(汇总)分子诊断技术.ppt
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分子诊断技术的临床应用ppt课件
二、PCR概述
PCR技术能在一个试管内将所要研究的 目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至 十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判 断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细 胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴 定。
PCR 发展简史
1983 Mullis于12月16日成功发明了PCR 1985 关于PCR 的文章首次由 Mullis及其同事等人 在
测 优生优育项目诊断：人巨细胞病毒（HCMV）、单纯疱
疹病毒（HSV）、弓形虫（TOX）、风疹病毒（RUB） 其它病原体检测：结核杆菌、肺炎支原体、EB病毒、
伤寒杆菌、幽门螺旋杆菌等
常规结核病实验室诊断方法及不足
1. 痰涂片作抗酸染色：阳性率低 、费时 2. 细胞培养“金标准”：周期太长(4-8W) 3. 血清学诊断：
的平衡点。
总结
分子诊断学的快速发展，得益与分子诊断技术 的日新月异。1990年启动的人类基因组计划的完 成经历了十三年的时间，而2007启动的1000人基 因组计划的完成却只用了3年，人类了解自然密 码的速度正在跨上快速列车。检验医学以提供精 密准确的数据服务于临床，而分子诊断技术正逐 渐成为临床实验室的常规应用技术，这将为检验 医学的发展提供巨大的机遇与挑战。
PCR技术
PCR核心技术是从水栖高温菌中
分离到能耐高温的Taq酶，使扩增反
应不需要每一个循环加一次DNA聚合
酶，从而实现了自动化，使应用领
域迅速扩大，PCR技术成为了分子生
物学中的一项突破性技术。
PCR概述——2000至2013年发表论文篇
30%
32%
PCR＋遗传分析
PCR＋临床诊断
PCR＋肿瘤研究
二 肿瘤相关基因表达的检测： 1、包括癌基因、抗癌基因 2、肿瘤转移基因 3、转移抑制基因
PCR分子诊断技术PPT课件
PCR临床意义：
快速确诊是否有病毒、细菌等致病性微生物感染；
了解体内感染的数量、复制程度，是否具有传染性；
对临床治疗的用药监测，有无好转或耐药情况，如 产生耐药，如何指导用药种类及计量等。
PCR的发展趋势
随着临床分子生物学的不断发展，DNA测序技术已 逐渐成熟，可为临床疾病的分子诊断提供更精确的判 定依据，现由一代测序技术已发展至三代测序技术， 为医疗领域带来更方便、快捷的检测手段。
1
脱氧核甘三磷酸（dNTP） 标准PCR反应体系中包含4种等物质的量浓度的脱氧核甘三磷
酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。 二价阳离子
所有的热稳定DNA聚合酶都要求有游离的二价阳离子，常用 的是Mg2＋，Mn2+ 缓冲液
维持PCR反应体系中的PH，使用Tris－Cl缓冲液。 一价阳离子
4.仪器使用的注意事项：放置水平、有稳定的电压并 连接地线（配备UPS不间断电源）、保证正常运行的 室温温度不超过15-25，仪器要放置在通风、散热较好 的区域，远离水源、火源、有腐蚀性物质及磁场感染 等环境影响。
5.仪器的维护与保养：在日常实验结束，仪器冷却后 对仪器表面进行正常维护及保养工作；使用中应小心 热盖与反应槽的污染，并定期使用95%的乙醇进行擦 拭，如被污染严重应先使用中性消毒液进行处理；每
PCR实验室质量管理体系的建立
依据 国内《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和ISO15189认可： CNAS CL02《医学实验室质量和能力认可》的准则和美国CAP认证 的PCR分子实验室要求等相关规定，建立标准、规范化的实验室 质量管理体系内容。
体系结构 质量手册：阐明实验室的质量方针、并描述质量体系的文件， 包括实验室的质量方针、目标、组织结构及质量体系要求等。 程序文件：对实验室工作流程的文件化描述，包括目的、范围、 职责及具体工作流程等。
分子诊断策略与常用技术PPT(共23页)
•
29、人生就像一道漫长的阶梯，任何人 也无法 逆向而 行，只 能在急 促而繁 忙的进 程中， 偶尔转 过头来 ，回望 自己留 下的蹒 跚脚印 。
•
30、时间，带不走真正的朋友；岁月， 留不住 虚幻的 拥有。 时光转 换，体 会到缘 分善变 ；平淡 无语， 感受了 人情冷 暖。有 心的人 ，不管 你在与 不在， 都会惦 念；无 心的情 ，无论 你好与 不好， 只是漠 然。走 过一段 路，总 能有一 次领悟 ；经历 一些事 ，才能 看清一 些人。
等位基因特异寡核苷酸探针（ASO）
引物1 5’
点突变（C to T）
探针1 3’
G
3’
引物2 5’
探针2 3’
5’
A
限制性片段长度多态性分析（RFLP） ➢ 原理
指DNA序列上发生一个变异后获得或丢失了一 限制性识别位点，使DNA限制性片段长度发生 变化，在人群中形成两种或两种以上的限制性 类型 利用特定限制性识别位点进行基因分析
•
25、你不能拼爹的时候，你就只能 去拼命 ！
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26、如果人生的旅程上没有障碍，人还 有什么 可做的 呢。
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27、我们无法选择自己的出身，可是我 们的未 来是自 己去改 变的。 励志名 言：比 别人多 一点执 着，你 就会创 造奇迹
•
28、伟人之所以伟大，是因为他与别人 共处逆 境时， 别人失 去了信 心，他 却下决 心实现 自己的 目标。
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31、我们无法选择自己的出身，可是我 们的未 来是自 己去改 变的。
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32、命好不如习惯好。养成好习惯，一 辈子受 用不尽 。
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33、比别人多一点执着，你就会创造奇 迹。
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50、想像力比知识更重要。不是无知 ，而是 对无知 的无知 ，才是 知的死 亡。
《分子诊断技术》课件
2010年代至今
随着生物信息学和人工智能技 术的发展，分子诊断技术不断 优化和升级，应用领域也不断
拓展。
02
分子诊断技术的基本原理
核酸的提取与纯化
核酸提取
核酸提取与纯化的重要性
是指从生物样本中分离和纯化核酸的 过程，是分子诊断技术中的基础步骤 。
是确保后续分子诊断实验结果准确性 和可靠性的关键。
案例三
总结词
SNP分型技术有助于个体化医疗的实现，为 患者提供更加精准的治疗方案。
详细描述
SNP分型技术可以对个体的基因变异进行精 细分析，预测个体对不同药物的反应和代谢 情况，为医生制定个体化的治疗方案提供科
学依据，提高治疗效果并减少副作用。
THANKS
感谢观看
特点
高灵敏度、高特异性、早期诊断、个性化治疗指导等。
分子诊断技术的应用领域
遗传性疾病诊断
通过对基因突变进行检测，对遗传性 疾病进行早期发现和干预。
肿瘤诊断与监测
通过对肿瘤相关基因和蛋白质的检测 ，对肿瘤进行早期发现、诊断、分期 、预后评估和复发监测。
感染性疾病诊断
通过对病原体基因和蛋白质的检测， 对感染性疾病进行快速诊断和用药指 导。
01
02
03
个性化医疗
结合基因组学、蛋白质组 学等技术，实现个体化、 精准化的诊断和治疗。
无创检测
研究无创或微创的分子诊 断技术，减少对患者的创 伤和痛苦。
实时监测
实现实时、动态的分子诊 断监测，及时发现病情变 化，为治疗提供及时反馈 。
05
案例分析
案例一：基因突变检测在肺癌诊断中的应用
总结词
基因突变检测在肺癌诊断中具有重要意义，有助于早期发现和个性化治疗。
随着生物信息学和人工智能技 术的发展，分子诊断技术不断 优化和升级，应用领域也不断
拓展。
02
分子诊断技术的基本原理
核酸的提取与纯化
核酸提取
核酸提取与纯化的重要性
是指从生物样本中分离和纯化核酸的 过程，是分子诊断技术中的基础步骤 。
是确保后续分子诊断实验结果准确性 和可靠性的关键。
案例三
总结词
SNP分型技术有助于个体化医疗的实现，为 患者提供更加精准的治疗方案。
详细描述
SNP分型技术可以对个体的基因变异进行精 细分析，预测个体对不同药物的反应和代谢 情况，为医生制定个体化的治疗方案提供科
学依据，提高治疗效果并减少副作用。
THANKS
感谢观看
特点
高灵敏度、高特异性、早期诊断、个性化治疗指导等。
分子诊断技术的应用领域
遗传性疾病诊断
通过对基因突变进行检测，对遗传性 疾病进行早期发现和干预。
肿瘤诊断与监测
通过对肿瘤相关基因和蛋白质的检测 ，对肿瘤进行早期发现、诊断、分期 、预后评估和复发监测。
感染性疾病诊断
通过对病原体基因和蛋白质的检测， 对感染性疾病进行快速诊断和用药指 导。
01
02
03
个性化医疗
结合基因组学、蛋白质组 学等技术，实现个体化、 精准化的诊断和治疗。
无创检测
研究无创或微创的分子诊 断技术，减少对患者的创 伤和痛苦。
实时监测
实现实时、动态的分子诊 断监测，及时发现病情变 化，为治疗提供及时反馈 。
05
案例分析
案例一：基因突变检测在肺癌诊断中的应用
总结词
基因突变检测在肺癌诊断中具有重要意义，有助于早期发现和个性化治疗。
《医学分子诊断》课件
诊断原理
分子诊断基于检测和分析样本中的生物分子，如DNA、RNA和蛋白质，以确定疾病的存在、类型和进展程度。
常见的分子诊断方法
1 聚合酶链式反应（PCR）
通过扩增目标DNA段，从而检测和识别基因变异和感染病原体。
2 基因测序
通过读取DNA序列，揭示基因突变、致病基因和个体遗传信息。
3 蛋白质组学
《医学分子诊断》PPT课 件
欢迎来到《医学分子诊断》PPT课件! 在这个课件中，我们将深入探讨包括研 究目的、诊断原理、常见的分子诊断方法、分子诊断在临床中的应用、分子 诊断的优势和挑战、未来发展方向以及总结等内容。
研究目的
我们的研究目的是探索如何利用分子诊断技术提高疾病的早期检测和诊断准 确性，为患者提供更好的治疗方案。
分子诊断的优势和挑战
1
优势
早期检测和诊断、个体化治疗、快速结果、高敏感性和特异性、广泛应用于临床 实践。
2
挑战
技术复杂性、标准化和质量控制、高成本、信息处理和隐私问题、临床实践中的 应用限制。
未来发展方向
未来的分子诊断将更加便携、快速、准确和个体化，结合人工智能和大数据 分析，推动医学进步和健康管理的革新。
总结
分子诊断作为一项重要的医学技术，正在为疾病的早期检测和个体化治疗提 供无限可能。通过不断的研究和发展，我们可以期待更加精准、有效和可靠 的分子诊断技术的出现。
通过分析样本中的蛋白质组成和表达水平，为疾病的诊断和治疗提供重要信息。
分子诊断在临床中应用
癌症诊断
通过检测肿瘤标志物和肿瘤细 胞的分子变化，实现早期癌症 的检测和个体化治疗。
遗传病筛查
通过检测患者的基因序列，提 前发现遗传病风险，为家庭计 划和婴儿出生前干预提供依据。
分子诊断策略与常用技术PPT课件( 23页)
三、分子诊断常用技术
核酸分子杂交技术 等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific
oligonucleotide, ASO) DNA限制性长度多态性(restriction
fragment length polymorphism, RLFP)分析 PCR-SSCP DNA测序 DNA芯片技术
RLFP分析法
RFLP分析
优点 • 分辩率高，无需标记,重复性好，简便快速直观 • 主要用于核酸变异分析比较, 微生物的分群分型， 癌基因分析，遗传病的诊断等。 局限
只能应用突变引起限制性酶切位点改变筛选，检测 效率低。
PCR/单链构象多态性分析（SSCP）
原理
将经扩增的DNA片段变性形成单链，由于序列不同，单 链构象就有差异，在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳的迁移率 不同，通过与标准物的对比，即可检测出有无变异。
等位基因特异寡核苷酸探针（ASO）
引物1 5’
点突变（C to T）
探针1 3’
G
3’
引物2 5’
探针2 3’
5’
A
限制性片段长度多态性分析（RFLP） 原理
指DNA序列上发生一个变异后获得或丢失了一 限制性识别位点，使DNA限制性片段长度发生 变化，在人群中形成两种或两种以上的限制性 类型 利用特定限制性识别位点进行基因分析
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
MstⅡ酶切位点(CCTNAGG)
GAG → GTG ↓
谷Aa→缬Aa 5´
3´
1.15kb
×
正常基因
5´
3´
1.35kb
突变基因
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析