【1】生物样本中蛋白质地提取及测定(分子医学实验)
生物蛋白的检验实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解蛋白质的组成和结构。
2. 掌握蛋白质的定性检测方法，包括双缩脲法、比色法等。
3. 熟悉蛋白质定量检测方法，如Bradford法。
4. 分析蛋白质在生物体中的重要作用。
二、实验原理1. 蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的生物大分子，具有多种生物学功能，如催化、运输、结构支撑等。
2. 双缩脲法：蛋白质中的肽键在碱性条件下与Cu2+形成紫红色络合物，颜色深浅与蛋白质含量成正比。
3. 比色法：通过蛋白质与特定试剂反应，形成有色物质，根据吸光度判断蛋白质含量。
4. Bradford法：蛋白质与Coomassie Brilliant Blue G-250反应，形成蓝色复合物，吸光度与蛋白质含量成正比。
三、实验材料1. 样品：鸡蛋清、牛奶、豆奶等。
2. 试剂：双缩脲试剂、比色试剂、Bradford试剂、NaOH、CuSO4、Bradford试剂标准品等。
3. 仪器：分光光度计、电子天平、移液器、试管等。
四、实验步骤1. 蛋白质定量检测（Bradford法）（1）配制Bradford试剂工作液：取适量Bradford试剂原液，用蒸馏水稀释100倍。
（2）配制蛋白质标准曲线：取Bradford试剂标准品，分别配制浓度为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL的标准溶液。
（3）测定样品吸光度：取适量样品，加入Bradford试剂工作液，摇匀，室温放置10分钟，用分光光度计测定595nm处的吸光度。
（4）绘制标准曲线，计算样品蛋白质含量。
2. 蛋白质定性检测（双缩脲法）（1）取适量样品，加入双缩脲试剂A液，摇匀。
（2）加入双缩脲试剂B液，摇匀。
（3）观察溶液颜色变化，记录结果。
3. 蛋白质定性检测（比色法）（1）取适量样品，加入比色试剂，摇匀。
（2）用分光光度计测定特定波长下的吸光度。
（3）记录结果。
五、实验结果与分析1. 蛋白质定量检测结果通过绘制标准曲线，计算样品蛋白质含量，得到以下结果：- 鸡蛋清蛋白质含量：X mg/mL- 牛奶蛋白质含量：Y mg/mL- 豆奶蛋白质含量：Z mg/mL2. 蛋白质定性检测结果（1）双缩脲法：鸡蛋清、牛奶、豆奶样品均呈现紫红色，说明样品中含有蛋白质。
蛋白质提取实验报告
一、实验目的1. 熟悉蛋白质提取的基本原理和方法。
2. 掌握蛋白质提取过程中常用的实验技术。
3. 了解蛋白质提取过程中的注意事项。
二、实验原理蛋白质是生物体内重要的生物大分子，广泛存在于各种生物组织中。
蛋白质提取是指从生物材料中分离和纯化蛋白质的过程。
本实验采用组织匀浆法提取动物组织中的蛋白质，通过离心、透析等步骤去除杂质，最终获得纯净的蛋白质样品。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠肝脏组织、离心管、组织匀浆器、透析袋、蒸馏水、缓冲液、蛋白酶抑制剂等。
2. 实验仪器：电子天平、高速离心机、移液器、恒温水浴锅、pH计、紫外-可见分光光度计等。
四、实验步骤1. 称取小鼠肝脏组织1g，加入适量缓冲液，用组织匀浆器匀浆。
2. 将匀浆液以3000r/min离心10分钟，收集上清液。
3. 将上清液转移至透析袋中，放入装有蒸馏水的烧杯中，透析24小时，去除小分子物质。
4. 将透析后的蛋白质溶液用pH计测定pH值，调节至7.0。
5. 加入适量的蛋白酶抑制剂，防止蛋白质降解。
6. 将蛋白质溶液转移至离心管中，以10000r/min离心10分钟，去除沉淀。
7. 收集上清液，用紫外-可见分光光度计测定蛋白质浓度。
8. 将蛋白质溶液转移至无菌容器中，4℃保存备用。
五、实验结果与分析1. 蛋白质提取效率：通过比较蛋白质提取前后样品的紫外-可见光吸收值，计算蛋白质提取效率。
本实验中，蛋白质提取效率为80%。
2. 蛋白质纯度：通过SDS-PAGE电泳分析，观察蛋白质条带，判断蛋白质纯度。
本实验中，蛋白质纯度较高，条带清晰。
3. 蛋白质浓度：通过紫外-可见分光光度计测定蛋白质浓度，计算蛋白质含量。
本实验中，蛋白质浓度为0.5mg/mL。
六、实验讨论与心得1. 实验过程中，组织匀浆的充分程度对蛋白质提取效率有重要影响。
匀浆过程中应尽量减少气泡产生，以保证蛋白质的完整性和提取效率。
2. 透析过程中，应选择合适的透析袋，以确保蛋白质不被透析袋孔径所截留。
蛋白提取实验报告
一、实验目的1. 学习蛋白质提取的基本原理和方法。
2. 掌握常用的蛋白质提取试剂及其作用。
3. 熟悉蛋白质提取过程中的注意事项。
二、实验原理蛋白质是生物体的重要组成部分，广泛存在于各种生物体中。
蛋白质提取是研究蛋白质结构与功能的基础。
本实验采用组织匀浆法提取蛋白质，通过加入一定量的蛋白质提取试剂，使蛋白质从组织细胞中释放出来，并通过离心、沉淀等步骤分离纯化蛋白质。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜鸡蛋、组织匀浆器、离心机、电子天平、移液器、玻璃棒、锥形瓶、烧杯、蒸馏水、丙酮、SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒等。
2. 实验试剂：Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）、SDS、β-巯基乙醇、DTT、NaOH、盐酸、NaCl、EDTA、蛋白酶抑制剂等。
四、实验步骤1. 蛋白质提取液制备：将Tris-HCl缓冲液、β-巯基乙醇、DTT、NaOH、NaCl、EDTA、蛋白酶抑制剂按一定比例混合，配制成蛋白质提取液。
2. 鸡蛋匀浆：将新鲜鸡蛋去壳，加入适量的蒸馏水，用组织匀浆器匀浆。
3. 蛋白质提取：将匀浆后的鸡蛋液加入蛋白质提取液中，混匀，室温放置30分钟。
4. 离心：将混合液以3000 r/min离心10分钟，收集上清液即为蛋白质提取液。
5. 蛋白质沉淀：在上清液中加入丙酮，使蛋白质沉淀，静置1小时。
6. 沉淀洗涤：将沉淀用丙酮洗涤2次，弃去丙酮。
7. 蛋白质溶解：将沉淀加入适量的SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒中的还原缓冲液，混匀，溶解蛋白质。
五、实验结果与分析1. SDS-PAGE电泳：将溶解后的蛋白质进行SDS-PAGE电泳，观察蛋白质条带。
2. 结果分析：根据电泳结果，可以观察到明显的蛋白质条带，说明蛋白质提取成功。
六、实验讨论1. 蛋白质提取过程中，选择合适的提取试剂和提取方法至关重要。
本实验中，我们采用组织匀浆法提取蛋白质，并结合多种蛋白质提取试剂，提高了蛋白质提取效率。
2. 蛋白质提取过程中，注意防止蛋白质变性和酶解。
仪器分析-实验课(蛋白提取与测定)
肌原纤维蛋白的提取——原理来自实验二： 肌原纤维蛋白的提取
取猪背最长肌，剔除脂肪和结缔组织，切成 1 cm3 小块，加入4 倍体积缓冲液(10 mM Na3PO4、0.1 M NaCl、2 mM MgCl2和 1 mM EGTA，pH7.0)，匀浆 60 s，3500 r/min冷冻离心15 min，取沉淀重复上面 步骤两次，得到粗提的肌原纤维蛋白。然后取此沉 淀加入4倍体积的0.1 M NaCl溶液，匀浆60 s，3500 r/min冷冻离心15 min，重复此操作一遍，取沉淀加 4倍体积的0.1 M NaCl 溶液，匀浆60 s，4层纱布过 滤，取上清液，用0.1 M的HCl调节pH值至6.0， 3500 r/min冷冻离心15 min，沉淀即为提纯的肌原纤 维蛋白，4°C冷藏备用。
静置30min后，在595nm波长下测吸光度以牛血 清蛋白含量(µg)为横坐标，以吸光度为纵坐标， 绘出标准曲线。
标准曲线法
标准曲线法的计算公式在一定条件下，标准曲线是一条直 线，直线的斜率和截距可以用最小二乘法求得。工作曲线 可以用一元线性方程表示：y=ax+b
式中，x为标准溶液的浓度，y为相应的吸光度。使用最小 二乘法确定的直线称为回归线，a,b称为回归系数。a 为直 线的斜率
双缩脲法测定蛋白质的含量——原理
实验三：双缩脲法测定蛋白质的含量
采用双缩脲法测定蛋白浓度，牛血清蛋白（BSA） 作为标准蛋白 。
1、标准曲线的制作
(10mg/ml) BSA/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
H2O/mL 双缩脲试剂/mL
1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
全蛋白提取实验报告
实验名称：全蛋白提取实验实验目的：学习掌握全蛋白提取的基本方法，了解蛋白质提取过程中可能遇到的问题及解决方法。
实验时间：2022年X月X日实验地点：实验室实验人员：XXX、XXX、XXX一、实验原理蛋白质是生物体的重要组成部分，提取蛋白质是生物化学、分子生物学等领域的重要实验技术。
全蛋白提取是将细胞或组织中的蛋白质提取出来，以便进行后续的蛋白质定量、纯化、鉴定等实验。
本实验采用组织裂解法提取全蛋白，该方法简单、快速、高效。
二、实验材料1. 实验材料：新鲜组织（如肝脏、肌肉等）2. 实验试剂：裂解液、磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、PMSF、SDS-PAGE电泳试剂、考马斯亮蓝R-250染料等3. 实验仪器：玻璃匀浆器、离心机、移液器、电泳仪、凝胶成像系统等三、实验步骤1. 组织处理：将新鲜组织用剪刀剪成小块，称取适量组织放入玻璃匀浆器中。
2. 裂解：向匀浆器中加入适量的裂解液，加入磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF，冰上裂解30min。
3. 离心：将裂解后的匀浆液以12000g离心15min，取上清液。
4. 蛋白质定量：采用考马斯亮蓝R-250法对蛋白质进行定量。
5. SDS-PAGE电泳：将蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳，观察蛋白质条带。
四、实验结果与分析1. 蛋白质定量结果：根据考马斯亮蓝R-250法，测定蛋白质浓度为X mg/mL。
2. SDS-PAGE电泳结果：观察蛋白质条带，可见明显的蛋白质条带，表明全蛋白提取成功。
五、讨论1. 裂解液的选择：本实验采用裂解液提取蛋白质，裂解液的选择对蛋白质提取效果有很大影响。
本实验中，裂解液中含有磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF，能有效抑制蛋白质降解，提高蛋白质提取效率。
2. 蛋白质定量：本实验采用考马斯亮蓝R-250法进行蛋白质定量，该方法操作简便、灵敏度高，适用于蛋白质含量较高的样品。
3. SDS-PAGE电泳：本实验采用SDS-PAGE电泳分离蛋白质，该方法能有效地分离蛋白质，便于观察蛋白质条带。
蛋白提取相关实验报告
1. 掌握蛋白质提取的基本原理和方法。
2. 学习蛋白质提取过程中所涉及的实验操作技术。
3. 了解蛋白质提取过程中的注意事项，提高实验操作技能。
二、实验原理蛋白质是生物体内重要的生物大分子，具有多种生物学功能。
在生物化学、分子生物学等领域，蛋白质提取是研究蛋白质结构与功能的重要前提。
本实验以鸡蛋清为材料，采用酸沉淀法提取蛋白质。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、冰、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水、硫酸铵、丙酮、酚酞指示剂等。
2. 实验仪器：研钵、研杵、离心机、电子天平、移液器、容量瓶、试管等。
四、实验步骤1. 鸡蛋清的制备：将鸡蛋打破，将蛋黄与蛋白分离，收集蛋白备用。
2. 蛋白质提取：取一定量的鸡蛋清，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。
加入2mol/L 盐酸，调节pH至4.5，使蛋白质发生酸沉淀。
用移液器取上清液，加入适量的硫酸铵，使蛋白质发生盐析沉淀。
离心分离，弃去上清液，收集沉淀。
3. 蛋白质复溶：将沉淀用蒸馏水洗涤2-3次，弃去洗涤液。
将沉淀转移到离心管中，加入适量的氢氧化钠溶液，使蛋白质复溶。
4. 蛋白质定量：取一定量的复溶蛋白质溶液，加入适量的酚酞指示剂，用氢氧化钠溶液滴定至溶液呈现微红色，记录滴定所用氢氧化钠溶液的体积。
5. 蛋白质浓度计算：根据滴定结果，计算蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 实验结果：根据滴定结果，计算得到蛋白质浓度为0.5mg/mL。
2. 结果分析：通过酸沉淀法提取蛋白质，成功从鸡蛋清中提取出蛋白质。
实验结果表明，所提取的蛋白质浓度较高，说明实验操作较为成功。
1. 蛋白质提取过程中，选择合适的提取方法和试剂对实验结果有重要影响。
本实验采用酸沉淀法提取蛋白质，操作简单，效果较好。
2. 在蛋白质提取过程中，注意控制pH值和温度，以防止蛋白质变性。
3. 实验过程中，应尽量避免空气氧化和细菌污染，以保证蛋白质的纯度。
4. 蛋白质浓度计算时，应准确记录滴定所用氢氧化钠溶液的体积，以确保实验结果的准确性。
分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法
分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法蛋白质提取是分子生物学研究中的一个重要步骤，通过提取出目标蛋白质可以进行进一步的分析和研究。
在实验室中，常用的蛋白质提取方法有多种，本文将介绍几种常见且有效的蛋白质提取方法。
一、细胞裂解法细胞裂解是最基本且重要的蛋白质提取步骤，它将细胞破裂，使内部蛋白质释放到裂解液中。
细胞裂解方法有多种，如机械破碎、超声波破碎和冻融破碎等。
其中，机械破碎是最常用的方法之一，它利用高速旋转的研钵或研磨珠对样品进行机械破碎，快速破裂细胞。
二、溶液裂解法溶液裂解法是一种温和的提取方法，适用于含有脆弱或难以裂解的细胞。
该方法通过将细胞置于含有细胞膜破坏剂的缓冲溶液中，使细胞膜破裂释放蛋白质。
常用的溶液裂解剂有洗涤剂（如SDS、Triton X-100等）和脂质体（如Tween 20）等。
三、超声波法超声波法是一种物理破碎的蛋白质提取方法。
它利用高频超声波的振荡作用，产生机械特效，使细胞破裂释放蛋白质。
超声波法可以实现非接触式破碎，不会污染样品，且对细胞结构的损伤较小，适用于多种细胞类型的蛋白质提取。
四、离心法离心法是一种通过差速离心来分离细胞碎片、细胞核或其他蛋白质复合物的方法。
通过调整离心速度和时间，可以使不同大小和密度的颗粒分层沉淀，从而实现蛋白质的分离和提取。
五、柱层析法柱层析法是一种高效的蛋白质提取方法，通过将样品溶液通过填充有特定亲和剂或离子交换基质的柱子，实现目标蛋白质的选择性吸附和洗脱。
柱层析法具有选择性强、分离效果好的特点，适用于高纯度蛋白质的提取。
六、电泳法电泳法是一种通过电场作用将蛋白质分离和提取的方法。
常见的电泳法有聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、SDS-PAGE等。
通过将样品经过电泳分离，可以将目标蛋白质从其他蛋白质分子中分离出来，实现蛋白质提取的目的。
总结：以上是分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法。
根据实验需要和样品特点的不同，选择合适的提取方法对于蛋白质研究的成功至关重要。
蛋白质提取实验报告
蛋白质提取实验报告蛋白质提取实验报告引言：蛋白质是生命体内最基本的组成部分之一，具有重要的生物学功能。
为了研究蛋白质的结构和功能，科学家们经常需要从生物样品中提取蛋白质。
本实验旨在探究蛋白质提取的方法和步骤，并评估不同提取方法的效果。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 细胞样品（例如细菌、植物或动物细胞）- 细胞裂解缓冲液（含有蛋白质保护剂）- 高速离心机- 蛋白质定量试剂盒2. 实验步骤：1）将细胞样品收集到离心管中，并加入适量的细胞裂解缓冲液。
2）使用超声波处理仪对细胞样品进行超声波破碎，以破坏细胞膜，释放细胞内的蛋白质。
3）将破碎后的细胞样品放入高速离心机中，以分离蛋白质。
4）将上清液转移到新的离心管中，并进行蛋白质浓度的测定。
实验结果与讨论：通过本实验，我们成功提取了细胞样品中的蛋白质，并进行了浓度测定。
在实验过程中，我们注意到以下几个关键点。
1. 细胞裂解缓冲液的选择：细胞裂解缓冲液中的蛋白质保护剂可以保护蛋白质免受降解。
在本实验中，我们选择了含有蛋白质保护剂的缓冲液，以最大程度地保留蛋白质的完整性和活性。
2. 超声波破碎的条件：超声波破碎是破坏细胞膜的常用方法之一。
然而，超声波的功率和处理时间对实验结果有很大的影响。
在本实验中，我们对超声波功率和处理时间进行了优化，以确保细胞样品完全破碎，但又不会对蛋白质造成不可逆的损伤。
3. 高速离心的参数选择：高速离心是将细胞碎片与蛋白质上清液分离的关键步骤。
离心的参数，如转速和离心时间，对分离效果有重要影响。
在实验中，我们尝试了不同的离心参数，并选择了最佳条件，以获得最高纯度的蛋白质上清液。
4. 蛋白质浓度的测定：蛋白质浓度的测定是评估蛋白质提取效果的重要步骤。
在本实验中，我们使用了蛋白质定量试剂盒进行测定。
该试剂盒利用比色法，根据蛋白质与染色剂的反应产生的吸光度变化来测定蛋白质的浓度。
通过与标准曲线的比较，我们可以准确地确定蛋白质的浓度。
结论：通过本实验，我们成功地提取了细胞样品中的蛋白质，并进行了浓度测定。
实验一 蛋白质含量测定平时必备哦亲讲解
引言
蛋白质的定量分析是生物化学和其他生命学科最常涉及的分析内容，是 临床上诊断疾病及检查康复情况的重要指标，也是许多生物制品，药 物、食品质量检测的重要指标。在生化实验中，对样品中的蛋白质进 行准确可靠的定量分析，则是经常进行的一项非常重要的工作。
?
目前测定蛋白质含量的方法有很多种，下面列出根据蛋白质不同性
重复上述测定操作 1-2次，读取相应的吸光度值， 取平均值。
? （7）浓度的测定 选择开关由“A”旋置“C”，将已标定浓度的样 品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放 入光路，此时数字显示值即为该待测溶液的浓度值。
（8）关机 实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比色皿 座架用软纸擦净。
碱性
烯醇化
铜离子在pH10条件下螯合在肽键结构中
从而使电子转移到混和酸的显色剂上， 增强了 酚试剂 对蛋白质的敏感性。
? 蛋白质与酚试剂呈色深浅与蛋白质的 含量成正比，利用蛋白质的浓度与呈 色的关系，制备标准曲线，来测定样 品中的蛋白质含量。
Lowry法优点
? 本法的优点是操作简便、灵敏度高、 较紫外吸收法灵敏 10—20倍，较双 缩脲法灵敏 100倍。其不足之处是 此反应受多种因素干扰。
（4）调节T=0% 轻轻旋动“0%”旋钮，使数字显示为“00.0”， （此时试样室是打开的）。
722型分光光度计的使用
? （5）调节T=100% 将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的比色皿 放入比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试样室盖子轻轻盖上， 调节透过率“100%”旋钮，使数字显示正好为“100.0”。
? （1）预热仪器 将选择开关置于“T”，打开电源开关，使仪器预热 20分钟。为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定 时应将试样室盖打开，使光路切断。
蛋白质测定实验报告
一、实验目的1. 理解蛋白质测定的原理和方法。
2. 掌握双缩脲试剂法测定蛋白质含量的基本操作步骤。
3. 学会使用分光光度计进行蛋白质定量分析。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子有机化合物，具有重要的生物学功能。
蛋白质含量是生物样品中的重要指标之一。
本实验采用双缩脲试剂法测定蛋白质含量，该法基于蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与铜离子发生反应，生成紫红色络合物，其吸光度与蛋白质含量成正比。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：鸡蛋清、牛血清白蛋白、牛血清、双缩脲试剂A、双缩脲试剂B、蒸馏水、分光光度计等。
2. 试剂：（1）双缩脲试剂A：称取硫酸铜0.1g，溶于50mL蒸馏水中；（2）双缩脲试剂B：称取酒石酸钾钠0.5g、碘化钾0.1g，溶于50mL蒸馏水中；（3）蛋白质标准溶液：配制浓度为0.1mg/mL的蛋白质标准溶液。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制（1）取6支10mL具塞试管，分别加入0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL蛋白质标准溶液；（2）向各试管中加入1.5mL双缩脲试剂A；（3）混匀，室温放置10分钟；（4）加入5mL双缩脲试剂B；（5）混匀，室温放置10分钟；（6）以蒸馏水为空白，用分光光度计在540nm波长处测定吸光度；（7）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定（1）取6支10mL具塞试管，分别加入0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL待测样品；（2）同标准曲线绘制步骤，测定吸光度；（3）根据标准曲线，计算样品蛋白质含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：y = 0.0019x + 0.0032，相关系数R² = 0.9986。
2. 样品测定根据标准曲线，计算各样品蛋白质含量如下：（1）鸡蛋清：0.5mg/mL；（2）牛血清：0.4mg/mL。
蛋白质的提取与检测
蛋白质的提取与检测第一节细胞总蛋白的提取及含量测定【基本原理】蛋白质含量测定法是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。
目前常用的有四种经典的方法，即定氮法、双缩脲法（ Biuret 法）、 Folin- 酚试剂法（ Lowry 法）和紫外吸收法。
另外还有两种近年普遍使用起来的测定法，即考马斯亮蓝法（ Bradford 法）与二辛可宁酸法（ BCA 法）。
值得注意的是，上述方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这几种方法测定有可能得出不同的结果。
每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。
在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。
Lowry 法：蛋白质与碱性铜溶液中的二价铜离子络和使得肽键伸展，从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与磷钼钨酸反应并产生深蓝色，在 750nm有最大光吸收值。
在一定浓度范围内，反应液颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比 ,由于各种蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量各不相同，因此在测定时需使用同种蛋白质作标准。
Bradford 法：蛋白质与染料考马斯亮蓝 G-250 结合，使得染料最大吸收峰从 465nm变为595nm,溶液的颜色由棕黑色变为蓝色。
在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定 595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。
BCA （Bicinchoninic acid ）法：二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子（Biuret reaction）并与BCA相互作用产生敏感的颜色反应。
两分子的 BCA 螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。
该水溶性的复合物在 562nm 处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
试剂配制】1. 1.74mg/ml (10mmol/L) PMSF: 0.174g PMSF溶解于 100ml 异丙醇，分装于 1.5ml离心管中，-20C保存。
【1】生物样本中蛋白质的提取及测定(分子医学实验)
《分子生物学实验》实验报告实验名称：生物样本中蛋白质的提取及测定姓名：杰学号： 3140104666组别：同组同学：唐曦带教教师：伟俞萍实验日期： 2015年9月15日目录1.原理： (3)1.1生物样本中蛋白质的提取 (3)1.2生物样本中蛋白质的测定 (4)1.2.1 Lowry法 (4)1.2.2 考马斯亮蓝法 (4)1.2.3 紫外吸收法 (4)2.操作步骤 (4)2.1生物样本中蛋白质的提取 (4)2.2生物样本中蛋白质的测定 (5)2.2.1 Lowry法 (5)2.2.2 考马斯亮蓝法 (5)2.2.3紫外吸收法 (6)3、实验结果 (6)3.1 原始数据 (6)3.1.1 Lowry法 (6)3.1.2 考马斯亮蓝法 (7)3.1.3 紫外吸收法 (7)3.2 数据处理 (8)3.2.1 Lowry法 (8)3.2.2 考马斯亮蓝法 (9)3.2.3 紫外吸收法 (10)4.讨论： (11)1.原理：1.1生物样本中蛋白质的提取离体不久的组织，在适宜的温度及pH等条件下，可以进行一定程度的物质代。
因此，在生物化学实验中，常利用离体组织来研究各种物质代的途径与酶系作用，也可以从组织中提取各种代物质或酶进行研究。
但生物组织离体过久，其所含物质的含量和生物活性都将发生变化。
例如，组织中的某些酶在久置后会发生变性而失活；有些组织成分如糖原、ATP等，甚至在动物死亡数分钟至十几分钟，其含量即有明显的降低。
因此，利用离体组织作代研究或作为提取材料时，都必须迅速将它取出，并尽快地进行提取或测定。
一般采用断头法处死动物，放出血液，立即取出实验所需的脏器或组织，除去外层的脂肪及结缔组织后，用冰冷的生理盐水洗去血液（必要时可用冰冷的生理盐水灌注脏器以洗去血液），再用滤纸吸干，即可用于实验。
取出的脏器或组织，可根据不同的方法制成不同的组织样品。
包括组织糜、组织匀浆、组织浸出液。
由于动物肝脏细胞比较脆弱，易于破碎，故本实验选用小鼠肝脏细胞作为实验材料，采用匀浆法法将其破碎，然后加入样品提取液使蛋白质溶解，用高速离心法弃去细胞碎片。
实验一动物细胞蛋白质的提取和含量测定
4、初提液的浓缩（利于下一步分离）：常用沉淀法，超滤法， 冷冻干燥法等。适当的沉淀剂可浓缩样品，并可去除核酸。
沉淀法：蛋白溶液中加入有机溶剂（如丙酮、乙醚等）， 通过其脱水作用和减少溶剂的极性使蛋白沉淀。或者加入硫 酸铵到一定浓度，蛋白可通过盐析作用沉淀。
（3）缺点
1. 由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同， 因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差。
2. 仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污 剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1N的 NaOH。（如同0.1N的酸干扰Lowary法一样）。 3. 标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用Beer定律进行计 算，而只能用标准曲线。
❖ 1、Lowry法（Folin－酚试剂法） ❖ 2、Bradford法 （考马斯亮蓝法） ❖ 3、紫外吸收法
这些方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因 为一种蛋白质溶液用这几种方法测定，有可能得出几种不同 的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。其 中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏 10～20倍.在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵 敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质； ④测定所要花费的时间。
❖ 3.逐管加入0. 5毫升试剂乙（Folin－酚试剂），同样立即充 分混匀。这一步混合速度要快，否则会使显色程度减弱。然 后在室温下放置30-60分钟。
❖ 4.以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，将样品和 待测品在可见分光光度计上于550nm处测定各管中溶液的吸 光度值。
蛋白质的提取及测定
蛋白质的提取及含量测定蛋白质的提取1.藻细胞破碎方法1.1反复冻融法：将藻细胞在20℃以下冰冻，再在4℃左右融解，反复3-4次，利用细胞内冰粒的形成和细胞液盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。
在显微镜下观察计数细胞破碎率可达90%以上，将破碎的的藻细胞悬浊液于4000 r/min离心20 min，弃沉淀，上清液加入一定量的壳聚糖，浓度为10g/L，充分搅拌后，4℃静置12 h，离心，取上清液。
该法操作简单、方便，适用于实验室少量藻体材料的处理。
1.2溶胀法：直接用蒸馏水或低盐溶液浸泡藻体细胞，使其溶胀、破裂，释放出藻胆蛋白。
用15 g/ L N a N O3或1 0 m m o l / L CaCl2的浸泡效果好。
余九九等比较了液氮冻融法和超声波法后，认为采用蒸馏水或低浓度CaCl2溶液40℃条件下浸泡螺旋藻的提取方法效果较好。
但溶胀法提取周期较长，用蒸馏水要浸泡10 d，用低浓度CaCl2溶液也需浸泡3~4d。
1.3超声波法：运用超声波破碎藻体细胞的细胞壁，使藻胆蛋白溶出。
在80w的超声清洗仪中超声30min，以破坏藻细胞的细胞壁。
该法常作为藻胆蛋白提取中的辅助方法。
单纯用超声波来破碎藻体细胞壁是不够的，还必须与其它方法合用，以最大限度地破碎藻体细胞。
1.4组织捣碎法：将材料配成稀糊状液，用高速组织捣碎机来破碎藻体细胞。
实际操作中，上述几种方法经常混合使用，以最大限度地破碎藻体细胞，使藻胆蛋白溶出。
2.粗提方法2.1盐析法：取上述藻蛋白粗体液，加入25%梯度饱和硫酸铵溶液，4℃静置12 h，离心，离心，取上清液，追加至55%饱和度，4℃静置12 h，离心。
将2次盐析得到的粗体液置于5%硫酸铵饱和梯度中，4℃静置12 h，离心，取上清液，追加至35% 饱和度，4℃静置12h，离心。
将4次盐析得到的粗体液置于23%硫酸铵饱和梯度中，4℃静置12 h，离心，取上清液，追加35%饱和度，4℃静置12h，离心。
生物样本实验报告
实验名称：生物样本中蛋白质的提取及测定实验目的：1. 学习并掌握生物样本中蛋白质的提取方法。
2. 了解蛋白质定量测定原理及操作步骤。
3. 通过实验，验证蛋白质提取效果及测定结果的准确性。
实验原理：1. 蛋白质提取：蛋白质是生物体中重要的生物大分子，广泛存在于各种生物样本中。
提取蛋白质的方法有很多，本实验采用酸碱沉淀法进行蛋白质提取。
该方法利用蛋白质在不同pH值下的溶解度差异，通过调节pH值使蛋白质从溶液中沉淀出来，从而实现蛋白质的提取。
2. 蛋白质定量测定：蛋白质定量测定是生物实验中常用的一种方法，本实验采用双缩脲法进行蛋白质定量测定。
该方法基于蛋白质分子中的肽键与铜离子在碱性条件下发生紫色反应，通过比色法测定蛋白质的浓度。
实验器材：1. 实验台2. 电子天平3. 离心机4. pH计5. 移液器6. 烧杯7. 研钵8. 移液管9. 试管10. 恒温水浴锅11. 紫外分光光度计12. 蛋白质标准品13. 双缩脲试剂A（氢氧化钠溶液）14. 双缩脲试剂B（硫酸铜溶液）15. 标准缓冲液16. 生物样本实验步骤：1. 蛋白质提取：1. 称取一定量的生物样本，加入适量的双蒸水，研磨成匀浆。
2. 将匀浆转移至离心管中，离心分离，取上清液。
3. 向上清液中加入适量的双缩脲试剂A，搅拌均匀。
4. 加入适量的双缩脲试剂B，搅拌均匀。
5. 室温下放置10分钟，观察溶液颜色变化。
2. 蛋白质定量测定：1. 准备一系列已知浓度的蛋白质标准品溶液。
2. 向每个标准品溶液中加入适量的双缩脲试剂A和B，搅拌均匀。
3. 将标准品溶液和待测样品溶液在相同条件下进行比色测定。
4. 以标准品溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
5. 根据待测样品溶液的吸光度，从标准曲线上查得蛋白质浓度。
实验结果与分析：1. 蛋白质提取效果：通过观察溶液颜色变化，发现加入双缩脲试剂A和B后，溶液呈现紫色，说明蛋白质已成功提取。
2. 蛋白质定量测定结果：通过绘制标准曲线，发现标准品溶液浓度与吸光度呈线性关系。
动物蛋白质的提取和含量测定
动物蛋白的含量测定
测定：
1.荧光光度法： 荧光是发射光,是分子、原子吸收光辐射被 激发,接着再发射出与吸收波长相同或波长 更长的光,是光致发光现象。
测定： 利用荧光技术测定蛋白质的方法有两类,一是测 定蛋白质的自身荧光,利用外加物质使蛋白质自 身荧光猝灭;二是利用荧光指示剂即荧光探针进 行测定。 常使蛋白质与荧光探针作用,多是一些荧光染料, 有时也用其他试剂,与蛋白质结合后,光谱呈现出 能量转移特征,引起荧光增强或减弱,即敏化荧光 和荧光猝灭现象,由增强或减弱的程度来测定蛋 白质的含量。
温馨提示：
若短时间不用，可置于4℃保存。 较长时间不用，可置于-20 ℃或更低 温度保存。 防止提取出的蛋白质变性失活
提取： • 二、化学方法： 1.水溶液提取法 提取动物组织蛋白质一般采用各种水溶液。 稀盐和缓冲体系的水溶液对蛋白质稳定性 好、溶解度大，是最常用的溶剂。稀盐溶 液（一般用氯化钠溶液）可促进动物蛋白 质溶解，同时因盐离子与蛋白质部分结合， 具有保护蛋白质不易变性的特点。
蛋白质是生命的物质基础，没有蛋 白质就没有生命。
功能蛋白： 1.物质运输：如载体蛋白，血红蛋白 2.催化功能：如绝大多数酶 3.信息交流：如受体（糖蛋白），蛋白质 类激素 4.免疫：如抗体，淋巴因子等免疫分子
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1.蛋白质的提取、分离和鉴定工作是生物工程 中一项十分艰巨的任务。要想分离提纯某一特 定的蛋白，首先必须把蛋白质从组织活细胞中 以溶解的状态释放出来。 2.动物组织或动物细胞可用电动捣碎机或匀浆 器破碎，细菌和植物细胞可用超声波、高压挤 或砂研磨等方法进行破碎。 3.大多数蛋白质均可溶于水，稀酸或稀碱溶液 中，可采取不同溶剂提取，分离及提纯蛋白质。
测定：
温馨提示
蛋白质提取
蛋白质提取、纯化及分析技术（适应于微生物、生化等专业）实验一多酚氧化酶（PPO）的分离提取一、原理与目的多酚氧化酶是植物组织内广泛存在的一种含铜氧化酶，植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成醌，是组织形成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。
醌类物质对微生物有毒害作用，所以伤口醌类物质出现是植物防止伤口感染的愈伤反应，因而受伤组织一般这种酶的活性就会提高。
多酚氧化酶也可与细胞内其他底物氧化相偶联，起到末端氧化酶的作用。
PPO的存在是水果、蔬菜褐变及营养丧失的主要原因之一。
PPO氧化内源的酚类物质生成邻醌，邻醌再相互聚合成醌或蛋白质、氨基酸等作用生成高分子络合物而导致褐色素的生成，色素分子量愈高，颜色愈暗。
多酚氧化酶活性高低也是马铃薯解除休眠的指标之一。
本实验将采用马铃薯为主要材料，通过组织细胞破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。
通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握相关仪器设备的操作使用，以及蛋白质的提取、分离的系统技术。
二、材料与试剂（1）马铃薯（大约每小组100-200g）（2）试剂：0.03M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02M巯基乙醇，0.001MEDTA，5%甘油，1%的聚乙烯吡咯烷酮)配制时配×10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵；0.03M磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02M 巯基乙醇，0.001MEDTA，0.005MgCL2）配置时配（3）实验器械与仪器设备：试管与试管架；烧杯、玻璃搅棒；移液管、滴管等；试剂瓶；透析袋；过滤纱布；植物组织匀浆器；pH计和pH试纸；GL-20C高速冷冻离心机；DL-7A大容量低速冷冻离心机三、操作步骤1：粗酶提取：水果肉组织按1：1（W/V）比例与003M磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02M巯基乙醇，0.001MEDTA，5%甘油，1%聚乙烯吡咯烷酮）混合，匀浆4层后纱布过滤，滤液以6000rpm 离心10min，弃除沉淀获得酶提取液。
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《分子生物学实验》实验报告实验名称：生物样本中蛋白质的提取及测定姓名：陈杰学号： 3140104666组别：同组同学：唐陈曦带教教师：刘伟俞萍实验日期： 2015年9月15日目录1.原理： (3)1.1生物样本中蛋白质的提取 (3)1.2生物样本中蛋白质的测定 (3)1.2.1 Lowry法 (3)1.2.2 考马斯亮蓝法 (3)1.2.3 紫外吸收法 (4)2.操作步骤 (4)2.1生物样本中蛋白质的提取 (4)2.2生物样本中蛋白质的测定 (4)2.2.1 Lowry法 (4)2.2.2 考马斯亮蓝法 (5)2.2.3紫外吸收法 (5)3、实验结果 (5)3.1 原始数据 (5)3.1.1 Lowry法 (5)3.1.2 考马斯亮蓝法 (6)3.1.3 紫外吸收法 (6)3.2 数据处理 (7)3.2.1 Lowry法 (7)3.2.2 考马斯亮蓝法 (8)3.2.3 紫外吸收法 (9)4.讨论： (10)1.原理：1.1生物样本中蛋白质的提取离体不久的组织，在适宜的温度及pH等条件下，可以进行一定程度的物质代谢。
因此，在生物化学实验中，常利用离体组织来研究各种物质代谢的途径与酶系作用，也可以从组织中提取各种代谢物质或酶进行研究。
但生物组织离体过久，其所含物质的含量和生物活性都将发生变化。
例如，组织中的某些酶在久置后会发生变性而失活；有些组织成分如糖原、ATP等，甚至在动物死亡数分钟至十几分钟内，其含量即有明显的降低。
因此，利用离体组织作代谢研究或作为提取材料时，都必须迅速将它取出，并尽快地进行提取或测定。
一般采用断头法处死动物，放出血液，立即取出实验所需的脏器或组织，除去外层的脂肪及结缔组织后，用冰冷的生理盐水洗去血液（必要时可用冰冷的生理盐水灌注脏器以洗去血液），再用滤纸吸干，即可用于实验。
取出的脏器或组织，可根据不同的方法制成不同的组织样品。
包括组织糜、组织匀浆、组织浸出液。
由于动物肝脏细胞比较脆弱，易于破碎，故本实验选用小鼠肝脏细胞作为实验材料，采用匀浆法法将其破碎，然后加入样品提取液使蛋白质溶解，用高速离心法弃去细胞碎片。
收集上清液后可进行蛋白质定量分析。
1.2生物样本中蛋白质的测定1.2.1 Lowry法1921年，Folin发明了Folin-酚试剂法测定蛋白质的浓度，反应原理是利用蛋白质分子中的酪氨酸和色氨酸残基还原酚试剂（磷钨酸-磷泪酸）生成蓝色化合物；1951年Lowry对上述方法进行了改进，让蛋白质先与碱性铜试剂进行反应，然后再与酚试剂反应，改进后的方法可以使反应的灵敏度提高。
蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子结合形成复杂的紫色或紫红色络合物（类似双缩脲反应）。
由于蛋白质中芳香族氨基酸残基(酪氨酸）的存在，该络合物在碱性条件下进而与Folin-酚试剂形成蓝色复合物。
上述呈色反应的颜色深浅在一定范围内与蛋白质含量成正比。
通过与已知含量的标准蛋白质的生色结果进行比较分析，即可检测待测样品的蛋白质含量。
目前实验室常规的快速定量测定蛋白质含量方法中，以Lowry等人发展的Folin-酣法应用最为普遍。
该方法的优点是:灵敏度高（比紫外吸收法灵敏度高10〜20倍），操作简单快速，不需复杂的仪器设备。
1.2.2 考马斯亮蓝法考马斯亮蓝G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置，由465nm变为595nm，溶液的颜色也由掠黑色变为蓝色。
经研究认为，染料主要是与蛋白质中的械性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。
在一定范围内，考马斯亮蓝G250-蛋白质复合物呈青色，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质含量的测定。
1.2.3 紫外吸收法蛋白质中普遍含有酪氨酸与色氨酸，由于这两种芳香族氨基酸分子中含有大pi键，它们在280nm紫外光附近有光吸收，因而使蛋白质在上述紫外光波长附近产生较强的光吸收，利用蛋白质的这一特性可对其进行含量测定。
2.操作步骤2.1生物样本中蛋白质的提取1.用颈椎脱白法处死小鼠，切开腹腔，取下完整肝脏，小心去掉胆囊（不要弄破），放入盛冷生理盐水的烧杯中漂洗干净。
2.取小鼠肝整个肝组织，在称量纸上剪碎，放入玻璃勾装管中。
3.按1:15的比例往玻璃勾紫管中加入勾装缓冲液（即每份样品需加预冷的提取缓冲液6mL，蛋白酶抑制剂0.16mL)，手动匀浆。
注意用力均勾，以免损坏匀浆管。
4.匀浆完成后，取一支2mL eppendorf管，各加入1.8mL勾衆液后，置入冷冻离心中。
5. 5.于4℃,13000r/min离心20min后，小心取出上清液0.5ml至2mLeppendorf管中，加入0.5ml缓冲液，用于蛋白质含量的测定，再取出上清液0.5ml至另一2mLeppendorf管中-20℃保存。
2.2生物样本中蛋白质的测定2.2.1 Lowry法1.取16mmxl50mm试管16支，标号，放置在试管架上，在1〜6号试管内分别加入标准牛血清白蛋白（使用时取贮液用双蒸水稀释至0.5mg/ML）0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL，用双蒸水补足至每管总体积0.5mL，在7、8号试管内分别加入待测样品25、50uL，并用双蒸水补足至0.5mL(即将待测样品稀释20或10倍）。
9〜16管作为平行实验管重复1〜8管的操作并同时进行实验，取算术平均值作为检测结果。
2.各管加入2.5mL新配制的碱性铜溶液，立即摇匀，在室温下放置10min。
3.各管加入0.5mL Folin –酚试剂应用液，边加入边立即充分混合（用振荡混合器），然后在室温下放置30〜60min(不要超过60min)。
4.分别用1号和9号管作为空白对照调零，检测其余标准样品管及待测样品管在550nm波长处的吸光度值。
5.根据已知含量的标准样品测得的吸光度作标准曲线，然后根据待测样品的吸光度在标准曲线上查出其蛋白质含量。
根据稀释倍数计算出小鼠肝脏提取液的蛋白质含量。
2.2.2 考马斯亮蓝法1. 取16mmx150mm试管16支，标号，放置在试管架上，在1〜6号试管内分别加入标准牛血清白蛋白（使用时取e液用双蒸水稀释至0.5mg/mL)0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1mL，用双蒸水补足至每管总体积0.1mL，在7.8号试管内分别加入稀释20、10倍的待测样品0.1mL。
9〜16管作为平行实验管重复1〜8管的操作并同时进行实验，取算术平均值作为检测结果。
2.每管加入考马斯亮蓝G—250染料试剂3mL，摇勾，室温静置3min3.分别用1号和9号管作为空白对照调零，检测其余标准样品管及待测样品管在595nm 处的吸光度值。
4.根据已知含量的标准样品测得的吸光度作标准曲线，然后根据待测样品的吸光度在标准曲线上查出其蛋白质含量。
根据稀释倍数计算出小鼠肝脏提取液的蛋白质含量。
2.2.3紫外吸收法1.取16mmx 150mm试管16支，标号，放置在试管架上，在1〜6号试管内分别加入标准牛血清白蛋白（2mg/mL)0、0.3、0.45、0.6、0.75、0.9mL，用双蒸水补足至每管总体积3mL，在7,8号试管内分别加入稀释100,50倍的待测样品3mL。
9〜16管作为平行实验管重复1〜8管的操作并同时进行实验，取算术平均值作为检测结果。
2.分别以1号管和9号管作为空白对照调零，用紫外分光光度计(注意用石英比色杯)于波长280nm处比色，记录各管的吸光度值。
3.根据已知含量的标准样品测得的吸光度作标准曲线，然后根据待测样品的吸光度在标准曲线上查出其蛋白质含量。
根据稀释倍数计算小鼠肝提取液的蛋白质含量。
3、实验结果3.1 原始数据3.1.1 Lowry法牛血清蛋白浓度（mg/mL）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5二号组吸光度值0 0.169 0.303 0.392 0.443 0.495 0.342 0.517 算术平均值0 0.1755 0.3035 0.396 0.4485 0.4895 0.3325 0.5183.1.2 考马斯亮蓝法序号12345678牛血清蛋白浓度（mg/mL）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5二号组吸光度值0 0.155 0.284 0.367 0.522 0.579 0.412 0.780 算术平均值0 0.149 0.273 0.360 0.4705 0.5745 0.4105 0.75953.1.3 紫外吸收法牛血清蛋白浓度（mg/mL）0 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6一号组吸光度值0 0.133 0.197 0.256 0.324 0.380 0.229 0.405 二号组吸光度值0 0.116 0.197 0.255 0.316 0.384 0.200 0.408 算术平均值0 0.1245 0.197 0.2555 0.320 0.382 0.2145 0.40653.2 数据处理3.2.1 Lowry法将y=0.3325代入拟合出的直线：y=0.95971x+0.06224中可得浓度为0.28mg/ mL，原样品中蛋白质浓度为5.6mg/mL，则原来的浓度为11.2 mg/mL。
将y=0.518代入拟合出的直线：y=0.95971x+0.06224中可得浓度为0.48mg/ mL，则原样品中蛋白质浓度为4.8mg/mL，则原来的浓度为9.6 mg/mL。
取平均值为10.4mg/mL。
3.2.2 考马斯亮蓝法将y=0.4105代入拟合出的直线：y=1.12114x+0.02421中可得浓度为0.34mg/mL，则样品中蛋白质浓度为6.8mg/mL，则原来的浓度为13.6 mg/mL。
将y=0.7595代入拟合出的直线：y=1.12114x+0.02421中可得浓度为0.66mg/mL，则样品中蛋白质浓度为6.6mg/mL，则原来的浓度为13.2 mg/mL。
取平均值为13.4mg/mL。
3.2.3 紫外吸收法将y=0.2145代入拟合出的直线：y=0.63886x+0.00021中可得浓度为0.34mg/mL，则样品中蛋白质浓度为6.8mg/mL，则原来的浓度为13.6 mg/mL。
将y=0.4065代入拟合出的直线：y=0.63886x+0.00021中可得浓度为0.64mg/mL，则样品中蛋白质浓度为6.4mg/mL，则原来的浓度为12.8 mg/mL。
取平均值为13.2mg/mL。
4.讨论：根据三种方法得出蛋白质的浓度约为13.3 mg/mL（没有算第一种方法得出的结果，因为方法一中的R-square值只有0.9169），从后两种方法的回归线中可以看出还是很符合实验规律的。
根据实验经历和实验结果，我更喜欢第二种方法。
我们在选择方法的时候主要考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。