细胞中常见的污染

合集下载

细胞培养中的几种污染

胞培养中的污染分为两类，化学污染和生物污染。

化学污染化学污染是一些对细胞有毒性的或对细胞产生刺激的化学物质。

这些污染一般来自于没有洗净的器皿、不纯的化学试剂和质量较差的蒸馏水等。

化学污染中比较引人注意的是细菌内毒素。

它是革兰氏阴性细菌细胞死亡后解体释放出的疏水性的细胞壁组成物质，对塑料等疏水性强的物质有很强的吸附能力。

细菌内毒素可刺激部分细胞产生一些激素或细胞因子，对细胞生长和实验结果产生影响。

细菌内毒素是临床上的最主要的热原（即注射到动物体内会导致动物发热），所以通过细胞培养生产的疫苗、细胞因子等用在临床上的药品的生产过程中更是要避免细菌内毒素的污染。

生物污染生物污染包括比较容易发现的细菌、霉菌和酵母的污染，和较难发现的病毒、支原体和其他细胞的污染。

细菌、霉菌和酵母到处存在，它们能在合适的环境中非常快速的生长。

这些污染比较容易观察到，它们往往会使其污染的培养液产生可见的变化，或者通过显微镜观察就可以看见。

由于病毒有种属特异性，所以病毒污染的概率比较小。

但是病毒污染难于发现，因为病毒颗粒特别微小，一般的实验室都没能力检查细胞培养中污染的病毒。

由于病毒一般潜伏在细胞内，对整个细胞培养不是致死的，所以它可能会使研究人员长期得到受病毒影响的细胞的实验结果。

1956 年 Robinson 及其同事首次发现细胞培养中的支原体污染。

90年代初美国的一个调查发现，在该国的细胞培养中，至少有15%被支原体污染。

由于支原体没有细胞壁，在细胞培养液中几乎是透明的，同时对常用于细胞培养中的抗生素不敏感，不引起 pH 变化，不使培养液浑浊，所以支原体污染不容易被发现，但是其存在会影响实验的结果。

细胞的交叉污染在细胞培养中发生的严重程度大大超过人们的想象：1981 年对ATCC细胞株的调查显示：超过 60 标记为其他细胞株的细胞居然是 HeLa 细胞。

细胞常见污染情况分析报告

细胞培养常见污染的判别及应对措施2011-01-02 10:19:04| 分类：实验| 标签：污染无菌细胞培养基灭菌|字号大中小订阅一、避免细胞培养污染的措施：污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好！注意以下几点，大部份的污染是可以避免的：1. 每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面和不消毒的器械（如移液枪等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处；使用无菌台后，再用酒精擦台面，紫外照20分！2. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。

3. 凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。

4. 提取组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）。

5. 注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。

6. 操作时一定按照实验室的要求，切忌粗心大意。

7. 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。

二、常见的细胞培养污染：下面是几种细胞培养过程中常见的污染：1. 支原体污染：传说中的黑焦虫，长得暴快。

24小时就满视野都是了。

污染源大多数情况下是培养用血清。

图1 支原体污染的光镜检测（圆圈所示，×10倍）图2 支原体污染的光镜检测（×20倍）图3 支原体污染的荧光检测图4 支原体污染的电镜检测（×30k，煎蛋状和其他形状）图5 支原体污染的电镜检测2. 念珠菌污染：似乎无处不在，而且顽固得很。

长得暴快（12h就能在细胞上面密布）。

培养液澄清。

低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。

图6 念珠菌污染的光镜检测（低倍镜）图7 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图8 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）图9 念珠菌污染的检测（革兰氏染色阳性）这么大面积的污染，你可以看看是不是操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。

细胞培养中常见的污染及处理@麦粒

常见细胞污染及其处理方法麦~粒（2012级生物化学与分子生物学专业）摘要：细胞培养是生命科学实验及生物医药产业化中的一项关键技术，细胞污染问题一直是细胞培养中的大敌。

本文综述了细胞培养中污染的类型、处理方法和预防措施等，以期为实验室细胞培养中遇到的细胞污染的解决提供参考。

关键词：细胞培养，细胞污染，支原体污染细胞培养技术是现代生命科学研究中不可缺少的一项基本实验技术，同时也是细胞工程中的核心技术之一。

细胞培养的质量好坏直接关系到实验结果的可靠性与否以及产品质量的合格与否。

在细胞培养中，最基本的原则就是无菌操作，污染是细胞培养最致命的大敌，预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。

特别是对于一些珍贵的细胞株，一旦污染对实验可能就是毁灭性的。

1 污染的类型细胞污染的类型可分为物理、化学、生物三类。

其中化学、生物因素最为常见，物理因素最易被忽视。

1.1物理污染物理性污染通过影响细胞培养体系中的组分，从而影响了细胞的代谢。

最为常见的是温度和辐射（紫外线照射）。

过冷或过热的温度对细胞可引起细胞生理状态的改变，如从冰箱中取出的培养液直接加至37℃培养的细胞中可能会造成细胞应激，影响某些实验现象的观察。

在生物安全柜紫外灭菌时，应当遮蔽对紫外线敏感的试剂，同时普通操作中也要注意对见光易分解的物质进行避光处理。

对于需要使用同位素标记的某些实验，应当注意细胞、试剂周围不能放同位素。

除此之外，有时操作过程中偶尔有异物落入，极易造成污染。

一些小的颗粒状异物作为是微生物污染的载体进入培养液中造成细胞污染。

另外，实验过程中酒精棉球的棉絮、移液器枪头上的某些塑料碎屑等都有可能增加染菌的概率。

1.2化学污染细胞培养中的化学污染大多是由于实验准备或实验过程中造作不当造成的。

在实验准备阶段，细胞培养室中的器皿应做到专用，避免与常用器皿混用。

此外，细胞用器皿洗刷过程中要注意洗刷彻底，不可有洗涤剂等残留。

高压灭菌时应灭菌彻底，并在灭菌后的生物安全柜中打开使用。

细胞培养中常见的污染的处理

细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。

仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。

或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。

CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。

并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。

待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。

孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。

其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。

预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。

，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。

而且它不能用过滤的办法除去。

支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。

用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。

Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。

如何预防细胞培养污染问题

如何预防细胞培养污染问题细胞培养是生物学和医学研究中常用的一种技术方法，但细胞培养过程中常常会面临细胞污染问题。

细胞培养污染会严重影响实验结果的准确性，因此需要采取一系列措施来预防细胞培养污染。

本文将介绍几种常见的细胞培养污染问题以及预防措施。

1. 细菌污染细菌污染是细胞培养中最常见的问题之一。

来自操作人员、试剂、培养器具和工作环境等多方面的细菌污染都可能导致细胞培养中的细菌污染。

预防措施：•穿戴合适的实验服和手套，并进行消毒处理，减少操作人员带入的细菌污染。

•使用无菌、高质量的试剂，并在实验中进行常规无菌操作，保持培养器具的无菌状态。

•经常对实验室进行清洁和消毒，保持工作环境的无菌。

2. 真菌污染真菌污染是细胞培养中另一个常见的问题。

真菌往往来自环境中的空气、试剂、培养器具或操作人员。

真菌污染会导致细胞生长异常，细胞死亡或实验结果异常。

预防措施：•定期消毒工作环境，特别是操作台和培养箱，避免真菌的滋生。

•使用高质量的培养基和抗生素，抑制真菌的生长。

•采取无菌技术操作，减少操作人员带入的真菌污染。

•定期更换培养器具，特别是培养瓶和培养皿，避免真菌滋生。

3. Mycoplasma 污染Mycoplasma 污染是细胞培养中常见但容易被忽视的问题。

Mycoplasma 是一类细小的细菌样微生物，常常会导致细胞株的污染。

Mycoplasma 污染会影响细胞生长、代谢以及实验结果的可靠性。

预防措施：•定期检测细胞株的 Mycoplasma 污染情况，可以使用 PCR 或流式细胞术等方法进行检测。

•新购买的细胞株进行隔离培养，并进行 Mycoplasma 检测，确保细胞株的无菌性。

•严格控制培养器具、培养基和操作人员的无菌操作，减少Mycoplasma 污染的可能性。

•定期更换培养基并添加抗生素，可以抑制 Mycoplasma 的生长。

4. 交叉污染交叉污染是指在细胞培养过程中，不同细胞株之间发生的细胞混合现象。

细胞培养技术中常见污染问题的解决方法

细胞培养技术中常见污染问题的解决方法细胞培养技术在生物医学研究领域扮演着重要的角色。

然而，细胞培养过程中常常会出现一些污染问题，严重影响实验结果的可靠性和重复性。

本文将探讨细胞培养技术中常见污染问题的解决方法。

一、细菌污染在细胞培养过程中，细胞培养器皿、培养基和实验室环境中都可能存在细菌污染的问题。

为了解决这个问题，可以采取一些预防措施。

首先，必须定期清洗和消毒培养器皿，以确保其表面的无菌。

其次，使用高品质和无菌的培养基是防止细菌污染的关键。

培养基应在严格无菌条件下配制，并在每次使用前进行相关的质检。

此外，实验室环境的洁净度也需要保持，经常进行清洁和消毒，减少细菌的滋生和传播。

二、真菌污染真菌污染是细胞培养中常见的问题之一，尤其在湿度高的环境下更容易发生。

为了避免真菌污染，可以在实验室中合理控制湿度，并保持培养器皿和培养基的干燥。

此外，使用抗真菌剂可以有效地减少真菌感染的风险。

对于一些特定的细胞系，可以对细胞培养器皿进行预处理，如用乙醇或己硝酸等消毒剂进行表面处理，以提高培养器皿的抗真菌能力。

三、交叉污染细胞系的交叉污染是实验室中常见的问题。

它可能是由于不慎携带其他细胞系的污染物，或是在培养中不同细胞系之间的相互感染所致。

为了防止交叉污染，可以采取一些措施。

首先，实验人员在操作细胞系之前必须养成良好的个人卫生习惯，包括洗手、戴手套等。

其次，不同细胞系之间要严格分开培养，避免接触。

此外，可以对新获得的细胞系进行鉴定，使用PCR等方法进行验证，确保其纯度。

四、内源性污染内源性污染是指细胞系自身产生的污染物。

它可能是由细胞自身分泌的代谢产物、去胎氧核糖核酸或细胞死亡引起的。

为了解决这个问题，可以采取以下措施。

首先，要定期更换培养基和培养器皿，及时清除废液和死细胞。

其次，对细胞进行经常性的鉴定，确保其活性和稳定性。

同时，培养温度、培养时间等因素也需要加以调整，以减少内源性污染的发生。

综上所述，细胞培养技术中常见的污染问题是可以通过一系列的控制措施来解决的。

细胞培养中常见污染

最近看到不少问有关细胞培养污染的事，正好我看到了一个有关这方面的总结，很全很好很强大，跟大家分享下细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。

或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。

CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。

并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。

待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。

孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。

其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。

，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。

而且它不能用过滤的办法除去。

支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。

用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。

听说你的细胞被污染了？

听说你的细胞被污染了？导语学会正确地进⾏细胞培养是细胞实验的基础，然⽽⼩⼼翼翼的你，怎奈何体外细胞的脆弱，百密终有⼀疏。

你偶然的⼀个喷嚏，不经意得捋捋你的头发丝，对于这些丢失体外抵抗能⼒的细胞都可能是毁灭性的灾害。

但是，并⾮所有的细胞污染都是致命的，若是及时发现，还是可以得到挽救的。

今天咱们的主题就是：教⼤家辨别各种细胞污染及如何应对。

如下图：实验室常见的细胞污染，你都知道属于哪种污染吗？细胞培养中的常见污染主要包括：细菌、霉菌、⽀原体、⿊胶⾍、病毒和交叉污染等，每⼀种污染都有各⾃的特点。

如细菌和霉菌增殖迅速，短时间就对细胞造成明显伤害；⽽⽀原体和病毒对细胞的影响则是⼀种缓慢长期的过程。

下⾯就具体看看每⼀种污染。

1. 细菌污染（较容易被发现）引起原因：操作不规范或⽆菌措施不到位等；细菌污染种类：⽩⾊葡萄球菌，⼤肠杆菌，假单孢菌、枯草杆菌等；细胞污染后的变化：①污染后由于有⼤量酸性物质产⽣，因此培养基会短时间内由红⾊变为黄⾊；②由于细菌⼤量增殖，培养基变浑浊，稍微振荡后可见培养基表⾯有漂浮物；③普通倒置显微镜⾼倍镜观察，胞浆内可见⼤量颗粒（如下图红⾊箭头）；④细胞⽣长缓慢，逐渐变圆脱落。

如下图所⽰：左：悬浮细胞污染后，可见悬浮细胞个体远⼤于杆状细菌，⽽细菌呈⿊⾊颗粒状并会有较快的运动速度；右：贴壁细胞，可看到球状细菌分布于细胞周围并做剧烈运动。

细菌污染的细胞（左悬浮细胞，右贴壁细胞）图⽚来源：UNC School of Medicine处理措施：在培养液中添加双抗（P/S）处理；可⽤抗⽣素的常⽤量的5~10倍作冲击疗法，⽤药24~48h后再换常规培养液；另外添加西司他丁钠和亚胺培南（泰能）处理细胞，适⽤于培养⽤具被打翻、使⽤了污染的培养液或要培养污染的组织或者冻存细胞的污染情况[1]。

裸⿏体内接种法是⽐较有效和彻底的除菌⽅法。

主要包括腹⽔接种和⽪下荷瘤分离细胞。

既能彻底清除污染细菌，⼜能保持肿瘤细胞的来源特征和恶性特性。

细胞培养中常见的污染情况、可能原因、解决方法

细胞培养中常见的污染情况、可能原因、解决方法细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。

或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。

CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。

并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。

待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。

孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。

其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。

而且它不能用过滤的办法除去。

支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。

用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。

细胞污染的种类有哪些

细胞污染的种类有哪些1. 异物污染细胞培养的一个常见问题是异物污染。

异物污染是指在细胞培养过程中，由于一些外部因素导致培养器具或培养介质中出现的异物。

这些异物可能包括灰尘、纤维、酵母、细菌、真菌、病毒等。

这些异物不仅会干扰细胞的生长和功能，还可能引起未知的变化和不确定的结果。

因此，在进行细胞培养实验时，要特别注意避免异物污染。

2. 细胞污染细胞污染是指在细胞培养的过程中，细胞本身受到一些外部因素的污染，从而导致细胞的变异、功能受损甚至细胞死亡。

细胞污染可以由以下几种常见的污染源引起：a. 细菌污染细菌污染是细胞培养中最常见的污染之一。

常见的细菌污染源包括实验环境中的空气、实验器具、培养介质等。

细菌污染会导致细胞生长受阻、感染和细胞凋亡等，严重时甚至会使细胞无法继续培养和使用。

b. 真菌污染真菌污染是指一些真菌，如酵母菌等进入细胞培养环境中并污染细胞。

真菌污染会引起细胞外观的改变、生长受阻、功能受损等问题。

在细胞培养实验中，应特别注意真菌污染的防控。

c. 病毒污染病毒污染在细胞培养中较为罕见，但一旦发生，对细胞的影响极大。

病毒污染会导致细胞的变异、功能失调甚至细胞死亡。

因此，进行细胞培养实验时，必须定期进行病毒检测，并采取相应的防控措施以避免病毒污染的发生。

d. 交叉污染交叉污染是指在细胞培养过程中，细胞株之间或批次之间发生的互相污染。

细胞培养实验室中经常同时进行多个细胞系的培养，因此，交叉污染的风险也相应增加。

交叉污染会导致细胞株的混杂和受污染细胞株的功能异常。

为了避免交叉污染，实验室应有严格的实验室操作流程，并定期检测细胞株的纯度。

3. 其他污染除了以上几种常见的细胞污染，还有一些其他类型的污染也可能影响到细胞培养实验的结果，例如：•化学物质污染：来自培养介质、溶液、培养基等中的化学物质可能对细胞产生毒性影响，导致细胞的变异或死亡。

•辐射污染：细胞培养过程中可能存在来自辐射源的污染，这可能会对细胞的遗传物质和生理功能产生不可逆的损害。

细胞培养常见细菌污染原因

细胞培养常见细菌污染原因细胞培养是生物学研究中常用的实验技术，用于研究细胞的生理、生化和分子生物学特性。

然而，细胞培养过程中常常会受到细菌污染的影响。

细菌污染会对细胞培养的可靠性和准确性产生不良影响，因此控制细菌污染是细胞培养实验中至关重要的一步。

细胞培养常见的细菌污染原因主要有以下几个方面：1. 操作不当：细胞培养的整个过程都需要严格的无菌操作，而操作不当是导致细菌污染的主要原因之一。

无菌操作包括更换培养基、移液操作、接种细胞等，如果在操作过程中没有严格遵守消毒和无菌操作规范，就会导致细菌的进入和繁殖。

2. 试剂和培养物污染：试剂和培养物是细胞培养中常用的重要物质，如果试剂和培养物本身存在细菌污染，那么在培养过程中就会引入细菌。

试剂如培养基、酶、胎牛血清等的批次变化或不良质量，都可能导致细菌污染。

此外，非无菌的操作也会导致试剂和培养物的污染。

3. 实验室环境污染：实验室环境中存在微生物的存在，如桌面、空气、实验器皿等都可能存在细菌。

如果实验室的环境清洁度不够高，容易造成细菌污染。

此外，实验器皿如培养皿、离心管等的洗涤和保存也需要保证无菌操作。

4. 人员因素：人员的操作能力和操作习惯也会影响到细菌污染的发生。

操作人员应该保持良好的个人卫生习惯，定期对手套、实验服等进行更换和清洗。

如果操作人员不注意操作细节，如不合理的移液操作、使用不干净的仪器等，都可能导致细菌的污染。

5. 培养器具污染：培养器具如试管、离心管、细胞培养板等在使用之前需要经过高温和化学消毒处理，以杀灭其中潜在存在的细菌。

然而，如果器具处理不彻底或者保存环境不好，就容易导致细菌的残留或再次感染。

细胞培养中细菌污染的危害是非常严重的。

首先，细菌污染会干扰细胞培养体系的稳定，导致无法准确观察和研究细胞的生理和生化特性。

其次，细菌代谢产物和细胞培养物中含有的抗生素等成分会干扰细胞培养的正常生长和发育，降低实验结果的可靠性和准确性。

此外，由于细菌的存在，还容易导致细胞死亡和污染的蔓延，对细胞培养的连续性和稳定性造成不可逆的伤害。

细胞培养技术中的常见问题与解决方法参考

细胞培养技术中的常见问题与解决方法参考细胞培养是生物学和医学研究中非常重要的一项技术。

然而，在进行细胞培养过程中，我们常常会遇到一些问题。

本文将介绍几个细胞培养中常见的问题，并提供相应的解决方法参考。

1. 细胞污染问题细胞污染是细胞培养中最常见的问题之一。

它可能来源于细胞培养器皿、培养基、试剂、液体气氛等多个方面。

常见的细胞污染类型包括细菌、真菌、酵母菌、支原体、霉菌等。

遇到细胞污染问题时，可以采取以下解决方法参考：- 严格的无菌操作：所有实验应该在无菌条件下进行，使用经过验收的培养器皿和无菌试剂。

- 经常检查和更换培养器皿、培养基：经常检查培养器皿和培养基是否有异常情况，如有污染应及时更换。

- 预防细胞污染：定期进行表面消毒、培养器具灭菌和试剂消毒以预防其他污染来源。

2. 细胞生长问题细胞生长问题是细胞培养过程中常见的一个问题。

主要表现为细胞无法黏附、生长缓慢或停止生长。

解决细胞生长问题的方法参考如下：- 增加培养物中的营养物：根据细胞类型和需求，调整培养基中的蛋白质、维生素和氨基酸等营养物的浓度。

- 提供适宜的培养条件：调整温度、湿度、CO2浓度等环境参数，以提供适宜的生长条件。

- 检查细胞的健康状态：定期检查细胞的形态和健康状况，如发现异常应及时采取措施。

3. 细胞凋亡问题细胞凋亡在细胞培养中可能出现，特别是在长期培养过程中。

细胞凋亡表现为细胞收缩、核染色质浓缩、DNA断裂等特点。

以下是解决细胞凋亡问题的方法参考：- 优化培养条件：提供适宜的培养基、温度、CO2浓度、液面高度等环境因素。

- 增加细胞存活因子：添加适量的生长因子、细胞因子或激素等，以提高细胞存活率。

- 检查细胞状态和健康：及时观察细胞的形态和生长状态，发现异常情况及时处理。

4. 细胞分化问题在一些特定细胞系中，细胞分化可能成为一个问题。

细胞分化表现为细胞形态、生长速率、分泌物或细胞功能的改变。

以下是解决细胞分化问题的方法参考：- 控制培养时间：在合适的时间段内收获细胞，以避免细胞进一步分化。

细胞培养技术中常见的细胞污染问题及处理方法

细胞培养技术中常见的细胞污染问题及处理方法细胞培养是生物学研究中经常使用的一种重要技术手段。

然而，随着研究的深入，细胞培养中常常会遇到细胞污染的问题，这给实验结果的可靠性和准确性带来了很大的影响。

细胞污染主要包括细菌、真菌、酵母、病毒以及其他的微生物污染。

在细胞培养中，如何及时发现和处理细胞污染问题，是每个实验室都需要面对的重要课题。

细菌污染是细胞培养中最常见的问题之一。

造成细菌污染的原因有很多，比如培养器具不洁净、操作不规范等。

当出现细菌污染时，可以通过观察培养物的外观变化来初步判断是否受到污染，比如培养物颜色的改变、气泡的形成等。

如果存在细菌污染的症状，可以通过将培养物进行细菌培养或细菌PCR检测以确认。

一旦确认细菌污染，需要立即更换培养器具，重做培养基，并对培养箱等设备进行彻底清洁和消毒。

真菌和酵母的污染在细胞培养中也是相对较常见的问题。

真菌和酵母污染一般表现为培养物的颜色变化、膜片上出现菌丝等。

当怀疑存在真菌和酵母的污染时，可以将培养物进行不同培养基上的转接和形态学观察，也可以通过真菌和酵母的特异性培养基进行检测确认。

处理真菌和酵母污染的方法包括体外灭菌、常规抗生素处理、加入抗真菌和酵母的药物等。

另外，病毒是一种较为严重的细胞污染问题。

病毒感染可以导致细胞凋亡、细胞功能紊乱甚至细胞死亡。

常见的病毒污染有常见冷感冒病毒、乙肝病毒等。

病毒污染的判断往往需要通过病毒培养、PCR或ELISA等技术进行鉴定。

处理病毒污染可以采用病毒灭活剂或直接更换细胞系等方法。

除了微生物污染外，还存在一些其他的细胞污染问题。

比如，细胞交叉污染是指来自其他细胞系的细胞误将自己的培养物中。

为了避免细胞交叉污染，可以采用细胞系的DNA指纹鉴定技术，或者使用经过认证的培养物，同时加强无菌操作的培养。

总结起来，细胞培养中的细胞污染问题多种多样，但我们可以通过细心观察培养物的变化、培养基的转接和不同培养基的形态学观察、特异性培养基的检测以及分子生物学方法的应用等，及时发现和处理细胞污染问题，确保实验的可靠性和准确性。

细胞污染

细胞污染常见有三种：即真菌污染、细菌污染和支原体污染。

细菌污染可见培养液明显混浊，细菌产生的毒素等使细胞崩解、死亡，孔或皿底部常有沉淀物出现，用光学显微镜或倒置相差显微镜观察可见视野内有均匀的点状颗粒，瑞氏或革兰氏染色镜下检查即可确定。

真菌污染这在细胞培养中是比较常见的，尤其是在炎热、潮湿的季节。

此种污染容易发现，肉眼观察大多呈白色或浅黄色小点漂浮于培养液表面，镜下可见丝状、管状或树枝状菌丝，纵横交错于细胞之间。

支原体污染这是目前细胞培养中最常见、不易被察觉、干扰实验结果的一种污染。

支原体在镜下呈暗色微小颗粒，并有类似布朗运动的表现，多位于细胞表面和细胞之间。

但值得注意的是该污染要与血清灭活当中产生的黑色小颗粒或细胞破碎后溢出的内容物如线粒体等进行区别。

细菌过滤器细菌都有一定的大小，如果过滤器的滤膜，或者滤柱，（或者其他的），孔径小于细菌的直径，那么当液体或者气体通过的时候，细菌就被挡住，过不去，那么过去的液体或者气体，就是无菌的。

一般小于0.22微米的孔，应该就可以滤菌了。

然而病毒因为其结构微小，数量级为纳米，所以可以通过细菌过滤器除菌过滤器主要是采用大比表面积，过滤精度为0.22μm以上的微滤滤芯，主要用于防止空气中的杂质和有害细菌、微生物等进入罐体、生产线、无菌室等，引起水质、产品和无菌室环境的变化，满足食品、生化、饮料、啤酒、医药、电子等行业的工艺需要。

用于水处理的罐体的罐内环境保护防止罐体内水体来自空气的污染时，也叫呼吸器。

微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物，个体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。

微生物包括细菌、病毒、霉菌、酵母菌等。

（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。

）病毒是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”，但是它的生存必须依赖于活细胞。

根据存在的不同环境分为原核微生物、空间微生物、真菌微生物、酵母微生物、海洋微生物等。

细胞培养中“黑胶虫”污染的检测及防治

6、建立有效的监控机制：对细胞培养过程进行实时监控，特别是在培养液更换、细胞传代等关键环节上要格外留意。通过定期检查和记录细胞生长情况、生化指标等数据，及时发现并处理潜在的黑胶虫污染问题。
7、采用新技术手段：随着科技的发展，一些新的技术手段如基因测序、生物信息学分析等也可用于检测和防治黑胶虫污染。通过这些技术手段的应用，可以更早地发现污染源、追踪污染途径并制定有效的防控措施。
4、建立应急预案：实验室应建立针对黑胶虫污染的应急预案，以便在发生污染时能够迅速采取有效的措施进行处理，最大程度地减少损失。
5、加强学术交流与培训：通过参加学术会议、研讨会等活动，了解和学习最新的研究成果和方法，提高对黑胶虫污染的认识和应对能力。同时，对实验室工作人员进行定期的培训和教育，提高他们的专业素养和操作技能。
5、使用适当的消毒剂：在细胞培养过程中，可以使用适当的消毒剂对实验器材和环境进行消毒处理。常用的消毒剂有75%酒精、紫外线、甲醛等。在使用消毒剂时，要严格按照使用说明进行操作，避免对细胞造成不良影响。
参考内容三
引言
随着人类文明的不断发展，塑料制品的使用日益普遍，由此引发的白色污染问题也越来越严重。本次演示将探讨白色污染的污染现状及防治对策，旨在引起人们对白色污染问题的，共同呵护环境。
参考内容
一、常用的细胞培养方法
细胞培养是一种广泛应用于生物学、医学和生物技术领域的技术。细胞培养是指将活细胞种植在适宜的基质中，通过提供适宜的营养和环境条件，使细胞在体外繁殖和生长。常用的细胞培养方法包括悬浮培养和贴壁培养。
1、悬浮培养：悬浮培养是将细胞悬浮在培养液中，通过搅拌或振荡使细胞均匀分布，并保持悬浮状态。这种方法适用于大多数类型的细胞，包括一些难以贴壁的细胞。

细胞中常见的污染

一、常见的污染如下：1. 细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显;仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够,压力足够尤其是和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,一定要注意下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象可在培养液中加相应的抗生素处理;2. 霉菌：培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差,用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜;或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染;CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有细胞暂时转移,采用过氧乙酸擦洗孵箱包括隔板,箱壁;并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时,使其蒸汽弥漫;待过氧乙酸的气味消散后,再移入细胞;孵箱应定期清洁2月左右,尤其在多雨的季节;其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照;预防霉菌污染,可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染,很难挽救,制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞;,将环境彻底消毒,如果所有细胞都污染,可能是系统污染,检查一下培养基和器材,如果只是个别污染,可能是操作问题,就要注意操作;3. 支原体：黑色的,好象多为多形,培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一;而且它不能用过滤的办法除去;支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去; 用泰乐菌素,兽用支原体病的药,但可用于细胞培养,无任何不良反应;Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染;如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度;4. 黑蛟虫：可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的;常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象;对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理;建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率;5. 真菌：一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物;真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了;6. 原虫：培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮;他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养;这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环;污染的可能原因：可能原因很多;比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等; 关于培养基的无菌状况,取培养基至培养瓶中不加细胞,37度试培养一段时间后观察;如果没有细菌生长就是操作的问题;也可以在培养基中事先加入双抗硫酸链霉素和氨苄青霉素;但双抗有时会影响细胞的状态,所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗,以避免影响实验结果;1孵箱应定期用三氧机消毒或者紫外光照射,并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水2超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素3超净台的风机不能过大,风机到6-8格;否则也可能能致霉菌污染4无菌室经甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水喷洒中和,约几小时即可进入操作;二、关于黑胶虫的描述1. 分类上的描述对于黑胶虫的分类,学术界没有明确给予说法;关于黑胶虫的分类,目前大部分人认为黑胶虫污染是微生物感染;在一些文章论述上把黑胶虫归为生物污染类型,但是没把它归为确定的生物分类类型,只是把黑胶虫独立为一种未知生物;而根据中国病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫,似乎和草履虫和变形虫有类似之处,但是由于课题经费不够而不能继续下去,最终也没有有力证明黑胶虫是属于原虫;也有一些学者不认为所谓的黑胶虫污染是一种生物污染,而认为是细胞碎片类物质,是在细胞培养时,细胞衰亡破裂产生的；也有在文献中报道说是玻璃瓶中类似氧化硅的物质,那个文献很少人找得到；还有报道黒胶虫是一种纳米级的细菌;2. 形态上的描述形态上类似与杆状细菌,但长度比细菌长,直径约在0.5~1微米,不染色观察为黑色；胶虫成熟后呈线状,而且形态是椭圆形;3. 运动形式在400X倒置显微镜小,有典型的布朗运动不规则的原地小距离抖动,即很多细胞培养者看到的,像黑色的小虫游来游去;可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去;但是在物理学上来说,颗粒足够小,在液体中也是做布朗运动的,这不足以说明黑胶虫的布朗运动就证明它是生物;4. 生理上的描述1抗性抗细菌和抗霉菌的药物对黑胶虫均无效,可以保守的判定黑胶虫不属于细菌;2环境抗逆性将培养器材150度烘烤8小时,可以消除,这个黑胶虫高压灭菌泡酸都不死;可见黑胶虫可以耐高温高压,而且还有点嗜酸,如果证实它是生物的话,那它很有可能是极端微生物,一种古菌;3营养条件"黑胶虫"可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随细胞传代而传代;可见"黑胶虫"是一种异养生物;三、对黑胶虫的各种猜测及相应的处理1. 非生物类1细胞碎片类在细胞培养的时候, 由于细胞代谢、物质交换、周边环境变化,尤其是在从37度培养箱中拿出来观察的过程中,由于液体培养基的比热较大,液内温度高于外界温度,造成冷热交换、小范围内形成液体流动加剧,当然这些小岁末就会被搅动起来形成似乎"游动"的感觉；随着细胞培养的继续,部分细胞开始衰亡,细胞膜结构破裂,破裂之后的细胞内容物泄露到培养液中;尤其是溶酶体的破坏,连续性地造成其他细胞和细胞器的损伤,如果换液不很勤,又会出现进一步破坏和残渣的出现；再者,"黑焦虫"问题是很多细胞培养者已经发现的问题,但到目前为止尚未找到其监测和排除的试剂和手段,这首先是由于所谓"黑焦虫"病原体根本难以收集和捕捉, 这也从另一个侧面证明了"黑焦虫"问题的难以确定性；再说任何一种外来的微生物在培养基中都会有生命活动的反应和表现,而不是简单地运动那样的外观性表现;举一个例子：如果"黑焦虫"的运动状况已经到了用显微镜已经可以观察出的程度,其营养代谢和能量需求也就可想而知;这样,培养液中的影响消耗、酸碱含量程度等都要发生明显变化;比如说：迅速的、大含量的沉淀, pH值的迅速下降,细胞大量破碎死亡、引发其它类型微生物侵染等等;而这些状况,在所谓的"黑焦虫"感染中,是很难观察到的;同时"黑焦虫"的出现而影响细胞状态似乎得不到有力的证据;倒是细胞状态下降的时候,"黑焦虫"明显增多了;很有可能是细胞状态下降时,细胞衰亡产生的细胞碎片;所以黑胶虫属于细胞碎片是比较可能和合理的;2玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西网上有一篇文章说,黑胶虫其实不是一种生物,是无机物,其本质是玻璃培养瓶里的硅颗粒;可影响细胞生长,细胞状态好时,不明显;细胞状态较差,数量少时才容易看到,最好的办法是用一次性培养瓶,可消除黑胶虫影响;3血清聚合物产物gibco公司的血清说明,此物为血清聚合产物,而不是微生物;2. 生物类1支原体有人曾认为黑胶可能是支原体污染,因为相对比较权威的网站文章指出,黑胶虫可以通过滤膜,可以在空气中传播;而恰巧口腔支原体为人体口腔中之正常菌丛,所以实验室之操作人员的污染亦可能为支原体的污染源;但有人为此做了实验证明黑胶虫不会是支原体,原因如下：光镜下可见, 因为体积不对,支原体在普通显微镜下不能看到;多种染色后可见,甚至hoechst即能将它染色,一般来说支原体用普通染色法不易着色,用姬姆萨染色很浅,革兰染色为阴性;所以,黑胶虫是一种支原体的可能性比较小;2真菌有很多人发现类似黑胶虫的,但最后确定是真菌,二性霉素B对其有效;那说明黑胶虫不存在只是细胞培养中的真菌感染,还是说明黑胶虫污染属于真菌类污染物;如果黑胶虫是一种真菌,那么由此引起的污染是不会引起那么多人的关注,即使它很特殊;但是这不能排除那些认为"黑胶虫"是真菌的细胞者,看到的只是一般真菌感染;由于细胞被感染了,要进行拯救处理,不像理论上那么简单,稍有不注意都是很容易导致培养失败,所以黑胶虫是一种真菌也是不太可能;3寄生类原虫黑胶虫属于寄生类的原虫,而不是细菌、支原体,也不是什么补体、细胞碎片或蛋白沉淀;有人在400倍以上的高倍镜下可以清楚的看到胶虫有两种不同形态,一种较大,运动较慢,泛红光；另一种较小,运动较快,红中带绿,个小的围着个大的分布,很可能是公的围着雌的;这种生物也并非离开细胞就不能存活,也有人做过这样的试验,单纯培养过污染胶虫的血清4周,直到满视野都是黑煤渣般的胶虫;给人的感觉是胶虫和细胞一样有丛集性,如果胶虫密度低则生长缓慢,如果手懒,拖了几天没换液,待胶虫生长到一定浓度后便会飞速分生,细胞受感染的程度也大,这时除了培养基中可见外,细胞表面通常也象长满了粉刺,所以有人认为细胞旁分泌的某些因子可以抑制胶虫的生长;据说,中国病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫,似乎和草履虫和变形虫有类似之处,然而由于课题经费不够而不能继续进行下去;由此黑胶虫属于原虫的有比较大的可能性;四、关于黑胶虫出现的几种情况1. "黑胶虫"的出现常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断,尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡;就是在细胞生长状态不良时,黑胶虫容易出现;"黑胶虫"生长与细胞的生长有此消彼长的关系,即当细胞状态好时小黑点会相应的减少；反之则增加,似乎有细胞竞争生长的关系,但总的来说它的出现似乎并不影响细胞的生长;2. 细胞刚用的时候,观察均生长良好,密度适中,培养液清亮,小黑点一般不出现,但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点,有时候在一夜之间暴长;细胞进过多次传代的情况下,也会使黑胶虫出现;3. 换用了其他公司的血清,多是北方公司的血清,就出现了这种非常类似这里的"黑胶虫"的情况;在北京医科大学/中国协和医科大合出版社出版的现代实验血液学研究方法与技术书中关于检查血清中写道,"我国北方小牛血清还多见黑胶虫污染";其实在很多,遭遇黑胶虫的案例中,大部分细胞培养者都认为黑胶虫来源于血清;4. 关于再细胞培养中出现黑胶虫后的几种处理建议1换好一点的血清,当然最好是进口胎牛血清国产血清太脏,就是价格高的离谱,经济条件不允许,可以用进口新生牛血清代替;建议如果使用的是Hyclone或GIBCO的血清可不必灭活,这样可以有效减少"小黑点"的形成;一般的血清都不要去灭活处理,为什么呢 INVITROGEN公司在其血清说明书上解析道：经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的;经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低;而经过热灭活的血清,沉淀物的形成会显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是"小黑点",常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增;除非是在做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,才推荐做热灭活;所以在不是做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞培养时,血清尽量不经热灭活;2如果是贴壁细胞的话,可用无菌的PBS洗几次,可一定程度上缓解;若是悬浮的话,就不太好处理拉,可以向其中少加一点滋养细胞;加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效还有就是实验环境要注意好,保持细胞间整个环境的洁净度;如果细胞不是非常珍贵,可以用伯氨奎、磺胺、四环素、贝尼尔,也有建议庆大霉素500 ug/ml洗涤;3换用进口的一次性塑料培养瓶;4停止复苏,停止养细胞,彻底消毒所有用于细胞培养的一切用品,包括所用的培养瓶,培养基,吸管,胰酶,孵箱,超净台、空间等等你能想到的和细胞培养相关的所有物品;一个星期后,再复苏污染之前冻存的细胞,注意你的白大衣衣袖污染即可;这样你可能觉得动作太大,但可以用一个星期的时间挽救两个月的时间,还有其他你为了找到污染源,去除污染所耗费的精力,和财力;5在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打,冲洗干净后再加入培养液,坚持天天洗,传代时加生理盐水再离心一次,接种密度稍大一些,一段时间后,虫子就会大大减少,对细胞的生长也不会有大的影响;所有东西最好重配；如果实在要抢救,重点突破,留几瓶污染不是很严重的细胞抢救,其余弃去;6如果有其它可用的细胞,那么污染的细胞最好扔掉；如没有,可试着用抗生素,最可靠的是细菌培养加药敏,据药敏结果选择抗生素,当然不能影响到细胞的状态;7有材料称minocycline具有一定的作用,可以和换液结合起来使用;由于黑胶虫尚未明确鉴定出是什么生物,所以上述的处理方法不一定正确,可以供考虑采用;8有人为寻找到杀灭"黑胶虫"的方法,做了一个试验,他取有"黑胶虫"污染的六孔板,每孔内有2 ml培养液,向有污染的孔内分别加入0.5 ml、1 ml、2 ml、3 ml 的新洁尔灭原液,边加边在倒置显微镜下观察;最后他得出结论：新洁尔灭与水或培养基的比例为1：4时即可杀死"黑胶虫";但是新洁尔灭对细胞的负面影响太大,比较珍贵的细胞培养最好不采用此方法;五、国外关于黑胶虫的相关情况在国外的生物论坛上也有很多人在讨论black dots 和black particles,也就是我们所说的黑胶虫;他们所描述black dots 和black particles的情况,基本上和国内论坛上相似;国外有人用实验证明black dots 或black particles 不是支原体,而在细菌范围内;基本过程如下：If the poster is concerned about mycoplasma, there are tests to identify them. One is a Hoechst dye staining technique to look for extranuclear DNA spots.Also, prepare a dry flame-fixed smear from another aliquot of the media 5-10 ul and stain with crystal violet. See under microscope at high magnification if there is anything resembling bacteria. And by the way, estimate the size of the particles to be sure it is in the range of bacteria.六、总结从前面关于黒胶虫的描述可以看出,人们遇到的黒胶虫并不都是一样的,有象细菌的、有象支原体的、有象原虫的、有象真菌的,还有象细胞碎片的;在国内个实验室的器材条件参差不齐,而且实验人员的操作质量也不尽相同,同一种现象也可能有些许差异,当用描述出来的现象的差异可能变大也可能变小;所以很多人看到细胞被细菌污染了,不好处理,而却描述出来的现象和流传的黑胶虫类似,就会把培养失败的原因归结到无法处理的黒胶虫污染,甚至可能说它发现的是真正的黑胶虫;这样的事情多了,黑胶虫就会人为的变种,象什么的都有;黑胶虫是否存在,还有待于科学的发展;但有一点可以肯定的,大部分人发现的"黒胶虫"并不是真正那个未知的黒胶虫,而是不很常见的细菌、真菌、原虫等微生物污染;。