《革兰氏阴性球菌》PPT课件
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– 血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、 透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰兰色菌落
– 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落
• 在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜 • 脑膜炎奈瑟菌于孵育24h后在培养基上发生自溶
3．生化特性
• 氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外） • 对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依
标本直接检查
• 直接涂片检查
– 脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片 – 皮肤瘀点渗出液涂片 – 革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球
菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈 瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断
• 抗原检查
– 通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验
• 包括A、C、Y、W125血清型的多价抗体和血清型B抗体
– 废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物
• 新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物
3．标本直接检查
• 标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查
– 男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多 革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断
– 女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革 兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群
• 可存在于健康人群的上呼吸道 • 近十年来报道
– 导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎 – 在免疫抑制和ICU的患者可导致菌血症 – 是社区呼吸道感染的主要病原体之一。
临床分离
• 从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本 • 呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液
– 口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本
• 主要致病物质是脂多糖 • 依据荚膜多糖的抗原成分可分为：A、B、C、……等13个血清群，我国A群占
95.8%，其余为B、C等群。
淋病奈瑟菌临床意义
• 淋病的病原菌
– 主要通过性接触直接感染 – 在分娩时通过产道感染新生儿
• 临床表现为：
– 单纯性淋病 – 盆腔炎口咽部和肛门直肠淋病 – 淋菌性结膜炎 – 播散性淋病
据 • 奈瑟菌属DNA中G+Cmol%为46~54
4．抵抗力
• 对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感 • 对青霉素敏感
– 但近年来由质粒介导的β内酰胺酶所致的耐 药在淋病奈瑟菌中产生较多
四、微生物检验
脑膜炎奈瑟菌
• 标本采集 – 无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本 – 采集后立即送往实验室 – 用血平板进行床边接种后置35℃孵育 – 血液标本接种在血液培养瓶中置35℃孵育 – 标本运送时需要35℃保温
• 流行性脑脊髓膜炎
– 冬末春初，多为学龄儿童、青少年 – 感染后多为隐性感染，少数可发展为菌血症或败血症，进而累及脑、脊髓膜，
形成化脓性脑膜炎 – 可出现严重的临床症状如发热、头痛、脑膜刺激
症阳性、甚至休克和DIC等；菌血症和细菌的损 伤作用使约半数患者出现皮下瘀斑
脑膜炎奈瑟菌临床意义
• 尽管可以在鼻咽部形成带菌状态，但侵袭性的脑膜炎奈瑟菌感染多为新近感染， 急性发病，发病时机体内缺乏杀菌抗体。
– 检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检测阳性结 果可作出快速、推测性诊断
分离培养鉴定
• 脑脊液标本
– 接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板
• 咽拭子或鼻咽拭子
– 接种在选择性培养基上如改良的Thayer-Martin(MTM)、 GC-Lect、New York City(NCY)等培养基
• 血液标本
– 经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼 脂平板上
• 置5%~7%CO2 35℃孵育，每隔24h观察平板
鉴定
• 初步确定为奈瑟菌属
– 直径1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落 – 涂片革兰染色见阴性双球菌 – 氧化酶试验阳性
• 进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖 类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌
瑟菌属鉴别 • 可产生诱导型β内酰胺酶
奈瑟菌属和卡他布兰汉菌的鉴定
感谢下 载
• 目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论
第一节 奈瑟菌属
一、分类
• 淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌对人致病 • 寄生在人体内鼻咽腔的腐生菌
– 解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黄奈瑟菌、粘 液奈瑟菌、浅黄奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延长奈 瑟菌、去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌
二、脑膜炎奈瑟菌临床意义
• 寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通过呼吸道分泌 物或空气微滴核而传播。
• 用分型血清确定血清型别 • 平板上没有发现菌落需继续观察72h后无菌生长可报
告为阴性
1．检验程序
（二）淋病奈瑟菌
2．标本采集
• 阴道和宫颈分泌物
– 用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处 停留10~15秒时间，蘸取
• 采集尿道分泌物Байду номын сангаас
– 弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本
• 尿液 • 直肠肛拭标本
• 可疑菌落 – 直径0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落
• 确认 – 将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌 – 氧化酶和触酶试验阳性 – 葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性
• 培养需观察72h后无菌生长可报告为阴性。
（2）免疫学鉴定
• 直接荧光染色 • 凝集试验或免疫渗滤技术
（3）分子生物学鉴定
寄 居，故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可
报告
• 新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双 球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎
4．分离培养与鉴定
• 选择培养基如MTM，Martin-Lewis（ML），或NYC • 置于5%CO2气体条件下35~37℃孵育 • 每隔24h观察平板
（1）形态和生化学鉴定
• 致病物质包括菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多 糖和铁调节蛋白
三、生物学特性
1．形态
• 革兰阴性双球菌 • 直径0.6~1.5μm
形似双肾或咖啡豆样，凹面相对 • 无动力，无芽胞，
某些菌种形成荚膜
2．培养特性
• 需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏 感，在培养基中需加入可溶性淀粉。
• 需氧生长，初次分离需5%~7%CO2和高湿度 • 最适生长温度为35~37℃，低于30℃不生长
第七章 革兰阴性球菌
李 向阳
奈瑟菌属（Neisseria） 布兰汉菌属（Branhamella）
概述
• “伯杰鉴定细菌学手册”第9版
– 将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉菌 属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科
• 奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）、脑 膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）以及莫拉菌属中的 卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是主要的致病菌。
• 痰液标本直接涂片革兰染色
– 如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径 为0.5~1.5μm革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染
卡他莫拉菌培养及鉴定
• 在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好
– 35℃ 24h孵育后菌落直径1~3mm，灰白色、光滑，用接 种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动
• 氧化酶和触酶阳性 • 不发酵葡萄糖和其它糖类产酸 • 大多数菌株还原硝酸盐和产生DNase。 • 三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈
• 检测靶片段的基因 – 隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌 胞嘧啶DNA 甲基转移酶基因、透明蛋白(opa)基 因、菌毛DNA 探针、rRNA 基因探针和porA 假 基因。
• 基因探针杂交、核酸扩增
第二节 卡他莫拉菌
• 卡他莫拉菌（M.catarrhalis）又称为卡他布兰汉菌（Branhamaceae catarrhalis）
– 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落
• 在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜 • 脑膜炎奈瑟菌于孵育24h后在培养基上发生自溶
3．生化特性
• 氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外） • 对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依
标本直接检查
• 直接涂片检查
– 脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片 – 皮肤瘀点渗出液涂片 – 革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球
菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈 瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断
• 抗原检查
– 通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验
• 包括A、C、Y、W125血清型的多价抗体和血清型B抗体
– 废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物
• 新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物
3．标本直接检查
• 标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查
– 男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多 革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断
– 女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革 兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群
• 可存在于健康人群的上呼吸道 • 近十年来报道
– 导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎 – 在免疫抑制和ICU的患者可导致菌血症 – 是社区呼吸道感染的主要病原体之一。
临床分离
• 从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本 • 呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液
– 口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本
• 主要致病物质是脂多糖 • 依据荚膜多糖的抗原成分可分为：A、B、C、……等13个血清群，我国A群占
95.8%，其余为B、C等群。
淋病奈瑟菌临床意义
• 淋病的病原菌
– 主要通过性接触直接感染 – 在分娩时通过产道感染新生儿
• 临床表现为：
– 单纯性淋病 – 盆腔炎口咽部和肛门直肠淋病 – 淋菌性结膜炎 – 播散性淋病
据 • 奈瑟菌属DNA中G+Cmol%为46~54
4．抵抗力
• 对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感 • 对青霉素敏感
– 但近年来由质粒介导的β内酰胺酶所致的耐 药在淋病奈瑟菌中产生较多
四、微生物检验
脑膜炎奈瑟菌
• 标本采集 – 无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本 – 采集后立即送往实验室 – 用血平板进行床边接种后置35℃孵育 – 血液标本接种在血液培养瓶中置35℃孵育 – 标本运送时需要35℃保温
• 流行性脑脊髓膜炎
– 冬末春初，多为学龄儿童、青少年 – 感染后多为隐性感染，少数可发展为菌血症或败血症，进而累及脑、脊髓膜，
形成化脓性脑膜炎 – 可出现严重的临床症状如发热、头痛、脑膜刺激
症阳性、甚至休克和DIC等；菌血症和细菌的损 伤作用使约半数患者出现皮下瘀斑
脑膜炎奈瑟菌临床意义
• 尽管可以在鼻咽部形成带菌状态，但侵袭性的脑膜炎奈瑟菌感染多为新近感染， 急性发病，发病时机体内缺乏杀菌抗体。
– 检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检测阳性结 果可作出快速、推测性诊断
分离培养鉴定
• 脑脊液标本
– 接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板
• 咽拭子或鼻咽拭子
– 接种在选择性培养基上如改良的Thayer-Martin(MTM)、 GC-Lect、New York City(NCY)等培养基
• 血液标本
– 经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼 脂平板上
• 置5%~7%CO2 35℃孵育，每隔24h观察平板
鉴定
• 初步确定为奈瑟菌属
– 直径1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落 – 涂片革兰染色见阴性双球菌 – 氧化酶试验阳性
• 进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖 类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌
瑟菌属鉴别 • 可产生诱导型β内酰胺酶
奈瑟菌属和卡他布兰汉菌的鉴定
感谢下 载
• 目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论
第一节 奈瑟菌属
一、分类
• 淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌对人致病 • 寄生在人体内鼻咽腔的腐生菌
– 解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黄奈瑟菌、粘 液奈瑟菌、浅黄奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延长奈 瑟菌、去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌
二、脑膜炎奈瑟菌临床意义
• 寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通过呼吸道分泌 物或空气微滴核而传播。
• 用分型血清确定血清型别 • 平板上没有发现菌落需继续观察72h后无菌生长可报
告为阴性
1．检验程序
（二）淋病奈瑟菌
2．标本采集
• 阴道和宫颈分泌物
– 用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处 停留10~15秒时间，蘸取
• 采集尿道分泌物Байду номын сангаас
– 弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本
• 尿液 • 直肠肛拭标本
• 可疑菌落 – 直径0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落
• 确认 – 将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌 – 氧化酶和触酶试验阳性 – 葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性
• 培养需观察72h后无菌生长可报告为阴性。
（2）免疫学鉴定
• 直接荧光染色 • 凝集试验或免疫渗滤技术
（3）分子生物学鉴定
寄 居，故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可
报告
• 新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双 球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎
4．分离培养与鉴定
• 选择培养基如MTM，Martin-Lewis（ML），或NYC • 置于5%CO2气体条件下35~37℃孵育 • 每隔24h观察平板
（1）形态和生化学鉴定
• 致病物质包括菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多 糖和铁调节蛋白
三、生物学特性
1．形态
• 革兰阴性双球菌 • 直径0.6~1.5μm
形似双肾或咖啡豆样，凹面相对 • 无动力，无芽胞，
某些菌种形成荚膜
2．培养特性
• 需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏 感，在培养基中需加入可溶性淀粉。
• 需氧生长，初次分离需5%~7%CO2和高湿度 • 最适生长温度为35~37℃，低于30℃不生长
第七章 革兰阴性球菌
李 向阳
奈瑟菌属（Neisseria） 布兰汉菌属（Branhamella）
概述
• “伯杰鉴定细菌学手册”第9版
– 将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉菌 属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科
• 奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）、脑 膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）以及莫拉菌属中的 卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是主要的致病菌。
• 痰液标本直接涂片革兰染色
– 如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径 为0.5~1.5μm革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染
卡他莫拉菌培养及鉴定
• 在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好
– 35℃ 24h孵育后菌落直径1~3mm，灰白色、光滑，用接 种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动
• 氧化酶和触酶阳性 • 不发酵葡萄糖和其它糖类产酸 • 大多数菌株还原硝酸盐和产生DNase。 • 三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈
• 检测靶片段的基因 – 隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌 胞嘧啶DNA 甲基转移酶基因、透明蛋白(opa)基 因、菌毛DNA 探针、rRNA 基因探针和porA 假 基因。
• 基因探针杂交、核酸扩增
第二节 卡他莫拉菌
• 卡他莫拉菌（M.catarrhalis）又称为卡他布兰汉菌（Branhamaceae catarrhalis）