【免费下载】 微生物生理生化反应实验报告

细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分 解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.例 如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且 德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且 德汉氏小管中无气体。 5.IMVC 实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
2.油脂水解试验
图一：淀粉水解试验接种示意图
（1）倒平板：按照油脂培养基配方配制固体油脂培养基，灭菌，待培养基冷却至 50℃左右，充分振荡，
使油脂均匀分布，在酒精灯火焰下倒平板，每组两个平板。
（2）用记号笔在在平板底部划成四部分。
（3）接种：在无菌操作台上将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别划十字
（1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白
胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并
非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测
的指标。大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。 （2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲
分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能 被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此 能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不 呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。 3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说 明此中菌可产生分解油脂的酶。 4. 糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数
线接种于平板相对应部分的中心，如图二所示，并贴好标签，标签上注明菌种的名称。
（4）培养：将平板倒置，在 28℃温箱中培养两天。
（5）观察：取出平板，观察菌苔颜色，如果出现红斑点，说明脂肪水解，为阳性反应。记录实验结果。
3.葡萄糖发酵实验 （1）培养基的配制：按照糖发酵培养基配置葡萄糖发酵培养基，分装至试管中，用胶头滴管往德汉 氏小管中注满培养基，再把德汉氏小管倒置放入试管中，注意不要让德汉氏小管中进入空气， 每组五只试管，灭菌。
酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄色转 变为红色，即甲基红反应。大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。 四、【实验步骤】 1. 淀粉水解实验 （1）倒平板：按照淀粉培养基配方配制固体淀粉培养基，灭菌，待培养基冷却至 50℃左右，在酒精 灯火焰旁倒平板，每组两个平板。 （2）用记号笔在平板底部划成四部分。 （3）接种：在无菌操作台上，将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别在 不同的部分点种，如图一所示，注意仅用接种针接触极少面积的培养基，在平板的反面对应部 分贴上标签，标签上分别写上菌名，以免混淆。 （4）培养：将平板倒置，在 28℃温箱中培养两天。 （5）观察：取出培养基，观察各种细菌的生长情况，打开平板盖子，滴入少量卢戈氏碘液于平板中， 轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板，观察培养皿中菌落周围是否有无色透明圈，若有无 色透明圈出现，说明淀粉已经被水解，为阳性，反之则为阴性。记录实验结果。
2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、【实验仪器与试剂】
菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌 培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
山东大学实验报告
2012 年 12 月 4 日
姓名
系年级 2011 级生科 2 班 组别 四
科目 微生物学实验
题ຫໍສະໝຸດ Baidu 微生物的生理生化反应
微生物的生理生化反应
一、【实验目的】
1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根保通据护过生高管产中线工资敷艺料设高试技中卷术资配，料置不试技仅卷术可要是以求指解，机决对组吊电在顶气进层设行配备继置进电不行保规空护范载高与中带资负料荷试下卷高总问中体题资配，料置而试时且卷，可调需保控要障试在各验最类；大管对限路设度习备内题进来到行确位调保。整机在使组管其高路在中敷正资设常料过工试程况卷中下安，与全要过，加度并强工且看作尽护下可关都能于可地管以缩路正小高常故中工障资作高料；中试对资卷于料连继试接电卷管保破口护坏处进范理行围高整，中核或资对者料定对试值某卷，些弯审异扁核常度与高固校中定对资盒图料位纸试置，.卷编保工写护况复层进杂防行设腐自备跨动与接处装地理置线，高弯尤中曲其资半要料径避试标免卷高错调等误试，高方要中案求资，技料编术试5写交卷、重底保电要。护气设管装设备线置备4高敷动调、中设作试电资技，高气料术并中课3试中且资件、卷包拒料中管试含绝试调路验线动卷试敷方槽作技设案、，术技以管来术及架避系等免统多不启项必动方要方式高案，中；为资对解料整决试套高卷启中突动语然过文停程电机中气。高课因中件此资中，料管电试壁力卷薄高电、中气接资设口料备不试进严卷行等保调问护试题装工，置作合调并理试且利技进用术行管，过线要关敷求运设电行技力高术保中。护资线装料缆置试敷做卷设到技原准术则确指：灵导在活。分。对线对于盒于调处差试，动过当保程不护中同装高电置中压高资回中料路资试交料卷叉试技时卷术，调问应试题采技，用术作金是为属指调隔发试板电人进机员行一，隔变需开压要处器在理组事；在前同发掌一生握线内图槽部纸内故资，障料强时、电，设回需备路要制须进造同行厂时外家切部出断电具习源高题高中电中资源资料，料试线试卷缆卷试敷切验设除报完从告毕而与，采相要用关进高技行中术检资资查料料和试，检卷并测主且处要了理保解。护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
图二：油脂水解试验接种示意图
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根保通据护过生高管产中线工资敷艺料设高试技中卷术资配，料置不试技仅卷术可要是以求指解，机决对组吊电在顶气进层设行配备继置进电不行保规空护范载高与中带资负料荷试下卷高总问中体题资配，料置而试时且卷，可调需保控要障试在各验最类；大管对限路设度习备内题进来到行确位调保。整机在使组管其高路在中敷正资设常料过工试程况卷中下安，与全要过，加度并强工且看作尽护下可关都能于可地管以缩路正小高常故中工障资作高料；中试对资卷于料连继试接电卷管保破口护坏处进范理行围高整，中核或资对者料定对试值某卷，些弯审异扁核常度与高固校中定对资盒图料位纸试置，.卷编保工写护况复层进杂防行设腐自备跨动与接处装地理置线，高弯尤中曲其资半要料径避试标免卷高错调等误试，高方要中案求资，技料编术试5写交卷、重底保电要。护气设管装设备线置备4高敷动调、中设作试电资技，高气料术并中课3试中且资件、卷包拒料中管试含绝试调路验线动卷试敷方槽作技设案、，术技以管来术及架避系等免统多不启项必动方要方式高案，中；为资对解料整决试套高卷启中突动语然过文停程电机中气。高课因中件此资中，料管电试壁力卷薄高电、中气接资设口料备不试进严卷行等保调问护试题装工，置作合调并理试且利技进用术行管，过线要关敷求运设电行技力高术保中。护资线装料缆置试敷做卷设到技原准术则确指：灵导在活。分。对线对于盒于调处差试，动过当保程不护中同装高电置中压高资回中料路资试交料卷叉试技时卷术，调问应试题采技，用术作金是为属指调隔发试板电人进机员行一，隔变需开压要处器在理组事；在前同发掌一生握线内图槽部纸内故资，障料强时、电，设回需备路要制须进造同行厂时外家切部出断电具习源高题高中电中资源资料，料试线试卷缆卷试敷切验设除报完从告毕而与，采相要用关进高技行中术检资资查料料和试，检卷并测主且处要了理保解。护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
（2）接种：待培养基冷却至常温时，在无菌操作台上，取葡萄糖发酵培养基试管 2 支接入大肠杆菌，
再取两只接入普通变形杆菌，接种后轻摇试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡，第五支 不接种，作为对照。在各试管外壁上贴上标签，标签上分别标明发酵培养基的名称和所接种的 细菌菌名。 （3）培养：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培养箱中于 28℃下培养两天。 （4）观察：观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡，并记录实验结果。 4.乳糖发酵实验 （1）培养基的配制：按照糖发酵培养基配置乳糖发酵培养基，分装至试管中，用胶头滴管往德汉氏小 管中注满培养基，再把德汉氏小管倒置放入试管中，注意不要让德汉氏小管中进入空气，每组 五只试管，灭菌。 （2）接种：待培养基冷却至常温时，在无菌操作台上，取乳糖发酵培养基试管 2 支接入大肠杆菌，再 取两只接入普通变形杆菌，接种后轻摇试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡第五支不接种， 作为对照。在各试管外壁上贴上标签，标签上分别标明发酵培养基的名称和所接种的细菌菌名。 （3）培养：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培养箱中于 28℃下培养两天。 （4）观察：观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡，并记录实验结果。 5.吲哚试验 （1）培养基的配制：按照蛋白胨水培养基配方配制培养基，分装至试管中，每组五只试管，在高压蒸 气锅内灭菌。 （2）接种：待培养基冷却后，在无菌操作台上将大肠杆菌接入 2 支蛋白胨水培养基，产气肠杆菌接入 2 支蛋白胨水培养基，剩余一只试管不接种，作为空白对照，贴好标签。 （3）培养：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培养箱中于 28℃下培养两天。 （4）观察：往培养后的蛋白胨水培养基内加入 3~4 滴乙醚，摇动数次，静置 1min，待乙醚上升后，沿 试管避徐徐加入 2 滴吲哚试剂。在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。观察加入试剂后 试管内的颜色反应并记录实验结果。 6.甲基红试验 （1）培养基的配制：按照葡萄糖蛋白胨水培养基配方配制培养基，分装至试管中，每组五只试管，在高 压蒸气锅内灭菌。 （2）接种：待培养基冷却后，在无菌操作台上将大肠杆菌接入 2 支葡萄糖蛋白胨水培养基，产气肠杆 菌接入 2 支葡萄糖蛋白胨水培养基，剩余一只试管不接种，作为空白对照，贴好标签。 （3）培养：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培养箱中于 28℃下培养两天。 （4）观察：培养两天后后，将每支葡萄糖蛋白胨水培养基培养物内加入 2 滴甲基红试剂，培养基变为 红色者为阳性，变为黄色者为阴性。观察试管内的颜色变化，并记录实验结果。
发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡
萄糖蛋白胨水培养基；
试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、
仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管
三、【实验原理】
1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种 微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不 同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化 试验占有重要的地位。 2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质