实体瘤细胞免疫治疗
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NK DC
过继免疫治疗：非机体自身产生，通过输入具有免疫功能成分（细胞、抗体）获得的免 疫能力
T vs Cancer
B
T
国际肿瘤免疫细胞治疗的应用
• 美国/欧洲：
– LAK细胞：细胞因子活化（IL-2）的杀伤细胞(T) – CIK细胞：细胞因子诱导（IL2\IL4\IFN）的杀伤细胞(T) – NK细胞：自然杀伤细胞(培养扩增？) – Sipuleucel-T：2010年美国FDA批准的第一个免疫细胞治疗产品
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
Blood
PBMC
DC
T
NK
APC－T
B
T vs Cancer
20 13 -513 / 20 13 .8. 14
Blood
PBMC
DC
T
NK
APC－T
B
T vs Cancer
2 0 1 3 . 8 . 1 4
Blood
PBMC
DC
T
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
Blood
PBMC
DC
T
NK
APC－T
Bຫໍສະໝຸດ Baidu
2012.9.10 治疗前
T vs Cancer
PET/CT（9月10日）：
左颈部增高淋巴结 左锁骨上增高淋巴结 纵隔多发代谢增高淋巴结，多融合成团块，可 符合恶性病变， 原发病灶不明确，可能为微小病灶；
NK
DC
B
T
肿瘤生物学及免疫学原则
Mao JP.Journal of International Pharmaceutical Research. 2013; 40(2):127-36
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
肿瘤免疫治疗的主要环节
增强肿瘤的特异性 免疫识别和杀伤能 力 提高抗肿瘤 细胞免疫功能
Blood
PBMC
DC
恶性肿瘤治疗的希望: 细胞免疫治疗
北京协和医院呼吸科 张力
T
NK
APC－T
B
T vs Cancer
美国《科学》杂志将“肿瘤免疫疗法” 作为2013年十大科学突破之首
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
2
Science, Dec. 20, 2013
解除T细胞免 疫抑制信号 肿瘤缩小 /痊愈
消除肿瘤细胞对 T细胞抑制性因 素
肿瘤
免疫治疗
Mao JP.Journal of International Pharmaceutical Research. 2013; 40(2):127-36
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
APC－T
PBMC
Blood
T细胞过继免疫治疗：直接杀伤肿瘤细胞、改善免疫环境
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
3
免疫治疗——肿瘤的第四种治疗方法
• 直接杀伤肿瘤的免疫细胞：CD8+ T细胞，生理条件下杀 伤性T细胞
• 功能：杀伤表达特定肿瘤抗原的肿瘤细胞
免疫记忆功能预防复发
胞内感染-病毒、细菌、寄生虫
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
Blood
NK
DC
B
T
9
2010年日本3021例患者 的临床回顾性分析结果
臨床結果 5%
31%
17%
完全寛解 部分寛解 長期不変
16%
不変 増悪
31%
151 514 484 936 936
完全寛解 部分寛解 長期不変 不変 増悪
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
EAAL治疗：2000年: 降低肝癌手术后的复发风险率41%
NK DC
日本：临床技术应用十年
術 後 期間 5年以内复发 2年以内复发 45(59%) 25(33%) 复 发 対照群（74例） 57(77%) 40(54%) ｐ値（＊＊） 0.01 0.005
免疫群（76例）（＊）
（THE LANCET 2000;356;802-07日本）
T vs Cancer
B T
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
胰腺癌肝 转移病例报告综合治疗 CR Oncology letters ;1594-1598.2014
301医院焦顺昌
T vs Cancer
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Blood
NK
DC
B
T
17
EAAL细胞改善患者免 疫状态
clinical immunology （2011）138，23-32
肺癌
22 17
6例死亡，中位生存期 尚未到
4例死亡，中位生存期 尚未到 2例死亡，中位生存期 尚未到 0例死亡，中位生存期 尚未到
74.4%
88.9% 60.0% 80.0%
结直 肠癌 胰腺癌
原发性 肝癌
6
5
T vs Cancer
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PBMC
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NK
DC
B
T
非小细胞肺癌治疗：常规治疗+EAAL细胞 治疗显著提高患者生存期
Percentage
50
20
20
10
10
1
25
0
0
PRE
POST
PRE
POST
0
PRE
POST
0
PRE
CD3+CD4+
65 60 55 50
P=0.5278
Percentage
45 40 35 30 25 20 15 10 5 0
PRE
POST
T vs Cancer
POST
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B
T vs Cancer
2 0 1 3. 1. 9 治 疗 前
Blood
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2 0 1 3. 1. 9
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T vs Cancer
2 0 1 4 . 2 . 1 7
Blood
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T
NK
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B
T vs Cancer
2 0 1 4 . 2 . 1 7
Blood
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DC
2014.4.25胸部CT：CR PFS9月（继续CR）
T
NK
APC－T
B
T vs Cancer
张XX.男，76岁 诊断： 右肺中上分化鳞癌（cT4N2M0，IIIb期）(EGFR-) 右主肺动脉受累 右肺阻塞性肺炎 纵隔淋巴结肿大 治疗： 泰欣生（32次，周疗）+健择（7次）周疗后 2程放射治疗后（胸部) 自体细胞回输后（20次）
• 日本：按医疗技术管理
– T细胞（EAAL技术)：以CD3+CD8+ T细胞为主
– NKT细胞：CD3+CD56+的 T细胞
• 韩国：韩国药监局批准
– T细胞（EAAL技术) ：以CD3+CD8+ T细胞为主
8
T vs Cancer
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PBMC
Blood
NK
DC
B
T
EAAL细胞
• 扩增活化的自体淋巴细胞（Expanded Activated Autologous Lymphocytes， EAAL) • 成分：以CD8+ 杀伤性T细胞为主（均值约70%）
2 0 1 3. 5. 6 放 疗 + 泰 欣 生
放疗期间同步 2013-1-29开始泰欣生周疗（共行13 次，末次为2013-5-8）
T vs Cancer
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DC
B
T
治疗： 2012-9-20行EP方案化疗+泰欣生400mg Qw 2012-11-7日行胸腹CT平扫：肺内病灶较前略有缩小 疗效：SD 2012年11月16日开始胸部放疗 2012年12月1日C3-C4周期EP方案化疗 随后行第12-16次泰欣生/周维持治疗 疗效（SD） 2013年1月16日、2月6日予2周期力比泰治疗 胸腹增强CT病灶较前片缩小， 疗效：PR 2013-10-9予第12周期力比泰维持化疗 2013-5-13至2014.2.18EAAL回输已行24次
在45位患者中共出现了62次不良反应，所有均为1或2级并且具有自限 性，未有患者出现肺或肾部的症状、任何迹象的感染、肝功能衰退或 自身免疫失调。
T vs Cancer
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B
T
EAAL联合常规治疗神经胶质母细胞瘤(日本）
Case Age Sex Initial Treatment Ope. Rad. Chemo. 1 2 3 4 5 37 17 49 56 40 F F M M M + + + + + 60Gy 60Gy 60Gy 60Gy 60Gy ACNU ACNU ACNU ACNU ACNU —— —— 24m 8m —— 10y10m,Alive 10y2m,Alive 3y9m,Dead 4y0m,Dead 2y6m,Alive TTP* Follow**
• 没有窗口期感染风险
• 扩增患者体内的肿瘤特异性记忆细胞，具有多种肿瘤抗 原特异性 • 可显著改善患者免疫功能，提高杀伤性细胞比例
22
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
EAAL使用方法体会
• 单独使用
– 手术、放化疗后预防复发
• 与化疗/放疗/靶向治疗联合
• 早期使用疗效更为明显
T vs Cancer
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PBMC
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18
CD3+CD8+
P=0.0036
50
CD3-CD56+
50
CD4/CD8
P=0.0333
7 6 5 4 3 2
75 100
IFN- +
***P=0.0005
P=0.0485
40
40
Percentage
Percentage
30
30
Percentage
• 患者一般情况 – EAAL治疗组晚期患者共51例，M38例，F13例，年龄31-78岁。 – ANSCLC22例，晚期结直肠癌17例，晚期胰腺癌7例，原发性肝癌5例 • 治疗方案
– 在最佳支持治疗或化疗的基础上加用EAAL细胞治疗
– 自身提供20－100ml外周血 – 体外培养使淋巴细胞数目扩增，每次回输3－10X109细胞/100－200ml
经EAAL治疗后，患者体内杀伤性淋巴细胞数量 和比例显著增加
T vs Cancer
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PBMC
Blood
NK
DC
B
T
EAAL细胞在非特异性细胞治疗中的优势
• 温和、对患者免疫系统无损伤 • 可长期使用维持肿瘤稳定 • 可联合化疗多次使用以实现协同作用，并显著降低化疗 副作用 • 没有自身免疫病的风险
NK
DC
B
T
Blood
PBMC
DC
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NK
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B
EAAL治疗后分泌IFN-γ的细胞比例显著升高
T vs Cancer
EAAL细胞可以改善患者体内免疫环境 Clin Immunol. 2011 Jan;138(1):23-32.
1. 2. 3. 4. 5. CD8+ 杀伤性T淋巴细胞比例上升 NK细胞比例上升 CD4/CD8 T淋巴细胞比值下降 分泌的IFN-γ细胞比例上升 IFN-γ的分泌量上升
含1％白蛋白的生理盐水
– 细胞产品无细菌、霉菌、支原体、病毒等任何微生物和内毒素的污染 – 培养后约２W开始回输，1次/周，化疗后>48h，至少回输6次
• 病例随访
– 记录其生存情况，随访终点为患者死亡
301医院焦顺昌
T vs Cancer
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• 随访结果
肿瘤类型 病例数 中位生存期（月）及说 1年生存率 明
T vs Cancer
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B
T
施X，男，46岁 2012年8月： 无明显诱因出现阵发性咳嗽，咳黄痰 偶有痰中带血丝，每日20余口 伴喘憋，咳嗽及吸烟时喘憋加重 伴头晕、头痛、左手臂麻木感
诊断： 肺腺癌可能性大（T4N3M1b，Ⅳ期） 纵隔、左锁骨上淋巴结转移 小脑幕脑膜转移不除外
APC－T
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B
T
患者出现的不良反应
不良反应
发热 头痛 恶心 头晕 搔痒 心动过速 总体
免疫治疗组 (n=76)*
36 (47%) 3 (4%) 3 (4%) 1 (1%) 1 (1%) 1 (1%) 45 (59%)
细胞回输 (n=370)
50 (14%) 5 (1%) 4 (1%) 1 (0· 3%) 1 (0· 3%) 1 (0· 3%) 62 (17%)
方法的优点： • • 采血量少：全血20～100ml（CIK用单采机，循环） 扩增效率高：上述少量采血可供达20次细胞回输，每次细胞回输量也可达 30 ～100亿 • • • 细胞活性高（90%以上）， 常温保存可达12小时便于运输保持功能 全程无血清培养安全高
T vs Cancer
APC－T
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*TTP:疾病复发时间 ** 截止2003年12月 正常 8-12月 5例中5例实现3年以上生存，2例实现10年以上生存 2006年2月至今，5例中3例实现5年以上生存，论文投稿中
T vs Cancer
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51例晚期肿瘤患者总结（2007-2009）
NK DC B T
过继免疫治疗：非机体自身产生，通过输入具有免疫功能成分（细胞、抗体）获得的免 疫能力
T vs Cancer
B
T
国际肿瘤免疫细胞治疗的应用
• 美国/欧洲：
– LAK细胞：细胞因子活化（IL-2）的杀伤细胞(T) – CIK细胞：细胞因子诱导（IL2\IL4\IFN）的杀伤细胞(T) – NK细胞：自然杀伤细胞(培养扩增？) – Sipuleucel-T：2010年美国FDA批准的第一个免疫细胞治疗产品
T vs Cancer
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B
T vs Cancer
20 13 -513 / 20 13 .8. 14
Blood
PBMC
DC
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B
T vs Cancer
2 0 1 3 . 8 . 1 4
Blood
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DC
T
T vs Cancer
APC－T
PBMC
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NK
DC
B
T
Blood
PBMC
DC
T
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APC－T
Bຫໍສະໝຸດ Baidu
2012.9.10 治疗前
T vs Cancer
PET/CT（9月10日）：
左颈部增高淋巴结 左锁骨上增高淋巴结 纵隔多发代谢增高淋巴结，多融合成团块，可 符合恶性病变， 原发病灶不明确，可能为微小病灶；
NK
DC
B
T
肿瘤生物学及免疫学原则
Mao JP.Journal of International Pharmaceutical Research. 2013; 40(2):127-36
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
肿瘤免疫治疗的主要环节
增强肿瘤的特异性 免疫识别和杀伤能 力 提高抗肿瘤 细胞免疫功能
Blood
PBMC
DC
恶性肿瘤治疗的希望: 细胞免疫治疗
北京协和医院呼吸科 张力
T
NK
APC－T
B
T vs Cancer
美国《科学》杂志将“肿瘤免疫疗法” 作为2013年十大科学突破之首
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
2
Science, Dec. 20, 2013
解除T细胞免 疫抑制信号 肿瘤缩小 /痊愈
消除肿瘤细胞对 T细胞抑制性因 素
肿瘤
免疫治疗
Mao JP.Journal of International Pharmaceutical Research. 2013; 40(2):127-36
T vs Cancer
APC－T
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NK
DC
B
T
APC－T
PBMC
Blood
T细胞过继免疫治疗：直接杀伤肿瘤细胞、改善免疫环境
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
3
免疫治疗——肿瘤的第四种治疗方法
• 直接杀伤肿瘤的免疫细胞：CD8+ T细胞，生理条件下杀 伤性T细胞
• 功能：杀伤表达特定肿瘤抗原的肿瘤细胞
免疫记忆功能预防复发
胞内感染-病毒、细菌、寄生虫
T vs Cancer
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DC
B
T
9
2010年日本3021例患者 的临床回顾性分析结果
臨床結果 5%
31%
17%
完全寛解 部分寛解 長期不変
16%
不変 増悪
31%
151 514 484 936 936
完全寛解 部分寛解 長期不変 不変 増悪
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
EAAL治疗：2000年: 降低肝癌手术后的复发风险率41%
NK DC
日本：临床技术应用十年
術 後 期間 5年以内复发 2年以内复发 45(59%) 25(33%) 复 发 対照群（74例） 57(77%) 40(54%) ｐ値（＊＊） 0.01 0.005
免疫群（76例）（＊）
（THE LANCET 2000;356;802-07日本）
T vs Cancer
B T
T vs Cancer
APC－T
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NK
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胰腺癌肝 转移病例报告综合治疗 CR Oncology letters ;1594-1598.2014
301医院焦顺昌
T vs Cancer
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DC
B
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17
EAAL细胞改善患者免 疫状态
clinical immunology （2011）138，23-32
肺癌
22 17
6例死亡，中位生存期 尚未到
4例死亡，中位生存期 尚未到 2例死亡，中位生存期 尚未到 0例死亡，中位生存期 尚未到
74.4%
88.9% 60.0% 80.0%
结直 肠癌 胰腺癌
原发性 肝癌
6
5
T vs Cancer
APC－T
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NK
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B
T
非小细胞肺癌治疗：常规治疗+EAAL细胞 治疗显著提高患者生存期
Percentage
50
20
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10
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1
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0
0
PRE
POST
PRE
POST
0
PRE
POST
0
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CD3+CD4+
65 60 55 50
P=0.5278
Percentage
45 40 35 30 25 20 15 10 5 0
PRE
POST
T vs Cancer
POST
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T vs Cancer
2 0 1 3. 1. 9 治 疗 前
Blood
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2 0 1 3. 1. 9
Blood
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T vs Cancer
2 0 1 4 . 2 . 1 7
Blood
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DC
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T vs Cancer
2 0 1 4 . 2 . 1 7
Blood
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2014.4.25胸部CT：CR PFS9月（继续CR）
T
NK
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B
T vs Cancer
张XX.男，76岁 诊断： 右肺中上分化鳞癌（cT4N2M0，IIIb期）(EGFR-) 右主肺动脉受累 右肺阻塞性肺炎 纵隔淋巴结肿大 治疗： 泰欣生（32次，周疗）+健择（7次）周疗后 2程放射治疗后（胸部) 自体细胞回输后（20次）
• 日本：按医疗技术管理
– T细胞（EAAL技术)：以CD3+CD8+ T细胞为主
– NKT细胞：CD3+CD56+的 T细胞
• 韩国：韩国药监局批准
– T细胞（EAAL技术) ：以CD3+CD8+ T细胞为主
8
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
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T
EAAL细胞
• 扩增活化的自体淋巴细胞（Expanded Activated Autologous Lymphocytes， EAAL) • 成分：以CD8+ 杀伤性T细胞为主（均值约70%）
2 0 1 3. 5. 6 放 疗 + 泰 欣 生
放疗期间同步 2013-1-29开始泰欣生周疗（共行13 次，末次为2013-5-8）
T vs Cancer
APC－T
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T
治疗： 2012-9-20行EP方案化疗+泰欣生400mg Qw 2012-11-7日行胸腹CT平扫：肺内病灶较前略有缩小 疗效：SD 2012年11月16日开始胸部放疗 2012年12月1日C3-C4周期EP方案化疗 随后行第12-16次泰欣生/周维持治疗 疗效（SD） 2013年1月16日、2月6日予2周期力比泰治疗 胸腹增强CT病灶较前片缩小， 疗效：PR 2013-10-9予第12周期力比泰维持化疗 2013-5-13至2014.2.18EAAL回输已行24次
在45位患者中共出现了62次不良反应，所有均为1或2级并且具有自限 性，未有患者出现肺或肾部的症状、任何迹象的感染、肝功能衰退或 自身免疫失调。
T vs Cancer
APC－T
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EAAL联合常规治疗神经胶质母细胞瘤(日本）
Case Age Sex Initial Treatment Ope. Rad. Chemo. 1 2 3 4 5 37 17 49 56 40 F F M M M + + + + + 60Gy 60Gy 60Gy 60Gy 60Gy ACNU ACNU ACNU ACNU ACNU —— —— 24m 8m —— 10y10m,Alive 10y2m,Alive 3y9m,Dead 4y0m,Dead 2y6m,Alive TTP* Follow**
• 没有窗口期感染风险
• 扩增患者体内的肿瘤特异性记忆细胞，具有多种肿瘤抗 原特异性 • 可显著改善患者免疫功能，提高杀伤性细胞比例
22
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
EAAL使用方法体会
• 单独使用
– 手术、放化疗后预防复发
• 与化疗/放疗/靶向治疗联合
• 早期使用疗效更为明显
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
18
CD3+CD8+
P=0.0036
50
CD3-CD56+
50
CD4/CD8
P=0.0333
7 6 5 4 3 2
75 100
IFN- +
***P=0.0005
P=0.0485
40
40
Percentage
Percentage
30
30
Percentage
• 患者一般情况 – EAAL治疗组晚期患者共51例，M38例，F13例，年龄31-78岁。 – ANSCLC22例，晚期结直肠癌17例，晚期胰腺癌7例，原发性肝癌5例 • 治疗方案
– 在最佳支持治疗或化疗的基础上加用EAAL细胞治疗
– 自身提供20－100ml外周血 – 体外培养使淋巴细胞数目扩增，每次回输3－10X109细胞/100－200ml
经EAAL治疗后，患者体内杀伤性淋巴细胞数量 和比例显著增加
T vs Cancer
APC－T
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DC
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EAAL细胞在非特异性细胞治疗中的优势
• 温和、对患者免疫系统无损伤 • 可长期使用维持肿瘤稳定 • 可联合化疗多次使用以实现协同作用，并显著降低化疗 副作用 • 没有自身免疫病的风险
NK
DC
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B
EAAL治疗后分泌IFN-γ的细胞比例显著升高
T vs Cancer
EAAL细胞可以改善患者体内免疫环境 Clin Immunol. 2011 Jan;138(1):23-32.
1. 2. 3. 4. 5. CD8+ 杀伤性T淋巴细胞比例上升 NK细胞比例上升 CD4/CD8 T淋巴细胞比值下降 分泌的IFN-γ细胞比例上升 IFN-γ的分泌量上升
含1％白蛋白的生理盐水
– 细胞产品无细菌、霉菌、支原体、病毒等任何微生物和内毒素的污染 – 培养后约２W开始回输，1次/周，化疗后>48h，至少回输6次
• 病例随访
– 记录其生存情况，随访终点为患者死亡
301医院焦顺昌
T vs Cancer
APC－T
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Blood
• 随访结果
肿瘤类型 病例数 中位生存期（月）及说 1年生存率 明
T vs Cancer
APC－T
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施X，男，46岁 2012年8月： 无明显诱因出现阵发性咳嗽，咳黄痰 偶有痰中带血丝，每日20余口 伴喘憋，咳嗽及吸烟时喘憋加重 伴头晕、头痛、左手臂麻木感
诊断： 肺腺癌可能性大（T4N3M1b，Ⅳ期） 纵隔、左锁骨上淋巴结转移 小脑幕脑膜转移不除外
APC－T
PBMC
Blood
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T
患者出现的不良反应
不良反应
发热 头痛 恶心 头晕 搔痒 心动过速 总体
免疫治疗组 (n=76)*
36 (47%) 3 (4%) 3 (4%) 1 (1%) 1 (1%) 1 (1%) 45 (59%)
细胞回输 (n=370)
50 (14%) 5 (1%) 4 (1%) 1 (0· 3%) 1 (0· 3%) 1 (0· 3%) 62 (17%)
方法的优点： • • 采血量少：全血20～100ml（CIK用单采机，循环） 扩增效率高：上述少量采血可供达20次细胞回输，每次细胞回输量也可达 30 ～100亿 • • • 细胞活性高（90%以上）， 常温保存可达12小时便于运输保持功能 全程无血清培养安全高
T vs Cancer
APC－T
PBMC
*TTP:疾病复发时间 ** 截止2003年12月 正常 8-12月 5例中5例实现3年以上生存，2例实现10年以上生存 2006年2月至今，5例中3例实现5年以上生存，论文投稿中
T vs Cancer
APC－T
PBMC
Blood
NK
DC
B
T
51例晚期肿瘤患者总结（2007-2009）
NK DC B T