生化实验报告模版

生物化学实验报告

姓名：郭玥

学号： 3120100021

专业年级： 2012级护理本科

组别：第8实验室

生物化学与分子生物学实验教学中心

【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】

实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法

2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法

3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法

4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法

5、了解柱层析技术

实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。

2、不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别，

可分离纯化各种蛋白质。

3、盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可

使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。蛋白质溶液中加入中性盐后，由

于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃

至消失。中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷

大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。

4、离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆

的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。

5、醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。

它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中

各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电

泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α

2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。

实验材料：人混合血清葡聚糖凝胶（G-25)层析柱

DEAE纤维离子交换层析柱饱和硫酸铵溶液

醋酸铵缓冲溶液 20%磺基水杨酸

1%BaCl

溶液氨基黑染色液

2

漂洗液 pH8.6巴比妥缓冲溶液

电泳仪、电泳槽

实验流程：盐析（粗分离）→葡聚糖凝胶层析（脱盐）→DEAE纤维素离子交换层析（纯化）→醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定）

实验步骤：

（一）盐析+凝胶柱层析除盐：

（二）离子交换层析（纯化）：

（三）醋酸纤维素薄膜电泳：

1、点样（如下图）：

-

点样线尽量点得细窄而均匀,宁少勿多

2、电泳：

①薄膜粗面向下

②点样端置阴极端

③两端紧贴在滤纸盐桥上，膜应轻轻拉平

电压：110V

时间：50min

3、染色和漂洗：

电泳完毕后，关闭电源，将膜取出，直接浸于染色液中5min。

取出膜，尽量沥净染色液，移入漂洗液中浸洗脱色（一般更换2次），至背景颜色脱净为止。

取出膜，用滤纸吸干即可。

注意事项：

1、所用血清应新鲜，无沉淀物及细菌滋生。

2、使用时勿将各时段所应用的溶液浓度弄错。

3、上样时，滴管应沿柱上端内壁加入样品，动作应轻、慢，勿将柱床冲起。流洗平衡时亦

应如此。

4、洗脱时应注意及时收集样品，切勿使蛋白质峰溶液流失，并注意层析柱不要流干，进入

空气。

5、切勿将检测蛋白质的磺基水杨酸与检查SO

42-的BaCl

2

混淆，因二者与相应物质生成的沉

淀均为白色。

6、葡聚糖凝胶价钱昂贵，要回收再生,避免损耗，严禁倒掉!

【实验报告第二部分（实验记录）：①主要实验条件（如材料的来源、质量；试剂的规格、用量、浓度；实验时间、操作要点中的技巧、失误等，以便总结实验时进行核对和作为查找成败原因的参考依据）；②实验中观察到的现象（如加入试剂后溶液颜色的变化）；③原始实验数据。评分（满分20分）：XX】

主要实验条件：

1、0.3mol/LpH6.5醋酸铵（NH

4AC）缓冲液：称取NH

4

AC 23.12g，加蒸馏水800ml溶解，滴入稀

氨水或稀醋酸液（注意混合均匀），调节pH至6.5后，补加蒸馏水至1000ml。

2、0.06mol/LpH6.5 NH

4

AC缓冲液：取上液用蒸馏水做5倍稀释。

3、0.02mol/LpH6.5 NH

4

AC缓冲液：取上液用蒸馏水做3倍稀释。

4、1.5mol/L NaCl-0.3mol/L NH

4AC溶液：称取NaCl87.7g溶于0.3mol/LpH6.5 NH

4

AC溶液中至

1000ml。

5、饱和硫酸铵溶液：称取固体(NH

4)

2

SO

4

850g加入1000ml蒸馏水中，在70-80℃下搅拌促溶，

室温中放置过夜，瓶底析出白色结晶，上清液即为饱和硫酸溶液。

实验现象：

饱和硫酸铵加入到血清后有沉淀生成，沉淀呈米黄色，上清液呈淡黄色。

原始实验数据：

将3条经染色的醋酸纤维素薄膜并列，使点样线位于同一水平，以正常血清蛋白图谱为对照，观察提纯的物质属哪种蛋白。所得的照片如下图：

血清清蛋白、γ-球蛋白纯度鉴定的电泳图谱