2014年高考生物专题复习——PCR技术
高三生物pcr技术复习试题.doc
高三生物PCR技术复习试题一、知识回顾聚合酶链反应法(PCR法)：PCR技术可模拟细胞核内DNA复制的天然过程，可在3～4h内使目的基因扩增上百万倍，达到肉眼可见的量，不需要放射性同位素标记就能分析、检测基因，大大提高了基因检测的灵敏度。
具体过程：首先，把DNA加热，使双链分开；然后将人工合成的一段单链核苷酸即DNA引物，黏附到DNA单股螺旋上；之后按照引物就能够复制出DNA来，重复放大50次后就可以制成10亿个基因。
在PCR放大过程中的关键是利用耐热DNA聚合酶使少量的DNA在短期内即能扩增数百万倍，便于分析、检测。
二、试题精练1、PCR技术是一种DNA的扩增技术。
在一定条件下，加入模板DNA、DNA聚合酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP可以实现DNA的扩增。
据此判断不合理的是A．dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作DNA合成的原料B．dTTP完全水解后产物有胸腺嘧啶、磷酸、核糖C．DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板DNA解旋D．CTP水解脱去两个磷酸基后是组成RNA的基本单位之一２、多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。
PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。
下列有关PCR过程的叙述中不正确的是：（）A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成C．延伸过程中需要DNA聚合酶、A TP、四种核糖核苷酸D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高3、下列有关PCR技术的叙述，不正确的是：（）A．PCR技术经过变形、复性、延伸三个阶段B．PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等C．PCR技术需在体内进行D．PCR技术是利用碱基互补配对的原则4、PCR技术扩增DNA,需要的条件是( )①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA ⑥核糖体A、①②③④B、②③④⑤C、①③④⑤D、①②③⑥5、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入PCR仪中扩增4代，那么，在PCR仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少应是A．640 B．8100 C．600 D．86406、对禽流感的确诊，先用PCR技术将标本基因大量扩增，然后利用基因探针，测知待测标本与探针核酸的碱基异同。
高三生物pcr技术复习试题
高三生物PCR技术复习试题一、知识回顾聚合酶链反应法(PCR法)：PCR技术可模拟细胞核内DNA复制得天然过程，可在3～4h内使目得基因扩增上百万倍，达到肉眼可见得量，不需要放射性同位素标记就能分析、检测基因，大大提高了基因检测得灵敏度。
具体过程：首先，把DNA加热，使双链分开；然后将人工合成得一段单链核苷酸即DNA引物，黏附到DNA单股螺旋上；之后按照引物就能够复制出DNA来，重复放大50次后就可以制成10亿个基因。
在PCR放大过程中得关键就是利用耐热DNA聚合酶使少量得DNA在短期内即能扩增数百万倍，便于分析、检测。
二、试题精练1、PCR技术就是一种DNA得扩增技术。
在一定条件下，加入模板DNA、DNA聚合酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP 可以实现DNA得扩增。
据此判断不合理得就是A．dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作DNA合成得原料B．dTTP完全水解后产物有胸腺嘧啶、磷酸、核糖C．DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温得方法破坏氢键，使模板DNA解旋D．CTP水解脱去两个磷酸基后就是组成RNA得基本单位之一２、多聚酶链式反应（PCR）就是一种体外迅速扩增DNA片段得技术。
PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新得脱氧核苷酸链）。
下列有关PCR过程得叙述中不正确得就是：（）A．变性过程中破坏得就是DNA分子内碱基对之间得氢键，也可利用解旋酶实现B．复性过程中引物与DNA模板链得结合就是依靠碱基互补配对原则完成C．延伸过程中需要DNA聚合酶、A TP、四种核糖核苷酸D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶得最适温度较高3、下列有关PCR技术得叙述，不正确得就是：（）A．PCR技术经过变形、复性、延伸三个阶段B．PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等C．PCR技术需在体内进行D．PCR技术就是利用碱基互补配对得原则4、PCR技术扩增DNA,需要得条件就是( )①目得基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA ⑥核糖体A、①②③④B、②③④⑤C、①③④⑤D、①②③⑥5、在基因工程中，把选出得目得基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入PCR仪中扩增4代，那么，在PCR仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸得个数至少应就是A．640 B．8100 C．600 D．86406、对禽流感得确诊，先用PCR技术将标本基因大量扩增，然后利用基因探针，测知待测标本与探针核酸得碱基异同。
2014北京高考真题生物(含解析)
2014年普通高等学校招生全国统一考试理科综合生物试题（北京卷）一、选择题1.蓝细菌(蓝藻)与酵母菌的相同之处是（）A．都有拟核B. 均能进行有氧呼吸C. 都有线粒体D.均能进行光合作用2.在我国北方，游泳爱好者冬泳入水后，身体立即发生一系列生理反应，以维持体温恒定。
此时，机体不会发生的反应是（）A．兴奋中枢神经系统，加强肌肉收缩B.通过反射活动引起皮肤毛细血管收缩C. 通过神经调节减少汗腺分泌D.抑制垂体活动导致甲状腺激素分泌减少3.比较生物膜和人工膜(双层磷脂)对多种物质的通透性.结果如右图，据此不能得出的推论是（）A.生物膜上存在着协助H2O通过的物质B.生物膜对K+、Na+、Cl-的通透具有选择性C.离子以易化（协助）扩散方式通过人工膜D.分子的大小影响其通过人工膜的扩散速率4.为控制野兔种群数量,澳洲引入一种主要由蚊子传播的兔病毒。
引入初期强毒性病毒比例最高，兔被强毒性病毒感染后很快死亡，致兔种群数量大幅下降。
兔被中毒性病毒感染后可存活一段时间，几年后中毒性病毒比例最高，兔种群数量维持在低水平。
由此无法推断出（）A.病毒感染对兔种群的抗性具有选择作用B.毒性过强不利于维持病毒与兔的寄生关系C.中毒性病毒比例升高是因为兔抗病毒能力下降所致D.蚁子在兔和病毒之间的协同(共同)进化中发挥了作用5. 在25℃的实验条件下可顺利完成的是（）A.光合色素的提取与分离B. 用斐林（本尼迪特)试剂鉴定还原糖C.大鼠神经细胞的培养D.制备用于植物组织培养的固体培养基二、非选择题29. (18分)为研究赤霉素(GA5)和生长素(IAA)对植物生长的影响，切取菟丝子茎顶端2.5cm长的部分(茎芽)。
置于培养液中无菌培养(图分为三组，分别培养至第1、8、15天，每组再用适宜浓度的激素处理30天，测量茎芽长度。
结果见图2：（1）植物激素是植物细胞之间传递________的分子。
（2）本实验中，试管用滤膜封口是为了在不影响________通过的情况下起到________的作用。
【课件】高三生物一轮复习课件微专题——PCR技术
。
图2中4次PCR对引物的使用不完全相同，如PCR1选择引物
A和B，PCR2选引物C和D，请问PCR3和PCR4应分别如何
选择引物： 不使用引物、
引物A和D 。
（2）该技术生产出来的蛋白A应属于 蛋白质 工程。
图1
图2
引物
扩增 特异性
扩增 高效性
发夹结构
二聚体
关于Taq酶（热稳定DNA聚合酶）
（1）从水生栖热菌（生存环境温度可高达80℃)中分离出 来具有热稳定的DNA聚合酶。 （2）作用原理：将脱氧核苷酸连接到引物的3’端，形成 磷酸二酯键。 （3）真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活， 因此PCR反应缓冲液中一般要加Mg2+。
关于PCR引物设计原则
PCR的首要任务就是引物设计。引物设 计的好坏，直接影响了PCR的结果。成 功的PCR反应既要高效，又要特异性扩 ①增引产物物长。度要适宜，通常为20-30个核苷酸
②引物GC含量要适宜，一般为45-55% ③退火温度要适宜 ④引物自身及引物之间不应存在互补序列
⑤引物5'端可以修饰，3'端不可修饰
3-5：不同循环次数的 PCR产物
6：清水
缺点：只能作定性分析，不能准确定量。易造成污染出现假阳性， 使其应用受到限制。
例题：利用PCR可以在体外进行DNA片段的扩增，下列有关“DNA片段 的扩增及电泳鉴定”实验的相关叙述，错误的是 A.PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高
B. 设计引物时需考虑引物的长度、碱基序列和GC含量
√C. Taq酶的浓度过低会引起非特异性扩增产物量的增多
D. 目标DNA的获得取决于引物在模板DNA上的结合位置
高考生物总复习 第34讲 基因工程(包括pcr技术)课件
图2 (1)图中EcoRⅠ限制酶识别的碱基序列是 GAATTC ,切割位点在
G和A 之间;SmaⅠ限制酶识别的碱基序列是 CCCGGG ,切割 位点在 G和C 之间。 (2)以上实例说明限制酶具有 专一 性。
1.限制酶和DNA连接酶的关系
(1)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。 (2)限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序 列或识别序列已经被修饰。 (3)在获取目的基因和切割载体时通常用同一种限制酶,以获得相同的 黏性末端,但如果用两种不同限制酶切割后形成的黏性末端相同,在
③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,也可使用不同的限制
酶切割目的基因和质粒,如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶
(但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点)。
(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类。 ①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶一致,以确保产生相同的黏性 末端。 ②质粒作为载体必须具备标记基因等,所以所选择的限制酶尽量不要破
4.如图所示为pBR322质粒,其中ampr(氨苄青霉素抗性基因)和tetr(四环 素抗性基因)为标记基因,ori为复制原点,其他均为限制酶及其识别位点, 并且每种限制酶都只有一个。pBR322质粒是基因工程较常用的运载 体。回答下列相关问题:
(1)制备重组质粒,需要限制酶和 DNA连接 酶。如制备重组质粒时, 使用PvuⅠ切割该质粒,则检测目的基因是否导入受体细胞,需要在培养 基中添加 四环素 。
体考查
理与技术
(5)DNA的粗提取与鉴 (3)以鸡血为实验材料进行探究实验,掌握
定
DNA粗提取和鉴定的方法。
考点一 基因工程的操作工具
总 考点二 基因工程的基本操作
热点专题13PCR技术及其应用-2025年生物学高考总复习课件
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高考总复习·生物学
(5)结果分析。
①两条单链等长DNA(目的基因)从第三轮循环开始出现(甲、乙)。随循
环次数的增加，目的基因含量会不断增加。
②通过以上分析可知，PCR反应的产物不都是所需的目的基因片段，除
目的基因外，还会存在四种类型的DNA分子(这四种类型同第二轮循环
产生的4个DNA分子)。
量PCR(RT-PCR)检测法，技术流程如下图所示，①②③表示相关步骤。
请回答：
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(1)PCR技术与DNA体内复制过程相比，两者的复制方式都是___________。
半保留复制
RT-PCR过程中，需先以RNA为模板合成cDNA，故装置中需添加
逆转录
酶。
蛋白酶K能催化
(2)过程①中，RNA提取裂解液可同时灭活病毒，原因是_______________
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2.PCR的原理
(1)DNA分子的热变性原理。
当温度超过90 ℃时，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称
为变性。温度缓慢降低到50 ℃左右时，两条彼此分离的DNA链重新结合
成双链，这个过程称为复性。
DNA双链
DNA单链
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(2)耐高温的DNA聚合酶。
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热点专题13 PCR技术及其应用
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高考总复习·生物学
［热点归纳］
1.概念
PCR是聚合酶链式反应的缩写，它是一项根据DNA半保留复制原理，在
体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，迅速扩增DNA片段的技
术，它能以极少量的DNA为模板，在短时间内复制出上百万份的DNA。
高三生物pcr技术复习试题doc资料
高三生物PCR技术复习试题一、知识回顾聚合酶链反应法(PCR法)：PCR技术可模拟细胞核内DNA复制的天然过程，可在3～4h内使目的基因扩增上百万倍，达到肉眼可见的量，不需要放射性同位素标记就能分析、检测基因，大大提高了基因检测的灵敏度。
具体过程：首先，把DNA加热，使双链分开；然后将人工合成的一段单链核苷酸即DNA引物，黏附到DNA单股螺旋上；之后按照引物就能够复制出DNA来，重复放大50次后就可以制成10亿个基因。
在PCR放大过程中的关键是利用耐热DNA聚合酶使少量的DNA在短期内即能扩增数百万倍，便于分析、检测。
二、试题精练1、PCR技术是一种DNA的扩增技术。
在一定条件下，加入模板DNA、DNA聚合酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP可以实现DNA的扩增。
据此判断不合理的是A．dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作DNA合成的原料B．dTTP完全水解后产物有胸腺嘧啶、磷酸、核糖C．DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板DNA解旋D．CTP水解脱去两个磷酸基后是组成RNA的基本单位之一２、多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。
PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。
下列有关PCR过程的叙述中不正确的是：（）A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成C．延伸过程中需要DNA聚合酶、A TP、四种核糖核苷酸D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高3、下列有关PCR技术的叙述，不正确的是：（）A．PCR技术经过变形、复性、延伸三个阶段B．PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等C．PCR技术需在体内进行D．PCR技术是利用碱基互补配对的原则4、PCR技术扩增DNA,需要的条件是( )①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA ⑥核糖体A、①②③④B、②③④⑤C、①③④⑤D、①②③⑥5、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入PCR仪中扩增4代，那么，在PCR仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少应是A．640 B．8100 C．600 D．86406、对禽流感的确诊，先用PCR技术将标本基因大量扩增，然后利用基因探针，测知待测标本与探针核酸的碱基异同。
高中生物精品资源高三一轮复习生物：PCR技术及其应用课件
5 练习
5.在基因工程中，把选出的目的基因(共1 000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌 呤脱氧核苷酸460个)放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放 入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少是( )
A.540个 B.7 560个 C.8 100个 D.17 280个
6 小结
碱基互补配对
原则
DNA半保留复制 原理 PCR技术 过程 变性-复性-延伸
应用
扩增
敲除或增加基因 DNA鉴定 基因定位 基因测序 ……
录酶
DNA单链 cDNA DNA重组
返回
重叠延伸PCR第二轮：上一轮的产物分子作为本轮的引物
N基因的b链→ N基因的a链→
A3+Y↓ 5’ 3’
3’ 5’ A1+X↑
←N基因的b链 ←N基因的a链
4 PCR技术的应用
5.应用PCR技术进行基因敲除或增加基因 重叠延伸PCR第三轮：上一轮的产物作为本轮的模板
A1+X↑
A3+Y↓ A3+Y↓
5 练习
1.利用PCR扩增目的基因的过程中，子链延伸需要引物，有关引物 设计的说法错误的是( ) A.两种引物之间不能有互补性 B.每种引物自身不应存在互补性 C.设计引物时需要知道目的基因的全部碱基序列 D.引物的长度关系到PCR的特异性
2.三次循环后产生的DNA分子中，只含有一个引物的DNA分子有 几条？占DNA分子总数的几分之几？
B.3号样品为不含目的基因的载体DNA D.10号确定反应体系等对结果没有干扰
5 练习
4.如果要用PCR扩增以下DNA模板中的基因1，需要的一对引物序列是( ) 5′CTTCGAAATTC—基因1—TCTCCCGATCGG—基因2—ATCCTTTGCTCT3′
高三生物pcr技术复习试题
聚合酶链反应法（PCR法）:PCR技术可模拟细胞核内DNA复制的天然过程，可在3〜4h内使目的基因扩增上百万倍，达到肉眼可见的量，不需要放射性同位素标记就能分析、检测基因，大大提高了基因检测的灵敏度。
具体过程：首先，把DNA加热，使双链分开；然后将人工合成的一段单链核苷酸即DNA引物，黏附到DNA单股螺旋上；之后按照引物就能够复制出DNA来,重复放大50次后就可以制成10亿个基因。
在PCR放大过程中的关键是利用耐热DNA聚合酶使少量的DNA在短期内即能扩增数百万倍，便于分析、检测。
二、试题精练1、PCR技术是一种DNA的扩增技术。
在一定条件下，加入模板DNA DNA聚合酶、dATR dCTP dGTP dTTP可以实现DNA的扩增。
据此判断不合理的是A. dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作DNA合成的原料B. dTTP完全水解后产物有胸腺嘧啶、磷酸、核糖C. DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板DNA解旋D. CTP水解脱去两个磷酸基后是组成R NA的基本单位之一2、多聚酶链式反应（PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。
PCR过程一般经历下述三十多次循环：95C 下使模板DNA变性、解链T 55 C下复性（引物与DNA模板链结合）72C下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。
下列有关PCF 过程的叙述中不正确的是：（）A. 变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B•复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成C. 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP四种核糖核苷酸D. PCR与细胞内DNA M制相比所需要酶的最适温度较高3、下列有关PCR技术的叙述，不正确的是：（）A. PCR技术经过变形、复性、延伸三个阶段B. PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等C. PCR技术需在体内进行D. PCR技术是利用碱基互补配对的原则4、PCR技术扩增DNA需要的条件是（）①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA ⑥核糖体A、①②③④B、②③④⑤C、①③④⑤D①②③⑥5、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入PCF仪中扩增4代，那么，在PCR仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少应是A. 640B. 8100C. 600D. 86406、对禽流感的确诊，先用PCR技术将标本基因大量扩增，然后利用基因探针，测知待测标本与探针核酸的碱基异同。
考点80 PCR技术-高考生物考点练习解析
1．PCR原理（1）细胞内DNA复制条件条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料酶解旋酶DNA聚合酶打开DNA双螺旋催化合成DNA子链能量 ATP 为解螺旋和合成子链供能引物RNA 为DNA聚合酶提供合成的3’端起点（2）细胞内DNA复制过程①DNA的两条链是反向平行的，通常将DNA的羟基末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端。
DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3’端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。
DNA的合成方向总是从子链的5’端向3’端延伸。
②在DNA的复制过程中，复制的前提是双链解开。
在体外可通过控制温度来实现。
在80~100 ℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。
PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。
由于PCR过程的温度高，导致DNA聚合酶失活，后来耐高温的DNA聚合酶的发现和应用，大大增加了PCR的效率。
③PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行，需提供：DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
2．PCR的反应过程PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。
从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列成指数扩增。
3．实验操作（1）PCR反应体系：缓冲液、DNA模板，四种脱氧核苷酸原料、热稳定的DNA聚合酶、两种RNA引物、水。
（2）实验操作步骤①按照PCR反应体系配方配制反应液；②将PCR反应体系50μL用微量移液器转移到微量离心管（0.5 mL）中；③将微量离心管放到PCR仪中；④设置PCR仪的工作参数；⑤DNA在PCR仪中大量扩增。
(完整版)高三生物pcr技术复习试题.doc
高三生物PCR技术复习试题一、知识回顾聚合酶链反应法(PCR法)：PCR技术可模拟细胞核内DNA复制的天然过程，可在3～4h内使目的基因扩增上百万倍，达到肉眼可见的量，不需要放射性同位素标记就能分析、检测基因，大大提高了基因检测的灵敏度。
具体过程：首先，把DNA加热，使双链分开；然后将人工合成的一段单链核苷酸即DNA引物，黏附到DNA单股螺旋上；之后按照引物就能够复制出DNA来，重复放大50次后就可以制成10亿个基因。
在PCR放大过程中的关键是利用耐热DNA聚合酶使少量的DNA在短期内即能扩增数百万倍，便于分析、检测。
二、试题精练1、PCR技术是一种DNA的扩增技术。
在一定条件下，加入模板DNA、DNA聚合酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP可以实现DNA的扩增。
据此判断不合理的是A．dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作DNA合成的原料B．dTTP完全水解后产物有胸腺嘧啶、磷酸、核糖C．DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板DNA解旋D．CTP水解脱去两个磷酸基后是组成RNA的基本单位之一２、多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。
PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。
下列有关PCR过程的叙述中不正确的是：（）A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成C．延伸过程中需要DNA聚合酶、A TP、四种核糖核苷酸D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高3、下列有关PCR技术的叙述，不正确的是：（）A．PCR技术经过变形、复性、延伸三个阶段B．PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等C．PCR技术需在体内进行D．PCR技术是利用碱基互补配对的原则4、PCR技术扩增DNA,需要的条件是( )①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA ⑥核糖体A、①②③④B、②③④⑤C、①③④⑤D、①②③⑥5、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入PCR仪中扩增4代，那么，在PCR仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少应是A．640 B．8100 C．600 D．86406、对禽流感的确诊，先用PCR技术将标本基因大量扩增，然后利用基因探针，测知待测标本与探针核酸的碱基异同。
高中生物pcr技术知识点
高中生物pcr技术知识点PCR技术作为分子生物学中的重要工具，在高中生物教学中也占有一席之地。
本文将从PCR技术的原理、步骤、应用以及注意事项等方面进行介绍。
一、PCR技术的原理PCR技术的核心是聚合酶链式反应，简称PCR。
PCR技术利用DNA聚合酶在高温下对DNA模板进行反复扩增，从而从极少量的DNA样本中扩增出足够多的目标序列，以便于后续检测和分析。
PCR反应主要由三步组成：变性、退火和延伸。
变性可以使DNA 双链解开成两条单链，退火可以使引物与模板DNA结合，延伸可以使引物在模板上逐渐合成新链。
二、PCR技术的步骤PCR技术主要包括反应体系的准备、PCR反应、PCR产物检测和分析四个步骤。
1. 反应体系的准备PCR反应需要准备PCR反应体系，反应体系包括PCR模板DNA、引物、dNTPs、聚合酶、缓冲液、水等多个组分。
其中，PCR模板DNA是PCR反应的起点，引物是PCR反应的关键，dNTPs是PCR反应的原料，聚合酶是PCR反应的催化剂，缓冲液是PCR反应的稳定剂，水是PCR反应的溶剂。
2. PCR反应PCR反应是PCR技术的核心步骤，PCR反应需要按照一定的温度和时间进行。
PCR反应一般包括变性、退火和延伸三个阶段。
变性阶段一般在94-98℃进行，可以使DNA双链解开成两条单链；退火阶段一般在50-60℃进行，可以使引物与模板DNA结合；延伸阶段一般在72℃进行，可以使引物在模板上逐渐合成新链。
3. PCR产物检测和分析PCR产物检测和分析是PCR技术的重要步骤，PCR产物的检测和分析一般包括凝胶电泳、荧光定量、序列分析等多个方面。
凝胶电泳是PCR产物检测和分析的基础，可以将PCR产物按照大小进行分离；荧光定量可以对PCR产物进行定量分析；序列分析可以对PCR产物进行序列测定和分析。
三、PCR技术的应用PCR技术在分子生物学、医学、环境科学、食品检测等多个领域都有广泛的应用。
在分子生物学领域，PCR技术可以用于基因克隆、基因检测、基因表达等多个方面；在医学领域，PCR技术可以用于病原菌检测、基因诊断、药物筛选等多个方面；在环境科学领域，PCR技术可以用于微生物检测、水质检测、土壤检测等多个方面；在食品检测领域，PCR技术可以用于食品安全检测、品种鉴定等多个方面。
高考生物二轮复习微专题9 PCR技术的热点考法归纳及融合基因的原理和应用
始位点,是RNA聚合酶识别和结合的部位。图甲中突变型FGF9 cDNA的a链
所在的DNA单链为转录的模板链,为了保证目的基因在启动子和终止子之间
且质粒上需要保留启动子、终止子、复制原点和至少一个标记基因,使用双
酶切可以避免载体自身环化,因此选用HindⅢ和SpeⅠ切割质粒,为了便于目
的基因和质粒连接,需要用相同的酶切割目的基因,以产生相同的黏性末端,
体,复合体会被转运到细胞核中”可知,为实现UAS控制的胰岛素基因表达的光调控,
需要将激活性质的P与Gal4基因融合,将协助转运的F(可进入细胞核)与激活转录的
VP基因融合,故选b、d。
②将上述两种融合基因和UAS控制的胰岛素基因导入一种通用受体细胞— —人胚肾细胞后,在红光照射下,细胞内形成 Gal4-P-F-VP(或VP-F-P-Gal4) 复 合体,招募细胞内的 RNA聚合 酶与UAS结合,启动下游胰岛素基因的表达。
所以引物1和引物4的5'端需分别添加HindⅢ和SpeⅠ的识别序列,才能与图乙
中的质粒正确连接。
5.反向PCR测定未知DNA区域
例5 如果已知一小段DNA的序列,
可采用PCR的方法,简捷地分析出已 知序列两侧的序列,具体流程如下图 (以EcoRⅠ酶切为例): 请据图回答问题:
(1)若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物,步骤Ⅲ选用的PCR 引物必须是 ②④ (从引物①②③④中选择,填编号)。
例8 [2023·北大附中模拟] 癫痫是一种间歇发作的神经系统疾病,发作时表
现为大脑特定区域神经元兴奋性持续增强。研究人员发现神经元中C蛋 白的表达量可指示神经元兴奋性变化。 (1)将C蛋白和绿色荧光蛋白融合基因导入作为 载体 的腺相关病毒,感 染小鼠神经元。 [解析] (1)某些病毒可以作为目的基因的载体,可将C蛋白和绿色荧光蛋白融 合基因作为目的基因导入腺相关病毒,感染小鼠神经元。
pcr扩增技术高中生物
pcr扩增技术高中生物
pcr是聚合酶链式反应，是一种用于放大扩增特定的"DNA"片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊"DNA"复制，"PCR"的最大特点，是能将微量的"DNA"大幅增加;聚合酶链式反应是利用"DNA"在体外九十五摄氏度高温时变性会变成单链，低温时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至"DNA"聚合酶最适反应温度，"DNA"聚合酶沿着磷酸到五碳糖的方向合成互补链，基于聚合酶制造的"PCR"仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。
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例题
3 【2008年江苏】回答下列问题。
（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合 酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是 耐高温 。 （2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种 类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与 模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？ 引物对B 。
【基础知识】
三、PCR过程：
预变性； 变性； 复性； 延伸； 循环。
例题
4 【2011年江苏】利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内
DNA复制类似（如下图所示）。图中引物中为单链DNA片段，它 是子链合成延伸的基础。 （1）从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所 占比例为 15/16 。 （2）在第 三 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的 DNA片段。
20世纪自然科学的两大成就
核技术： 能量的放大
计算机芯片： 信息的集成
20世纪生命科学的两大成就
PCR技术： 生命信息的放大
基因术
基因工程的基本操作程序的步骤： 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴（如cDNA）基因的构建过程供体细胞的基
限制酶 全部DNA 大量DNA
因
片段 拼接到载体上
组
文
导入受体细胞扩增库基因的构建过程mRNA 逆转录 单链DNA双链DNAcDNA利用PCR技术扩增目的基因
PCR的全称： 聚合酶链式反应
PCR的原理： DNA复制
合成的方向都是5’→3’。
【基础知识】
二、PCR条件：
胞内DNA复制与PCR技术的比较：
解旋 酶
模板 引物 能量+原料 温度 缓冲液 子链合成
胞内DNA复制 解旋酶，边解旋边复制
解旋酶/DNA聚合酶 DNA母链 RNA dNTP 最适温度
Mg2+,缓冲对 半不连续复制
PCR 变性
Taq DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶 。
例题
2 【2011年江苏】请回答基因工程方面的有关问题：
（1）设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（ 只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。
①第一组： 引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效
；
②第二组： 引物Ⅰ’自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效 。
三、程序设计：
【实验操作】
四、操作提示：
微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前 必须进行高压灭菌；
微量离心管在每吸取一种试剂都必须更换枪头； 所有的成分加入离心管后，盖严盖子，用手指轻轻 弹击管的侧壁，离心10s，使反应液集中在离心管底 部，再放入PCR仪中进行反应。
【实际应用】
一、遗传疾病的诊断： 基因诊断；
1、目的基因概念： 主要指的是编码蛋白质的结构基因。也
可以是一些具有调控作用将含有某种生物不同基因的许多DNA 片断，导入到受体菌的群体中，各个 受体定DNA聚合酶，下面的表达式不能正
确反映DNA聚合酶的功能，这是因为 DNA聚合酶只能将单个脱氧核
苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上 。
【基础知识】
二、PCR条件：
温度： 90℃～95℃：变性； 55℃～60℃：复性； 70℃～75℃：延伸。
【注意】具体温度与DNA母链 及引物中的G、C含量有关。
例题
5 【2011年北京】根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出
被插入的基因片段。如下图，从图中A、B、C、D四种单链DNA片段 中选取 B、C 作为引物进行扩增，得到的片段将用于获取该基因 的全序列信息。
【实验操作】
一、实验仪器：
【实验操作】
二、设置对照：避免外源DNA的污染。
二、刑侦破案； 三、古生物学； 四、基因克隆： 五、DNA序列测定。
1988年美国穆里斯 （K.Mullis）等人发明，荣 获1993年诺贝尔化学奖。
【基础知识】
一、PCR原理：
DNA复制：半保留复制； DNA的热变性原理。
Taq DNA聚合酶 耐高温。
【基础知识】
一、PCR原理：
DNA复制：半保留复制；
需要提供合成模板；
DNA聚合酶 不能起始新的DNA链，必须要有引物提供3’-OH；
PCR技术扩增目的基因的前提条件： 要有一段已知的目的基因的核苷酸序列。
利用PCR技术扩增目的基因
PCR的条件： 模板 ——目的基因DNA 原料 ——四种脱氧核苷酸 引物 ——如单链DNA分子片段
酶 ——耐热的DNA聚合酶 控制温度 ——PCR仪自动调控
PCR
多聚酶链式反应 （Polymerase Chain Reaction），是一种体外迅 速扩增DNA片段的技术。
例题
1 【2011年安徽】家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素
基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。 采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR
反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水、4种 脱氧核糖核苷酸、模板DNA、 对干扰素基因特异的DNA引物对 和
DNA母链 DNA dNTP
3个温度 Mg2+,缓冲对
连续复制
【基础知识】
二、PCR条件：
引物：决定PCR扩增产物的特异性和长度。 引物设计的原则：
1.引物长度：通常为20～30bp，尽量降低引物与非扩 增区的同源性； 2.引物内部不能存在部分互补序列； 3.两个引物之间不能存在部分互补序列；