微核试验完整ppt课件
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3、滴到玻片上的小牛血清不要太多,涂时 要涂匀,以便推片
4、染色前可以先看一下整体涂片情况,细 胞分散度是否良好
5、关键步骤是制作良好的骨髓涂片以及优 良的染色
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流程图
处死小鼠,取胸骨
推片
固定(甲醇固定15分钟) 染色(吉姆萨染色15分钟)
观察并记数
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感谢亲观看此幻灯片,此课件部分内容来源于网络, 如有侵权请及时联系我们删除,谢谢配合!
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微核可出现于多种细胞中,但在有核细胞中 难以与正常核的分叶及核突出物区分,故常计数 PCE细胞中的微核,因为在此阶段,主核排出,易 于观察微核,这些细胞保持其嗜碱性约24小时, 然后成为正染红细胞(NCE),并进入外周血。
注:在主核排除时,微核仍保留在细胞中
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8
操作步骤:
一 染毒:
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5
源自文库
原理:
1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点 的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞 质中
2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向 移动,从而遗留在细胞质中
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6
结论:
微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生 的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗 传学终点
2 计数:1000个PCE中含微核的PCE数,并计算 200个细胞中PCE/NCE的比值
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结果与分析:
1 结果:试验只计数PCE中的微核,微核率 以千分率表示。每组的雌雄动物分开计数 微核PCE均值。
2 分析:正常的PCE/NCE比值为1(0.6-1.2), 如果<0.1,则表示PCE形成受到严重抑制; 如果<0.05,则表示受试物剂量过大,结果 不可靠。
3 染色:用新鲜配制的Giemsa应用液(Giemsa储
备液一份加pH6.8的磷酸盐缓冲液9份)染色10-
15分钟,细流水冲掉玻片染色液,晾干
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四 观察和计数:
1 观察:先用低倍镜观察,选择分布均匀的区域,
再在油镜下观察计数。PCE细胞呈灰蓝色,正染红 细胞(NCE)桔黄色。细胞中的微核大半呈圆形, 边缘光滑,嗜色性与核质一致,一个细胞内可以 出现一个或多个微核。
染毒途径:腹腔注射环磷酰胺,染毒二次, 0、24小时各染毒一次,6h后取样
染毒剂量:50mg/kg
二 处死:
颈椎脱臼法处死小鼠
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三:骨髓液的制备和涂片
1 处理:方法:取胸骨,去掉血污和肌肉,剪去 每节骨骺,用弯止血钳将骨髓挤于预先滴有小牛 血清的清洁载玻片上,混合均匀后推片
2 固定:将推好凉干的骨髓片放进染色缸,甲醇 固定15分钟,取出晾干
4、M期(有丝分裂期):前期,早中期,中期, 后 期(微核形成期),末期
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3
图13-1 细胞周期可划分为四个阶段
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4
微核(micronucleus)
是染色体或染色单体的无着丝点片断或纺锤体 受损而丢失的整个染色体,于细胞分裂后期留在 细胞质中,末期后,单独形成一个或几个规则的 次核,包含在子细胞的胞质内,比主核小,故叫 微核。
小鼠骨髓细胞微核试验
受试物: 环磷酰胺 受试动物: 小鼠
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1
实验目的
学习和掌握小鼠骨髓细胞微核试验的原理和方法
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2
细胞分裂分为四个期:
1、G1期(DNA合成前期):细胞生长,为DNA复制做 准备。
2、S期(DNA合成期):体细胞的DNA含量由2C增加 到4C
3、G2期(DNA合成后期):该期主要为M期作准备,包 括复制因子的失活和有丝分裂促进因子的分化,有 关细胞骨架系统重新组装的蛋白质合成
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图 1 :正常嗜多染红细胞 PCE (× 400 ) 图 2 带微核嗜多染红细胞 MNPCE (× 400)
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微核 嗜多染细胞
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注意事项:
1、剪胸骨时通过剪断两边的肋骨来把整块 胸骨取下来,以防不小心把胸骨剪断
2、挤出骨髓处的肌肉要剔除干净
4、染色前可以先看一下整体涂片情况,细 胞分散度是否良好
5、关键步骤是制作良好的骨髓涂片以及优 良的染色
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流程图
处死小鼠,取胸骨
推片
固定(甲醇固定15分钟) 染色(吉姆萨染色15分钟)
观察并记数
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微核可出现于多种细胞中,但在有核细胞中 难以与正常核的分叶及核突出物区分,故常计数 PCE细胞中的微核,因为在此阶段,主核排出,易 于观察微核,这些细胞保持其嗜碱性约24小时, 然后成为正染红细胞(NCE),并进入外周血。
注:在主核排除时,微核仍保留在细胞中
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操作步骤:
一 染毒:
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原理:
1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点 的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞 质中
2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向 移动,从而遗留在细胞质中
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结论:
微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生 的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗 传学终点
2 计数:1000个PCE中含微核的PCE数,并计算 200个细胞中PCE/NCE的比值
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结果与分析:
1 结果:试验只计数PCE中的微核,微核率 以千分率表示。每组的雌雄动物分开计数 微核PCE均值。
2 分析:正常的PCE/NCE比值为1(0.6-1.2), 如果<0.1,则表示PCE形成受到严重抑制; 如果<0.05,则表示受试物剂量过大,结果 不可靠。
3 染色:用新鲜配制的Giemsa应用液(Giemsa储
备液一份加pH6.8的磷酸盐缓冲液9份)染色10-
15分钟,细流水冲掉玻片染色液,晾干
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四 观察和计数:
1 观察:先用低倍镜观察,选择分布均匀的区域,
再在油镜下观察计数。PCE细胞呈灰蓝色,正染红 细胞(NCE)桔黄色。细胞中的微核大半呈圆形, 边缘光滑,嗜色性与核质一致,一个细胞内可以 出现一个或多个微核。
染毒途径:腹腔注射环磷酰胺,染毒二次, 0、24小时各染毒一次,6h后取样
染毒剂量:50mg/kg
二 处死:
颈椎脱臼法处死小鼠
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三:骨髓液的制备和涂片
1 处理:方法:取胸骨,去掉血污和肌肉,剪去 每节骨骺,用弯止血钳将骨髓挤于预先滴有小牛 血清的清洁载玻片上,混合均匀后推片
2 固定:将推好凉干的骨髓片放进染色缸,甲醇 固定15分钟,取出晾干
4、M期(有丝分裂期):前期,早中期,中期, 后 期(微核形成期),末期
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图13-1 细胞周期可划分为四个阶段
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微核(micronucleus)
是染色体或染色单体的无着丝点片断或纺锤体 受损而丢失的整个染色体,于细胞分裂后期留在 细胞质中,末期后,单独形成一个或几个规则的 次核,包含在子细胞的胞质内,比主核小,故叫 微核。
小鼠骨髓细胞微核试验
受试物: 环磷酰胺 受试动物: 小鼠
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实验目的
学习和掌握小鼠骨髓细胞微核试验的原理和方法
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2
细胞分裂分为四个期:
1、G1期(DNA合成前期):细胞生长,为DNA复制做 准备。
2、S期(DNA合成期):体细胞的DNA含量由2C增加 到4C
3、G2期(DNA合成后期):该期主要为M期作准备,包 括复制因子的失活和有丝分裂促进因子的分化,有 关细胞骨架系统重新组装的蛋白质合成
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图 1 :正常嗜多染红细胞 PCE (× 400 ) 图 2 带微核嗜多染红细胞 MNPCE (× 400)
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微核 嗜多染细胞
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注意事项:
1、剪胸骨时通过剪断两边的肋骨来把整块 胸骨取下来,以防不小心把胸骨剪断
2、挤出骨髓处的肌肉要剔除干净