薄层色谱法(TLC)解析

0.5％碘的氯仿溶液
显黄棕色
中性0.05％高锰酸钾溶液 显黄色
碱性高锰酸钾试剂
显黄色
铁氰化钾-三氯化铁试剂 还原性物质显蓝色，再喷2mol／L盐酸溶液，则蓝色加深。
5％磷钼酸乙醇溶液
还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。
专属性显色剂
显色剂
适用化合物
硝酸银／过氧化氢
卤代烃类
荧光素／溴
不饱和烃
展开
• 以直立展开为多 • 展开剂用量：展开后仍留有三分之二以上
体积为宜；浸入展开剂的深度以距原点 0.5cm为宜； • 展开距离：8-15cm • 溶剂蒸气预饱和：15-30分钟
展开系统的饱和
• 一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放 展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待 展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖 上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展 开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防 止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。 展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开 剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影 响不大，当然动作应该尽量轻、快
五、注意事项
• 用涂布器制板的要点：玻璃板要清洁；调浆要均 匀；涂布后的薄层板应低温缓慢干燥。
• 自制薄板要求：表面均匀、平整、光滑，无麻点、 无气泡、无破损、无污染。
• 薄层厚薄对Rf值影响：硅胶G板当厚低于150μm时， Rf值随薄层的减低而增大，可变性大；板厚250 μm ， Rf改变不显著。
混合展开湿度变化 ⑶其中一种溶剂被优先吸附 ⑷各组分间可能发生相互作用 ⑸吸附剂中杂质不断流出引起组成改变
⑴至少可以把微克级的被分离物质显示出来； ⑵能给出一个确定的显示区域； ⑶显示区域有一定的稳定 性。
显色剂可以分成两大类：
• 一类是检查一般有机化合物的通用显色剂； • 另一类是根据化合物分类或特殊官能团设
计的专属性显色剂。
常用通用显色剂
显色剂
呈现颜色
硫酸-水；硫酸-乙醇
不同有机化合物显不同颜色
薄层色谱法(TLC)
班级：药物化学 姓名：XXX
日期：2016.10.22 课程：现代分离技术
一、定义：
薄层色谱：常用TLC表示，又称薄 层层析，属于固－液吸附色谱。原 理是利用混合物中各组分吸附或溶 解性能的不同，达到分离的效果。 另一方面若在制作薄层板时，把吸 附层加厚，将样品点成一条线，则 可分离多达500mg的样品。
有机高分子聚合物、特殊要求可用缓冲液、稀碱液等。
3、点样器
• 毛细管 • 微量注射器 • 半自动及全自动点样器
4、展开容器
• 专用平底或双槽展开缸、盖能密闭 • 特殊水平展开缸
5、显色设备
• 喷雾显色：玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，用 压缩气体可使试剂呈均匀细雾状喷出
• 浸渍显色 • 蒸气熏蒸显色
显色剂的要求：
四氯邻苯二甲酸酐
芳香烃
甲醛／硫酸
多环芳烃
3，5一二硝基苯酰氯
醇类
品红／亚硫酸
醛基化合物
硝普钠／铁氰化物
肪族含氮化物
四、操作方法：
点样
• 形状：圆点状、窄细条状
• 点样位置：距底边1-1.5cm、圆点直径不大 于0.3cm、条带宽0.5-1.0cm
• 样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、 氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹 风的热风吹干或放入干燥器里晾干。
二、特点及应用原则：
1、薄层色谱的特点： 灵敏度及分辨率高、分离快速、操作方便、
同时分离多个样品、样品预处理简单、设备简单。 2、展开剂体系的选择：
一般展开剂体系选择如下：根据分离样品性 质、薄层色谱板性质选择一个二元溶剂体系，通 过调节溶剂比例以寻求适合Rf值。
三、仪器与材料
1、薄层板 2、点样器 3、展开容器 4、显色设备 5、色谱检视装置
1、薄层板
1.1薄层板分类 自制薄层板 普通薄层板和高效薄层板 硅胶GF254、氧化铝、纤维素、聚酰胺薄层板
和C18键合相、氨基键合相、腈基键合相、 二醇基键合相薄层板(固定相类型分类)
1.1.1自制薄层板: 须能保证色谱质量； 对薄层板需特别处理和化学改性可用； 节约成本。
玻璃板要求：表面光洁、平整，厚1-2mm， 洁净。
规格：10cm×10cm、10 cm×15cm、10 cm×20cm、20 cm×20cm
1.1.2薄层板的自制方法：
1、初步溶解CMC钠盐（0.5%-0.8%） 2、恒温再次溶解 3、离心或抽滤（取上清液） 4、溶解硅胶（1:3）注：超声溶解。 5、涂布 6、晾干活化
2、固定相：
最常用固定相： ⑴硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254； ⑵氧化铝； ⑶硅澡土； ⑷纤维素等。 吸附剂：直径10-40μm 黏合剂：0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠、10%-15%煅石膏、淀粉、