汉防己(华西药学药化实验)
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实验目的： 1.掌握生wenku.baidu.com碱的鉴定方法 2.掌握渗漉法提取生物碱的方法 3.掌握叔胺总碱的提取和纯化方法 4.巩固抽滤、连续提取、重结晶、薄层层析等基本操作
实验原理： 1.生物碱的鉴定方法：大多数生物碱在酸条件下可与某些试剂（如碘化碘钾、碘化铋钾、 碘化汞钾、硅钨酸）反应生成难溶于水的复盐或络合物而产生沉淀，可用于预示天然 药物中生物碱类成分的存在。一般采取三种以上沉淀试剂进行反应，以排除氨基酸、 蛋白质、多糖、鞣质等的假阳性干扰。 2.生物碱酸提碱沉：大多数生物碱在植物中有有机酸盐形式存在，以水为溶剂可将其提取 出来，若选用稀硫酸、稀盐酸等为溶剂，可使原料中溶解度较小的生物碱有机酸盐转 变为溶解度较大的无机酸盐，从而提高溶出率。酸提取后，用石灰乳调PH至碱性，又 可使生物碱盐转化为游离碱沉淀出来。 3.减压抽滤：利用真空泵或水泵产生负压使过滤速度加快。 4.季铵型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂：叔胺型生物碱不溶于水，易溶于亲脂 性有机溶剂。 5.连续提取：亲脂性生物碱用亲脂性有机溶剂提取时，由于有机溶剂容易挥发，多采取连 续回流提取法利用溶剂的蒸发、回流、渗漉等操作用新鲜溶剂不断浸润混合物以得到 所需成分。溶剂利用量少，提取效率高。 6.重结晶：结晶和重结晶是利用混合物中各成分在不同温度溶剂中溶解度的不同来达到分 离纯化目的的，溶剂要求在温度较低时对所需成分溶解度小，而在温度高时溶解度大。 7.薄层层析：主要是利用硅胶对样品中各成分吸附能力的不同以及展开剂对它们解吸附能 力的不同，使各成分达到分离效果。并可通过与标准品的比对带到鉴别的目的。
碘化铋钾
碘化碘钾
硅钨酸 立即产生大量 淡黄色絮状沉 淀 +
立即产生大量橘 立即产生大量 红色沉淀 棕色沉淀 + +
结果 结论
汉防己粗粉提取液中可能含有生物碱
2.将渗漉液用新鲜石灰乳调至PH9-10，溶液颜色变化为棕红色澄清-棕红色浑浊-泥浆状浊液， 充分静置。
3. 倾倒部分上清液后，抽滤，得泥黄色固体。加入100ml 95%乙醇调成糊状，并与净 砂拌均匀，水浴加热烘炒干。将其转入连续提取器中，以100ml乙醚为溶剂，油浴 80-90摄氏度加热，连续提取1小时，得淡黄色溶液。取1ml提取筒中部提取液挥干， 用1%盐酸溶解，加2滴碘化铋钾试剂，结果如下：
思考与讨论
注意事项： 1.装置的安装要小心，不能打碎仪器 2.点样时轻点三次，每次点完用电吹风立即烘干，要求点样点扩散后不超过 2mm 3.抽滤转移残留样品时用母液而非洗涤液转移可避免因溶剂的增多而造成的损失。 洗涤样品时尽量做到洗涤溶剂少量多次，即用最少的溶剂达到最大洗涤效果。 4.重结晶后应逐步冷却静置，骤冷会使晶型不好 5.乙醚的爆炸限很宽1.85%-36.5%，闪点-45摄氏度。乙醚等易燃易爆液体应避 开明火，实验选择热源时要充分考虑这方面因素。且乙醚沸点低、挥发性强、 有麻醉性，实验过程中要尽量减少其在空气中暴露，装置气密性要求严格。 6.渗漉过程中要保持提取剂液面高于药材，使药材始终完全浸润在提取剂中，以 防药材干涸裂开，使之后加入的溶剂直接从裂缝中流走而达不到提取目的。
比移值Rf为溶质迁移距离与流动相迁移距离之比。
Rf甲素 Rf乙素 Rf样品 结论 Rf样品1 Rf样品2
6.将烘干的产品称重描述形状并计算产率。 名称：亲脂性叔胺总碱 性状： 重量： 产率：
装置图：
渗漉装置（渗漉筒 棕色瓶 大锥形瓶）、水蒸汽浴加热装置（电炉 石棉 网 烧杯 蒸发皿）、抽滤装置（水泵 安全瓶 布氏漏斗 大抽滤瓶）、 连续提取装置（木块 油锅 圆底烧瓶 恒压漏斗 球形冷凝管 ）
药材：汉防己科千金藤属植物（Stephania tetrandra S.Moore）块根粉 末 试剂：0.5%硫酸、新鲜石灰乳、碘化汞钾试剂、碘化碘钾试剂、碘化铋 钾试剂、硅钨酸试剂、净砂、乙醚、1%盐酸、95%乙醇、氯化钠、 硅胶GF254、0.5%CMC-Na aq、展开剂（环己烷-乙酸乙酯-二乙胺比 例为6：3:1）、显色剂（改良碘化铋钾试剂）。
结果
橘红色无沉淀
结论
提取完全
回收乙醚后得总碱粗品。将所得的的总碱粗品用95%乙醇23ml加热回流溶解，制成黄色 饱和溶液，趁热将其倾倒入300ml食盐水中（20g氯化钠），在水浴上稍加热到59摄 氏度促使沉淀凝聚，室温静置数分钟后，并使其逐步冷却。沉淀完全后，抽滤，得 类白色固体，即亲脂性叔胺总碱。 4.称取GF254 2g，加入0.5%CMC-Na aq 5ml 调成糊状，铺板4块并活化烘干。 5.将固体转到培养皿中置于红外灯下烘干，取芝麻大小溶于3滴95%乙醇并与汉防己甲素 标准品、汉防己乙素标准品进行薄层层析。展开剂为石油醚-乙酸乙酯-二乙胺比例 6:3:1，显色剂为改良碘化铋钾试剂。结果如下：
思考 1.为什么要使用稀H2SO4提取？ 2.为什么用石灰乳调pH? 3.抽滤后拌砂的目的是什么？
操作： 1. 将40g汉防己粗粉与0.5%硫酸31.5ml拌匀，发胀35min，均与装入渗漉筒中，用950ml0.5% 硫酸渗漉提取，渗漉速度为2ml/min，渗漉液为棕色液体。取渗漉液四份，每份1ml，分别加 入2滴碘化汞钾、碘化铋钾、碘化碘钾、硅钨酸试剂，反应结果如下：
沉淀试剂 现象
碘化汞钾 立即产生大量 类白色沉淀 +
实验原理： 1.生物碱的鉴定方法：大多数生物碱在酸条件下可与某些试剂（如碘化碘钾、碘化铋钾、 碘化汞钾、硅钨酸）反应生成难溶于水的复盐或络合物而产生沉淀，可用于预示天然 药物中生物碱类成分的存在。一般采取三种以上沉淀试剂进行反应，以排除氨基酸、 蛋白质、多糖、鞣质等的假阳性干扰。 2.生物碱酸提碱沉：大多数生物碱在植物中有有机酸盐形式存在，以水为溶剂可将其提取 出来，若选用稀硫酸、稀盐酸等为溶剂，可使原料中溶解度较小的生物碱有机酸盐转 变为溶解度较大的无机酸盐，从而提高溶出率。酸提取后，用石灰乳调PH至碱性，又 可使生物碱盐转化为游离碱沉淀出来。 3.减压抽滤：利用真空泵或水泵产生负压使过滤速度加快。 4.季铵型生物碱易溶于水，不溶于亲脂性有机溶剂：叔胺型生物碱不溶于水，易溶于亲脂 性有机溶剂。 5.连续提取：亲脂性生物碱用亲脂性有机溶剂提取时，由于有机溶剂容易挥发，多采取连 续回流提取法利用溶剂的蒸发、回流、渗漉等操作用新鲜溶剂不断浸润混合物以得到 所需成分。溶剂利用量少，提取效率高。 6.重结晶：结晶和重结晶是利用混合物中各成分在不同温度溶剂中溶解度的不同来达到分 离纯化目的的，溶剂要求在温度较低时对所需成分溶解度小，而在温度高时溶解度大。 7.薄层层析：主要是利用硅胶对样品中各成分吸附能力的不同以及展开剂对它们解吸附能 力的不同，使各成分达到分离效果。并可通过与标准品的比对带到鉴别的目的。
碘化铋钾
碘化碘钾
硅钨酸 立即产生大量 淡黄色絮状沉 淀 +
立即产生大量橘 立即产生大量 红色沉淀 棕色沉淀 + +
结果 结论
汉防己粗粉提取液中可能含有生物碱
2.将渗漉液用新鲜石灰乳调至PH9-10，溶液颜色变化为棕红色澄清-棕红色浑浊-泥浆状浊液， 充分静置。
3. 倾倒部分上清液后，抽滤，得泥黄色固体。加入100ml 95%乙醇调成糊状，并与净 砂拌均匀，水浴加热烘炒干。将其转入连续提取器中，以100ml乙醚为溶剂，油浴 80-90摄氏度加热，连续提取1小时，得淡黄色溶液。取1ml提取筒中部提取液挥干， 用1%盐酸溶解，加2滴碘化铋钾试剂，结果如下：
思考与讨论
注意事项： 1.装置的安装要小心，不能打碎仪器 2.点样时轻点三次，每次点完用电吹风立即烘干，要求点样点扩散后不超过 2mm 3.抽滤转移残留样品时用母液而非洗涤液转移可避免因溶剂的增多而造成的损失。 洗涤样品时尽量做到洗涤溶剂少量多次，即用最少的溶剂达到最大洗涤效果。 4.重结晶后应逐步冷却静置，骤冷会使晶型不好 5.乙醚的爆炸限很宽1.85%-36.5%，闪点-45摄氏度。乙醚等易燃易爆液体应避 开明火，实验选择热源时要充分考虑这方面因素。且乙醚沸点低、挥发性强、 有麻醉性，实验过程中要尽量减少其在空气中暴露，装置气密性要求严格。 6.渗漉过程中要保持提取剂液面高于药材，使药材始终完全浸润在提取剂中，以 防药材干涸裂开，使之后加入的溶剂直接从裂缝中流走而达不到提取目的。
比移值Rf为溶质迁移距离与流动相迁移距离之比。
Rf甲素 Rf乙素 Rf样品 结论 Rf样品1 Rf样品2
6.将烘干的产品称重描述形状并计算产率。 名称：亲脂性叔胺总碱 性状： 重量： 产率：
装置图：
渗漉装置（渗漉筒 棕色瓶 大锥形瓶）、水蒸汽浴加热装置（电炉 石棉 网 烧杯 蒸发皿）、抽滤装置（水泵 安全瓶 布氏漏斗 大抽滤瓶）、 连续提取装置（木块 油锅 圆底烧瓶 恒压漏斗 球形冷凝管 ）
药材：汉防己科千金藤属植物（Stephania tetrandra S.Moore）块根粉 末 试剂：0.5%硫酸、新鲜石灰乳、碘化汞钾试剂、碘化碘钾试剂、碘化铋 钾试剂、硅钨酸试剂、净砂、乙醚、1%盐酸、95%乙醇、氯化钠、 硅胶GF254、0.5%CMC-Na aq、展开剂（环己烷-乙酸乙酯-二乙胺比 例为6：3:1）、显色剂（改良碘化铋钾试剂）。
结果
橘红色无沉淀
结论
提取完全
回收乙醚后得总碱粗品。将所得的的总碱粗品用95%乙醇23ml加热回流溶解，制成黄色 饱和溶液，趁热将其倾倒入300ml食盐水中（20g氯化钠），在水浴上稍加热到59摄 氏度促使沉淀凝聚，室温静置数分钟后，并使其逐步冷却。沉淀完全后，抽滤，得 类白色固体，即亲脂性叔胺总碱。 4.称取GF254 2g，加入0.5%CMC-Na aq 5ml 调成糊状，铺板4块并活化烘干。 5.将固体转到培养皿中置于红外灯下烘干，取芝麻大小溶于3滴95%乙醇并与汉防己甲素 标准品、汉防己乙素标准品进行薄层层析。展开剂为石油醚-乙酸乙酯-二乙胺比例 6:3:1，显色剂为改良碘化铋钾试剂。结果如下：
思考 1.为什么要使用稀H2SO4提取？ 2.为什么用石灰乳调pH? 3.抽滤后拌砂的目的是什么？
操作： 1. 将40g汉防己粗粉与0.5%硫酸31.5ml拌匀，发胀35min，均与装入渗漉筒中，用950ml0.5% 硫酸渗漉提取，渗漉速度为2ml/min，渗漉液为棕色液体。取渗漉液四份，每份1ml，分别加 入2滴碘化汞钾、碘化铋钾、碘化碘钾、硅钨酸试剂，反应结果如下：
沉淀试剂 现象
碘化汞钾 立即产生大量 类白色沉淀 +