免疫学实验胶体金免疫层析技术 (课件)
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《免疫胶体金技术》课件
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实验仪器：离心机、电泳仪、显微 镜、移液器等
实验注意事项：避免污染、控制温 度、保持湿度等
实验步骤
准备实验材料： 制备胶体金溶 制备抗体溶液： 制备抗原溶液：
包括胶体金、 液：将胶体金 将抗体与缓冲 将抗原与缓冲
抗体、抗原、 与缓冲液混合， 液混合，搅拌 液混合，搅拌
缓冲液等
搅拌均匀
提高稳定性：通过优化实验条件、选择稳定的检测试剂等方法，提高检测结果的稳定性
提高自动化程度：通过开发自动化检测设备，提高检测效率和准确性
免疫胶体金技术的实验操作
实验准备
实验材料：胶体金、抗体、抗原、 缓冲液、洗涤液、显色剂等
实验步骤：样本处理、抗体孵育、 胶体金标记、洗涤、显色等
添加标题
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云计算和大数据技术：实现 检测数据的实时分析和共享
检测灵敏度提升
技术进步：通过改进胶体金颗粒的制备工艺，提高检测灵敏度
应用领域：在生物医学、食品安全、环境监测等领域具有广泛应用前景
技术融合：与其他检测技术相结合，提高检测灵敏度和准确性
发展趋势：随着科技的发展，免疫胶体金技术的检测灵敏度将不断提高，应用范围也将不 断扩大。
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汇报人：
免疫胶体金技术
汇报人：
单击输入目录标题 免疫胶体金技术概述 免疫胶体金技术的分类 免疫胶体金技术的优缺点 免疫胶体金技术的实验操作 免疫胶体金技术的应用实例
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免疫胶体金技术概述
定义和原理
免疫胶体金技术是一种基于免疫反应的检测技术 原理：利用抗原-抗体特异性结合，通过胶体金标记抗体，实现对目标抗原 的检测 特点：灵敏度高、特异性强、操作简便、快速
免疫胶体金技术ppt课件
λmax
橙色
518nm
橙色
522nm
红色
525nm
紫红ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
535nm
TEM Images of Colloidal Au
Average particle size ~ 17nm
Good gold colloids and bad (unstable) gold colloids
. 劣质金外形不均一，且 非球形，有凝集景象， 颗粒间变异系数较大
➢Final conjugation (IgG)
Take 100ml of gold sol and adjust to Ph9 Adjust the dialyzed and centrifuged antibody solution
(0.1ug/ul) to pH9.2 Add the determined amount of antibody solution dropwise
胶体金与蛋白质的结合胜利与否，取决于pH值，普 通只需在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才干结 实地结合，因此，标志之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标志蛋白质的等电点略偏碱。
需求提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需求 降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH能 够损害pH测定计的探头，因此，普通用精细的pH试纸测 定其pH即可.
2. Adjust the antibody (0.1ug/ul) to the proper pH with 100nM K2CO3 or 100mM HC1.
3. Add the antibody to each tube in a series from 0150ul (ie 0-15ug in steps of 0, 1, 2, 3 ....15ug).
《免疫胶体金技术》课件
该技术适用于现场快速检测和应急响 应，为及时诊断和治疗提供了有力支 持。
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
免疫胶体金技术(转)PPT课件
前景展望
1 2 3
不断改进技术
随着科学技术的不断发展，免疫胶体金技术将不 断改进和完善，提高检测的灵敏度和特异性。
拓展应用领域
免疫胶体金技术的应用领域将不断拓展，不仅限 于医学诊断，还可应用于食品安全、环境监测等 领域。
实现自动化和智能化
未来免疫胶体金技术将与自动化、智能化技术相 结合，提高检测的效率和准确性，为临床诊断和 科学研究提供更好的服务。
用。
04
免疫胶体金技术具有操作简便、特异性高、稳定性好 等优点，但也存在一些限制，如检测灵敏度相对较低， 对某些低浓度目标物质检测效果不佳。
对未来研究的建议
01
深入研究免疫胶体金技 术的反应机制和影响因 素，为优化技术提供理 论支持。
02
探索新型的标记物和信 号放大策略，提高检测 灵敏度和特异性。
成熟发展
90年代至今，免疫胶体金 技术不断优化，应用范围 逐渐扩大。
02
免疫胶体金技术的制备方法
胶体金的制备
制备原理
利用氯金酸的水溶液在碱性条件下加热产生聚合物颗粒，通过控制反应条件如 温度、pH值和反应时间，可控制胶体金的粒径大小。
制备步骤
将氯金酸水溶液加热至沸腾，加入氢氧化钠调节pH值至碱性，继续加热至溶液 变为橙红色，冷却后即可获得胶体金溶液。
免疫抗原的制备
抗原选择
选择具有特异性识别能力的抗原，如抗体、多肽等，确保与 目标分子有高亲和性。
抗原制备
将抗原与载体蛋白结合，形成抗原-载体蛋白复合
结合原理
利用抗原-抗体之间的特异性结合反应，将免疫抗原与胶体金结合，形成胶体金 标记的免疫复合物。
结合方法
免疫胶体金技术(转)ppt课 件
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备方法 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的优缺点及前景展望 • 结论
免疫胶体金PPT课件
免疫胶体金技术的应用领域
医学诊断
食品安全
用于检测各种疾病相关 的抗原、抗体，如HIV、
肝炎、癌症等。
用于检测食品中的有害 物质和添加剂，保障食
品安全。
环境监测
用于检测水体、土壤等 环境中的有害物质，保
护环境健康。
生物科学研究
用于研究生物分子相互 作用、细胞信号转导等
生物学过程。
02
免疫胶体金技术的原理
结果判断主观
02
该技术结果判断需要人工进行，不同操作者判断标准可能存在
差异，导致结果不一致。
适用范围有限
03
免疫胶体金技术主要适用于定性检测，对于定量检测和结构分
析等方面存在局限性。
改进方向
提高特异性
通过改进抗体和抗原的纯化技术、优化标记物和检测条件等手段， 提高免疫胶体金技术的特异性。
实现自动化
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、结果直观等。
免疫胶体金技术的发展历程
01
02
03
起源
20世纪70年代，英国科学 家利用胶体金标记技术制 备出了第一个单克隆抗体。
发展
随着技术的不断完善，免 疫胶体金技术在医学、生 物学等领域得到了广泛应 用。
最新进展
近年来，纳米胶体金标记 技术的研究取得了重要突 破，提高了检测的灵敏度 和特异性。
抗体与抗原的结合
将抗体与抗原混合，使其在一定 条件下结合。
洗涤
去除未结合的抗原和抗体，提高 实验的特异性。
胶体金的标记
胶体金的制备
通过还原剂的作用将金离子还原成胶体金颗粒。
胶体金的标记
将已制备好的胶体金与已结合的抗体结合，形成 金标抗体复合物。
胶体金免疫层析技术演示课件
15
临床上将缺铁性贫血分为以下三个阶段：
铁缺乏阶段 潜在性缺铁期
血清铁蛋 白含量
转铁蛋白 红细胞游离 饱和度 原卟啉（FEP）
血红蛋白
<12ng/ml
缺铁性红细胞生成 <12ng/ml <15%
缺铁性贫血
<12ng/ml <15%
>4.5μg/L >4.5μg/L
4/36
北京易斯威特生物医学科技有限公司
5
什么是缺铁性贫血
当机体对铁的需求与供给失衡，导致体内贮存铁耗尽 （ID），继之红细胞内铁缺乏（IDE），最终引起缺 铁性贫血（IDA）。IDA是铁缺乏症（包括ID，IDE 和IDA）的最终阶段，表现为缺铁引起的小细胞低色 素性贫血及其他异常。
2/36
胶体金免疫层析法检测试剂盒的特点
操作方便，读取结果的时间短：一般只需要一个加样步骤，得 到结果时间最短的只需要3~5分钟，最长的也不会超过30分钟 。
灵敏度和特异性好，受外界影响少：高度特异的抗原抗体反应 保证该检测结果保持很高的特异性和灵敏度。
成本低廉，所需样本很少：一般只需要不到100μl样本即可得到 检测结果。
情商受损：情感淡漠，不开心、紧张、易疲劳；兴趣少， 不容易逗乐，不合群，注意力难集中。
身体发育受影响：听视觉神经反应迟缓；细胞、体液免 疫功能降低，易感染；延缓运动神经的发育，运动功能 受损。小儿长期贫血不仅会影响生长发育，还可诱发一些感
染性疾病。
更重要的一点是：胎儿及婴幼儿时期铁缺乏，甚至无法
被日后的补铁所逆转。
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10
什么是铁蛋白（Ferritin）
胶体金免疫层析技术ppt课件
正常人血清中含有少量铁蛋白，但 不同的检测法有不同的正常值。一般正 常均值男性约80－130ug/L(80-130ng/ml) 女性约35－55ug/L(35-55ng/ml)。
xx
11/3611
铁蛋白起什么作用？
铁蛋白在体内作用主 要有两条：一是作为体内 铁的储存库用于血红蛋白 的合成；二是将铁保存在 中空的球形蛋白内，防止 细胞内游离铁过多而产生 有害作用。
3/33/366
铁蛋白检测试剂盒
铁蛋白检测—— 缺铁性贫血的预防性金指标
EASYSWEET-培训资料
4/36
xx
5/36 5
什么是缺铁性贫血
当机体对铁的需求与供给失衡，导致体 内贮存铁耗尽（ID），继之红细胞内铁 缺乏（IDE），最终引起缺铁性贫血 （IDA）。IDA是铁缺乏症（包括ID， IDE和IDA）的最终阶段，表现为缺铁 引起的小细胞低色素性贫血及其他异常。
IDA是最常见的贫血。其发病率在发展 中国家、经济不发达地区及婴幼儿、育 龄妇女明显增高。
EASYSWEET-培训资料
6/63/366
孕妇发生缺铁性贫血的后果
增加心输出量和胎盘血流量，加重心脏 负担。
胎儿缺氧，生长发育受阻。 影响免疫、消化等多系统的正常功能 多种妊娠并发症。 胎儿先天铁储存不足，婴幼儿期易缺铁。 严重的会因血红蛋白携带氧气不足而致
在卫生部2011年6月23日发布的《孕产期保健工作管理办法》 和《孕产期保健工作规范》中也明确提出“提倡适量运动， 预防及纠正贫血。”“进行保健指导，……纠正贫血”，同 时孕产妇中重度贫血患病率也作为重点健康指标用于核查。
防治儿童营养性铁缺乏症参照方案中同时指出：婴幼儿缺铁 的源头是孕妇和乳母，防治婴幼儿缺铁首先要从源头人群 （孕妇）补铁开始。要控制儿童铁缺乏、减少缺铁的危害， 首先要着重防治孕妇的铁缺乏。
xx
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铁蛋白起什么作用？
铁蛋白在体内作用主 要有两条：一是作为体内 铁的储存库用于血红蛋白 的合成；二是将铁保存在 中空的球形蛋白内，防止 细胞内游离铁过多而产生 有害作用。
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铁蛋白检测试剂盒
铁蛋白检测—— 缺铁性贫血的预防性金指标
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什么是缺铁性贫血
当机体对铁的需求与供给失衡，导致体 内贮存铁耗尽（ID），继之红细胞内铁 缺乏（IDE），最终引起缺铁性贫血 （IDA）。IDA是铁缺乏症（包括ID， IDE和IDA）的最终阶段，表现为缺铁 引起的小细胞低色素性贫血及其他异常。
IDA是最常见的贫血。其发病率在发展 中国家、经济不发达地区及婴幼儿、育 龄妇女明显增高。
EASYSWEET-培训资料
6/63/366
孕妇发生缺铁性贫血的后果
增加心输出量和胎盘血流量，加重心脏 负担。
胎儿缺氧，生长发育受阻。 影响免疫、消化等多系统的正常功能 多种妊娠并发症。 胎儿先天铁储存不足，婴幼儿期易缺铁。 严重的会因血红蛋白携带氧气不足而致
在卫生部2011年6月23日发布的《孕产期保健工作管理办法》 和《孕产期保健工作规范》中也明确提出“提倡适量运动， 预防及纠正贫血。”“进行保健指导，……纠正贫血”，同 时孕产妇中重度贫血患病率也作为重点健康指标用于核查。
防治儿童营养性铁缺乏症参照方案中同时指出：婴幼儿缺铁 的源头是孕妇和乳母，防治婴幼儿缺铁首先要从源头人群 （孕妇）补铁开始。要控制儿童铁缺乏、减少缺铁的危害， 首先要着重防治孕妇的铁缺乏。
免疫层析快速诊断技术简介胶体金PPT资料
喷点方式
灵敏度问题
BJQ3000: 非接触喷点
A划J线Q3宽0度廉00: 价非接：触单喷点个测试条成本极低
BJQ3000:0.
将可反单应 份好检可的测单试：纸对份条标检本T线既测颜能：色成与批对制检标作测的，本色又既卡可比单能较份成，检看测批颜，检色可属立测于刻，那拿一到又个结可档果次，单，不份则必在等检数待测据。记，录可时候立填写该档次标识。
免疫层析快速诊断技术简介胶体金
一、胶体金纸条总述
二、胶体金纸条种类 三、胶体金纸条结构 四、胶体金纸条优缺点 五、胶体金纸条应用领域 六、胶体金纸条检测原理 七、胶体金纸条相关仪器设备 八、胶体金纸条判读方法
什么是快速检测？
快速检测是一种廉价的、一次性的、基 于膜的检测方法，它能提供分析物存在于 液体样品的视觉证据。
AJQ3000: 0.5-5mm 最小喷量
BJQ3000:10nl/drop
AJQ3000:1ul/cm 划线精密度 BJQ3000:±1% AJQ3000: ±2%
切条机
仪器参数 仪器尺寸为： 430mmx410mmX360mm 平台大小: 450mmX70mm 平台移动速度: 0-330mm/sec X、Y、Z轴移动误差: <50um 定位精度: ±10um in 1 axis;±25um in 2 axis 喷点方式 BJQ3000: 非接触喷点 AJQ3000: 非接触喷点 划线宽度
很传多染厂 病家（刻都禽拿开流发感到了,兽结对瘟应果疫的等，读）条不仪必，大等部待分都。是采用简单的30万象素数码摄像头做一个拍摄，然后用软件分析。
食品安全检测中心,各监管部门
这六种、检 胶测体稳可金定以纸以条性独检好立测的原：试理金纸条标，试也可剂以稳以装定在，塑料可盒长中的期形保式进存行。。
灵敏度问题
BJQ3000: 非接触喷点
A划J线Q3宽0度廉00: 价非接：触单喷点个测试条成本极低
BJQ3000:0.
将可反单应 份好检可的测单试：纸对份条标检本T线既测颜能：色成与批对制检标作测的，本色又既卡可比单能较份成，检看测批颜，检色可属立测于刻，那拿一到又个结可档果次，单，不份则必在等检数待测据。记，录可时候立填写该档次标识。
免疫层析快速诊断技术简介胶体金
一、胶体金纸条总述
二、胶体金纸条种类 三、胶体金纸条结构 四、胶体金纸条优缺点 五、胶体金纸条应用领域 六、胶体金纸条检测原理 七、胶体金纸条相关仪器设备 八、胶体金纸条判读方法
什么是快速检测？
快速检测是一种廉价的、一次性的、基 于膜的检测方法，它能提供分析物存在于 液体样品的视觉证据。
AJQ3000: 0.5-5mm 最小喷量
BJQ3000:10nl/drop
AJQ3000:1ul/cm 划线精密度 BJQ3000:±1% AJQ3000: ±2%
切条机
仪器参数 仪器尺寸为： 430mmx410mmX360mm 平台大小: 450mmX70mm 平台移动速度: 0-330mm/sec X、Y、Z轴移动误差: <50um 定位精度: ±10um in 1 axis;±25um in 2 axis 喷点方式 BJQ3000: 非接触喷点 AJQ3000: 非接触喷点 划线宽度
很传多染厂 病家（刻都禽拿开流发感到了,兽结对瘟应果疫的等，读）条不仪必，大等部待分都。是采用简单的30万象素数码摄像头做一个拍摄，然后用软件分析。
食品安全检测中心,各监管部门
这六种、检 胶测体稳可金定以纸以条性独检好立测的原：试理金纸条标，试也可剂以稳以装定在，塑料可盒长中的期形保式进存行。。
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基础金核
双离子 内层负离子（AuC12－） zeta电位
外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中
zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持 胶体金的稳定状态。
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附 功能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白 质等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等 非共价结合，形成胶体金标记物。
结果判定：
1、禽流感H9亚型抗原检测试纸卡：两条红线，阳 性；一条红线，阴性；无红线，试纸失效。 2、禽流感抗体检测试纸卡：两条红线，阳性；一 条红线，阴性；无红线，试纸失效。 3、磺胺嘧啶残留检测试纸卡：两条红线，阴性； 一条红线，阳性；无红线，试纸失效。
胶体金免疫层析试纸条的构成
样品垫
金标垫
膜
吸收垫
衬板
胶体金免疫层析试纸条类型：
GICA有三种反应模式：夹心法，间接法，竞争抑制法。 夹心法反应原理
B 阳性
C 阴性
间接法反应原理
B 阳性
C 阴性
竞争抑制法反应原理
阴性
弱阳性
阳性
检测线颜色强度与SD浓度负相关
目的：掌握间接试纸卡的检测原理，操
疾病的快速诊断及药物残留分析
GICA是一种新型检测方法，具有简单快速、结果 清晰，可通过肉眼判定结果、无需复杂操作技巧和特 殊设备、灵敏度高、无污染、携带方便等优点。 己成 为临床快速诊断领域发展的一个新方向，在发达国家 己得到广泛应用。
类别ห้องสมุดไป่ตู้
应用领域
检测的物质
人类医学 各 级 医 院 , 血 传染病（乙肝五项,HIV, SARS等） 站 ,CDC, 防疫站 , 诊 标志物（ AFP 、肌钙蛋白、粪便血红蛋 断中心；家庭自检； 商检系统；边检口 白等） 女性妊娠 hCG(早孕) 岸；公安系统. 毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒）
农牧业
畜牧兽医站 , 商检 传染病（禽流感,链球菌等） 系统 , 边检口岸 , 农 牧类院系和研究所 病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究 有害物质超标 机构
环境
食品安全 食品安全检测中心, 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）,大肠 各监管部门 杆菌,黄曲霉素
胶体金
胶体金（colloidal gold）也称金溶胶（goldsol），是金盐被 还原成原子金后形成的金颗粒悬液。
胶体金免疫层析技术
（colloidal gold immunochromatography assay, GICA）
胶体金免疫层析技术
20世纪80-90年代在酶联免疫吸附试验、 乳胶凝集试验、单克隆抗体技术、胶体金免疫 技术和新材料技术基础上发展了新型体外诊断 技术——胶体金免疫层析技术（colloidal gold immunochromatography assay, GICA）。
作方法及结果判定方法
实验材料：
1、禽流感H9亚型抗原检测试纸卡
2、禽流感抗体检测试纸卡 3、磺胺嘧啶残留检测试纸卡 4、禽流感H9亚型病毒阳性对照 5、禽流感H9亚型病毒阴性对照
6、禽流感抗体阳性对照
7、磺胺嘧啶残留阳性对照 8、磺胺嘧啶残留阴性对照
实验步骤：
1、加被检样品：100 ul/孔，阳性、阴性对照。 2、5min后观察结果。