生化试剂参数ppt课件

✓第一标准吸光度界限(S1 Abs.limt) 通常指零浓度标准品的吸光度界限，在终点法和速率法中计算方式不 同
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生化试剂其他参数及意义
✓反应过程吸光度界限(Absorbance Limit) 在动力学反应中,由于高浓度（活性）样本使底物耗尽，所测吸光度已 不可靠,使高浓度的样本测定值低很多,甚至为负值。为能正确反映测定 结果，需设置底物耗尽限(某一特定吸光度)，是在反应时间内反应没有 发生底物耗尽时所能达到的最小(反应曲线向下)或最大(反应曲线向上) 的吸光度值 ，该吸光度即为吸光度界限。可用于确保高浓度（活性） 样本结果的准确性。
CX9
24
33 900 3-25
LX20
41
70 800 3-25
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各机型参数特点
不同机型分析方法
表示方法
常用选择项
COBAS
Asaay
Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point end
HITACHI Assay code Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point end
• 不同机型读点间隔时间及最大读点数
P800 C501
读点间隔(秒) 18 8
HITACHI 18 OLYMPUS 18
ABBOTT 17
BECKMAN 非连续性
最大读点数 34 70
35/68 27/14 33
975秒
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各机型生化分析仪概括介绍
各机型试剂死腔量
机型
R1死体积（ml） R2死体积（ml）
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生化试剂主要参数及意义
✓项目名称(test name)： 常以项目的英文缩写来设置。 ✓方法类型(assay/Method )（适用于仪器的方法）： 方法类型主要分为：终点法和动力学法 终点法 一点终点法：样本与试剂混匀一定时间后读取反应终点吸光度，如血糖氧化 酶法、总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法等。 两点终点法：（又称固定时间法）样本与试剂混匀一定时间后先读取吸光度 A1，延迟一定时间后读取吸光度A2，计算吸光度差值与标准比较求得结果。 如肌酐苦味酸法等。可消除内源性物质干扰。
✓样本体积（sample volum） 一般为2-35μl ，以0.1μl步进。
✓试剂量（regengt volum） 一般为20-300μl ，以1μl步进。
不同机型生化分析仪的样本量及试剂量限制不同，样本与试剂可根据比例进行增
大或减少。
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生化试剂主要参数及意义
✓测定波长（wavelength）： 不同生化分析仪具备不同的波长。可选择单波长或双波长。
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生化试剂其他参数及意义
✓ 试剂吸光度范围(Linearity） 线性度不能超过设定界限，超限时说明吸光度的变化量之间已经不成 线性或说明底物不足，检测结果会变低。 ✓试剂线性范围（Dynamic Range/Technical Limit） 与试剂/样本比值有关，超出范围的样本应增加样本量重测或样本稀释 后重测。
检测时吸光度值为主波长的吸光度减去副波长的吸光度。
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生化试剂主要参数及意义
✓分析时间： 孵育时间（incubate time） 一点终点法的孵育时间是指样本与试剂开始到反应终点的时间；两点 终点法是指第一个吸光度反应点开始到第二个吸光度点为止时间。一 般为5min。 延迟时间（delay time） 加入第二反应试剂后到第一个吸光度监测点开始的时间。即样本与反 应试剂（第二试剂）混匀开始至第一个吸光度选择点之间的时间。单 试剂一般设置为30s，双底物反应或酶类反应一般设置为1-3min。 连续监测时间（ continuous monitoring time） 在延迟时间后的零级反应开始，监测至少4个点（3个吸光度变化值）， 一般为1-2min。
OLYMPUS Reaction Slope
BECKMAN Reaction Direction
ABBOTT Reaction Mode
可选择项
INC/DEC INC/DEC
+/Positive/Negative
Up/Down
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各机型参数特点
不同机型测定波长
COBAS HITACHI OLYMPUS BECKMAN ABBOTT
多用于连续监测法测定酶活时，无需定标曲线，根据摩尔消光系数计 算得到结果。
106× V
F= —————— ɛ×v×L
V：反应体系总体积（ml）；v：样本体积（ml） ɛ：摩尔消光系数（cm2/mol） L：比色杯光径（cm）；106：将mol换算为μmol
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生化试剂其他参数及意义
✓试剂吸光度上限、下限/试剂吸光度界限(OD Limt) ✓底物耗尽限额(substrate exhaust limit) ✓试剂吸光度线性范围(Linearity） ✓ 试剂线性范围（Technical Limit） ✓前区检查限(Prozone Check Limt) ✓方程式（Fomular） ✓小数位（Decimal Places） ✓双份界限（Duplicate Limit） ✓敏感性界限(Sensitivity Limit) ✓第一标准吸光度界限(S1 Abs.limt) ✓反应过程吸光度界限(Absorbance Limit)
主波长（main wavelength/primary wavelength ） 根据待测物质在特定波长下具有最大吸收峰来选择主波长。 副波长（次波长sub wavelength/second wavelength ） 可不选择设定。副波长可消除样本溶血，血清浑浊的干扰影响，副波 长与主波长越接近越好。
2-50
32/32
600
33/33
86
800 1.5-35
R1 (ul)
R2 (ul)
20-270
20-270 50-350 20-270 20-350
20-270
反应液 (ul)
150-380
150-355 250-500 150-320 180-500
250120-300
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各机型生化分析仪概括介绍
✓小数位（Decimal Places） 主要根据项目参考范围的小数位进行设定，一般0-2位。
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生化试剂其他参数及意义
✓双份界限（Duplicate Limit） 也称离散性，是同一个标准液两次测定吸光度的差值，表示试剂和仪 器的重复性,此值越小表示试剂和仪器的精密度越高 ✓敏感性界限(Sensitivity Limit) 可以检测的最低吸光度值，也就是检测最低浓度的可靠性
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生化试剂主要参数及意义
✓校正方法（Calibration Type）：
可采用标准液（校准液）定标方式或理论K值方式获取标准曲线。
线性定标（ Linear/AB）：
两点定标，标准曲线呈直线。
非线性定标（Spline/4AB/polygonal）：
多点定标，标准曲线近似于直线。
理论K值 （Factor/MB）：
Βιβλιοθήκη Baidu
340-800nm。参数设定时可选择与项目要求相近的波长。
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各机型参数特点
不同机型反应时间：仪器的一个分析周期中，试剂 和样本混合最后一点测定读数时间
常见仪器可以选择的时间 COBAS P800 :1~10、15、22分钟
C501: 3~10分钟 HITACHI ：3、5、8、10、15、22分钟 OLYMPUS固定时间： 8.3分钟 ABBOTT固定时间：9.6 分钟 BECKMAN可达时间：975秒
机型
日 立 7600P 系 列 7600D
7170S 7060 7080 7020 7150 7180
试剂位 R1/R2
项目 速度 （双） 无 ISE
样本 (ul)
44
800
2-35
16
2400 2-20
45/45
86
800
2-35
32/32
32
360
3-50
33/33
49
360
2-25
40
36
200
OLYMPUS Method
RATE/FIXED/END
BECKMAN Reaction type
RATE1/2/END1/2
ABBOTT Reaction defintion Rate /Flex Rate/End
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各机型参数特点
不同机型反应方向
表示方法
COBAS
INC/DEC
HITACHI
INC/DEC
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生化试剂主要参数及意义
一级动力学法：（两点速率法）
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生化试剂主要参数及意义
零级动力学法：（连续监测法，用于酶活性监测）
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生化试剂主要参数及意义
✓反应方向(response direction) 正向反应（UP/INC/+）：吸光度增加。 负向反应（DOWN/DEC/-）：吸光度下降。
✓测定温度 30℃、37℃、25℃
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生化试剂其他参数及意义
✓前区检查限(Prozone Check Limt) 主要用于免疫比浊法项目，可根据项目要求选YES或NO，比较终点法 后两个读数点的差别，如果后一点比前一点的吸光度低，表示已经有 抗原过剩，样本应稀释后重测
✓方程式（Fomular） Y=aX+b a为截距，b为斜率。用于校正检测结果，一般a为1.000，b为0.000，
反应液 (ul)
AU600 48/48 48 800 2-50 AU640 48/48 48 800 2-50
25-300 25-300
150-550
AU2700 48/48 48 1600 1.6-
15-250
120-430
AU5600
2640
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各机型生化分析仪概括介绍
21
各机型生化分析仪概括介绍
Beckman CX5
Beckman LX20
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各机型生化分析仪概括介绍
Beckmam
机型
试剂位 R1/R2
项目
速度 无 ISE
样本 (ul)
R1 (ul)
R2 (ul)
反应液 (ul)
CX4
24
24 225 3-25
系
列 CX5
24
29 600 3-69
CX7
24
33 900 3-25 200-327/6-75 225-325
主波长
Wave(Main/ Wave(Main/ Wavelength pri Primary Wavelength Wavelength Primary
次波长
Sub) Sub) Wavelength sec Secondary Wavelength Wavelenght Secondary
不同机型所具波长数目不同，一般波长分布为 从紫外线到红外线
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生化试剂主要参数及意义
动力学法
一级动力学法：（两点速率法）样本与试剂反应不断消耗反应物，反应速度 不断减小，吸光度变化不断减小，在特定时间段内进行监测，该时间段内吸 光度升高或降低与样本浓度成正比，如同型半胱氨酸、总胆汁酸等。
零级动力学法：（连续监测法，用于酶活性监测）样本与试剂反应，反应物 可匀速生成某个产物，如NADH，在特定波长下吸光度均匀的增大或减小，增 大或减小的速度与样本浓度呈正比。如碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶等。
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各机型参数特点
• 不同机型试剂加入相应时间(分钟)
HITACHI P800 C501 OLYMPUS ABBOTT
R1 R2(1.5) R3(5) R4(9) R1 R2(1.5) R3(5) R4(9) R1 R2(1.5) R3(5) R1 R2(3.3) R1 R2(5.1)
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各机型参数特点
生化试剂各机型参数确定
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目录
➢生化试剂主要参数及意义 ➢生化试剂其他参数及意义 ➢各机型生化分析仪概括介绍 ➢各机型参数特点
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生化试剂主要参数及意义
生
化
试
剂
说
明
书
中
各
参
数
（
例
：
脂
肪
酶
）
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生化试剂主要参数及意义
✓项目名称 ✓方法类型 ✓反应方向 ✓测定波长 ✓测定温度 ✓样本体积 ✓试剂量 ✓分析时间 ✓校正方法
淡蓝色字体标注参数设定时一般为机器默认。
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各机型生化分析仪概括介绍
AU400
AU2700
AU640
AU480
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各机型生化分析仪概括介绍
AU
机型
试剂位 R1/R2
项目 速度 (双) 无 ISE
样本 (ul)
R1 (ul)
R2 (ul)
系
列
AU400 48/48 38 400 2-50
25-300
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生化试剂其他参数及意义
✓试剂吸光度上限、下限/试剂吸光度界限(OD Limt) 常用规定波长及光径下的吸光度值表示。终点法常在0点读数，连续监 测法常以反应监测起始点来判读该吸光度值。 可用于判断试剂质量。检测试剂空白时，若超过此参数的限值，则提 示试剂可能失效。
✓底物耗尽限额(substrate exhaust limit) 连续监测法或两点终点法时设置。 根据吸光度上升或下降设定MAX-OD/MIN-OD，吸光度超过设定界限 时，代表样品酶活非常高，底物消耗太快，所测得结果不能代表真实 酶活力。