方法及原理；4.了解检测肝损伤模型的制备及SGPT在科研中的应用。
二、[仪器与试剂]1．实验材料动物肝脏2．实验试剂（1）0.9%NaCl溶液（2）海砂（3）1%谷氨酸溶液（1%KOH溶液中和）（4）1%丙酮酸钠溶液（用1%KOH溶液中和）（5）0.1%KHCO3溶液（6）0.025%一溴乙酸溶液（用1%KOH中和）（7）2%乙酸溶液（8）酚的饱和水溶液：将2份酚和2份水（按重量计算）混合，放入分液漏斗中，振荡。
静止24h以后分层，将下部酚层放入瓶中备用。
新配制的酚展层剂可以反复使用1周。
（9）0.1%水合茚三酮的正丁醇溶液（10）0.1%标准谷氨酸溶液（11）0.1%标准丙氨酸溶液（12）1%KOH溶液谷丙转氨酶活性的鉴定（纸层析法）一、[实验原理]观察肌肉糜中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。
通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。
为防止丙酮酸被肌肉糜中的其它酶所氧化或还原，在反应系统中加入了抑制剂溴乙酸。
二、[实验操作]1.谷丙转氨酶提取液制备：2g肝脏+0.9%NaCL 6mL+海砂 200mg，在低温下，研磨成浆，用稀薄的脱脂棉过滤，得提取液（滤液不清）。
2.转氨作用取试管2支，按下表加入试剂，加入试剂的单位为mL加脱脂棉塞，45℃水浴，1.5h，时时振荡内容物沸水浴2min，使蛋白质完全沉下，过滤，作层析3.纸层析操作方法取圆形层析滤纸1张，在圆心处用圆规绘出直径为3cm的同心圆（滤纸不可以折），通过中心将滤纸绘成四等分扇形。
用毛细管点样2-4次（直径不超过2mm），在滤纸的圆心上剪一小孔，直径约1-2mm，取一小滤纸条，将下端剪成刷状，在卷成灯芯插入圆形小孔，不能使灯芯突出纸面，将圆形滤纸平放在盛有层析液（水饱和酚）培养皿上，使灯芯向下与溶剂接触，用大小相同的培养皿盖在滤纸上，溶剂通过灯芯上升到滤纸上向四周展层，直到溶剂前沿移至距滤纸边缘约1cm处时停止（展层时间为1h），80-100℃烘箱干燥，喷洒水合茚三酮的正丁醇溶液，80-100℃显色。
生物化学--实验十一血清谷—丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)
生物化学--实验十一血清谷—丙转氨酶活性的测定（改良赖氏法）实验十一血清谷—丙转氨酶活性的测定,改良赖氏法,【目的要求】1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。
2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。
3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
【实验原理】血清中的谷-丙转氨酶(ALT)，在37?、pH7.4的条件下，可催化基质(底物)液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸:COOH COOH CH 3 CH3 CH 2CH2ALT HN,C,H 2C=O CH CH 22+ COOH COOH 37?、pH7.4 + HN,C,H C=O 2 COOH COOH a-酮戊二酸 L-丙氨酸 a-丙酮酸 L-谷氨酸生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸 -2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。
据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。
NO NO22 R H CHH 3 C=O —NO —NO + 22HN—N— C=N—N— 2 COOH COOH HO 2 2,4二硝基苯肼丙酮酸二硝基苯腙(黄色) α-酮酸 - OHHO 2 NO2- O CH 3 =N—O C=N—N= COOH苯腙硝醌化合物(红棕色)尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化合物而影响测定结果，但因其量不多，加之对505nm的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强，尤其用标准曲线作测定时，所用的酶活性单位通过卡门氏分光光度速率法矫正，摈弃了赖氏法一些固有弊端，结果比其他比色法准确。
故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续监测法的单位使用赖氏法。
1981年全国常规生化检验方法学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理，全国肝炎协作会议也建议统一使用改良赖氏法。
分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力实验原理的教学
在医学实验中，测定血清谷丙转氨酶（AST）活力是一项常见的实验项目。
AST是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，其活力的变化与肝脏疾病、心肌梗塞等疾病有关，因此对其活力的测定具有重要的临床意义。
分光光度法是一种常用的测定AST活力的方法，其原理简单、灵敏度高，被广泛应用于实验室教学和临床实验中。
本文将介绍分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的教学方法及实验原理。
二、实验原理1. 原理概述分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的原理是通过测定NADH在340nm处的吸光度变化来间接测定AST的活力。
在AST催化下，谷丙酮酸被转化为丙酮酸，同时NADH被氧化为NAD+，在这个过程中，NADH的量减少，其在340nm处的吸光度也随之下降。
通过测定NADH在340nm处的吸光度变化可以间接测定AST的活力。
2. 实验步骤（1）样品制备：将待测血清标本离心沉淀，取清澈液体作为实验样品。
（2）反应体系配置：在离心管中依次加入0.1mol/L磷酸缓冲液、0.1mol/L谷氨酰胺、0.005mol/L的NADH和待测血清标本，将混合液置于37℃水浴中预温。
（3）光度计调零：将光度计调零，设置吸光度波长为340nm。
（4）反应开始：向预温的混合液中加入谷丙酮酸，开始计时测定吸光（5）记录数据：间隔一定时间（例如30秒）记录一次吸光度值，直至吸光度不再发生变化。
三、教学方法1. 理论讲解：在实验前，对分光光度法的原理进行详细的讲解，包括NADH在340nm处的吸光度变化与AST活力的关系，以及实验的步骤和注意事项。
2. 演示操作：老师可以进行实际的操作演示，展示如何配置反应体系、如何操作光度计、如何记录数据等。
3. 学生操作：让学生分组进行实验操作，指导学生合理分配实验任务，注意安全操作，并及时解答学生在实验中遇到的问题。
4. 数据分析：引导学生利用实验数据进行分析，计算得出血清谷丙转氨酶活力的结果，并进行讨论和总结。
四、实验结果分析通过分光光度法测定AST活力的实验，可以得到待测血清样本在一定时间内NADH在340nm处的吸光度值变化曲线。
实验十四血清谷丙转氨酶(ALT)的测定与应用(精)
在氨基酸分解代谢中，联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主 要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联 而完成。此过程可用下式表示：
苯腙在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为 439-530 nm，因此在波长520 nm处吸光度度增加的程度与反应体系 中丙酮酸与 α - 酮戊二酸的摩尔比基本呈线性关系，故可 藉以测定谷丙转氨酶的活力。 本法以l ml血清与基质液在 37℃，保温30分钟生成2.5μ g 丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位。 求酶活性单位的方法： ①标准品对照法：检品与标准丙酮酸液同样处理呈色，进行 比色，计算出酶活性单位。 ②标准曲线法：取含待测物的一系列标准溶液，作标准曲线， 由标准曲线查得活性单位。
实验十四
血清谷丙转氨酶（ALT）的测定与应用
1 实验目的
⑴ 掌握血清谷丙转氨酶的活力测定的方法。 ⑵ 掌握血清谷丙转氨酶的正常值及应用意义。
2 实验原理
谷丙转氨酶，主要存在于各种细胞中，尤以肝细胞为最， 整个肝脏内转氨酶含量约为血中含量的100倍。正常时， 只有少量释放入血中，血清中其酶的活性即可明显升高。 在各种病毒性肝炎的急性期，药物中毒性肝细胞坏死时， ALT大量释放入血中。因此它是诊断病毒性肝炎、中毒性 肝炎的重要指标。肝细胞内谷丙转氨酶的浓度比血清高 1000-5000倍。 只要有1%的肝细胞坏死，便可使血中酶活性增高 1倍，因 此转氨酶（尤其是ALT）是急性肝细胞损害的敏感标志。
混匀后，37℃水浴准确保温20min 5.0 5.0 5.0
混匀后，静置10min，在520nm下比色，读取A、B、S管的吸光度值。 A-BS（A-B）×500 S×2.5
⑵ 计算：
正常参考值： ① 速率法：男性，5-40 U/L；女性，5-35 U/L； ② 赖氏比色法：5-25卡门单位/mL血清。
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在代谢过程中的重要作用。
2. 学习转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 掌握分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的操作技能。
二、实验原理转氨酶是一种广泛存在于生物体内的氨基转移酶，能催化氨基酸的氨基与酮基酸的酮基互换。
在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。
其中，谷丙转氨酶（ALT）是人体内最重要的转氨酶之一，主要存在于肝脏细胞内。
当肝脏发生病变时，如肝炎、心肌梗死等，血清中ALT活力常显著增加，因此在临床诊断上，ALT活力的测定具有重要的意义。
本实验采用分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力，通过检测ALT催化丙氨酸与酮戊二酸反应生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，来计算酶的活力。
三、实验材料1. 仪器：分光光度计、离心机、恒温水浴锅、移液器、试管等。
2. 药品与试剂：丙氨酸、酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼、NaOH、标准ALT溶液、血清样本等。
四、实验步骤1. 准备工作：将所有药品与试剂按照实验要求进行配置，确保实验所需的药品与试剂质量合格。
2. 标准曲线制作：将标准ALT溶液按照实验要求进行稀释，制成一系列不同浓度的标准溶液。
分别取等体积的标准溶液和2，4-二硝基苯肼溶液，混合后加入NaOH，进行显色反应。
在560nm波长下，测定吸光度值，以ALT浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 实验测定：取血清样本，按照实验要求进行稀释，分别加入丙氨酸、酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼和NaOH，进行显色反应。
在560nm波长下，测定吸光度值。
4. 数据处理：将实验测定的吸光度值代入标准曲线，计算出血清ALT活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线制作：根据实验数据，绘制标准曲线，线性范围为20～100U。
2. 实验测定：根据实验数据，计算血清ALT活力，结果为X U/L。
3. 结果分析：根据血清ALT活力值，判断肝脏功能是否正常。
实验十一 谷丙转氨酶活性的测定
A.取干净试管6支，编号后按照下表添加试剂。 B.将试管置于37℃水浴中保温10min，然后向每管中加入0.5ml2,4-二 硝基苯肼，再继续保温20min。 C.分别向各管中加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml，室温下静止10min。 D.用“0”号管作为空白对照，与520nm下测定吸收值。 E.以各管吸收值为纵坐标，丙酮酸的浓度为横坐标做标准曲线。
应
用
• GPT在肝脏中含量最多，当某种药物对肝脏早晨损害或病 毒肝炎的急性阶段，由于肝细胞受损，GPT就释放到血液 中，使血清中此酶水平明显要指标。
实验方法
1.标准曲线的制备
0 2mM丙酮酸标准溶液 （ml） 磷酸缓冲液（ml） GPT底物溶液（ml） 0.00 0.25 0.50 1 0.05 0.20 0.50 2 0.10 0.15 0.50 3 0.15 0.10 0.50 4 0.20 0.05 0.50 5 0.25 0.00 0.50
2、严格按照实验步骤进行，温度和时间均要严格控制。
2.GPT活性的测定：取干净试管4支，按照下表添加试剂。
试剂
鱼肌肉匀浆液（ml） GPT底物溶液（ml）
测定1
0.25 0.50
对照1
0.25
测定2
0.25 0.50
对照2
0.25
37 ℃水浴加热30min（转氨基反应） 2,4-二硝基苯肼（ml） GPT底物溶液（ml） 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50
37 ℃水浴加热20min（丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应） 0.4mol/L氢氧化钠溶液 （ml） 5.00 5.00 5.00 5.00
各管反应完成后混匀，室温静止10min后，以对照管1或者对照2调 节零点，测定1和2号管的吸收值。
实验七.血清谷丙转氨酶(S-GPT)活性测定
作用？
2. 3. 4. S-GPT活性测定二次保温有什么意义？ 影响酶促反应的因素有那些？ 本实验直接测定物质酶（S-GPT）催化下列反应：
在足量底物条件下，生成产物越多表明酶活性越大，酶浓度越 高。一般以在一定时间内丙酮酸的生成量代表S-GPT活性的大小。
二、实验操作
赖氏法测定S-GPT活力：取干净试管3支，按下表操作： 加入物 测定管 标准管 空白管
谷丙转氨酶底物溶液 血清 丙酮酸标准液（２umol/mL） 0.1mol/L磷酸缓冲液 0.５ 0.1 0.５ 0.１ 0.５ 0.１
实验考试
血清谷丙转氨酶(S-GPT)活性测定
生化与分子生物学教研室
注意事项
1. 2. 3. 4. 5. 6. 考试时间90分钟 血清样品每人一支，并记录编号 移液器及Tip头对应使用，正确操作 登记学号、姓名、血清编号、A测、A标、计算结果及实验报告 的平均成绩 每位同学书写当次实验报告包括思考题，并及时清洗自己所用 的器皿，并将试剂、器皿正确归位 值日生负责当次实验室整体卫生
混匀，３７℃水浴预温１０min
2,4-二硝基苯肼溶液
0.1mol/L ＮaOH
0.５
５.0
0.５
５.0
0.５
５.0
混匀，３７℃水浴保温２０min
A520nm波长处比色 计算公式：S-GPT活性单位%= A测/A标×57
三、思考题
以下思考题任选2个作答
1.
什么叫转氨基作用？根据所学理论阐明转氨基作用
《生物化学实验》教学课件—35 血液中转氨酶活力的测定
生物化学实验技术
α-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯肼结合， 生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光 谱与丙酸酮二硝基苯稍有差别，在520m波长 比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较 丙酮酸二硝基苯腙为低（约相差3倍）。经转 氨基作用后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加， 因此在波长520m处吸光度增加的程度与反应 体系中丙酮酸与α-酮戊二酸的摩尔比基本上呈 线性关系，故可藉以测定谷丙转氨酶的活力。
3、酮体的测定
（1）另取2只50mL锥形瓶，按下表编号后加 入有关试剂。加完试剂后摇匀，放置10min。
编号
滤液1
I（实验） 2.0 II（对照） --
试剂（mL）
滤液2
0.1mol/L 10%NaO
H2O
碘溶液 H溶液
--
--
3.0
3.0
2.0
--
3.0
3.0
生物化学实验技术
在标准曲线上查出丙酮酸的μmol数（用 1μmol丙酮酸代表1.0单位酶活力），计算每 100mL血清中转氨酶的活力单位数。
混匀后，37℃水浴20min
0.4mol/L NaOH溶液/mL
5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
混匀后，室温放置10min，以0号管作空白，在505nm比色
丙酮酸的μmol数（横坐标） 0
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
A505nm（纵坐标）
生物化学实验技术
2、另取2支试管，按下表进行操作。
生物化学实验技术
本实验以丙氨酸及α-酮戊二酸作为谷丙转氨酶 （GPT或ALT）作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛 作辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮 酸的量来确定其酶活力。丙酮酸能与2,4-二硝基苯肼 结合，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，后者在碱性溶液 中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439~530nm，可用于 测定丙酮酸含量。
血清谷丙转氨酶实验报告
一、实验目的通过本实验，了解血清谷丙转氨酶（SGPT）的测定原理、方法及临床意义，掌握分光光度法测定血清谷丙转氨酶活性的操作技能。
二、实验原理谷丙转氨酶（ALT）是一种催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸之间氨基转移的酶，主要存在于肝细胞内。
当肝细胞受到损害时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血清ALT活性升高。
本实验采用分光光度法测定血清ALT活性，通过测定ALT催化丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙的吸光度，从而计算出ALT的活性。
三、实验材料1. 试剂：丙氨酸标准品、α-酮戊二酸标准品、2，4-二硝基苯肼、磷酸盐缓冲液、氢氧化钠、邻苯二甲酸氢钾等。
2. 仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验方法1. 标准曲线绘制（1）配制丙氨酸标准溶液：准确称取丙氨酸标准品，用磷酸盐缓冲液溶解并定容，配制成0.1mmol/L的丙氨酸标准溶液。
（2）取六支试管，分别加入0.1mmol/L丙氨酸标准溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，各加入磷酸盐缓冲液至1.0ml。
（3）向各试管中加入2，4-二硝基苯肼0.2ml，混匀，37℃水浴30min。
（4）加入氢氧化钠溶液1.0ml，混匀，显色30min。
（5）用分光光度计在540nm波长处测定各试管吸光度，以丙氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活性测定（1）取血清样本0.1ml，加入磷酸盐缓冲液至1.0ml。
（2）按标准曲线绘制方法，测定血清样本吸光度。
（3）根据标准曲线，计算血清ALT活性。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以丙氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：Y = 0.0678X - 0.0011，相关系数R²=0.9968。
2. 血清ALT活性测定测定血清样本吸光度为0.560，根据标准曲线计算血清ALT活性为0.9mmol/L。
实验五血清中谷丙转氨酶的测定
200 –
50.0 –
200
2000
冷却至室温后，510nm处比色
比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。 第五页
（2）计算： 依据朗伯-比尔定律： A=KLC
标准管谷丙转氨酶活力：57U/L
U样=
A样 A标
× U标
样品管光密度值
样品管谷丙转氨酶活力（＝
×57
U/L）
标准管光密度值
第六页
温水浴锅
第四页
四、实验步骤
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
试剂
试剂空白管 标准管 样品管
基质液(uL)
200
200
标准液(uL)
–
50.0
血清样品(uL)
–
–
蒸馏水(uL)
50.0
–
混合37℃水浴放置30min显色剂(uFra bibliotek)200
200
37℃水浴放置20min
稀释NaOH(uL)
2000
2000
参考值
谷丙转氨酶
血清参考值：0~ 50U/L
第七页
注意事项
正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比 色液应占比色皿的2/3。
每次测定时都需用试剂空白溶液调零，不能用 蒸馏水代替
微量移液枪的正确使用
第八页
（1）丙氨酸+α-酮戊二酸 ALT 丙酮酸+谷氨酸
（2）丙酮酸+2,4-二硝基苯肼
丙酮酸2,4-二硝基苯肼(黄色)
NaOH （3） 丙酮酸2,4-二硝基苯肼
（黄色）
苯腙硝醌化合物 （红棕色）
510nm
相对血清ALT活力
光吸收法测定
第三页
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= SALT活力
测定管微克数—对照管微克数 （单位） 2.5×0.1
五、注意事项
1. 2，4-二硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙 2. 吸量应准确，严格控制反应时间和温度。 3. 在测定SALT活力时，应事先将底物、血清在37℃水浴中恒 温 4. 溶血标本不宜采用，因血细胞内转氨酶活力较高，影响测定 结果。 5．在测定时，如酶活力较大（大于100单位），应将样品稀释 后再进行测定。
serum Aminotransferase/ transaminase
catalyze alanine α-ketoglutarate glutamic acid pyruvic acid alkali substrate
ABSTRACT
Observing Enzyme Activity Changes of Alanine Aminotransferase in Sample
三、实验原理
COOH
C H3
CH2 α-ketoglutarate C H2
C H N H2 COOH
CO
alanine
COOH
COOH GPT
SUBSTRATE
C H2 CH2
C H N H2 COOH
pyrivic acid
C H3 CO COOH
pyruvic acid glutamic acid
0.50 0.50
0.50
0.50
0.50
0.50
37℃水浴保温20min
氢氧化钠ml
5
5
5
5
5
5
室温下静置10min
蒸馏水调零点，于520nm处测吸光度
1. 为什么在制作标准曲线时要加入底物溶液 2. 为什么加入底物溶液的体积不同，对反应没有影响 3. 怎么计算丙酮酸的质量
50 A520 丙酮酸微克数-吸光度标准曲线
0.4mol/L氢氧化钠溶液， ml
测定管 0.1 0.5
37℃水浴30min
0.5 ____
37℃水浴20min
5.0 室温下静置10min
对照管 0.1 ____
0.5 0.5
5.0
1. 4根干燥试管的用途是什么？ 2. 样品测定为什么要使用对照管？ 3. 样品测定的酶反应怎样终止？ 4. 血清样品和底物在使用前最好提前放置于水浴中预热，
45
40
35 y = 117.0x - 0.733
30
25
20
15
10
5
0
-5 0
0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4
丙酮酸微克数(μg)
2． SALT活力测定：洁净干燥试管4支，即测定管、对照管各2支
试剂 血清， ml SALT底物溶液， ml
2,4-二硝基苯肼溶液， ml SALT底物溶液， ml
1. 转氨作minotransferase，transaminase） 催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶
谷丙转氨酶 glutamic-pyruvic transminase GPT 又称丙氨酸转氨酶alanine aminotransferase ALT
谷草转氨酶 glutamic oxaloacetic transaminase GOT 又称天冬氨酸转氨酶 aspartate transaminase, AST
3.转氨作用的机制：
4．转氨作用的意义 正常时转氨酶主要分布在细胞内，血清中酶活 力很低 GOT以心脏细胞中活力最大，其次为肝脏细胞 GPT则以肝脏细胞中活力最大
N O2
H2N HN
N O2
CH3
N O2
C N NH
COOH
N O2
Pyruvate dinitrate
H2O
ph丙en酮ylh酸yd二ra硝zo基n苯e 腙
OH
Re红d 棕br色own
2,4-dinitrate2,p4h-e二ny硝lh基yd苯ra肼zine
SALT单位的定义是：1ml 血清在37℃与底物作 用30min，每产生2.5μg丙酮酸所需酶的量为一个 SALT单位。
四、实验操作
1.标准曲线的绘制 试剂 管号
0
1
2
3
4
5
丙酮酸标准液，ml
0.00 0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
SALT底物溶液，ml
0.50 0.45
0.40
0.35
0.30
0.25
磷酸缓冲液，ml
0.10 0.10
0.10
0.10
0.10
0.10
37℃水浴中保温10min
2,4-二硝基苯肼
正常组织 心脏 肝脏
异常组织 心脏 肝脏
细胞中酶活力 GOT高 GOT/GPT高 细胞破损酶溢出
血清中酶活力
GOT升高 GOT/GPT
GOT低 GOT/GPT低
升高
5.谷丙转氨酶的临床意义
如果GPT血清值超过正常上限2－3倍，并持续两 周以上，表明有肝胆疾病存在的可能。 ALT的正常上限是40单位，2.5倍为100单位，20 倍为800单位。
Abstract: Objetcive: To determine the activity of serum ALT in sample. Method: SALT was measured by Reitman-Frankel colorimetric end point method Results: The normal SALT activity is ( ) unit, the abnormal SALT activity is ( ) unit. Conclusion: The activity of SALT in abnormal sample is much higher than that in normal sample Key Words: alanine aminotransferase， aspartate transaminase, enzyme activity, serum, α-ketoglutarate, substrate,
实验六
观察血清中谷丙转氨酶的活力变化
Experiment 6
Observing Enzyme Activity Changes of Alanine Aminotransferase in Sample
一、目的要求
1、了解血清谷丙转氨酶活力变化的意义 2、掌握血清谷丙转氨酶活力的测定方法
二、相关知识点
六、专业词汇
glutamic-pyruvic transminase GPT alanine aminotransferase ALT glutamic oxaloacetic transaminase GOT aspartate transaminase, AST enzyme activity