第5章 常见免疫学检测技术-胶体金免疫层析
临床免疫学：胶体金免疫层析试验
胶体金-乙肝表面抗原 加样区
C：乙肝表面抗体
主要试剂
• 试剂条 • 采血针 • 缓冲液
操作方法与结果判定
• 将血清/血浆/全血标本直接加入加样区,
• 静置10分钟后判定结果，20分钟后判定结 果无效；
• 两条带有效，标本阳性；
• 仅质控区有带， 标本阴性;
<<临床免疫学检验>>操作考试
班级
姓名
学号
分数
题号 操作题 理论题
操作（50分）
实验报告：（30分，其中实验原理8分、试剂与器材 2分、操作步骤5分、注意事项5分、结果分析与 判断5分、临床意义5分）
理论题（20分）
操作考试时间：2017-12-12下午
分两批进行： 第一批：1、2班：14：00~15：30 第二批：3、4班：15：30~17：00
• 仅测试区有带， 无
• 无带；
效
注意事项
• 测试条从冰箱取出后应恢复至室温； • 加标本不可越过加样区。
方法学评价与临床应用
• 操作简单、方便，结果快速； • 符合床边检验POCT要求； • 不能准确定量。
作业：要求大家对前面7次实验报告按
照老师批改意见进行订正。下周操作考试 时学委收齐交到讲台上。
胶体金免疫层析试验
• 胶体金免疫技术
胶体金免疫测定技术
胶体金渗滤试验 胶体金层析试验
胶体金免疫层析试验原理
一种将胶体金免疫技术和蛋白质层析技术相 结合的快速固相膜免疫分析技术。所用试剂全部 为干试剂，测试时滴加在膜一端的待测标本溶液 受载体膜的毛细管作用向另一端移动，在移动过 程中待分析物与固定于载体膜上的抗原或抗体结 合而被固相化，最终通过胶体金的呈色条带来判 断试验结果。
免疫胶体金层析法
免疫胶体金层析法
——金标记免疫法测HCG
.
原理
• 采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维 素膜为载体，使抗原抗体反应和洗 涤在同一渗滤膜上，反应后根据在 膜上的颜色判断结果。
• 以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔 膜毛细管作用，使膜一端的液体慢 慢向另一端渗移，犹如层析
.
← HCG分子 ← 鼠抗人HCG单抗 ← 胶体金颗粒
←胶体金标记鼠抗人HCG单抗
←羊抗鼠IgG
.
positive
HCG 阳性标本
MAX
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色 在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控 线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质. 控对照。
.
方法学评价
• 该法为定性检测尿中HCG，不能确定其浓度 • 因为该法是用单抗来测定HCG，特异性较高， 黄
疸、蛋白、血细胞和浑浊度对结果观察都无影 响。、 • 晨尿中一般含有最高的HCG值，检出率较高。 • 检测时间：HCG一般在受精卵着床后几天才出现 在尿液中，而且要达到一定的量才能被检出，因 此，对于平时月经正常的妇女需在月经推迟后才 可能在尿中检出，二月经周期长或排卵异常的妇 女有可能在停经40-44天才能检出 • 尿液稀释：如果喝水过多使尿液稀释可能会导致 假阴性结果。
金标鼠抗人IgG单抗随层析作用向上移动，到达质控线，无羊抗鼠IgG( 二抗)或破坏失效，不结合而 不显色，作为质控对照。
.
大便隐血
MAX
.
注意事项
• 1. 将试条有标志线的下端浸入尿液标本中， 深度不可超过标志线（若超过，可能会出 现假阳性）
胶体金免疫层析技术
胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术是一种重要的生物分析技术，它在医学诊断、生物学研究、环境监测等领域有着广泛的应用。
本文将介绍胶体金免疫层析技术的原理、方法、应用及发展前景等方面，以帮助读者深入了解这一技术的重要性和特点。
一、胶体金免疫层析技术的原理胶体金免疫层析技术是一种基于抗原与抗体特异性结合原理的生物分析技术。
其原理基于胶体金颗粒的特殊性质，当胶体金颗粒与特定的抗体或抗原结合时，会产生颜色变化。
这种颜色变化可以通过裸眼观察或仪器测定来定量分析目标物质的含量，从而实现对目标分子的快速、灵敏、特异性检测。
二、胶体金免疫层析技术的方法1. 样品预处理在进行胶体金免疫层析技术前，需要对样品进行一定的预处理工作，以获得高纯度的检测目标。
这包括样品的收集、提取、稀释、清洁等操作，以确保样品的纯度和稳定性。
2. 抗原抗体结合在胶体金免疫层析技术中，首先将抗原或抗体与胶体金颗粒结合，形成胶体金-抗原或胶体金-抗体复合物。
这一步是整个技术的关键，其特异性结合决定了最终结果的准确性和可靠性。
3. 层析纸制备将样品和复合物应用于层析纸上，经过升温、冷却和其他特殊处理，使复合物在层析纸上呈现出清晰的条带，以便进行后续的观察和分析。
4. 结果分析通过裸眼观察或仪器测定，分析样品中的目标分子的含量，从而得出最终的检测结果。
三、胶体金免疫层析技术的应用1. 医学诊断胶体金免疫层析技术在临床医学中被广泛应用，例如对传染病、肿瘤标志物、生化指标等的快速检测，为疾病的早期诊断和治疗提供了重要的支持。
2. 食品安全该技术可以用于食品中有害物质的检测，如农药残留、重金属污染等，确保食品的安全和健康。
3. 环境监测胶体金免疫层析技术也可以用于环境监测领域，检测水质、土壤质量等环境参数，为环境保护和生态平衡提供数据支持。
四、胶体金免疫层析技术的发展前景随着生物技术和纳米技术的不断发展，胶体金免疫层析技术将得到更广泛的应用和改进。
未来，可以预见该技术在药物筛选、基因检测、个性化医疗等领域将发挥越来越重要的作用。
免疫层析法 胶体金法
免疫层析法胶体金法免疫层析法（Immunoassays）是一种常用的生物化学分析方法，可以用来检测和测量样品中的特定分子。
它基于抗体和抗原之间的特异性相互作用，利用这种相互作用来检测和量化感兴趣的分子。
胶体金法（Colloidal Gold）是一种常用的免疫层析法的检测方法。
它利用胶体金颗粒的特殊性质，结合抗体和抗原的特异性相互作用，实现对目标物质的定性和定量分析。
免疫层析法的原理是利用抗体与抗原的特异性结合，从而实现对目标物质的检测。
在胶体金法中，胶体金颗粒被偶联上特异性的抗体，形成胶体金标记物。
当样品中存在目标物质时，胶体金标记物会与目标物质结合形成免疫复合物。
这个免疫复合物可以通过免疫层析膜迁移，最终形成可见的条纹或颜色变化。
胶体金法的优势在于其操作简便、结果直观、灵敏度高和特异性好。
它可以应用于多种领域，如临床医学、食品安全、环境监测等。
在临床医学中，胶体金法常用于检测生物标志物，如肿瘤标志物、感染性疾病的病原体等。
在食品安全领域，胶体金法可以用来检测食品中的有害物质，如农药残留、重金属等。
在环境监测中，胶体金法可以用于检测水体、土壤等环境样品中的污染物。
使用胶体金法进行免疫层析分析的步骤一般包括样品预处理、胶体金标记物的制备、样品与标记物的反应、免疫层析膜的制备以及结果的读取和分析等。
首先，需要对样品进行预处理，如提取、纯化或稀释等，以获得适合分析的样品。
然后，制备胶体金标记物，将特异性抗体与胶体金颗粒偶联。
接下来，将样品与标记物反应，使目标物质与胶体金标记物结合形成免疫复合物。
然后，将反应混合物加载到免疫层析膜上，免疫复合物会随着溶液的迁移在膜上形成条纹。
最后，通过肉眼或专用的读取设备对条纹进行观察和分析，根据条纹的颜色、强度和位置等来判断目标物质的存在与浓度。
虽然胶体金法在免疫层析分析中具有许多优点，但也存在一些局限性。
首先，胶体金颗粒的稳定性较差，容易聚集和沉积，影响结果的准确性和可重复性。
胶体金免疫层析技术演示课件
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临床上将缺铁性贫血分为以下三个阶段：
铁缺乏阶段 潜在性缺铁期
血清铁蛋 白含量
转铁蛋白 红细胞游离 饱和度 原卟啉（FEP）
血红蛋白
<12ng/ml
缺铁性红细胞生成 <12ng/ml <15%
缺铁性贫血
<12ng/ml <15%
>4.5μg/L >4.5μg/L
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什么是缺铁性贫血
当机体对铁的需求与供给失衡，导致体内贮存铁耗尽 （ID），继之红细胞内铁缺乏（IDE），最终引起缺 铁性贫血（IDA）。IDA是铁缺乏症（包括ID，IDE 和IDA）的最终阶段，表现为缺铁引起的小细胞低色 素性贫血及其他异常。
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胶体金免疫层析法检测试剂盒的特点
操作方便，读取结果的时间短：一般只需要一个加样步骤，得 到结果时间最短的只需要3~5分钟，最长的也不会超过30分钟 。
灵敏度和特异性好，受外界影响少：高度特异的抗原抗体反应 保证该检测结果保持很高的特异性和灵敏度。
成本低廉，所需样本很少：一般只需要不到100μl样本即可得到 检测结果。
情商受损：情感淡漠，不开心、紧张、易疲劳；兴趣少， 不容易逗乐，不合群，注意力难集中。
身体发育受影响：听视觉神经反应迟缓；细胞、体液免 疫功能降低，易感染；延缓运动神经的发育，运动功能 受损。小儿长期贫血不仅会影响生长发育，还可诱发一些感
染性疾病。
更重要的一点是：胎儿及婴幼儿时期铁缺乏，甚至无法
被日后的补铁所逆转。
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什么是铁蛋白（Ferritin）
胶体金免疫层析竞争法
胶体金免疫层析竞争法1. 背景介绍胶体金免疫层析竞争法（Colloidal Gold Immunochromatographic Assay）是一种常见的免疫层析快速检测方法。
该方法基于免疫学原理，利用胶体金颗粒与样品中的目标分子相互作用，通过色素沉淀形成可见的测试结果。
这种检测方法具有检测快速、操作简单、结果直观等优点，在临床诊断、食品安全监测、环境污染监测等领域得到广泛应用。
2. 原理介绍2.1 免疫学原理免疫学原理是胶体金免疫层析竞争法的基础。
免疫层析法是一种通过抗原-抗体反应实现分离和检测的技术。
在该方法中，通过将抗原（目标分子）与抗体（特异性与抗原结合的蛋白质）结合，形成免疫复合物，从而实现目标分子的检测。
2.2 胶体金颗粒胶体金颗粒是胶体金免疫层析法的关键试剂。
胶体金颗粒具有良好的生物相容性、稳定性和可见性，广泛应用于免疫学和生物医学领域。
胶体金颗粒的颜色通常为红色或紫色，直径一般在10-100纳米之间。
在光学显微镜下观察，胶体金颗粒呈现明显的表面等离子共振吸收峰，即表现为红色。
2.3 竞争反应胶体金免疫层析竞争法通过竞争反应实现目标分子的检测。
竞争反应分为两个步骤：竞争体系构建和检测结果显示。
2.3.1 竞争体系构建竞争体系构建是胶体金免疫层析竞争法的关键步骤。
在这一步骤中，将胶体金颗粒与目标分子结合。
首先，将目标分子与胶体金颗粒中的抗体结合，形成免疫复合物。
然后，将样品中的目标分子与胶体金颗粒中的抗体竞争结合。
当样品中的目标分子存在时，会与胶体金颗粒中的抗体竞争结合，导致免疫复合物的形成减少。
而当样品中的目标分子不存在时，胶体金颗粒中的抗体能与胶体金颗粒自身上的抗原结合，免疫复合物形成量较多。
2.3.2 检测结果显示检测结果显示是胶体金免疫层析竞争法的关键步骤。
在这一步骤中，利用胶体金颗粒的可见性进行结果显示。
当竞争体系构建完成后，将样品滴在测试纸上，胶体金颗粒会经由纸质的吸收作用，沿纸张上升。
胶体金免疫层析原理
胶体金免疫层析原理
胶体金免疫层析是一种利用胶体金标记技术和层析技术的免疫检测技术，是一种简便、快速、准确、灵敏度高的免疫检测方法。
该方法的特点是：1.在短时间内可同时检测多种物质，一次可同时测定多个不同性质的样品；2.可在现场测定；3.对样品进行定性或定量检测，便于现场观察分析；4.与传统方法相比，具有快速、简便、低成本等特点。
因此，在临床检验中得到广泛应用。
胶体金免疫层析技术是在金标垫上包被抗人IgG或IgM抗体的半定量或定量的胶体金，作为一种标记物加入到待检样品中，通过对抗体的吸附作用，在胶体金颗粒上形成肉眼可见的金标记线（GoldLine）。
当样品中含有待检成分时，其胶体金标记线和待检抗原或抗体结合形成肉眼可见的胶体金颗粒；当样品中不含有待检成分时，其胶体金标记线和待检抗原或抗体不结合形成肉眼可见的胶体金颗粒。
由于胶体金标记物与待检抗原或抗体结合形成肉眼可见的带颜色的条带状物，即可判断样品中有无待检成分。
—— 1 —1 —。
免疫层析快速诊断技术简介胶体金课件
BJQ3000:10nl/drop
AJQ3000:1ul/cm 划线精密度 BJQ3000:±1% AJQ3000: ±2%
切条机
仪器参数: 进料宽度：≤100 mm 进料长度：不限,可连续进料切割 切割宽度：≥1 mm, 宽度连续可调 切割宽度设定位数：0.01 mm 切割精度：±0.1 mm 切割速度：230次/分钟, 速度连续可调 切条计数：单次工作和总工作分别计数 刀片: 日本进口, 耐磨高碳钢材料 抗静电装置：建议选配 电源：220VAC 重量：20KG 尺寸：430(L)×330(W)×260(H) mm
这种检测可以以独立的试纸条，也可以 以装在塑料盒中的形式进行。
总的来说，做此项检测至少需要50ul的 液体标本，可在5－30分钟完成。
胶体金纸条的不同种类
层析法技术优势:简单\现场\快速
试纸条组成结构
控制线（C线）
与常规诊断方法相比：
优点 快速：全部检测过程仅需 5-30分钟。
缺点 定量问题
很多厂家都开发了对应的读条仪，大部分都是采用简单的30万 象素数码摄像头做一个拍摄，然后用软件分析。
农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）,大肠杆菌,黄曲霉素 免五疫、层 胶析体快金速纸诊条断应技用术领简域介胶体金
快廉速价：全单部个检测测试过条程成仅本需极低5-30分钟。 2可在0单非mm份 临/检床dro测检p：测）对中标，本样既本能可成能批是检由测土，壤又、可粉单尘份、检植测物，或可者立食刻品拿制到备结的果微，量不溶必液等。待。 A传很J染多Q3病 厂0（家00乙都: 0肝开. 五发项了对,H应IV,的S读AR条S仪等，）大部分都是采用简单的30万象素数码摄像头做一个拍摄，然后用软件分析。 传这BIO染种D病 检O（测T 乙可X肝以YZ五以30项独50立,H点的IV膜,试S喷纸AR金条S机，等也）可以以装在塑料盒中的形式进行。 五B刀八IO、片D胶 : O日体T本金X进纸Y口Z条3,0应判耐50用读磨点领方高膜域法碳喷钢金材机料 传目农刀染前兽片病 涉 药 : 日（足残本乙该留进肝领（口五域磺, 项的胺耐科类,磨H研、I高V,机瘦碳S构肉A钢R很精材S多等料等，））从,大中肠科杆院菌到,黄C曲DC霉，素细数来也有三五十家。 可 5免 刀 廉 农-5单疫片价兽m份层:：药m日检 析 单 残本测 法 个 留进： 检 测 （口对 测 试 磺, 标 原 条 胺耐本 理 成 类磨既 分 本 、高能类极瘦碳成 介 低 肉钢批 绍 精材检 等料测 ），,大又肠可杆单菌份,黄检曲测霉，素可立刻拿到结果，不必等待。 六最（可标环、小竞单志保胶 喷 争 份 物 监体量反检（测金应测A部F纸）：门P、条对,研肌检标究钙测本机蛋原既构白理能、成粪批便检血测红，蛋又白可等单）份检测，可立刻拿到结果，不必等待。 然B目进廉这J后前料价种Q3打 ， 长 ： 检0开国度单测00分内：个可:1析能不测以0n软点限试以l/d件出条独,r可o，来成立p连将的本续该厂极试进灰家低纸料度有条切图，4割0象也多导可家入以，以自装动在分塑析料出盒灵中敏的度形，式本进底行情。况。 这A然快简食J种后速便品Q3检 打 ： 安0测开全不00可分部需检:1以析检其测ul/以软测它中cm独件过任心立，程何,各的将仅仪监试该需器管纸灰设部5-条度备3门0，图分也象操钟可导作。以入也以，极装自其在动简塑分单料析，盒出无中灵需的敏专形度业式，人进本员行底，。情携况带。方便，可随时随地进行。 八划免总仪、线疫的器胶 精 层 来 参体密析说数金度法，纸检做条测此判原项读理检方分测法类至介少绍需要50ul的液体标本，可在5－30分钟完成。
胶体金免疫层析法原理
胶体金免疫层析法原理
胶体金免疫层析法是一种常用于生物分析和临床诊断的技术。
它基于抗原-抗体反应原理，利用胶体金粒子和抗体之间的相互作用来实现分离和检测目标分子。
胶体金是一种纳米级粒子，其表面具有特定的化学官能团，可以与抗体分子发生化学结合。
在胶体金免疫层析法中，首先将目标分子与抗体反应，形成抗原-抗体复合物。
然后将这个复合物与含有胶体金粒子的试剂混合，使胶体金粒子与抗原-抗体复合物结合。
混合物经过一段时间后，被加入到一根特定宽度和长度的试纸条上，试纸条上通常具有特定的孔洞或线条，用于控制混合物的流动。
胶体金粒子在试纸条上移动的速度受到复合物的大小和电荷的影响。
当复合物较大且带有负电荷时，胶体金粒子与复合物结合，导致复合物无法通过试纸孔洞或线条，停留在原位置。
这样，通过观察试纸条上形成的颜色条带的位置，可以确定是否存在目标分子。
通常，出现颜色条带表示目标分子的存在，而无颜色条带表示目标分子的缺失。
胶体金免疫层析法具有快速、便携和易于操作的特点，可以在不需要复杂设备和实验室条件的情况下进行分析。
因此，它广泛应用于临床诊断、食品安全检测、环境监测等领域。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用随着食品工业的快速发展和全球贸易的加速，食品安全问题日益受到人们的关注。
食品安全检测是保障食品质量和保障公众健康的重要环节，快速、准确的检测技术对于食品安全已经成为不可或缺的一环。
胶体金免疫层析技术是一种迅速、敏感、特异性好，并且易于操作的检测技术。
本文将介绍胶体金免疫层析技术的原理、特点及在食品安全现场快速检测中的应用。
一、胶体金免疫层析技术原理胶体金免疫层析技术是基于抗原与抗体之间的特异性结合原理。
首先将目标分子作为抗原，与特异性的抗体反应形成抗原-抗体复合物，然后将其与胶体金颗粒结合。
当抗原-抗体复合物与胶体金颗粒结合时，会发生颗粒聚集，产生可见的颜色变化。
通过颜色的变化可以判断样品中是否存在所需检测的目标分子，从而实现快速检测。
1. 快速性：胶体金免疫层析技术无需复杂的操作步骤，通常能在几分钟内完成检测。
对于食品安全现场快速检测来说，时间就是金钱，因此快速性是其最大的优势之一。
2. 敏感性：胶体金免疫层析技术对目标分子的检测灵敏度高，可以检测到极低浓度的目标分子。
这使得其在食品安全检测中能够及时发现微量的有害物质，保障公众健康。
3. 特异性：胶体金免疫层析技术对目标分子的检测特异性好，能够区分目标分子和其他干扰物质，减少误判的可能性。
4. 易操作性：胶体金免疫层析技术不需要复杂的仪器设备，操作简单，适用于各种现场检测环境。
5. 成本低廉：胶体金免疫层析技术的试剂成本低廉，相对于传统的检测方法，可以大大降低检测成本。
1. 残留农药检测：农药残留是食品安全的一个重要问题，特别是对于农产品出口国家来说，农药残留的限量标准要求更加严格。
胶体金免疫层析技术可以快速检测食品中的农药残留情况，为食品出口提供可靠的检测数据。
2. 食品中毒素检测：食品中的毒素是一种常见的食品安全隐患，例如黄曲霉素、赭曲霉素等。
采用胶体金免疫层析技术可以对食品中的毒素进行快速检测，及时发现食品中的毒素污染问题。
[医学]胶体金免疫层析技术
![[医学]胶体金免疫层析技术](https://img.taocdn.com/s3/m/8c232dc719e8b8f67c1cb9d7.png)
◊ 在其后的20年中，免疫层析产品得到了快速 的发展：
项目 早孕检测 毒品检测 疾病检测
所占百分比 90%以上 80-90% 30-40%
◊ 快速，定性 10分钟以内就可得到检测结果。
◊ 无需设备 一根检测条就能完成检测
◊ 准确、灵敏 灵敏度可以达到10-9数量级
◊ 应用范围不断扩大
疾病诊断，食品安全，药物检测，DNA检测
1978年geoghega发现了胶体金标记物在光镜水平的应用
+ 胶体金结构：
胶体金颗粒由一个基础金核 （原子金Au）及包围在外的双 离子层构成，紧连在金核表面 的是内层负离子（AuC12－）， 外层离子层H+则分散在胶体间 溶液中，以维持胶体金游离于 溶胶间的悬液状态。
∆染色—不同粒径，不同颜色
出现了全新的免疫学理论 从分子水平对免疫系统进行研究
抗原抗体——钥匙和锁的 关系
抗体能够特异性的结合 抗原的活性位点。
基因工程指按人们意愿设计，通过改造基因 或基因组而改变生物的遗传特性，从而获 得新的品种货或产品。
意义：可以稳定的获得人类所要的蛋白。
◊ 20世纪90年代初，第一个免疫层析产品诞 生——用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)的测 定。
粒径 2～5nm 10～20nm 30～80nm
颜色 橙色的 酒红色 紫红色
∆ 胶体的特性—充分的溶解性，良好的流动性
∆吸附能力—在不改变蛋白性质的情况下，稳 定迅速的吸附蛋白
+ 胶体金在电镜水平的应用 + 胶体金在光镜水平的应用 + 胶体金在流式细胞仪中的应用 + 免疫印迹技术
什么叫硝酸纤维素膜？ 以硝酸纤维素为基质，经过匀浆，滚筒铺膜，
是机体识别“自身”与“非己”抗原，对 自身抗原形成天然免疫耐受，对“非己” 抗原产生排斥作用的一种生理功能。正常 情况下，这种生理功能对机体有益，可产 生抗感染、抗肿瘤等维持机体生理平衡和 稳定的免疫保护作用
免疫层析胶体金法
免疫层析胶体金法免疫层析胶体金法是一种常用的生物分析技术，主要用于检测生物样本中的抗原或抗体。
该方法结合了免疫学原理和胶体金纳米颗粒的特性，具有高灵敏度、高特异性和简单快速等优点。
免疫层析胶体金法的原理是基于抗原与抗体之间的特异性反应。
首先，在胶体金纳米颗粒表面修饰上适当的抗体或抗原，使其能够与待测的抗原或抗体发生特异性结合。
然后，将待测样品添加到一片特定的膜上，膜上固定有与胶体金固定结合的另一种抗体或抗原。
当样品中存在与胶体金修饰的抗原或抗体相结合的待测物时，会形成胶体金-待测物-固定抗体或抗原的复合物。
这些复合物会在免疫层析膜上移动并沉积在特定位置，形成可视的条纹或斑块。
免疫层析胶体金法具有许多优点。
首先，它具有快速的分析速度，通常花费不到半个小时就能得到结果。
其次，该方法不需要复杂的仪器设备，只需简单的样品处理和可见观察，因此可以广泛应用于基础研究和临床诊断等领域。
此外，免疫层析胶体金法具有较高的灵敏度和特异性，能够检测到低浓度的抗原或抗体。
同时，该方法还能同时检测多个待测物，提高了检测的效率。
免疫层析胶体金法在许多领域得到了广泛的应用。
在医学诊断方面，它可以用于检测多种疾病的标志物，如传染病、肿瘤、心脏病等。
在食品安全领域，免疫层析胶体金法可以用于快速检测食品中的残留农药、毒素以及转基因成分。
在环境监测方面，该方法可以用于检测水体、土壤和空气中的污染物，如重金属、农药等有害物质。
此外，免疫层析胶体金法还可应用于生物制药、疫苗研发等领域。
然而，免疫层析胶体金法也存在一些局限性和挑战。
首先，其灵敏度和特异性受抗体或抗原的质量影响较大，需要高质量的抗体或抗原来提高检测的准确性。
其次，该方法只能实现定性或半定量的分析，不能得到精确的定量结果。
此外，免疫层析胶体金法对待测样品的复杂性有一定的限制，如含有干扰物质或高浓度的待测物。
因此，在实际应用中需要综合考虑这些因素。
综上所述，免疫层析胶体金法是一种高灵敏度、高特异性和简单快速的生物分析技术。
免疫胶体金层析法的原理
免疫胶体金层析法的原理免疫胶体金层析法是一种常用的生物分析技术，主要用于检测和分离生物样品中的特定分子。
其原理基于胶体金颗粒在特定条件下与抗原-抗体相互作用而发生的可见光学变化。
胶体金是一种具有特殊光学性质的纳米材料，其表面可以修饰上特定的抗体。
在免疫胶体金层析法中，首先将待检测的抗原样品与标记有特定抗体的胶体金颗粒相混合。
当抗原与抗体结合时，会形成抗原-抗体复合物。
这些复合物在溶液中具有一定的电荷，会影响胶体金颗粒的稳定性。
之后，将混合物置于层析膜上，这是一种特殊的过滤膜，具有特定的孔径大小。
混合物在层析膜上进行渗透层析。
由于抗原-抗体复合物较大，其在层析膜上的渗透速度较慢，而未结合的胶体金颗粒则能够更快地通过层析膜。
最终，在层析膜上形成了不同区域，其中包括有含有抗原-抗体复合物的区域和只含有未结合胶体金颗粒的区域。
这种区域的形成可以通过肉眼观察或者使用特定的检测设备来实现。
由于胶体金颗粒的特殊光学性质，当抗原-抗体复合物存在时，溶液的颜色会发生变化，通常由红色变为紫色或蓝色。
通过观察颜色变化的位置和程度，就可以判断样品中是否存在特定的抗原。
这种免疫胶体金层析法具有简单、快速、灵敏等优点，广泛应用于临床诊断、食品安全检测、环境监测等领域。
除了上述基本原理外，免疫胶体金层析法还可以通过不同的改进和优化来适应不同的应用需求。
例如，可以通过调节胶体金颗粒的大小和表面修饰来改变其稳定性和灵敏度。
此外，还可以利用纳米技术的进展，将免疫胶体金层析法与其他分析技术相结合，进一步提高检测的灵敏度和准确性。
免疫胶体金层析法是一种基于抗原-抗体相互作用的生物分析技术。
通过胶体金颗粒的特殊光学性质以及层析膜的选择，可以实现对特定抗原的快速检测和分离。
该方法具有简单、快速、灵敏等优点，广泛应用于生命科学研究和临床诊断等领域。
随着纳米技术的发展，相信免疫胶体金层析法在未来会有更加广泛的应用前景。
实验六 胶体金免疫层析技术
原理：利用胶体金 颗粒与抗体或抗原 结合形成免疫复合 物通过层析技术进 行分离和检测。
胶体金颗粒具有高 灵敏度、高稳定性 和易于观察的特点 。
应用领域：广泛应 用于医学、生物技 术、食品检测等领 域。
历史和发展
1971年胶体金免疫层析技术首 次被提出
1980年代胶体金免疫层析技术 开始应用于临床诊断
05
胶体金免疫层析技术的应用案例
在医学诊断中的应用
快速检测：用于 快速检测传染病、 肿瘤标志物等
定量检测：用于 定量检测激素、 药物浓度等
早期诊断：用于 早期诊断某些疾 病如阿尔茨海默 病等
疾病监测：用于 监测疾病进展和 治疗效果如糖尿 病等
在食品安全检测中的应用
检测食品中的农药残留
检测食品中的重金属含量
准备实验材 料：胶体金 免疫层析试 纸条、样本、
缓冲液等
样本处理： 将样本进行 稀释、离心
等处理
加样：将样 本加入到试 纸条的加样
孔中
孵育：将试 纸条放入孵 育器中设定 合适的温度
和时间
观察结果： 在孵育结束 后观察试纸 条上的颜色 变化判断结
果
数据分析： 根据实验结 果进行数据 分析和报告
撰写
实验结果分析
稳定性好：胶体金颗粒不易氧化 稳定性好
技术局限性
灵敏度较低：胶体金免疫层析技 术灵敏度较低难以检测到低浓度 的抗原或抗体。
检测时间较长：胶体金免疫层析 技术检测时间较长需要等待一定 时间才能得到结果。
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பைடு நூலகம்
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特异性较差：胶体金免疫层析技 术特异性较差容易发生交叉反应 导致假阳性结果。
1990年代胶体金免疫层析技 术逐渐成熟广泛应用于传染病、 肿瘤等疾病的检测
胶体金免疫层析技术PPT课件
用于检测生物样本中药物残留，如抗生素、化疗药物等，评估药物 治疗效果和预防药物滥用。
生物分子检测
用于检测生物样本中特定的生物分子，如抗原、抗体等，辅助诊断疾 病和研究生物过程。
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该技术主要适用于小分子抗 原和抗体的检测，对于大分 子物质如蛋白质、细胞等的 检测效果不佳。
成本较高
虽然胶体金免疫层析技术试 剂成本相对较低，但仪器设 备和生产工艺的成本较高， 导致整体成本较高。
对环境因素敏感
胶体金免疫层析技术的检测 结果易受环境因素影响，如 温度、湿度等，需要在一定 的条件下进行操作。
抗体或抗原的纯化
通过亲和层析、凝胶过滤等方法去除杂质，获得纯度较高的抗体或 抗原。
抗体或抗原的标记
将抗体或抗原与胶体金颗粒结合，形成抗体-胶体金或抗原-胶体金 复合物，以便后续检测时能够与目标物质发生反应。
制备胶体金与抗体或抗原的结合物
1 2
胶体金与抗体或抗原的结合
通过物理吸附、化学键合等方法将抗体或抗原固 定在胶体金颗粒表面，形成结合物。
胶体金免疫层析技术 PPT课件
目 录
• 胶体金免疫层析技术概述 • 胶体金免疫层析技术的基本组成 • 胶体金免疫层析技术的制作过程 • 胶体金免疫层析技术的优缺点 • 胶体金免疫层析技术的应用实例
01
胶体金免疫层析技术概 述
定义与特点
定义
胶体金免疫层析技术是一种基于 胶体金标记和免疫层析原理的快 速检测技术。
结合物的纯化
通过离心、超滤等方法去除未结合的抗体或抗原， 获得纯度较高的结合物。
3
结合物的稳定性
通过调节溶液的pH值、加入稳定剂等手段，提 高结合物的稳定性，以确保其在存储和使用过程 中性能稳定。
胶体金和免疫层析法区别
胶体金和免疫层析法区别胶体金和免疫层析法是生物医学领域常用的两种技术手段，它们在生物分析、临床诊断、生命科学研究等方面都有着重要的应用价值。
这两种方法都是利用抗体与抗原的特异性相互作用来进行生物分析的技术手段，但在原理和应用方面有着一些显著的区别。
首先，我们先来介绍一下胶体金技术。
胶体金是一种在纳米尺度下的金颗粒悬浮液，其具有良好的生物相容性和生物相互作用性，在生物医学领域被广泛应用于生物探针和生物标记物的检测。
胶体金技术主要是利用了胶体金颗粒的表面等离子共振（Surface Plasmon Resonance, SPR）效应来进行分析，当在特定条件下，胶体金颗粒与抗体–抗原复合物结合后，会发生表面等离子共振现象，从而产生可见光的吸收峰值转移，通过测量吸光度的变化来进行生物分析。
相比之下，免疫层析法则是一种传统的生物分析方法，该方法主要原理是利用抗体与抗原的特异结合，通过与被测样品中的抗原相互作用，形成免疫复合物，然后通过免疫扩散或免疫沉淀的方式来进行分离和检测。
免疫层析法在临床诊断和生物医学研究中有着广泛的应用，尤其在血清标志物检测、肿瘤标志物检测、感染病原体检测等方面有着重要的价值。
在原理方面，胶体金技术主要通过测定胶体金颗粒的表面等离子共振效应来进行生物分析，所以其具有较高的灵敏度和特异性，能够检测到非常低浓度的抗原分子。
而免疫层析法则主要通过抗原-抗体的非共价结合来进行分析，所以其检测灵敏度相对较低，一般只能检测到中等浓度的抗原。
此外，胶体金技术还具有颜色可视化的优势，当胶体金与抗原结合后，会出现颜色变化，通过肉眼观察就可以判断结果，这在一些简单快速的生物分析中有着很大的应用潜力。
而免疫层析法通常需要通过测定免疫复合物的位置和密度来进行定量分析，相对来说操作要求比较严格。
在应用方面，由于胶体金技术具有灵敏度高、特异性好、操作简单、颜色可视化等优势，因此在临床诊断、环境监测、生命科学研究等领域都有着广泛的应用。
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夹心法反应演示
阳性
阴性
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
©②间接法检测抗体
间接法反应演示
阳性
阴性
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
©③间接竞争法
竞争抑制法反应演示
阴性
弱阳性
阳性
检测线颜色强度与样品浓度负相关
竞争法结果判断
（三）胶体金免疫测定技术
ª 2.胶体金免疫层析试纸条制作 § （1）试剂、耗材准备 § （2）金标抗体的制备 § （3）试纸条的组装 § （4）试纸条的优化 § （5）样品检测及分析
ª 2.胶体金（免三疫）层胶析体试金纸免条疫制作测定技术
§ （1）试剂、耗材准备
• 硝酸纤维素膜的参数：孔径、对称性、层析速度、表面 活性剂、蛋白结合力、强度、表面质量、厚度、批间均 一性等
• um 指的是膜孔径，但膜在生产过程中，由于干燥成型 等过程的非绝对均一，膜的孔径也是非均一的，不同厂 家膜孔径标准无法统一衡量
（三）胶体金免疫测定技术
ª 1.主要形式（基本原理） § 斑点金免疫渗滤/dot immunogold filtration
assay, DIGFA § 胶体金免疫层析/immunochromatography assay,
ICA--试纸条
（三）胶体金免疫测定技术
§ （1）斑点金免疫渗滤
原 • 以硝酸纤维素膜作为固相载体、包被抗 理 原或抗体
（二）胶体金的制备
® 一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣 酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等
ª 以柠檬酸三钠还原法为例 § 取0.01% HAuCl4 溶液100 mL 搅拌、加热、回
流，沸腾2 min, 迅速一次加入一定量的 1% 柠 檬酸三钠水溶液（现配），保持低沸，经由蓝、 灰、至呈现透明的橙红色停止加热。回流冷却至 室温（应为原体积，否则应用蒸馏水恢复体积） § 加入柠檬酸钠的量不同，胶体金颗粒大小不同
常见免疫学检测技术之
胶体金标记免疫检测
一、胶体金标记免疫检测应用现状
§ 胶体金标记技术创于20世纪70年代，是以胶体 金作为示踪标志物或显色剂，应用于抗原抗体 反应的一种新型免疫标记技术
§ 由于胶体金具有肉眼可观测的红色，所以既可 用于免疫电镜、光镜检测，又能作为指示物结 合固相载体用于体外免疫检测抗原或抗体
在 40-60nm 为好。颗粒再大则变为黑色，且不 稳定；颗粒过小，虽然稳定性好，但颜色为橙黄 色，视觉效果不好，而且小颗粒相对要结合更多 的抗体，系统的灵敏度也随之下降。胶体金溶液 应清亮透明
20nm
制备好的胶体金溶胶
（二）胶体金的制备
ª 胶体金颗粒的鉴定 § 胶体金颗粒的直径符合要求、大小均一、稳定
• 利用微孔滤膜渗滤特性可使抗原或抗 体与膜表面的固相抗体或抗原结合、 聚集，形成紫红色斑点
• 微孔滤膜渗滤特性可完成洗涤过程， 实现游离标记物的分离；
（三）胶体金免疫测定技术
§ （1）斑点金免疫渗滤
胶体金免疫渗滤试验
§ （1）斑点金免疫渗滤
©①双抗体夹心法
• 固定于膜上的多克隆抗体＋标本中待测抗原＋ 金标记的特异性单克隆抗体显色
ª 2.胶体金（免三疫）层胶析体试金纸免条疫制作测定技术
§ （1）试剂、耗材准备
• 硝酸纤维素膜又称为NC膜，在胶体金试纸中用做C/T线 的承载体，同时也是免疫反应的发生处
• 现在有销售的NC膜品牌型号如下： MILLIPORE（美国），M135（有背衬/无背衬两种） M180（有背衬/无背衬两种） WHATMAN and S&S，Puraband impuraband, SARTORIUS（德国），CN140 MDI（印度），8um 6um 伊能（国产），8um 6um
原 • 是用胶体金标记技术和蛋白质层析技术 理 • 将结合各的种以反应微试孔剂滤分膜点为固载定体在的测快试速版的相固应相
• 通区膜域过免，毛疫检细分测析管标作技用术本加使在样试品纸溶条 液的 在一 层端析材料 上泳动，样本中的待测物与层析材料中 的反应试剂发生特异性结合反应，形成 的复合物被富集或固定在层析条上的特 定区域（检测线），通过标记抗体显色
• 而以秒为单位的定义为，每4cm膜，水的层析时间是 ***s。该单位已经越来越被各大厂商所接受，成为了一 个通用的比较标准
• 换算情况大致为：8um=135s；6um=180s
ª 2.胶体金（免三疫）层胶析体试金纸免条疫制作测定技术
§ （2）金标抗体的制备 • ①抗体的预处理 ² 抗体均应纯化 ²抗体应先对低离子强度的水（5mM NaCl溶液，
食品 食品安全检测中心, 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精
安全 各监管部门
等）,大肠杆菌,黄曲霉素
--
瘦 肉 精
沙 丁 胺 醇
--
瘦 肉 精
沙 丁 胺 醇
—
瘦 肉 精
克 伦 特 罗
瘦肉精—莱克多巴胺
瘦肉精—莱克多巴胺
瘦肉精—莱克多巴胺
—
兽 药
恩 诺 沙 星
致病菌--大肠杆菌O157
其它有害物质—三聚氰胺
§ 最初应用于免疫组化染色，随后发展到以膜为 载体的免疫测定技术
一、胶体金标记免疫检测应用现状
§ 胶体金标记技术具有简单、快速、灵敏等特 点，得到了广泛应用
§ 20世纪90年代兴起的胶体金免疫层析技术，特 别是试纸条的发展，使操作更加方便快捷
§ 胶体金标记免疫检测技术在临床医学检测、激 素检测、食品安全检测、药物残留和毒品快速 检测，以及抗原抗体分析等诸多领域迅速发展
传染病（乙肝五项,HIV, SARS 等）；标志物（AFP、肌钙蛋 白、粪便血红蛋白等）；女性妊 娠（hCG(早孕),LH,FSH)；毒品 （吗啡,K粉,摇头丸,冰毒）
农牧 畜牧兽医站, 商检 传染病（禽流感,兽瘟疫等） 业 系统,边检口岸,农
牧类院系和研究所
环境 环保监测部门,研 有害物质超标 究机构
无自凝现象 § 要得到大小更均匀的胶体金颗粒，可采用甘油
或蔗糖密度梯度离心，经分级后制得胶体金颗 粒直径的变异系数（CV）可小于15% § TEM观察，测量100个胶体金颗粒，计算胶体金 颗粒的平均直径及标准差
（二）胶体金的制备
ª 胶体金的保存 § 胶体金具有很高的动力学稳定性，在稳定因素
不受破坏时自身凝聚极慢，可放置数年不发生 凝聚 § 影响稳定的因素主要有电解质、溶胶浓度、温 度等 § 如需长期保存，可加入 0.02% NaN3，放入4℃ 避光保存
• 可单份检测：对标本既能成批检测，又可 单份检测，可立刻拿到结果，不必等待
• 稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存
• 检测标本种类多：既可用于查血，又可用 于检尿或唾液，因而适合各种检查
类别
应用领域
检测的物质
人类 医学
各级医院,血 站,CDC,防疫站,诊 断中心；家庭自 检；商检系统；边 检口岸；公安系统
² 是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的 包被过程
² 吸附机理可能是胶 体金颗粒表面负电 荷，与蛋白质的正 电荷基团因静电吸 附而形成牢固结合
² 胶体金颗粒与蛋白质的结合不被 坏蛋白质的生物活性，形成胶体 金标记蛋白
ª 2.胶体金（免三疫）层胶析体试金纸免条疫制作测定技术
§ （2）金标抗体的制备
• 用于测抗原
胶体金免疫渗滤试验
§ （1）斑点金免疫渗滤 • 双抗体夹心法原理
A
B
胶体金免疫渗滤试验
§ （1）斑点金免疫渗滤
©②间接法
• 固定于膜上的特异性抗原＋标本中的相应抗体 ＋金标记的抗抗体或金标记的葡萄球菌A蛋白 质（SPA）显色。
• 用于检测抗体 • 图略
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
AuC12- 的zeta 电位可以使胶 体金颗粒之间 相互排斥，以 维持胶体金的 稳定状态
AuC12-
11个金原子
H+
构成的核心
胶体金颗粒结构及带电情况
（一）胶体金的特性
§ 胶体特性 均一的胶体溶液 胶体金呈球形(小颗粒)或椭圆形(大颗粒)
§ 呈色性 颗粒大小不同、颜色不同
§ 特定的吸收光谱 § 胶体金颗粒显负电
• ③最佳标记量的确定
²将待标记的蛋白用5mM NaCl，pH7.0溶液作系 列稀释后，分别取0.1mL（含蛋白质5～40ug） 加到1mL胶体金溶液的EP管中，另设一管不加 蛋白质的对照管；5min后加入0.1mL 10%NaCl 溶液
² 目测：混匀后静置2小时观察 ² OD值作曲线法确定：混匀后10min测
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
LA T E R A L FLO W T E S T S T R IP O F V E D A LA B
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（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
©①双抗体夹心法
• 固定于膜上的抗 体1＋标本中待测 抗原＋金标记的 抗体2显色
• 用于测抗原
ª 2.胶体金（免三疫）层胶析体试金纸免条疫制作测定技术
§ （2）金标抗体的制备
• 目测法
以稳定1ml胶体金溶液红色不变的最低蛋白质用 量，即为该标记蛋白质的最低用量，在实际工作 中，可适当增加10％，在此情况下蛋白质分子在金 颗粒表面的吸附量最大
pH7.0）透析，去除盐类成份（盐类能影响金 溶胶对蛋白质的吸附，并可使溶胶聚沉） ² 应避免磷酸根离子和硼酸根离子，因其可吸附 于颗粒表面而减弱胶体金对蛋白质的吸附 ² 高速离心或微孔滤膜除去聚合物
ª 2.胶体金（免三疫）层胶析体试金纸免条疫制作测定技术
§ （2）金标抗体的制备
• ②抗体的标记原理
还原胶10体0 m金L 标0.0记1%物H的AuC制l4备所需量