胶体金技术的发展原理及制备方法

胶体金技术的发展原理及制备方法

1971年Faulk和Taylor首先将胶体金应用于免疫细胞化学研究，1974年Romano建立了间接免疫金染色法，从此胶体金作为新型的免疫标记技术得到迅速发展。

由胶体金标记技术发展起来的胶体金免疫快速诊断技术主要有两种：快速斑点免疫金渗滤法和胶体金免疫层析法。后者具有操作简便（浸入液体中就行）、快速（全程5~10分钟搞定）、无需仪器设备（结果目测就OK）、试剂稳定、成品易于保存（保质期1~2年）等优点，是科学研究和临床诊断的有力工具。

胶体金（colloidal gold）即胶体状态的金单质，因为其单质粒径非常小可以分散于溶液中形成胶体，故名胶体金。胶体金的常规制备方法是用还原剂还原氯金酸（HAuCl4，橘黄色晶体，易潮解，氯金酸合成见下图）里的金元素形成金胶体颗粒。这种胶体颗粒在碱性环境下带上负电荷，可与蛋白质的正电荷基团牢固结合，对蛋白进行标记，用于后续的检测，如制成胶体金试纸条（卡）进行物质的检测。

还原氯金酸的化合物很多，通常我们选择柠檬酸三钠（Na3C6H5O7·2H2O）。当用1%柠檬酸三钠还原100 mL 0.01%金氯酸时，不同体积比可以得到不同粒径和颜色的胶体金哦！

制备胶体金步骤简单（见下图），重点是制备过程所用到的材料都必须是彻底清洁的。例如水至少是双蒸水，玻璃棒、玻璃容器等要酸洗后冲洗干净并且最好是硅化的，制备好的胶体金可以加入0.02％ NaN3在洁净玻璃容器内长期存放。

适合于胶体金试纸条（卡）的胶体金粒径在20~40 nm之间为宜，制备的胶体金溶液呈红色，胶体金被置于试纸条（卡）的样品垫下游。当液体样品滴加后，液体溶解胶体金并带动其与样品中的抗原（抗体），在硝酸纤维素膜的毛细作用下从一端慢慢渗移到吸收垫一端，利用抗体/抗原特异性结合及胶休金的显色（红色）反应，可以检测抗原／抗体存在与否。胶体金试纸条（卡）主要分为双抗夹心法和竞争法两类，前者适合检测大分子物质，后者适合检测小分子物质。两种试纸条（卡）的原理见下图：

除了这两种常规的方法，间接法也用于胶体金试纸条（卡）的制备，其原理见下图：

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