细胞培养污染简介
细胞培养中的几种污染
胞培养中的污染分为两类，化学污染和生物污染。
化学污染化学污染是一些对细胞有毒性的或对细胞产生刺激的化学物质。
这些污染一般来自于没有洗净的器皿、不纯的化学试剂和质量较差的蒸馏水等。
化学污染中比较引人注意的是细菌内毒素。
它是革兰氏阴性细菌细胞死亡后解体释放出的疏水性的细胞壁组成物质，对塑料等疏水性强的物质有很强的吸附能力。
细菌内毒素可刺激部分细胞产生一些激素或细胞因子，对细胞生长和实验结果产生影响。
细菌内毒素是临床上的最主要的热原（即注射到动物体内会导致动物发热），所以通过细胞培养生产的疫苗、细胞因子等用在临床上的药品的生产过程中更是要避免细菌内毒素的污染。
生物污染生物污染包括比较容易发现的细菌、霉菌和酵母的污染，和较难发现的病毒、支原体和其他细胞的污染。
细菌、霉菌和酵母到处存在，它们能在合适的环境中非常快速的生长。
这些污染比较容易观察到，它们往往会使其污染的培养液产生可见的变化，或者通过显微镜观察就可以看见。
由于病毒有种属特异性，所以病毒污染的概率比较小。
但是病毒污染难于发现，因为病毒颗粒特别微小，一般的实验室都没能力检查细胞培养中污染的病毒。
由于病毒一般潜伏在细胞内，对整个细胞培养不是致死的，所以它可能会使研究人员长期得到受病毒影响的细胞的实验结果。
1956 年 Robinson 及其同事首次发现细胞培养中的支原体污染。
90年代初美国的一个调查发现，在该国的细胞培养中，至少有15%被支原体污染。
由于支原体没有细胞壁，在细胞培养液中几乎是透明的，同时对常用于细胞培养中的抗生素不敏感，不引起 pH 变化，不使培养液浑浊，所以支原体污染不容易被发现，但是其存在会影响实验的结果。
细胞的交叉污染在细胞培养中发生的严重程度大大超过人们的想象：1981 年对ATCC细胞株的调查显示：超过 60 标记为其他细胞株的细胞居然是 HeLa 细胞。
关于细胞污染的一些总结和心得
关于细胞污染的一些总结和心得概述凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染，细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性。
细胞污染根据污染源主要可以分为物理性，化学性和生物性污染。
物理性污染的来源、危害及预防：物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染。
物理性污染通过影响细胞培养体系中的生化成分，从而影响细胞的代谢。
培养环境中的物理因素，如温度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响。
细胞、培养液或其它培养试剂暴露于放射线、辐射或过冷过热的温度中，可以引起细胞代谢发生改变，如细胞同步化、细胞生长受抑制甚至细胞死亡。
通过实验室的合理设计及建立规范的操作规程，可以减少环境中物理因素对细胞的影响。
孵箱应放在温度较恒定的环境中，周围不能放置能引起机械振动的设备，如离心机。
培养液及培养试剂应放在固定的位置，为避免光照试剂不能放在玻璃门的冰箱中，试剂周围不能放同位素。
培养液从冰箱中取出后应在室温中放置一段时间后再进行实验，以避免过冷的温度对细胞的影响。
化学性污染的来源、危害及预防培养环境中许多化学物质都可以引起细胞的污染。
化学物质并不总是抑制细胞的生长，某些化学物质如激素就可促进细胞的生长。
不同细胞对化学物质污染的反应是不一样的。
未纯化的物质、试剂、水、血清、生长辅助因子及储存试剂的容器都可能成为化学性污染的来源。
细胞培养的必需养分，如氨基酸，若浓度超过了合适的范围，也会对细胞产生毒性。
同样，不同细胞系其最佳培养条件下对血清和缓冲液的要求是不一样的，在培养中应严格控制。
玻璃制品清洗过程中残留的变性剂或肥皂(通常残留在瓶盖的内表面)是最常见的化学性污染。
水是唯一一种在凝固时膨胀的化合物。
因此在选择冻存细胞的容器时应考虑到这个因素。
容器因水的膨胀而发生破裂是引起试剂污染的重要原因。
为了避免金属离子、有机分子、细胞内毒素等物质对水的污染，在配制液体，清洗容器时必须使用不含杂质的超纯水。
细胞培养污染的途径、危害及预防措施
细胞培养污染的途径、危害及预防措施污染是细胞培养技术中面临的主要问题。
由于每一种细胞有其独特的培养体系，因此污染造成的后果也不尽相同。
某些污染的发生往往难以察觉和检测，而且污染源能长期共存于培养体系中，这类污染事实上大部分被人们忽视了。
培养的细胞作为一个生物体，会对培养环境以及环境中的污染物作出相应的反应，造成培养细胞生物学特性的改变，而对实验结果造成潜在的威胁，而且随着污染时间的延长而增加。
培养环境中的物理、化学及生物因素都可能侵入培养环境造成污染。
由于入侵的微生物在培养体系中不断增殖、代谢，因此生物性的污染对细胞的危害最大。
随着污染微生物的不断增殖，交叉污染的可能性也不断增加。
此外，微生物代谢消耗大量必需的养分，同时产生多种有毒的代谢产物，如酶、抗原及毒素等，进一步对细胞产生毒害作用。
因此，熟悉细胞培养污染的途径及其危害性，建立细胞培养规范的操作方法及规章制度，可以有效地防止污染，保证实验体系的稳定性和可靠性。
1细胞培养基本技术为了减少污染对细胞培养的影响，必须建立细胞冻存库。
细胞冻存库应该分主细胞库和工作细胞库，当需要做实验时从主细胞库中复苏细胞建立工作细胞库。
每一个冻存标本都应明确记录细胞的性质、代数及有无污染。
同时还应建立规范的检测程序进行菌检及细胞鉴定［1］。
为了保证培养细胞系的完整性，必须进行具体的实验记录，应包括以下内容：细胞系的种类及来源、有无污染、细胞代数和倍增时间、以及选择性突变。
具体的记录有利于对细胞的遗传及生理特性在常规传代培养中因突变、污染及各种原因导致的改变进行分析。
经过连续传代培养的细胞与它较早代数的冻存细胞相比，随着培养时间的延长，细胞在适应环境的过程中，其生物特性已发生了改变。
培养的细胞由若干生长速度及活力各异的亚群组成。
随着培养时间的延长，生长速度快及活力高的细胞亚群逐渐占优势，这种选择性趋势会影响整个细胞群的生物特性。
应用不同代数的细胞连续进行实验则结果会发生偏差。
细胞培养中常见的污染的处理
细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。
如何预防细胞培养污染问题
如何预防细胞培养污染问题细胞培养是生物学和医学研究中常用的一种技术方法，但细胞培养过程中常常会面临细胞污染问题。
细胞培养污染会严重影响实验结果的准确性，因此需要采取一系列措施来预防细胞培养污染。
本文将介绍几种常见的细胞培养污染问题以及预防措施。
1. 细菌污染细菌污染是细胞培养中最常见的问题之一。
来自操作人员、试剂、培养器具和工作环境等多方面的细菌污染都可能导致细胞培养中的细菌污染。
预防措施：•穿戴合适的实验服和手套，并进行消毒处理，减少操作人员带入的细菌污染。
•使用无菌、高质量的试剂，并在实验中进行常规无菌操作，保持培养器具的无菌状态。
•经常对实验室进行清洁和消毒，保持工作环境的无菌。
2. 真菌污染真菌污染是细胞培养中另一个常见的问题。
真菌往往来自环境中的空气、试剂、培养器具或操作人员。
真菌污染会导致细胞生长异常，细胞死亡或实验结果异常。
预防措施：•定期消毒工作环境，特别是操作台和培养箱，避免真菌的滋生。
•使用高质量的培养基和抗生素，抑制真菌的生长。
•采取无菌技术操作，减少操作人员带入的真菌污染。
•定期更换培养器具，特别是培养瓶和培养皿，避免真菌滋生。
3. Mycoplasma 污染Mycoplasma 污染是细胞培养中常见但容易被忽视的问题。
Mycoplasma 是一类细小的细菌样微生物，常常会导致细胞株的污染。
Mycoplasma 污染会影响细胞生长、代谢以及实验结果的可靠性。
预防措施：•定期检测细胞株的 Mycoplasma 污染情况，可以使用 PCR 或流式细胞术等方法进行检测。
•新购买的细胞株进行隔离培养，并进行 Mycoplasma 检测，确保细胞株的无菌性。
•严格控制培养器具、培养基和操作人员的无菌操作，减少Mycoplasma 污染的可能性。
•定期更换培养基并添加抗生素，可以抑制 Mycoplasma 的生长。
4. 交叉污染交叉污染是指在细胞培养过程中，不同细胞株之间发生的细胞混合现象。
细胞培养中常见污染
最近看到不少问有关细胞培养污染的事，正好我看到了一个有关这方面的总结，很全很好很强大，跟大家分享下细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
细胞培养中常见的污染及处理@麦粒
常见细胞污染及其处理方法麦~粒（2012级生物化学与分子生物学专业）摘要：细胞培养是生命科学实验及生物医药产业化中的一项关键技术，细胞污染问题一直是细胞培养中的大敌。
本文综述了细胞培养中污染的类型、处理方法和预防措施等，以期为实验室细胞培养中遇到的细胞污染的解决提供参考。
关键词：细胞培养，细胞污染，支原体污染细胞培养技术是现代生命科学研究中不可缺少的一项基本实验技术，同时也是细胞工程中的核心技术之一。
细胞培养的质量好坏直接关系到实验结果的可靠性与否以及产品质量的合格与否。
在细胞培养中，最基本的原则就是无菌操作，污染是细胞培养最致命的大敌，预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。
特别是对于一些珍贵的细胞株，一旦污染对实验可能就是毁灭性的。
1 污染的类型细胞污染的类型可分为物理、化学、生物三类。
其中化学、生物因素最为常见，物理因素最易被忽视。
1.1物理污染物理性污染通过影响细胞培养体系中的组分，从而影响了细胞的代谢。
最为常见的是温度和辐射（紫外线照射）。
过冷或过热的温度对细胞可引起细胞生理状态的改变，如从冰箱中取出的培养液直接加至37℃培养的细胞中可能会造成细胞应激，影响某些实验现象的观察。
在生物安全柜紫外灭菌时，应当遮蔽对紫外线敏感的试剂，同时普通操作中也要注意对见光易分解的物质进行避光处理。
对于需要使用同位素标记的某些实验，应当注意细胞、试剂周围不能放同位素。
除此之外，有时操作过程中偶尔有异物落入，极易造成污染。
一些小的颗粒状异物作为是微生物污染的载体进入培养液中造成细胞污染。
另外，实验过程中酒精棉球的棉絮、移液器枪头上的某些塑料碎屑等都有可能增加染菌的概率。
1.2化学污染细胞培养中的化学污染大多是由于实验准备或实验过程中造作不当造成的。
在实验准备阶段，细胞培养室中的器皿应做到专用，避免与常用器皿混用。
此外，细胞用器皿洗刷过程中要注意洗刷彻底，不可有洗涤剂等残留。
高压灭菌时应灭菌彻底，并在灭菌后的生物安全柜中打开使用。
培育技术中常见的细胞污染处理方法
培育技术中常见的细胞污染处理方法细胞污染是培育技术过程中一个常见而严重的问题。
细胞污染指的是外源性的微生物、真菌、细菌或其他细胞种类在细胞培养中的存在。
细胞污染会对实验结果产生不可预测的影响，甚至使实验失效。
因此，对于细胞污染的处理方法和预防措施的研究非常重要。
本文将介绍一些在细胞培养中常见的细胞污染处理方法。
一、消毒剂处理消毒剂处理是最常见的细胞污染处理方法之一。
消毒剂可以有效杀灭微生物和其他细胞种类，以减少污染。
常见的消毒剂有乙醇、过氧化氢和氯化物等。
在使用消毒剂处理细胞污染时，应选择适当的浓度和处理时间，并确保消毒剂不会对目标细胞产生不良影响。
二、培养基更换培养基更换是另一种常见的细胞污染处理方法。
培养基中添加抗生素可以有效抑制污染微生物的生长。
常用的抗生素包括青霉素、链霉素和庆大霉素等。
更换含有抗生素的培养基可以杀灭或抑制细菌和真菌等微生物的生长，从而有效处理细胞污染。
三、细胞分离细胞分离是一种通过分离感染的细胞来处理细胞污染的方法。
这可以通过细胞离心、细胞分选或免疫磁珠分离等技术来实现。
通过分离感染的细胞，可以有效减少细胞污染，同时保留无污染的细胞进行后续实验。
四、细胞冻存细胞冻存是另一种有效处理细胞污染的方法。
将无污染的细胞分装入液氮等低温环境中冻存，可以有效抑制细菌、真菌和其他细胞种类的生长。
在需要时，可以从冻存样品中恢复细胞，以继续实验。
然而，细胞冻存也存在一定的风险，如细胞冻存过程中可能引起的细胞损伤等问题需要注意。
五、污染原因的分析和改进污染原因的分析和改进是细胞污染处理的重要环节。
通过分析细胞污染的原因，可以采取相应的改进措施来预防细胞污染的再次发生。
污染原因的分析可以包括对实验设备、试剂和操作流程等的检查和评估。
通过对可能存在的问题进行改进，可以有效提高细胞培养的纯度和可靠性。
细胞污染是培育技术中一个常见且严重的问题。
为了有效处理细胞污染，研究并应用适当的处理方法和预防措施是非常重要的。
细胞培养中常见的污染情况、可能原因、解决方法
细胞培养中常见的污染情况、可能原因、解决方法细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
细胞污染的种类有哪些
细胞污染的种类有哪些1. 异物污染细胞培养的一个常见问题是异物污染。
异物污染是指在细胞培养过程中，由于一些外部因素导致培养器具或培养介质中出现的异物。
这些异物可能包括灰尘、纤维、酵母、细菌、真菌、病毒等。
这些异物不仅会干扰细胞的生长和功能，还可能引起未知的变化和不确定的结果。
因此，在进行细胞培养实验时，要特别注意避免异物污染。
2. 细胞污染细胞污染是指在细胞培养的过程中，细胞本身受到一些外部因素的污染，从而导致细胞的变异、功能受损甚至细胞死亡。
细胞污染可以由以下几种常见的污染源引起：a. 细菌污染细菌污染是细胞培养中最常见的污染之一。
常见的细菌污染源包括实验环境中的空气、实验器具、培养介质等。
细菌污染会导致细胞生长受阻、感染和细胞凋亡等，严重时甚至会使细胞无法继续培养和使用。
b. 真菌污染真菌污染是指一些真菌，如酵母菌等进入细胞培养环境中并污染细胞。
真菌污染会引起细胞外观的改变、生长受阻、功能受损等问题。
在细胞培养实验中，应特别注意真菌污染的防控。
c. 病毒污染病毒污染在细胞培养中较为罕见，但一旦发生，对细胞的影响极大。
病毒污染会导致细胞的变异、功能失调甚至细胞死亡。
因此，进行细胞培养实验时，必须定期进行病毒检测，并采取相应的防控措施以避免病毒污染的发生。
d. 交叉污染交叉污染是指在细胞培养过程中，细胞株之间或批次之间发生的互相污染。
细胞培养实验室中经常同时进行多个细胞系的培养，因此，交叉污染的风险也相应增加。
交叉污染会导致细胞株的混杂和受污染细胞株的功能异常。
为了避免交叉污染，实验室应有严格的实验室操作流程，并定期检测细胞株的纯度。
3. 其他污染除了以上几种常见的细胞污染，还有一些其他类型的污染也可能影响到细胞培养实验的结果，例如：•化学物质污染：来自培养介质、溶液、培养基等中的化学物质可能对细胞产生毒性影响，导致细胞的变异或死亡。
•辐射污染：细胞培养过程中可能存在来自辐射源的污染，这可能会对细胞的遗传物质和生理功能产生不可逆的损害。
细胞培养常见细菌污染原因
细胞培养常见细菌污染原因细胞培养是生物学研究中常用的实验技术，用于研究细胞的生理、生化和分子生物学特性。
然而，细胞培养过程中常常会受到细菌污染的影响。
细菌污染会对细胞培养的可靠性和准确性产生不良影响，因此控制细菌污染是细胞培养实验中至关重要的一步。
细胞培养常见的细菌污染原因主要有以下几个方面：1. 操作不当：细胞培养的整个过程都需要严格的无菌操作，而操作不当是导致细菌污染的主要原因之一。
无菌操作包括更换培养基、移液操作、接种细胞等，如果在操作过程中没有严格遵守消毒和无菌操作规范，就会导致细菌的进入和繁殖。
2. 试剂和培养物污染：试剂和培养物是细胞培养中常用的重要物质，如果试剂和培养物本身存在细菌污染，那么在培养过程中就会引入细菌。
试剂如培养基、酶、胎牛血清等的批次变化或不良质量，都可能导致细菌污染。
此外，非无菌的操作也会导致试剂和培养物的污染。
3. 实验室环境污染：实验室环境中存在微生物的存在，如桌面、空气、实验器皿等都可能存在细菌。
如果实验室的环境清洁度不够高，容易造成细菌污染。
此外，实验器皿如培养皿、离心管等的洗涤和保存也需要保证无菌操作。
4. 人员因素：人员的操作能力和操作习惯也会影响到细菌污染的发生。
操作人员应该保持良好的个人卫生习惯，定期对手套、实验服等进行更换和清洗。
如果操作人员不注意操作细节，如不合理的移液操作、使用不干净的仪器等，都可能导致细菌的污染。
5. 培养器具污染：培养器具如试管、离心管、细胞培养板等在使用之前需要经过高温和化学消毒处理，以杀灭其中潜在存在的细菌。
然而，如果器具处理不彻底或者保存环境不好，就容易导致细菌的残留或再次感染。
细胞培养中细菌污染的危害是非常严重的。
首先，细菌污染会干扰细胞培养体系的稳定，导致无法准确观察和研究细胞的生理和生化特性。
其次，细菌代谢产物和细胞培养物中含有的抗生素等成分会干扰细胞培养的正常生长和发育，降低实验结果的可靠性和准确性。
此外，由于细菌的存在，还容易导致细胞死亡和污染的蔓延，对细胞培养的连续性和稳定性造成不可逆的伤害。
CELL-污染与排除
3.操作过程中的预防 3.操作过程中的预防
不宜过早开瓶；开瓶后瓶口不能与风向相逆，保持斜立， ① 不宜过早开瓶；开瓶后瓶口不能与风向相逆，保持斜立， 不再使用的培养液应立即封闭瓶口, 不再使用的培养液应立即封闭瓶口,不允许触及器皿的 无菌部分（瓶口及瓶塞内侧）； 无菌部分（瓶口及瓶塞内侧）； ② 开启及关闭瓶口时注意火焰烧灼及火焰附近工作； 开启及关闭瓶口时注意火焰烧灼及火焰附近工作； 应专管专用； ③ 应专管专用； 培养的细胞勿过早暴露于空气中； ④ 培养的细胞勿过早暴露于空气中； 操作时不准交谈、咳嗽； ⑤ 操作时不准交谈、咳嗽； 操作完毕应整理好工作台面，并消毒擦拭工作面， ⑥ 操作完毕应整理好工作台面，并消毒擦拭工作面，关闭超 净工作台。 净工作台。
三.操作 器材和溶液使用前未仔细检查是否污染过 ； 吸管、刀、剪沾染微生物； 瓶口封不严； 培养两种以上细胞，使用同一吸管或营养液。 四.血清 被支原体和病毒污染。
五. 组织
手术中污染； 组织本身带菌； 用碘酒后擦拭不净造成碘污染。
第二节 污染对细胞的影缓慢、分裂相减少、粗糙、轮廓增强。 停止增殖，分裂相消失， 停止增殖，分裂相消失，胞质中出现大量堆 积物，变圆或崩溃从瓶壁脱落。 积物，变圆或崩溃从瓶壁脱落。 污染物不同，对细胞的影响不同。 污染物不同，对细胞的影响不同。
真菌污染
（二）细菌污染
培养液变黄，混浊； 以内很明显; 培养液变黄，混浊；48h以内很明显 细胞很快 以内很明显 崩解死亡。 崩解死亡。 镜下可见菌体。 镜下可见菌体。 污染后细胞发生病理改变， 胞内颗粒增多、 污染后细胞发生病理改变 ， 胞内颗粒增多 、 增 最后变圆脱落死亡， 粗 ， 最后变圆脱落死亡 ， 造成试验失败和细胞 株(系)丢失。 系 丢失。 丢失
常用的细胞培养方法、污染及污染处理
常用的细胞培养方法、污染及污染处理一、本文概述细胞培养是生物学和医学领域中一种重要的实验技术，广泛应用于基础研究和实际应用。
通过模拟细胞在体内生长的环境，细胞在体外得以繁殖、分化并维持其特定功能。
本文旨在概述常用的细胞培养方法，包括培养基的选择、细胞传代、细胞冻存与复苏等，同时探讨细胞培养过程中可能出现的污染问题，包括细菌、真菌和支原体等微生物污染，以及污染的检测和处理方法。
通过本文的阐述，读者可以对细胞培养的基本流程和污染防控有更为全面的了解，为实验操作提供指导和参考。
二、常用的细胞培养方法细胞培养是生物学和医学研究中的核心技术，用于模拟体内环境，研究细胞生长、分化和功能。
以下是几种常用的细胞培养方法：贴壁培养法：这是最常见的细胞培养方法。
细胞在培养瓶或培养板的表面上贴壁生长，形成单层细胞。
这种方法适用于大多数哺乳动物细胞系。
悬浮培养法：某些细胞，如血液细胞、肿瘤细胞和某些干细胞，可以在液体培养基中悬浮生长。
这种方法不需要细胞贴壁，可以方便地扩大细胞数量。
微载体培养法：微载体是一种微小的、可以悬浮在培养基中的颗粒，通常用于大规模细胞培养。
细胞可以在微载体的表面上贴壁生长，从而增加细胞与培养基的接触面积，提高细胞生长效率。
三维培养法：这种方法模拟体内组织的三维结构，使用支架或凝胶等基质支持细胞生长。
它有助于研究细胞间的相互作用和组织的形成。
共培养法：将不同类型的细胞放在同一个培养环境中进行培养，以模拟体内细胞间的相互作用。
例如，将内皮细胞和肿瘤细胞共培养，可以研究肿瘤血管生成的过程。
在进行细胞培养时，需要选择适合细胞类型和实验目的的培养方法，同时严格控制培养条件，包括温度、湿度、pH值、营养成分等，以确保细胞的正常生长和繁殖。
三、细胞培养污染及其影响在细胞培养过程中，污染是一个常见且严重的问题，可能对细胞生长、实验结果和细胞治疗产生负面影响。
污染主要来源于微生物，包括细菌、真菌、支原体和病毒等。
细胞污染的检测与去除
第二章 动物细胞培养第四节 细胞污染的检测与去除细胞培养最怕的就是细胞污染。
一旦细胞发生污染，轻的，导致实验无法正常进行，严重的，可能会导致细胞株的丢失。
细胞污染：是指细胞培养物中混入培养环境中的对细胞生存有害的成分或造成细胞不纯的异物。
细胞污染的主要途径有：1）空气因素：空气是微生物传播的最主要途径。
在超净工作台、细胞培养室工作时，不戴口罩，不带头套，面对操作间大声讲话、咳嗽等均可能造成细胞污染。
2）器材因素：主要是细胞培养用器材清洗消毒不彻底，致使污染物残留；培养箱没有定期消毒，易使细菌、霉菌孽生，形成污染。
3）操作因素：实验操作者无菌观念不强、操作不规范、甚至使用污染的器具等。
培养两种以上细胞时，交叉使用吸管或培养液瓶等导致细胞交叉污染。
4）血清或培养基：有些血清生产时已被支原体或病毒等污染，有的在培养基配制过程中已经污染，或者在培养基的存放过程中导致了污染。
5）组织样本：尤其在进行原代培养时，组织样本可能带菌，导致污染。
细胞污染的主要类型有（图1）：图1 细胞污染的主要类型第一，细菌污染：细菌是细胞培养中最常见的污染。
细菌种类繁多，形态多样，可呈球状、杆状和螺旋状。
因为细菌的繁殖速度快，被污染后，往往一天内即可通过肉眼观察发现，pH值也会突然降低，培养基的颜色也会很快变化，培养液会变浑浊。
轻微细菌污染的去除: 可使用5-10倍常用抗生素剂量的冲击法，加抗生素作用24-28 h，再换成常规培养液，有时可排除污染，但大部分细胞培养的细菌污染发现时就已经很严重了，无法挽救，最好直接丢弃，防止污染的扩大。
细胞培养细菌污染的主要检测方法有：肉眼观察法；培养检查法；显微镜观察法；PCR检测法等。
1）肉眼观察法：（图2），如图，这是正常生长细胞在不同时间的培养基的颜色，污染细胞培养基会变得浑浊，培养基会快速变黄（因大量细菌繁殖会导致pH 快速下降）。
刚传代细细胞培养中需要传代的细图2 正常生长细胞培养基的颜2）培养检查法：就是用细胞培养上清在无菌琼脂糖培养基平板上划线培养，37℃培养箱中培养过夜，看是否有细菌菌落长出（图3）。
细胞污染简介(整理)
细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理你的培养液应该一两天内很快变混浊．刚开始小虫杆状成串，不怎么动，多了以后就不成串了，移动迅速，是这样吗？如果是，细菌培养液是被洋葱佰克霍尔德菌污染了。
洋葱佰克霍尔德菌（Burkholderiacepacia）原属假单胞菌属，是植物病原菌，因引起洋葱患病而得名，是医院感染病原菌之一。
洋葱伯克霍尔德菌是一种广泛存在于土壤及水中，与医院感染密切相关的革兰阴性杆菌，尤其为免疫缺陷及肺囊性纤维化患者易感染细菌之一。
它可以在无糖的培养基中生长。
在医院环境中常可污染自来水、体温表、喷雾器、静脉导管、导尿管、静脉输液管等，造成院内传播，导致多种医院感染，如败血症、心内膜炎、肺炎、伤口感染、深部脓肿和眼结膜炎等，尤其采用导管植入进行治疗者，更容易引起感染。
洋葱伯克霍尔德菌对多种抗菌药具有天然的耐药性。
耐药现象严重，治疗可选择复方磺胺甲懒唑、哌拉西林,三唑巴坦、哌拉西林和头孢他啶等抗菌药物。
参考文献：洋葱伯克霍尔德菌86株的分布与耐药性尤荣开，等中国抗感染化疗杂志2003年2月28日第3卷第1期2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差.用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
细胞污染
细胞污染常见有三种：即真菌污染、细菌污染和支原体污染。
细菌污染可见培养液明显混浊，细菌产生的毒素等使细胞崩解、死亡，孔或皿底部常有沉淀物出现，用光学显微镜或倒置相差显微镜观察可见视野内有均匀的点状颗粒，瑞氏或革兰氏染色镜下检查即可确定。
真菌污染这在细胞培养中是比较常见的，尤其是在炎热、潮湿的季节。
此种污染容易发现，肉眼观察大多呈白色或浅黄色小点漂浮于培养液表面，镜下可见丝状、管状或树枝状菌丝，纵横交错于细胞之间。
支原体污染这是目前细胞培养中最常见、不易被察觉、干扰实验结果的一种污染。
支原体在镜下呈暗色微小颗粒，并有类似布朗运动的表现，多位于细胞表面和细胞之间。
但值得注意的是该污染要与血清灭活当中产生的黑色小颗粒或细胞破碎后溢出的内容物如线粒体等进行区别。
细菌过滤器细菌都有一定的大小，如果过滤器的滤膜，或者滤柱，（或者其他的），孔径小于细菌的直径，那么当液体或者气体通过的时候，细菌就被挡住，过不去，那么过去的液体或者气体，就是无菌的。
一般小于0.22微米的孔，应该就可以滤菌了。
然而病毒因为其结构微小，数量级为纳米，所以可以通过细菌过滤器除菌过滤器主要是采用大比表面积，过滤精度为0.22μm以上的微滤滤芯，主要用于防止空气中的杂质和有害细菌、微生物等进入罐体、生产线、无菌室等，引起水质、产品和无菌室环境的变化，满足食品、生化、饮料、啤酒、医药、电子等行业的工艺需要。
用于水处理的罐体的罐内环境保护防止罐体内水体来自空气的污染时，也叫呼吸器。
微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物，个体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。
微生物包括细菌、病毒、霉菌、酵母菌等。
（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。
）病毒是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”，但是它的生存必须依赖于活细胞。
根据存在的不同环境分为原核微生物、空间微生物、真菌微生物、酵母微生物、海洋微生物等。
细胞培养中“黑胶虫”污染的检测及防治
6、建立有效的监控机制：对细胞培养过程进行实时监控，特别是在培养液 更换、细胞传代等关键环节上要格外留意。通过定期检查和记录细胞生长情况、 生化指标等数据，及时发现并处理潜在的黑胶虫污染问题。
7、采用新技术手段：随着科技的发展，一些新的技术手段如基因测序、生 物信息学分析等也可用于检测和防治黑胶虫污染。通过这些技术手段的应用，可 以更早地发现污染源、追踪污染途径并制定有效的防控措施。
4、建立应急预案：实验室应建立针对黑胶虫污染的应急预案，以便在发生 污染时能够迅速采取有效的措施进行处理，最大程度地减少损失。
5、加强学术交流与培训：通过参加学术会议、研讨会等活动，了解和学习 最新的研究成果和方法，提高对黑胶虫污染的认识和应对能力。同时，对实验室 工作人员进行定期的培训和教育，提高他们的专业素养和操作技能。
5、使用适当的消毒剂：在细胞培养过程中，可以使用适当的消毒剂对实验 器材和环境进行消毒处理。常用的消毒剂有75%酒精、紫外线、甲醛等。在使用 消毒剂时，要严格按照使用说明进行操作，避免对细胞造成不良影响。
参考内容三
引言
随着人类文明的不断发展，塑料制品的使用日益普遍，由此引发的白色污染 问题也越来越严重。本次演示将探讨白色污染的污染现状及防治对策，旨在引起 人们对白色污染问题的，共同呵护环境。
参考内容
一、常用的细胞培养方法
细胞培养是一种广泛应用于生物学、医学和生物技术领域的技术。细胞培养 是指将活细胞种植在适宜的基质中，通过提供适宜的营养和环境条件，使细胞在 体外繁殖和生长。常用的细胞培养方法包括悬浮培养和贴壁培养。
1、悬浮培养：悬浮培养是将细胞悬浮在培养液中，通过搅拌或振荡使细胞 均匀分布，并保持悬浮状态。这种方法适用于大多数类型的细胞，包括一些难以 贴壁的细胞。
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3，支原体污染
3.1，支原体污染是目前实验室中最为常见的污染细胞的原核生物。 因支原体属于直径介于0.2左右的最小原核生物，形态易变，故极
易通过滤膜而逃过培养液的过滤除菌步骤。在细胞培养液中，支原体 可达到107-108CFU/mL （CFU=Colony Forming Unit，支原体浓度测量 单位）而不使培养液混浊及影响细胞生长。多种支原体对细胞不产生 任何病变效应，使得细胞污染不易被察觉。据报道，目前世界上有3050%的细胞株已受支原体污染。但是支原体对干细胞培养的影响甚大， 胚胎干细胞受支原体污染形态、生长速度等均出现改变。
我们的目标
二，污染是细胞培养的大敌。保证细胞株不受污染是细 胞库保藏能力的关键性标志，也是其他能力提升的基础
1，细菌污染 2，真菌污染 3，支原体污染 4，内毒素污染 5，细胞间交叉污染
1，细菌污染。
实验室中因操作不慎而引起的污染，即使在细胞培养液中加入了预 防剂量的抗菌素也会产生。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌，以 及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液 肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。污染后细胞发生 病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成实验失败和 细胞株(系)丢失。
• 2014年10月，国务院印发《关于加快科技服务业发展的若干意 见》（国发〔2014〕49号），这是国务院首次对科技服务业发展 作出的全面部署。
（国家对我们的要求）
细胞资源为生物医药基础研究和产业发展提供支撑和保障细胞Fra bibliotek源保藏和技术研发
基础研究实验细胞库
人类遗传资源库
国家发展和安全战略
一， 细胞系是重要的遗传资源。细胞库的功能包括 资源保藏能力、资源利用能力和资源开发能力。这 三方面的提升是建设一流细胞保藏单位的关键抓手， 也是推动细胞库向科技服务业转移重心的必经之路。
坚持国际接轨的细胞保藏技术水平，积极吸引国内 有知识产权的细胞系进入细胞库保藏，逐步形成自
己的特色。
中科院 细胞库
坚持用户至上的服务态度，全方位为用户着想为用 户服务，积极推动库内细胞资源的利用。
密切关注国际细胞生物学发展前沿，主动与医院等 单位合作，拓宽细胞资源的种类，为我国细胞生物
学的进一步发展做好准备。
细胞库
瞄准科技发展前沿 提升利用开发水平
细 质 文鉴 胞 量 档定 培 控 管检 养 制 理测
拓宽收集渠道 提升保藏特色
保藏、评价
技技对培 术术外训 咨服供科 询务应普
开放、共享
一， 细胞系是重要的遗传资源。保存细胞系的细胞库其功能包括资源保 藏能力、资源利用能力和资源开发能力。这三方面的提升是建设一流细 胞保藏单位的关键抓手。
可污染细胞的支原体种类较多，主要有Mycoplasma orale, M.hyorhinis, M.arginini 和 Acholeplasma laidlawii。目前已
发现的支原体超过100种，这就是单一的检测方法有时会失败的原 因之一。我们建议至少选择2种方法来检测支原体。
3.2，常用支原体检测方法 3.2.1，肉汤培养基检测法。医药行业规定使用。 3.2.2，间接染色法检测支原体 用待检测的细胞培液培养Vero细胞，然后用显微镜观察是否有 支原体感染。Vero细胞来源于正常的成年非洲绿猴肾组织，由Y. Yasumura和Y. Kawakita于1962年在日本Chiba大学分离得到。 Vero细胞是非整倍体，可在培养液中无限生长，常用来生产疫 苗，检测支原体和细菌外毒素等。细胞培养液中的支原体可用 Hoechst33258或DAPI染色后观察到。由于支原体含有DNA，染色 后在细胞表面，培养基中及培养皿表面呈现出荧光小点。
细胞培养污染简介
用创新驱动科技服务业的发展
• 十八大明确提出要“实施创新驱动发展战略，强调科技创新是 提高社会生产力和综合国力的战略支撑，必须摆在国家发展全局 的核心位置”。
• 我国科技服务业已经具备一定的发展基础，但是与英、美等发 达国家相比，我国的科技服务业产值及其占GDP比重较低，2011 年度实现科技服务增加值不足7000亿元，占GDP比重约为1.4%。
在细胞培养过程中如果在显微镜下发现破碎的细胞很多，需要频繁 换液才能维持传代培养的时候，即应怀疑支原体污染。
由于多数细胞受支原体污染后无明显变化或略有变化，若不及 时处理，将产生交叉污染。另外，支原体会改变宿主细胞的结构和 功能等一系列特征，因此尽管很多受支原体污染的细胞其形态看不 出变化，但对其进行进一步分子生物学分析时，其实验结果会不准 确。为此建议各实验室定期对细胞进行支原体检查。
二， 保证细胞株不受污染是细胞库保藏能力的关键 性标志，也是其他能力提升的基础。
一， 细胞系是重要的遗传资源。由细胞 库（Cell Bank）负责保存细胞系。
细胞库
细 质 文鉴 胞 量 档定 培 控 管检 养 制 理测
技技对培 术术外训 咨服供科 询务应普
保藏、评价
开放、共享
一， 细胞系是重要的遗传资源。负责保存细胞系的细胞 库应当开发、承担更多的功能，提升服务科技、服务社 会的能力，产生更高的服务业产值。
2，真菌污染
在细胞培养过程中较为常见，尤其在南方霉雨季节进行细胞培养更易 产生。最常见的真菌有：烟曲霉、黑曲菌、毛霉菌、白色念珠菌、酵母菌 等。培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色小点，培 养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状菌丝纵横交 错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散 在细胞周边和细胞之间。
间接染色法检测支原体
A
B
C
Vero细胞DAPI染色荧光照片(400×)。A，感染支原体的 Vero细胞。蓝色卵圆形荧光物质为Vero细胞核，其周围蓝 色荧光小点为支原体(箭头)；B，未感染支原体的阴性对照 Vero细胞；C，加入待检培养液的Vero细胞(未感染支原体)。
3.2.2，PCR法检测支原体 许多支原体检测方法不仅用时长而且复杂，有的方法仅限于检 测有限种类的支原体。PCR检测法灵敏度高，特异性强，只用一 天时间即可快速检测细胞培养液中的支原体，是一种检测支原 体的有效手段。中科院干细胞库选择支原体16S rDNA序列为靶 序列设计引物，同时做对照组实验和干扰实验以避免假阳性或 假阴性结果，取得了很好的效果。