细胞培养污染简介
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坚持国际接轨的细胞保藏技术水平，积极吸引国内 有知识产权的细胞系进入细胞库保藏，逐步形成自
己的特色。
中科院 细胞库
坚持用户至上的服务态度，全方位为用户着想为用 户服务，积极推动库内细胞资源的利用。
密切关注国际细胞生物学发展前沿，主动与医院等 单位合作，拓宽细胞资源的种类，为我国细胞生物
学的进一步发展做好准备。
2，真菌污染
在细胞培养过程中较为常见，尤其在南方霉雨季节进行细胞培养更易 产生。最常见的真菌有：烟曲霉、黑曲菌、毛霉菌、白色念珠菌、酵母菌 等。培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色小点，培 养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状菌丝纵横交 错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散 在细胞周边和细胞之间。
间接染色法检测支原体
A
B
C
Vero细胞DAPI染色荧光照片(400×)。A，感染支原体的 Vero细胞。蓝色卵圆形荧光物质为Vero细胞核，其周围蓝 色荧光小点为支原体(箭头)；B，未感染支原体的阴性对照 Vero细胞；C，加入待检培养液的Vero细胞(未感染支原体)。
3.2.2，PCR法检测支原体 许多支原体检测方法不仅用时长而且复杂，有的方法仅限于检 测有限种类的支原体。PCR检测法灵敏度高，特异性强，只用一 天时间即可快速检测细胞培养液中的支原体，是一种检测支原 体的有效手段。中科院干细胞库选择支原体16S rDNA序列为靶 序列设计引物，同时做对照组实验和干扰实验以避免假阳性或 假阴性结果，取得了很好的效果。
• 2014年10月，国务院印发《关于加快科技服务业发展的若干意 见》（国发〔2014〕49号），这是国务院首次对科技服务业发展 作出的全面部署。
（国家对我们的要求）
细胞资源为生物医药基础研究和产业发展提供支撑和保障
细胞资源保藏和技术研发
基础研究实验细胞库
人类遗传资源库
源自文库
国家发展和安全战略
一， 细胞系是重要的遗传资源。细胞库的功能包括 资源保藏能力、资源利用能力和资源开发能力。这 三方面的提升是建设一流细胞保藏单位的关键抓手， 也是推动细胞库向科技服务业转移重心的必经之路。
可污染细胞的支原体种类较多，主要有Mycoplasma orale, M.hyorhinis, M.arginini 和 Acholeplasma laidlawii。目前已
发现的支原体超过100种，这就是单一的检测方法有时会失败的原 因之一。我们建议至少选择2种方法来检测支原体。
3.2，常用支原体检测方法 3.2.1，肉汤培养基检测法。医药行业规定使用。 3.2.2，间接染色法检测支原体 用待检测的细胞培液培养Vero细胞，然后用显微镜观察是否有 支原体感染。Vero细胞来源于正常的成年非洲绿猴肾组织，由Y. Yasumura和Y. Kawakita于1962年在日本Chiba大学分离得到。 Vero细胞是非整倍体，可在培养液中无限生长，常用来生产疫 苗，检测支原体和细菌外毒素等。细胞培养液中的支原体可用 Hoechst33258或DAPI染色后观察到。由于支原体含有DNA，染色 后在细胞表面，培养基中及培养皿表面呈现出荧光小点。
细胞库
瞄准科技发展前沿 提升利用开发水平
细 质 文鉴 胞 量 档定 培 控 管检 养 制 理测
拓宽收集渠道 提升保藏特色
保藏、评价
技技对培 术术外训 咨服供科 询务应普
开放、共享
一， 细胞系是重要的遗传资源。保存细胞系的细胞库其功能包括资源保 藏能力、资源利用能力和资源开发能力。这三方面的提升是建设一流细 胞保藏单位的关键抓手。
二， 保证细胞株不受污染是细胞库保藏能力的关键 性标志，也是其他能力提升的基础。
一， 细胞系是重要的遗传资源。由细胞 库（Cell Bank）负责保存细胞系。
细胞库
细 质 文鉴 胞 量 档定 培 控 管检 养 制 理测
技技对培 术术外训 咨服供科 询务应普
保藏、评价
开放、共享
一， 细胞系是重要的遗传资源。负责保存细胞系的细胞 库应当开发、承担更多的功能，提升服务科技、服务社 会的能力，产生更高的服务业产值。
3，支原体污染
3.1，支原体污染是目前实验室中最为常见的污染细胞的原核生物。 因支原体属于直径介于0.2左右的最小原核生物，形态易变，故极
易通过滤膜而逃过培养液的过滤除菌步骤。在细胞培养液中，支原体 可达到107-108CFU/mL （CFU=Colony Forming Unit，支原体浓度测量 单位）而不使培养液混浊及影响细胞生长。多种支原体对细胞不产生 任何病变效应，使得细胞污染不易被察觉。据报道，目前世界上有3050%的细胞株已受支原体污染。但是支原体对干细胞培养的影响甚大， 胚胎干细胞受支原体污染形态、生长速度等均出现改变。
在细胞培养过程中如果在显微镜下发现破碎的细胞很多，需要频繁 换液才能维持传代培养的时候，即应怀疑支原体污染。
由于多数细胞受支原体污染后无明显变化或略有变化，若不及 时处理，将产生交叉污染。另外，支原体会改变宿主细胞的结构和 功能等一系列特征，因此尽管很多受支原体污染的细胞其形态看不 出变化，但对其进行进一步分子生物学分析时，其实验结果会不准 确。为此建议各实验室定期对细胞进行支原体检查。
细胞培养污染简介
用创新驱动科技服务业的发展
• 十八大明确提出要“实施创新驱动发展战略，强调科技创新是 提高社会生产力和综合国力的战略支撑，必须摆在国家发展全局 的核心位置”。
• 我国科技服务业已经具备一定的发展基础，但是与英、美等发 达国家相比，我国的科技服务业产值及其占GDP比重较低，2011 年度实现科技服务增加值不足7000亿元，占GDP比重约为1.4%。
我们的目标
二，污染是细胞培养的大敌。保证细胞株不受污染是细 胞库保藏能力的关键性标志，也是其他能力提升的基础
1，细菌污染 2，真菌污染 3，支原体污染 4，内毒素污染 5，细胞间交叉污染
1，细菌污染。
实验室中因操作不慎而引起的污染，即使在细胞培养液中加入了预 防剂量的抗菌素也会产生。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌，以 及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液 肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。污染后细胞发生 病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成实验失败和 细胞株(系)丢失。
己的特色。
中科院 细胞库
坚持用户至上的服务态度，全方位为用户着想为用 户服务，积极推动库内细胞资源的利用。
密切关注国际细胞生物学发展前沿，主动与医院等 单位合作，拓宽细胞资源的种类，为我国细胞生物
学的进一步发展做好准备。
2，真菌污染
在细胞培养过程中较为常见，尤其在南方霉雨季节进行细胞培养更易 产生。最常见的真菌有：烟曲霉、黑曲菌、毛霉菌、白色念珠菌、酵母菌 等。培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色小点，培 养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状菌丝纵横交 错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散 在细胞周边和细胞之间。
间接染色法检测支原体
A
B
C
Vero细胞DAPI染色荧光照片(400×)。A，感染支原体的 Vero细胞。蓝色卵圆形荧光物质为Vero细胞核，其周围蓝 色荧光小点为支原体(箭头)；B，未感染支原体的阴性对照 Vero细胞；C，加入待检培养液的Vero细胞(未感染支原体)。
3.2.2，PCR法检测支原体 许多支原体检测方法不仅用时长而且复杂，有的方法仅限于检 测有限种类的支原体。PCR检测法灵敏度高，特异性强，只用一 天时间即可快速检测细胞培养液中的支原体，是一种检测支原 体的有效手段。中科院干细胞库选择支原体16S rDNA序列为靶 序列设计引物，同时做对照组实验和干扰实验以避免假阳性或 假阴性结果，取得了很好的效果。
• 2014年10月，国务院印发《关于加快科技服务业发展的若干意 见》（国发〔2014〕49号），这是国务院首次对科技服务业发展 作出的全面部署。
（国家对我们的要求）
细胞资源为生物医药基础研究和产业发展提供支撑和保障
细胞资源保藏和技术研发
基础研究实验细胞库
人类遗传资源库
源自文库
国家发展和安全战略
一， 细胞系是重要的遗传资源。细胞库的功能包括 资源保藏能力、资源利用能力和资源开发能力。这 三方面的提升是建设一流细胞保藏单位的关键抓手， 也是推动细胞库向科技服务业转移重心的必经之路。
可污染细胞的支原体种类较多，主要有Mycoplasma orale, M.hyorhinis, M.arginini 和 Acholeplasma laidlawii。目前已
发现的支原体超过100种，这就是单一的检测方法有时会失败的原 因之一。我们建议至少选择2种方法来检测支原体。
3.2，常用支原体检测方法 3.2.1，肉汤培养基检测法。医药行业规定使用。 3.2.2，间接染色法检测支原体 用待检测的细胞培液培养Vero细胞，然后用显微镜观察是否有 支原体感染。Vero细胞来源于正常的成年非洲绿猴肾组织，由Y. Yasumura和Y. Kawakita于1962年在日本Chiba大学分离得到。 Vero细胞是非整倍体，可在培养液中无限生长，常用来生产疫 苗，检测支原体和细菌外毒素等。细胞培养液中的支原体可用 Hoechst33258或DAPI染色后观察到。由于支原体含有DNA，染色 后在细胞表面，培养基中及培养皿表面呈现出荧光小点。
细胞库
瞄准科技发展前沿 提升利用开发水平
细 质 文鉴 胞 量 档定 培 控 管检 养 制 理测
拓宽收集渠道 提升保藏特色
保藏、评价
技技对培 术术外训 咨服供科 询务应普
开放、共享
一， 细胞系是重要的遗传资源。保存细胞系的细胞库其功能包括资源保 藏能力、资源利用能力和资源开发能力。这三方面的提升是建设一流细 胞保藏单位的关键抓手。
二， 保证细胞株不受污染是细胞库保藏能力的关键 性标志，也是其他能力提升的基础。
一， 细胞系是重要的遗传资源。由细胞 库（Cell Bank）负责保存细胞系。
细胞库
细 质 文鉴 胞 量 档定 培 控 管检 养 制 理测
技技对培 术术外训 咨服供科 询务应普
保藏、评价
开放、共享
一， 细胞系是重要的遗传资源。负责保存细胞系的细胞 库应当开发、承担更多的功能，提升服务科技、服务社 会的能力，产生更高的服务业产值。
3，支原体污染
3.1，支原体污染是目前实验室中最为常见的污染细胞的原核生物。 因支原体属于直径介于0.2左右的最小原核生物，形态易变，故极
易通过滤膜而逃过培养液的过滤除菌步骤。在细胞培养液中，支原体 可达到107-108CFU/mL （CFU=Colony Forming Unit，支原体浓度测量 单位）而不使培养液混浊及影响细胞生长。多种支原体对细胞不产生 任何病变效应，使得细胞污染不易被察觉。据报道，目前世界上有3050%的细胞株已受支原体污染。但是支原体对干细胞培养的影响甚大， 胚胎干细胞受支原体污染形态、生长速度等均出现改变。
在细胞培养过程中如果在显微镜下发现破碎的细胞很多，需要频繁 换液才能维持传代培养的时候，即应怀疑支原体污染。
由于多数细胞受支原体污染后无明显变化或略有变化，若不及 时处理，将产生交叉污染。另外，支原体会改变宿主细胞的结构和 功能等一系列特征，因此尽管很多受支原体污染的细胞其形态看不 出变化，但对其进行进一步分子生物学分析时，其实验结果会不准 确。为此建议各实验室定期对细胞进行支原体检查。
细胞培养污染简介
用创新驱动科技服务业的发展
• 十八大明确提出要“实施创新驱动发展战略，强调科技创新是 提高社会生产力和综合国力的战略支撑，必须摆在国家发展全局 的核心位置”。
• 我国科技服务业已经具备一定的发展基础，但是与英、美等发 达国家相比，我国的科技服务业产值及其占GDP比重较低，2011 年度实现科技服务增加值不足7000亿元，占GDP比重约为1.4%。
我们的目标
二，污染是细胞培养的大敌。保证细胞株不受污染是细 胞库保藏能力的关键性标志，也是其他能力提升的基础
1，细菌污染 2，真菌污染 3，支原体污染 4，内毒素污染 5，细胞间交叉污染
1，细菌污染。
实验室中因操作不慎而引起的污染，即使在细胞培养液中加入了预 防剂量的抗菌素也会产生。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌，以 及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液 肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。污染后细胞发生 病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成实验失败和 细胞株(系)丢失。