离体蛙心灌流及某些离子
离体蛙心灌流及某些离子药物对离体蛙心活动的影响
30
在蛙心插管中滴加乳酸，使心肌 力发生改变的原因是（）。
收缩
H+抑制Ca2+的内流
H+与Ca2+竞争肌钙 蛋白
H+抑制K+的内流
去甲肾上腺素 肾上腺素
BDE
去甲肾上腺素 肾上腺素
ABC
H+抑制Na+的内流
H+与Ca2+竞 争钙调蛋白
AB
31
在蛙心插管中滴加碳酸氢钠，使心肌 OH-中和H+，使H+
收缩力发生改变的原因是（）。
浓度减少
H+减少促进Ca2+内 流
H+减少促进Ca2+与肌 OH-促进Ca2+的内
钙蛋白的亲和力
流
OH-促进Ca2+ 与肌钙蛋白 的亲和力
ABC
32
蛙心夹夹住心尖不 在观察一些离子、药物对离体蛙心活 宜过多，以免过度 每次更换任氏液量 动的影响时，应注意的事项包括（） 牵拉造成心室损伤 应该保持一致
心室舒张的程度
11
在离体蛙心灌流实验中，记录心搏曲 线时，曲线的密度代表
心肌收缩的强弱
12
在离体蛙心灌流实验中，记录心搏曲 线时，曲线的基线代表
心肌收缩的强弱
心跳节律 心跳节律
心跳频率 心跳频率
心室舒张的程度 心室舒张的程度
E 5
静脉窦 左主动脉上 任意部位均 可 β
β
β 以上均有可 能 HCO3以上均错误
在蛙心插管中滴加ACh引起心肌收缩力
4 的改变是ACh与心肌上哪种受体结合的 M
N
α
V
结果。
在蛙心插管中滴加肾上腺素引起心肌
不同离子对蛙离体心脏活动的影响
不同离子对蛙离体心脏活动的影响08科2摘要：本次实验采用用蛙类斯氏离心心脏灌流法，采用1%、2%、4%三种不同浓度的钾、钠、钙溶液分别进行灌流实验。
结果表明：高浓度的氯化钠能够使心脏收缩和舒张的幅度均减小，但心脏频率基本山不变；KCl使蛙心活动减弱，甚至停在基线处。
并且浓度越大，减弱越快，基线越往上移动；氯化钙使蛙心收缩力和舒张增强，心率明显加快，且浓度越大影响越明显。
关键字：蛙心灌流不同离子浓度心脏活动影响前言蛙心离体后，用理化因素类似于两栖类动物血浆的任氏液灌注时，在一定时间内，仍保持有节律的舒缩活动，而改变灌流液的理化性质后，心脏的节律性舒缩活动亦随之改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持正常心脏活动的必要条件。
心脏的主要功能是兴奋和收缩。
兴奋以离子为基础，因此细胞外或血浆内的离子浓度变化对心脏有重要影响，其中钾钠钙最为重要。
因而，我们设计不同浓度的钾、钠、钙溶液对心脏进行灌流的实验。
初步研究这三种离子对心脏兴奋性的影响，以期加深对心脏正常功能的了解和初步探讨异常功能的形成原理。
1、实验材料和方法1.1【材料】1.1.1实验动物：蛙1.1.2实验器材：生物机能系统或BL-420生物信号采集系统，张力换能器，探针，外科剪，小手剪，烧杯，滴管，蛙心套管，蛙心夹，铁支架，试管夹，眼科镊，丝线，双凹夹，蛙板，蛙足钉等。
1.1.3实验药品：任氏液，氯化钠（1%，2%，4%），氯化钙（1%，2%，4%），氯化钾（1%，2%，4%），生理盐水等。
1.2【方法】（1）取蟾蜍1只，使头向下，将蛙针于枕骨大孔处向前插入颅腔左右摇动，破坏脑组织，再将针插入脊椎管，以破坏脊髓，动物全身软瘫。
（2）仰位固定于蛙板上，先用普通剪刀将胸部皮肤剪开，再将胸部肌肉及软骨剪去，用虹膜剪剪破心包膜暴露心肌。
（3）于主动脉干以下绕一线，左右放平，备结扎用。
在主动脉右侧分支下，再穿一线，尽量在远心端扎紧，左手提线，右手以眼科剪于左主动脉上向心剪一Ｖ形切口，将盛有任氏液的蛙心套管，通过主动脉球转向左后方，同时用镊子轻提动脉球，向插管移动的反方向拉，即可使插管尖端顺利进入心室，用主动脉干下的线结扎固定。
生理学实验报告蛙心灌流
生理学实验报告-蛙心灌流————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期:ﻩ蛙类离体心脏灌流一、【目的要求】1、学习离体蛙心灌流法。
2、观察Nａ＋,K+,Ｃa2+及肾上腺素(Adｒ),乙酰胆碱（ＡCｈ)，乳酸对离体心脏活动的影响。
二、【原理】将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩,心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分,观察其对心脏活动的作用。
心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。
外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。
三、【实验仪器】青蛙、常用手术器械、蛙板（或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。
套管夹、0．６5％ＮaＣl、２％ＣａＣl2、1%KCl、１：1０000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。
四、【方法与步骤】１、斯氏蛙心插管法(１)一只青蛙,双毁髓后背位置于蜡盘中,按前面的方法暴露心脏。
仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。
在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时,结扎位置可靠上些)。
再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。
左手提起主动脉上的结扎线,右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。
选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。
当套管尖端到达动脉圆锥基部时,应将套管稍稍后退,使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进,经主动脉瓣插入心室腔内（于心室收缩时插入,但不可插得过深,以免心室壁堵住套管下口)。
离体蛙心灌流及某些离子、药物 对离体蛙心活动的影响
离体蛙心灌流及某些离子、对离体蛙心活动的影响perfusion of frog’s heart 主要内容相关理论知识实验部分实验目的实验对象实验仪器与药品实验步骤结果分析与讨论相关理论知识正常的蛙心能按静脉窦的节律性自动产生兴奋，心脏的自动节律性活动，需要有一个合适的理化环境。
蟾蜍心脏离体后，用任氏液灌流，在一定时间内仍能保持节律性兴奋和收缩活动。
由于心脏的正常活动还有赖于内环境因素的相对稳定，改变灌流液的成分可引起心脏活动的改变。
相关理论知识心肌细胞的生理特性表现为：自动节律性、兴奋性、传导性和收缩性。
心肌细胞外离子浓度的变化和因体内生物活性物质（如激素）引起的细胞膜离子通透性的改变，对心肌细胞的生物电活动和生理特性必然会产生明显的影响。
相关理论知识影响心肌细胞电生理特性的原因 1.心肌的自动节律性（1）最大复极电位与阈电位的差距（2）4期自动除极速度 2.心肌的兴奋性（1）静息电位水平：依赖于细胞外K浓度（2）Na通道的性状相关理论知识影响心肌细胞电生理特性的原因 3.心肌的传导性主要取决于动作电位0期除极速度和幅度 4.心肌的收缩性依赖于细胞外钙离子浓度相关理论知识离子对心脏活动的影响钾离子K参与心肌细胞的复极化和自律细胞的4期自动去极化过程，其改变不仅取决于细胞内外K浓度梯度，还与细胞膜对K通透性有关，因此其影响是多方面的相关理论知识离子对心脏活动的影响钙离子 Ca2对Na内流存在竞争抑制作用，称膜屏障作用，对静息电位无影响。
Ca2o ↑，可使心肌细胞的兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。
相关理论知识迷走神经和乙酰胆碱迷走神经兴奋时，节后纤维释放Ach激动心肌细胞膜上M型胆碱受体，产生负性变力、负性传导、负性变时等效应。
心交感神经与去甲肾上腺素心交感神经节后纤维释放的递质是去甲肾上腺素，激动心肌细胞膜上的受体，产生正性变力、正性传导、正性变时等效应。
实验目的1.本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法。
离子及药物对离体蛙心脏活动得影响
一实验目的1、学习制备离体蛙心脏及离体心脏灌流的方法。
2、观察钠离子、钾离子、钙离子3种离子，去甲肾上腺素、乙酰胆碱、温度、酸碱度等因素对心脏活动的影响。
3、通过实验使学生初步对递质、受体、受体兴奋剂及受体阻断剂的概念有所感知。
二实验原理心脏正常的节律性活动必须在适宜的理化环境中进行，一旦适宜的环境被破坏，例如酸碱度及离子浓度的急剧改变等，心脏的活动就会受到影响。
在整体内，心脏的活动受自主神经的双重支配，交感神经兴奋时，其末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力量增强，心率加快；而迷走神经兴奋时，其末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力量减弱，心率减慢。
强心甙类药物能够增强心肌收缩能力，减慢心率。
青蛙心脏离体后，用理化特性近似于血浆的任氏液灌流，在一定时间内，可保持其比较稳定的节律性收缩和舒张。
改变任氏液的组成成分，如改变Na+﹑K+﹑Ca2+ 的浓度及酸﹑碱度等，心脏跳动的频率和幅度就会发生相应的改变。
当血钾离子过高时，心肌兴奋性、自律性、传导性和收缩性均降低，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。
而血钙离子升高时，心肌收缩力增强，但过高时可使心室停搏于收缩期。
而血钙离子降低时，心肌收缩力减弱。
血钠离子轻微变化对心肌影响不明显，只有发生明显变化时才会影响心肌的生理特性，钠离子剧烈升高时心脏的兴奋性和自律性虽升高，但兴奋的传导性和收缩性却下降，严重时可使心脏停搏于舒张期。
三使用仪器、材料1、实验仪器：生物信号采集处理系统，张力换能器，小动物手术器械，蛙板，细线，滴管，烧杯，蛙心夹，蛙心插管，滴管，万能支架等2、实验材料：0.4%肝素-任氏液插管用，任氏液，0.65%氯化钠，2%氯化钙，1%氯化钾，1%乳酸，2.5%碳酸氢钠，1：10000肾上腺素，1：10000乙酰胆碱，1：5000阿托品等溶液四. 实验步骤1、双毁髓法处死青蛙2、蛙类离体心脏制备3、实验装置连接4、记录不同离子及药物对心脏收缩的影响先描记正常的蛙心搏动曲线作为对照，注意观察心搏频率、心室的收缩和舒张程度。
离体蛙心-灌流和影响
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.蛙心插管 1.2 在主动脉根部剪一 斜口，将插管插入动脉 圆锥， 在心室收缩时 将插管插入心室，结扎 固定。
实验步骤
二、连接仪器和装置
1.用试管夹将蛙心管固定 在铁支架上
2.把张力换能器固定铁支 架支台上，在心室舒张期 将与换能器相连的蛙心夹 夹在心尖上。
用，对静息电位无影响。 [Ca2+]o ↑，可使心肌细 胞的兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。
相关理论知识
迷走神经和乙酰胆碱
迷走神经兴奋时，节后纤维释放Ach,激动心肌 细胞膜上M型胆碱受体，产生负性变力、负性传导、 负性变时等效应。
心交感神经与去甲肾上腺素
心交感神经节后纤维释放的递质是去甲肾上 腺素，激动心肌细胞膜上的ß受体，产生正性变 力、正性传导、正性变时等效应。
曲线幅度 —— 收缩的程度 曲线疏密 —— 心率 曲线基线 —— 舒张的程度
观察项目
二、观察离子、药物和酸碱的影响 1)更换任氏液为3%氯化钙溶液1～2滴，记录心率 和收缩幅度，冲洗（下同） 2)滴加1～2滴1%氯化钾溶液 3)滴加1～2滴1：10000去甲肾上腺素溶液 4)滴加1～2滴1：10000肾上腺素溶液 5)滴加1～2滴1：10000 乙酰胆碱溶液 6)滴加1～2滴 2.5%碳酸氢钠溶液 7)滴加1～2滴3%乳酸溶液
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因
1.心肌的自动节律性
（1）最大复极电位与阈电位的差距 （2）4期自动除极速度
2.心肌的兴奋性
（1）静息电位水平：依赖于细胞外K+浓度 （2）Na+通道的性状
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因
离子与药物对离体蛙类心脏活动的影响
人体生理学实验实验名称离子与药物对离体蛙类心脏活动的影响一、结构式摘要目的：1.学习斯氏离体蛙心灌流的方法（Straub氏法）2．观察Na+ K+ Ca+、肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
原理及方法：心脏的正常节律性活动必须在适宜的理化环境里才能维持，一旦适宜的理化环境被干扰或破坏，心脏活动就会受到影响。
故当其离体后，通过蛙心套管向其提供灌流液，可以保持心脏的机能活动。
通过改变灌流液中各种离子的浓度或加入不同的药物，可以直接观察到各种离子、神经递质或药物等因素对心脏活动的强度和频率的影响。
结果：用5g/L NaCl溶液灌注蛙心时出现心跳减弱现象；用10g/LKCl溶液灌注蛙心时，出现心跳减弱现象；加20g/L CaCL2后，离体蛙心收缩力增强，滴加肾上腺素后，蛙心收缩增强，滴加乙酰胆碱后，蛙心活动减弱。
二、材料实验设备及材料：牛蛙、RM6240C多道生理信号采集处理系统、张力换能器（量程25g）、万能滑轮、常用手术器械、蛙心插管、蛙心夹、套管夹、试管夹、蛙溶液、10g/LKCl溶液、0.1g/L 板、滴瓶、任氏液、5g/LNaCl溶液、20g/L CaCl2肾上腺素溶液、1g/L乙酰胆碱溶液。
仪器参数：通道时间常数为直流，滤波频率10HZ，灵敏度3g，采样频率400Hz，扫描速度1s/div。
二、观察项目及结果描述说明:Na+使蛙心活动的心率减小，振幅减小；Ca+使蛙心活动的心率减小，振幅变大，直至停止。
K+使蛙心活动的心率减小，振幅减小，直至停止；肾上腺素使蛙心活动的心率增大，振幅增大；乙酰胆碱使蛙心活动的心率减小，振幅减小，直至停止。
几种离子和药物对离体蛙心活动的影响的截图正常情况：Na+Ca+K+肾上腺素乙酰胆碱四、讨论影响实验结果的主要干扰因素：1、当某种干扰因素（尤其是抑制心脏活动的药物）作用已明显时，没有立即换洗，使心肌受损。
影响接下来的实验。
改进方法是：即使换任氏液。
2、换洗任氏液后，没有待心脏恢复正常，就加了下一种离子，以致影响实验结果。
生理学实验报告-蛙心灌流
蛙类离体心脏灌流一、【目的要求】1、学习离体蛙心灌流法。
2、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh),乳酸对离体心脏活动的影响。
二、【原理】将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。
心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。
外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。
三、【实验仪器】青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。
套管夹、0．65％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。
四、【方法与步骤】1、斯氏蛙心插管法（1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。
仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。
在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。
再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。
左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。
选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。
当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。
此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。
用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。
离体蛙心灌流
实验一离体蛙心灌流（八木氏）一、目的在维持离体心脏循环的条件下，观察不同的阳离子（Na+、K+、Ca2+）；酸、碱及肾上腺素，乙酰胆碱等神经递质对心脏活动的影响，同时记录心输出量与心率的变化。
二、原理心脏离体后，如用人工灌流法保持其新陈代谢的顺利进行，则心脏仍能有节律地自动收缩和舒张，且可维持较长的时间。
离体心脏活动所需的灌流液。
应同动物内环境一致改变灌流液的成分，则可引起心脏活动的改变。
三、实验用品蛙（蟾蜍）、蛙心夹、蛙板、蛙心套管、常规手术器械（蛙）、试管夹、双凹夹、铁支架、小烧杯、滴管、张力换能器。
D-95生理记录系统、任氏液、5%NaCl、l%KCl、1%CaCl2、0.01%肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、3%乳酸、2.5%NaHCO3、滴管、棉球、棉线等。
四、方法与步骤（一）离体蛙心的制备1、暴露心脏取青蛙（或蟾蜍）一只，用蛙针从枕骨大孔插入破坏延髓后，仰卧固定于蛙板上，依次剪开胸前区皮肤和肌肉。
开胸暴露心脏。
然后用镊子提起心包膜，再用虹膜剪刀将其剪破，使心脏完全暴露出来。
2、蛙心插管用蛙心夹在心舒张期夹住心室尖。
将心脏轻轻提起，辨认与心脏相连的诸血管。
出入蛙心脏的血管共有九条（左主动脉、右主动脉、左、右前腔静脉、后腔静脉，左、右肺静脉，左、右肝静脉）然后将蛙心夹之连线用胶泥（或胶布）固定在蛙板上，以便操作。
用虹膜剪将连在左肝静脉上的心包膜剪去（注意：不要损伤静脉窦）。
用镊子将已浸湿任氏液的一条线穿过左肝静脉的下方，用另一条线穿过左主动脉下面，尽量向远端结扎，并结扎除左主动脉及左肝静脉外的全部血管。
左主动脉做输出管（动脉插管）。
左肝静脉做输入管（静脉管）插管。
首先用小镊子提起左肝静脉，用虹膜剪刀朝向心端剪一“V”型切口，把盛有任氏液的蛙心静脉从此插入，注意勿损伤静脉窦。
用线结扎固定。
冲洗心脏，洗净余血。
再翻正心脏，在左主动脉上离动脉圆锥1厘米处，朝向心端剪一“V”形切口，将蛙心动脉插管插入，用线结扎固定。
离体蛙心灌流及某些离子药物对离体蛙心活动影响
实验结果
实验项目
任氏液 2% CaCl2 1% KCl 1：10000 E 1：10000 Ach 2.5% NaHCO3
3% 乳酸
收缩强度 处理前 处理后
心率 处理前 处理后
结果分析与讨论
1.任氏液：正常对照 2. 3%CaCl2灌流： [Ca2+ ]o ↑
Ca2+内流↑ [Ca2+]i↑
兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
结果分析与讨论
3. 1%KCl灌流： [K+ ]o↑
AP平台期缩短 Ca2+内流↓
兴奋-收缩耦联↓
收缩力↓
结果分析与讨论
4. 1:10000 E灌流 与心肌β1受体结合 cAMP Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑
兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
4期 If 、I CaT通道↑ 4期自动去极速度↑
曲线幅度 —— 收缩的程度 曲线疏密 —— 心率 曲线基线 —— 舒张的程度
观察项目
二、观察离子、药物和酸碱的影响 1)更换任氏液为3%氯化钙溶液1～2滴，记录心率 和收缩幅度，冲洗（下同） 2)滴加1～2滴1%氯化钾溶液 3)滴加1～2滴1：10000去甲肾上腺素溶液 4)滴加1～2滴1：10000肾上腺素溶液 5)滴加1～2滴1：10000 乙酰胆碱溶液 6)滴加1～2滴 2.5%碳酸氢钠溶液 7)滴加1～2滴3%乳酸溶液
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影响心肌细胞电生理特性的原因
1.心肌的自动节律性
（1）最大复极电位与阈电位的差距 （2）4期自动除极速度
2.心肌的兴奋性
（1）静息电位水平：依赖于细胞外K+浓度 （2）Na+通道的性状
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离体蛙心灌流及某些离子
心交感神经与去甲肾上腺素
心交感神经节后纤维释放的递质是去甲肾上 腺素，激动心肌细胞膜上的ß受体，产生正性变 力、正性传导、正性变时等效应。
实验目的
1.本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法。
2.用离体蛙心灌流的方法观察：
① K+、Ca2+ ② 酸、碱度 ③ 肾上腺素（E）
乙酰胆碱（Ach）
对心脏活动的影响
心肌的收缩性依赖于细胞外钙离子浓度影响心肌细胞电生理特性的原因离子对心脏活动的影响钾离子k参与心肌细胞的复极化和自律细胞的4期自动去极化过程其改变不仅取决于细胞内外k浓度梯度还与细胞膜对k通透性有关因此其影响是多方面的离子对心脏活动的影响钙离子ca内流存在竞争抑制作用称膜屏障作用对静息电位无影响
离体蛙心灌流及某些离子、药物 对离体蛙心活动的影响
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离子对心脏活动的影响
钙离子 Ca2+对Na+内流存在竞争抑制作用，称膜屏障作 用，对静息电位无影响。 [Ca2+]o ↑，可使心肌细 胞的兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。
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迷走神经和乙酰胆碱
迷走神经兴奋时，节后纤维释放Ach,激动心肌 细胞膜上M型胆碱受体，产生负性变力、负性传导、 负性变时等效应。
碳酸氢钠 乳酸
7. 3%乳酸灌流 H+与Ca2+竞争肌钙蛋白， Ca2+不能与肌钙蛋白结 合，心肌收缩力↓。
思考题
通过本次实验结果，分析离子、药物和递对 心搏曲线有什么影响？为什么？来自（2）4期自动除极速度
2.心肌的兴奋性
（1）静息电位水平：依赖于细胞外K+浓度 （2）Na+通道的性状
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影响心肌细胞电生理特性的原因
实验七 蛙类离体心脏灌流实验
实验七蛙类离体心脏灌流一．目的要求：1．学习掌握离体蛙心灌流法；2．观察Na+、K+、Ca+及肾上腺素、乙酰胆碱等对离体心脏活动的影响。
二．基本原理：心肌具有自动节律性收缩活动的特性，可用人工灌流的方法研究心脏活动的规律及其特点，还可通过改变灌流液的成分或加入某些药物来观察其对心脏活动的影响。
三．动物、器材和试剂：1．动物：蟾蜍2．器材：常有手术器械、蛙心夹、蛙心插管、张力换能器、滑轮、蛙盘、滴管、烧杯。
3．试剂：任氏液、5％NaCl溶液、2％CaCl2溶液、1％KCl溶液、1:100000肾上腺素溶液、1:100000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液。
四．方法与步骤：1．双毁髓，将蟾蜍固定于蜡盘；2．暴露心脏，分离心脏周围的大血管。
在左主动脉下方穿一线，距动脉圆锥2~3mm 处结扎。
再从左、右两主动脉下方穿一线，打一活结备用。
在前、后腔静脉下穿一线，结扎，保留静脉窦。
用眼科剪在动脉圆锥前端，沿向心方向剪一斜口，然后将盛有少量任氏液－肝素溶液的蛙心插管由此开口处插入动脉圆锥。
当插管尖端到达动脉圆锥基部时，应稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内（可用另一只手轻轻捏住心室，感觉插入位置，不可插得过深，以免心壁堵住插管尖端）。
3．用滴管吸去套管中的血液，更换新的任氏液。
提起打活结的备用线，将左右主动脉连同插入的插管扎紧，再将连线固定于插管的小钩上。
剪断结扎线以外的血管及所有牵连的组织，将心脏离体。
用任氏液反复冲洗心室内余血，使灌流液不再有血液，至心室发白。
加入一定高度的任氏液，标记。
4．用蛙心夹夹住心室尖，接滑轮，固定于张力感受器。
5．连接仪器，调整初长度，开始实验。
在任氏液中加入几滴5％NaCl溶液，观察曲线变化，当曲线出现明显变化时，立即吸去灌洗液，用任氏液反复冲洗，至曲线恢复正常。
加任氏液至标记高度。
同法做CaCl2、KCl、肾上腺素、乙酰胆碱，记录。
五．注意事项：1．插入时应注意方向，不能用力过大，也不可强硬插入；2．插管时要防止凝血，需互相配合；3．扎插管时应扎紧，防止实验时滑出；4．液面高度应保持一致；5． 加药时应有前后对照；6． KCl 、乙酰胆碱的影响较剧烈，应注意快速清除。
生物学实验离体蛙心灌流
乙酰胆碱：与心肌细胞的M2受体结合，产生负性变时、变力和变传导效ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
实验原理 自律细胞：组成特殊传导系统的心肌细胞
肾上腺素：主要与心肌的β1受体结合，产生正性变时、变力和变传导效应。 观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
另一方面，心脏正常的节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，所以，改变灌流液的成分，则可以引起心脏活动的改变。
斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.
制备蛙心标本时，勿伤静脉窦；
RP或MDP与阈电位之差
具体作用机制见《大学生工理学作》P2细36~2胞39、：P248普通的具有收缩能力的心肌细胞
肾上腺素：主要与心肌的β1受体结合，产生正性变时、变力和变传导效应。
制备蛙心标本时，勿伤静脉窦；
心率：自律细胞4期自动除极速度
固定套管并用任氏液换洗血液；
斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.
工作细胞：普通的具有收缩能力的心肌细胞
动物与器材
牛蛙 斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任
制备蛙心标本时，勿伤静脉窦； 各溶液作用一旦出现，应立即用新鲜任氏液
换洗，以免心肌受损，而且待心跳恢复正常 后方能进行下一步实验； 蛙心插管内液面应保持恒定； 每次更换或滴加溶液必须做标记；
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离体蛙心灌流
实验目的
学习离体蛙心灌流的方法； 观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的
影响。 观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏
活动的影响。
实验原理
作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动 产生兴奋。因此，只要将离体失去神经支配 的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间被 仍能产生节律性兴奋和收缩。
蛙心灌流试验
相关理论知识
离子对心脏活动的影响
钙离子 Ca2+对Na+内流存在竞争抑制作用，称膜屏障作 用，对静息电位无影响。 [Ca2+]o ↑，可使心肌细 胞的兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。
相关理论知识
迷走神经和乙酰胆碱
迷走神经兴奋时，节后纤维释放Ach,激动心肌 细胞膜上M型胆碱受体，产生负性变力、负性传导、 负性变时等效应。
实验步骤
二、连接仪器和装置
1.用试管夹将蛙心管固定 在铁支架上 2.把张力换能器固定铁支 架支台上，在心室舒张期 将与换能器相连的蛙心夹 夹在心尖上。
注意事项
1.蛙心插管内液面勿过高或过低，每次换液时，必 须用任氏液冲洗3次。 2.每次加药，心搏曲线出现变化后立即将插管内液 体吸出。 3.随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。 4.换能器头端应向下倾斜以免液体进人换能器。 5.各种试剂的滴管不要混淆,以免影响实验结果。
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.观察心脏的解剖结构
（腹面）
（背面）
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.蛙心插管 1.1 在主A干下穿一线打一 松结；在左主A下再穿一 线结扎。
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.蛙心插管
1.2 在主动脉根部剪一
斜口，将插管插入动脉
圆锥， 在心室收缩时
将插管插入心室，结扎 固定。
离体蛙心灌流及某些离子、药物 对离体蛙心活动的影响
(perfusion of frog’s heart)
主要内容
相关理论知识 实验部分
实验目的
实验对象 实验仪器与药品 实验步骤
结果分析与讨论
相关理论知识
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主要内容
相关理论知识 实验部分
实验目的 实验对象 实验仪器与药品 实验步骤
结果分析与讨论
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因
1.心肌的自动节律性
（1）最大复极电位与阈电位的差距 （2）4期自动除极速度
2.心肌的兴奋性
（1）静息电位水平：依赖于细胞外K+浓度 （2）Na+通道的性状
观察项目
一、描记正常心搏曲线
曲线幅度 —— 收缩的程度 曲线疏密 —— 心率 曲线基线 —— 舒张的程度
观察项目
二、观察离子、药物和酸碱的影响 1)更换任氏液为3%氯化钙溶液1～2滴，记录心率 和收缩幅度，冲洗（下同） 2)滴加1～2滴1%氯化钾溶液 3)滴加1～2滴1：10000去甲肾上腺素溶液 4)滴加1～2滴1：10000肾上腺素溶液 5)滴加1～2滴1：10000 乙酰胆碱溶液 6)滴加1～2滴 2.5%碳酸氢钠溶液 7)滴加1～2滴3%乳酸溶液
收缩力↑
结果分析与讨论
3. 1%KCl灌流： [K+ ]o↑
AP平台期缩短 Ca2+内流↓
兴奋-收缩耦联↓
收缩力↓
结果分析与讨论
4. 1:10000 E灌流 与心肌β1受体结合 cAMP Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑
ห้องสมุดไป่ตู้兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
4期 If 、I CaT通道↑ 4期自动去极速度↑
相关理论知识
离子对心脏活动的影响
钙离子 Ca2+对Na+内流存在竞争抑制作用，称膜屏障作
用，对静息电位无影响。 [Ca2+]o ↑，可使心肌细 胞的兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。
相关理论知识
迷走神经和乙酰胆碱
迷走神经兴奋时，节后纤维释放Ach,激动心肌 细胞膜上M型胆碱受体，产生负性变力、负性传导、 负性变时等效应。
实验步骤
二、连接仪器和装置
1.用试管夹将蛙心管固定 在铁支架上
2.把张力换能器固定铁支 架支台上，在心室舒张期 将与换能器相连的蛙心夹 夹在心尖上。
注意事项
1.蛙心插管内液面勿过高或过低，每次换液时，必 须用任氏液冲洗3次。
2.每次加药，心搏曲线出现变化后立即将插管内液 体吸出。
3.随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。 4.换能器头端应向下倾斜以免液体进人换能器。 5.各种试剂的滴管不要混淆,以免影响实验结果。
自律性↑ 心率↑
结果分析与讨论
5. 1:10000 Ach灌流 与心肌M受体结合 K+外流↑, Ca2+内流↓ [Ca2+]i↓ E-C耦联↓ 收缩力↓
最大复极电位↑ 4期K+外流↑
自律性↓
心率↓
结果分析与讨论
6. 2.5％NaHCO3 灌流 中和H+，Ca2+与肌钙蛋白
结
碳酸氢钠 乳酸
合，心肌收缩力恢复。
7. 3%乳酸灌流
H+与Ca2+竞争肌钙蛋白， Ca2+不能与肌钙蛋白结
合，心肌收缩力↓。
思考题
通过本次实验结果，分析离子、药物和递对 心搏曲线有什么影响？为什么？
心交感神经与去甲肾上腺素
心交感神经节后纤维释放的递质是去甲肾上 腺素，激动心肌细胞膜上的ß受体，产生正性变 力、正性传导、正性变时等效应。
实验目的
1.本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法。
2.用离体蛙心灌流的方法观察：
① K+、Ca2+ ② 酸、碱度 ③ 肾上腺素（E）
乙酰胆碱（Ach）
对心脏活动的影响
实验结果
实验项目
任氏液 2% CaCl2 1% KCl 1：10000 E 1：10000 Ach 2.5% NaHCO3
3% 乳酸
收缩强度 处理前 处理后
心率 处理前 处理后
结果分析与讨论
1.任氏液：正常对照 2. 3%CaCl2灌流： [Ca2+ ]o ↑
Ca2+内流↑ [Ca2+]i↑
兴奋-收缩耦联↑
实验对象 蟾蜍
实验仪器设备
RM6240生物采集系统 张力换能器 蛙类手术器械 蛙心插管 试管夹 缝合线 蛙心夹 铁支架 滴管
实验药品
任氏液 l％KCl 3％CaC12 l：10,000 E l：10,000 ACh 3％乳酸 2.5％NaHCO3
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.破坏脑和脊髓 2.暴露心脏
相关理论知识
影响心肌细胞电生理特性的原因
3.心肌的传导性
主要取决于动作电位0期除极速度和幅度
4.心肌的收缩性
依赖于细胞外钙离子浓度
相关理论知识
离子对心脏活动的影响
钾离子
K+参与心肌细胞的复极化和自律细胞的4期自动 去极化过程，其改变不仅取决于细胞内外K+浓 度梯度，还与细胞膜对K+通透性有关，因此其 影响是多方面的
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.观察心脏的解剖结构
（腹面）
（背面）
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.蛙心插管 1.1 在主A干下穿一线打一
松结；在左主A下再穿一 线结扎。
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.蛙心插管 1.2 在主动脉根部剪一 斜口，将插管插入动脉 圆锥， 在心室收缩时 将插管插入心室，结扎 固定。