全血基因组DNA的提取
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明一、试剂盒组成及存储条件：1.试剂盒包括蛋白酶K、缓冲液、洗涤缓冲液、脱水溶液等。
2.试剂盒应存放在4℃以下避光干燥处，避免冻结。
二、实验前准备：1.准备所需的实验耗材和设备，如离心管、恒温振荡器、离心机等。
2.取出全血样品，可以是新鲜全血或已离心制备的全血细胞。
三、DNA提取步骤：1.取出全血样品，用洗涤液洗涤细胞沉淀并离心收集，去除红细胞。
2.加入蛋白酶K将细胞裂解，释放DNA。
3.加入缓冲液和脱水溶液，沉淀DNA并洗涤。
4.最终稀释DNA并保存在适当的条件下。
四、实验注意事项：1.操作过程中需注意无菌操作，避免污染。
2.加入蛋白酶K的量应准确控制，不要过多或过少。
3.混合溶液时需轻轻摇匀，避免气泡的产生。
4.稀释保存DNA时，需使用无核酸酶的载体溶液，如TE缓冲液。
五、质控及结果分析：1.可以通过琼脂糖凝胶电泳或比色法检测提取的DNA质量。
2.检测DNA浓度和纯度，确保提取的DNA适用于后续实验。
3.可以保存提取好的DNA样品，以备后续实验使用。
六、应用领域：1.该试剂盒适用于从全血样品中提取DNA，可用于基因分析、疾病诊断、遗传研究等领域。
2.可以用于个体基因检测、种群遗传学研究、药物反应性研究等。
总结：全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样品中提取DNA的重要工具，操作简便、提取效率高。
在实验中需注意操作规范，保证提取的DNA质量和纯度。
该试剂盒广泛应用于科研领域，为基因研究和临床诊断提供了有力支持。
希望上述使用说明能够帮助用户正确、高效地使用全血基因组DNA提取试剂盒。
实验二 全血基因组DNA的提取
实验二：全血基因组DNA的提取一实验目的：1．学习并掌握动物全血提取DNA的方法2．从全血中提取到一定量的纯净的DNA样品二实验原理DNA存在于细胞核中，用细胞裂解液除取红细胞，核裂解液破坏白细胞，氯仿使蛋白质变性，用无水乙醇洗涤DNA，从而得到纯净的DNA分子。
三、实验仪器、材料、试剂（一）仪器1．高速离心机 2．烘箱 3．冰箱4．水浴锅5．微量移液器6．高压灭菌锅（二）材料1．鸡血、2．细胞裂解液3．核裂解液、4．饱和NaCl、5．氯仿、6．无水乙醇、7．ddHO、8.滤纸、9．微量取液器、10.1.5mL/2mL 离心管、11.一次性2手套、12.离心管架、13.记号笔等（三）试剂配制细胞裂解液:10mm/l Tris-Hcl(1mol/L) ,11%w/l蔗糖,5 mmol/L Mgcl2,1%v/vEDTA, 10mm/L Triton 核裂解液：10mm/l Tris-Hcl, 1%w/v SDS, 10mm/L Na2柠檬酸三钠四、实验步骤1．吸取500ul血液至2ml离心管，加入1000ul的细胞裂解液，上下颠倒2-3min。
2．在4°C，6000rpm转速离心3min,弃上清液。
3．重复1-2步（1-3次），直至洗净红细胞，颜色变白为止。
4.加入300ul核裂解液，上下颠倒2min,室温静置2min。
5.加入100ul饱和NaCl和600ul氯仿，轻轻上下颠倒2min, 4°C，6000rpm 转速离心5min。
6.小心吸取上清液（不能吸入下层液体），移至新的1.5ml的离心管。
7.加入600ul冷藏无水乙醇，轻轻摇动，观察有无絮状物质。
8. 4°C，13000rpm转速离心3min，小心倒掉上清液，用滤纸吸取管壁周围的液体，室温下是离心管完全干燥。
（1h左右）9.沿管壁慢慢加入50ul ddHO，然后轻轻吹打均匀。
210.-20°C的冰箱保存。
人全血DNA的提取实验步骤
人全血DNA的提取实验步骤
取2ml抗凝血于无菌15ml离心管
↓3000r/min 离心5min
弃上清，加入适量生理盐水
↓上下颠倒混匀
3000r/min 离心5min
↓
弃上清，加入约5倍体积的无菌ddH2O
↓上下颠倒混匀
室温静置5分钟，4000r/min 离心10min
↓
弃上清，加入约5倍体积的无菌ddH2O重悬白细胞沉淀
↓上下颠倒混匀
4000r/min 离心10min
↓
弃上清，加入STE至2毫升
↓上下颠倒混匀
再加10%SDS 200μl和10mg/ml 蛋白酶K 20μl 混匀
↓置56℃水浴震荡3h
取出观察白细胞消化情况（无可见沉淀），冷却至室温
↓
加入等体积饱和酚，缓慢摇动20min
↓4000r/min 离心10min
小心吸出上清转于另一无菌15ml离心管中
↓
加入等体积氯仿：异戊醇（24：1）缓慢摇动20min
↓4000r/min 离心10min
小心吸出上清转于另一无菌15ml离心管中
↓
向上清中加入1/10体积的3M NaAC（pH5.2），混匀
↓
再加入2倍体积的无水乙醇，缓慢摇动即可见DNA丝状体
↓
用无菌吸管吸出DNA丝状体移至装有1ml70%乙醇的Epp管内
↓
12000r/min 离心3~5min，弃上清。
沉淀用1ml 70%乙醇洗涤1~2次
↓
12000 r/min 离心3~5min，弃上清。
↓
室温风干或DNA风干机抽干
↓
用100μl TE溶解DNA 沉淀。
从全血和体液中提取基因组DNA的操作步骤(精)
从全血和体液中提取基因组DNA 的操作步骤提取DNA 需要的仪器和试剂：⑴ 1.5ml 离心管⑵ 移液管: 1000ul, 200ul, 40ul 各一支和移液管尖头: 100-1000ul, 1-200ul 各一盒⑶ 微型滤柱（备用）⑷ 小型旋转混合器一台⑸ 小型离心机: 可放入1.5ml 离心管和2ml 收集管.⑹ 恒温水浴⑺ 电冰箱: -20 C, 4 C⑻ 无水乙醇(自备)⑼ 70% 乙醇(自备)⑽ 利普生DNA 提取试剂盒。
内含: ⑴ 裂解液1 ⑵ 裂解液2 ⑶消化液 ⑷纯化液⑸弥散液 ⑹蛋白酶K ⑺ 带钩细玻棒一盒 ⑻ 微型滤柱若干。
提取DNA 前注意：⑴ 使血样品内容物达到室温（15 – 25 C ）。
⑵ 预热水浴到58 C ， 为步骤3作准备。
⑶ 置弥散液于58 C 内，为步骤4或步骤7作准备。
⑷ 所有的离心步骤均在室温下进行。
⑸ lml 全血可提得15-60ug DNA 。
一．从1ml 全血或体液中提取DNA 的步骤：⑴ 裂解1： 取1ml 全血，血桨，血清，淋巴细胞放入到1.5ml 的离心管中，加入400ul 裂解液1。
上下翻转，使沉淀物分散，旋转脉动15秒后放入离心机中离心，离心速率为8000rpm ，1min.。
倒掉上层液，可见离心管底部有血色沉淀。
重复此裂解步骤一次，这次是加入1ml 裂解液1。
最后用移液管吸净所有上层液弃去, 以使离心管底部的血色沉淀不再残留有裂解液1。
⑵ 裂解2: 在上面离心管中加入1ml 裂解液2。
上下翻转，务必使沉淀物分散， 旋转脉动15秒后放入离心机中离心，8000rpm ，1 min.。
倒掉上清液，可见离心管底部有微量淡红色沉淀。
重复此裂解步骤一次，这次仍然是加入1ml 裂解液2，最后用移液管吸净所有上清液弃去，以使离心管底部的灰白色沉淀不再残留有裂解液2。
⑶ 消化： 吸取蛋白酶K 10ul ( = 0.2mg )加入到上面的离心管中，用移液管尖头反复吹打， 使蛋白酶K 与沉淀物均匀接触后， 加入320ul 消化液，上下翻转离心管， 务必使沉淀物分散于消化液中。
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明DNA提取是生物学、遗传学和分子生物学等领域的一项重要实验操作。
全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样本中提取DNA的试剂盒，本文将详细介绍其使用说明。
一、试剂准备：1.预先将试剂盒从-20℃的冷冻器中转移到4℃的冰箱中解冻，取出所需试剂。
2.将试剂A和试剂B随机摇匀，避免沉淀的产生。
二、样本处理：1.取出需要提取DNA的全血样本，将其加入离心管中。
2.加入适量的蒸馏水和样本量相等体积的10%梳酸混匀，使血细胞溶解。
三、样本裂解：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的样本处理试剂（试剂A和试剂B），混匀离心管。
4.将裂解后的样本置于冰上放置10分钟。
四、DNA纯化：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.将样本离心管中的上清转移至新的离心管中，并加入适量的试剂C，混匀并置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免悬浮细胞的干扰。
五、脱脂：1.准备脱脂离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂D，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免沉淀的干扰。
六、洗涤：1.准备洗涤离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂E和试剂F，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免沉淀的干扰。
七、DNA溶解：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂G，混匀并置于冰上放置5分钟。
八、DNA浓缩：1.准备离心管和4℃的离心机。
2.加入适量的试剂H，混匀离心管，置于冰上放置5分钟。
4.弃去上清，避免纯化后的DNA丢失。
九、DNA溶解：1.加入适量的蒸馏水，混匀使DNA溶解。
十、质检：1.准备质检相关设备和试剂。
2.使用紫外分光光度计检测DNA纯度和浓度。
3.对提取的DNA进行PCR扩增、酶切鉴定等质检步骤。
以上就是全血基因组DNA提取试剂盒的使用说明，希望对您在实验中提取DNA有所帮助。
在操作中，请严格按照试剂盒说明书和实验室操作规范进行操作，确保实验的准确性和可重复性。
全血DNA提取步骤
从全血中抽提基因组DNA的方法1、取全血700µL离心，5000rpm，5min，弃去上清液。
2、沉淀物用1mL的红细胞裂解液洗涤3次，5000rpm，5min，弃去上清液，倒干。
3、加入450µL细胞裂解液和6µL蛋白酶K（20mg/mL），55℃～66℃水浴4小时。
4、用等体积的酚、氯仿、异戊醇（25︰24︰1）抽提2次，12000rpm，5min。
5、用2倍体积冰预冷的无水乙醇沉淀（无水乙醇），有絮状沉淀后置于―20℃，沉淀30min。
6、沉淀结束后，12000rpm，5min，弃上清液。
7、用800µlL70%的乙醇洗涤沉淀，12000rpm，3min。
8、弃上清液，干燥。
9、加入50µL 1×TE缓冲液溶解，―20℃保存备用。
附：DNA提取相关试剂配制1、红细胞裂解液（PH 7.4）配制量：1L配制方法：（1）、称量NH4CL 0.802g、NaHCO3 0.84g、Na2EDTA·2H2O37.22g，置于1L烧杯中。
（2）、向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
（3）、加去离子水将溶液定容至1L后，高压灭菌。
（4）、室温保存。
2、细胞裂解液（PH 8.0）配制量：500Ml配制方法：（1）、称量NaCL 2.92g、SDS 5g、Tris 0.61g，置于1L烧杯中。
（2）、向烧杯中加入约300ml的去离子水，搅拌溶解，在溶解过程中用1mL移液器加入10mL的TriTon-100。
（3）、溶解后加入20mg/mL的蛋白酶K 3µL.（4）、加去离子水将溶液定容至500mL后，高压灭菌。
（5）、室温保存。
全血基因组DNA的提取
全血基因组DNA的提取实验2 全血基因组DNA的提取原理：由于血液各组成成分颗粒大小及比重的不同，利用明胶的吸附作用，使红细胞沉降在管底，从而与白细胞分离。
通过SDS的破膜（细胞膜和核膜）作用，使白细胞释放出DNA，然后利用酚和氯仿抽提纯化，分离除去蛋白质，最后用乙醇沉淀析出DNA。
材料：方法：1.提取WBC（1）取1ml全血（EDTA抗凝），加入等体积（1ml ）3%的明胶，盖紧后颠倒混匀，37℃水浴静置5-10分钟。
明胶是高分子的聚合物，可与红细胞粘合并使其凝聚成串钱状而加速红细胞快速沉降，使之与白细胞分离。
（2）取上清液至另一干净离心管，4000转离心5分钟。
（3）弃上清液，留沉淀。
2.破碎WBC在留有沉淀的离心管中加TES 2ml，溶解沉淀（滴管或加样器抽吸，一定要充分吹散沉淀以利于破膜）后加10% SDS 10滴，抽吸混匀，破膜。
以后的操作要小心轻柔，以免机械剪切力破坏核酸的完整性（核酸已释出）3.抽提DNA（1）加入2 ml pH 7.8的饱和酚（在通风橱中操作，吸取下层。
苯酚有毒，注意安全），颠倒混匀（一定要充分混匀）。
4000转离心5-10分钟。
（2）取上层水相至另一离心管，加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1）（在通风橱中操作，有毒，注意安全），颠倒混匀，4000转离心5分钟。
4.沉淀DNA将上层水相移至一小玻璃试管中，小心沿试管壁加入2.5倍体积的无水乙醇，用滴管吸上层乙醇沿管壁缓慢冲洗下层溶液（小心，不要把DNA吹散），看到DNA絮状沉淀完全析出为止。
5.溶解DNA沉淀用吸管吸出絮状沉淀至另一1.5ml小离心管，稍离心后加入70%乙醇洗涤1次（去除共沉淀的盐），离心后将乙醇去除干净，挥干5-10分钟。
将上述挥干的DNA加入200-300μl TE（或者双蒸水），轻轻震荡，使之溶解，冰箱保存备用。
结果：获得基因组DNA 讨论：小组10人，个人分别为一组，有的同学的DNA成形状不明显，到实验步骤的最后没有肉眼看见DNA絮状沉淀析出，难以判断基因组DNA是否提取成功。
实验七 饱和Nacl法提取全血基因组DNA
实验七全血DNA的提取和凝胶电泳检测（氯化钠饱和溶液提取法）实验目的掌握真核细胞基因组染色体DNA的一种提取方法学习使用紫外分光光度法鉴定DNA的纯度，估计相对含量。
实验原理利用高渗溶液裂解红细胞，利用高渗溶液、蛋白酶K溶解白细胞细胞壁，释放核内基因组DNA。
利用DNA不溶于三氯甲烷和乙醇，但其他杂质多溶于此2种溶液，纯化DNA实验仪器及用品•高速冷冻离心机；制冰机；紫外可见分光计；冰箱；水浴锅；离心管；烧杯；•电子天平等实验试剂红细胞裂解液、STE、10%SDS、蛋白酶K、饱和Nacl溶液、三氯甲烷、异丙醇、70%乙醇、双蒸水实验步骤1.裂红细胞：1ml红细胞裂解液+400 l全血加入2mlEP管，反复颠倒混匀，之后静置2min，然后12000rpm离心5min。
弃上清。
【注意不要把下面的白细胞也倒掉】2.裂解过夜：①STE 500μl + ②10% SDS(pH=8.14) 150μl + ③蛋白酶K 10μl 【SDS用之前水浴】①②③加至上面步骤1的管子中，裂解过夜，65度水浴（加裂解液后颠倒混匀）(约每隔一小时操作一次，以使白细胞沉淀充分与裂解混合液接触，裂解更加充分，沉淀要弹起来)3.向上步EP管中加入饱和Nacl溶液300ul，颠倒混匀轻摇3分钟。
【NaCl饱和溶液配制时下面要有一定的未溶解的固体】4．再加400ul三氯甲烷轻轻混匀轻摇5分钟，之后离心（12000rpm，20min，4度或4度预冷）5．取上清（用枪吸至1.5ml新EP管），加异丙醇沉淀DNA（异丙醇最好-20度或4度预冷，用前取出），离心（12000rpm，20min，4度或4度预冷）。
上清：异丙醇=1：0.6. 【取上清时要注意不要把下面的也吸上来，可稍微留下一些】6．70%乙醇洗两次（1ml），颠倒混匀。
12000rpm，离心5min7．烘干8. 加双蒸水或TE溶解。
9.紫外分光光度仪检测实验结果1。
全血DNA提取步骤
全血DNA提取步骤提取全血DNA是常见的分子生物学实验步骤之一，可以用于基因测序、PCR等一系列实验。
下面将详细介绍全血DNA提取的步骤，供参考：1.样本准备首先，需要准备采集血液的材料，如采血管、细胞裂解缓冲液、蛋白溶解缓冲液、蛋白酶K等。
此外，还需要一些实验所需的试剂和器材，如离心管、离心机、恒温器等。
确保仪器和试剂的清洁和消毒。
2.血液采集使用专业的血液采集器具，从被试者的静脉中采集血液样本。
建议使用EDTA抗凝管收集血液，以防止血液凝固。
3.预处理将采集的全血样本通过轻轻倾斜管子，使其混合均匀。
根据实验需要，可选择不同的预处理方式。
如果需要分离血浆或血细胞，可将全血离心，离心速度通常为1000-2000g，离心时间为15-20分钟。
4.细胞裂解将离心后的血细胞沉淀取出，加入适量的细胞裂解缓冲液。
裂解缓冲液的成分通常包括盐溶液、蛋白酶K、非离子型洗涤剂等。
裂解缓冲液的选择可根据实验的目的和所需的DNA纯度来确定。
将裂解缓冲液和血细胞沉淀充分混合，可使用移液器轻轻上下翻动。
5.DNA沉淀将混合好的血细胞裂解液加入离心管中。
在室温下离心10-15分钟，以除去细胞残渣和细胞膜的碎片。
离心完成后，将上清液转移到新的离心管中。
6.蛋白溶解将血细胞裂解液中的蛋白质通过加入蛋白溶解缓冲液沉淀下来。
蛋白溶解缓冲液通常包含盐溶液和蛋白酶K。
将蛋白溶解缓冲液加入上一步的上清液中，轻轻混合，并在室温下静置一段时间。
然后再次进行离心，使蛋白质沉淀到离心管的底部。
7.除去上清液将离心管取出，将上清液倒出，只保留蛋白质沉淀在离心管底部的沉淀。
8.水洗将离心管中的蛋白质沉淀用去离子水洗涤一次，以去除余留的盐溶液和杂质。
将去离子水加入离心管中，轻轻混合后离心，然后将上清液倒出。
9.DNA溶解将沉淀的蛋白质用适量的DNA溶解缓冲液重新溶解。
DNA溶解缓冲液通常包含盐溶液和螯合剂，以便稳定DNA的结构。
将DNA溶解缓冲液加入离心管中，轻轻混合使蛋白质沉淀溶解。
全血dna提取实验报告
全血dna提取实验报告
全血DNA提取是DNA分子生物学中用来分析遗传多态性与染色体研究或突变检测等方
面研究的重要手段之一。
本研究采用厌氧通过脱水-水解提取法进行全血中DNA提取实验，以获取质量更高的DNA分子，并分析每个样本的提取效果。
本实验利用贴片加压技术收集被试全血样本，分别收集200 µl，800 µl和1200 µl。
200µl的血液按比例加入800µl PBS做血浆样本做先行DNA提取实验。
在实验中，利用固相萃取（SPE）技术对全血样品进行基因组DNA提取。
提取进程主
要分为三部分：提取液，洗脱液和上液等步骤，经历细胞消化、碱解、洗脱和上液后可以
完成基因组DNA的提取。
实验结果显示，200µl血液在添加PBS之后，对提取的DNA进行了质量检查，通过两
次PCR检测其纯度，结果表明提取的DNA纯度达到2.2，合格率在99.8%以上，按靶点克
隆法或者qwtPCR法测序可以有效验证实验结果。
800µl和1200µl血液提取的DNA，通过PCR测序，得到了较高质量的DNA，结果表明
提取的DNA纯度经进行质检测无污染物，合格率超过99.9%。
经上述实验，我们可以验证厌氧脱水-水解法可以从血液中高效提取DNA，提取的DNA
纯度高，DNA的片段可以用PCR技术进行扩增，继而用于基因组学分析等研究。
实验二全血基因组DNA的提取
实验二全血基因组DNA的提取实验二：全血基因组DNA的提取一实验目的：1．学习并掌握动物全血提取DNA的方法2．从全血中提取到一定量的纯净的DNA样品二实验原理DNA存在于细胞核中，用细胞裂解液除取红细胞，核裂解液破坏白细胞，氯仿使蛋白质变性，用无水乙醇洗涤DNA，从而得到纯净的DNA分子。
三、实验仪器、材料、试剂（一）仪器1．高速离心机 2．烘箱 3．冰箱4．水浴锅5．微量移液器6．高压灭菌锅（二）材料1．鸡血、2．细胞裂解液3．核裂解液、4．饱和NaCl、5．氯仿、6．无水乙醇、7．ddHO、8.滤纸、9．微量取液器、10.1.5mL/2mL 离心管、11.一次性2手套、12.离心管架、13.记号笔等（三）试剂配制细胞裂解液:10mm/l Tris-Hcl(1mol/L) ,11%w/l蔗糖,5 mmol/L Mgcl2,1%v/vEDTA, 10mm/L Triton 核裂解液：10mm/l Tris-Hcl, 1%w/v SDS, 10mm/L Na2柠檬酸三钠四、实验步骤1．吸取500ul血液至2ml离心管，加入1000ul的细胞裂解液，上下颠倒2-3min。
2．在4°C，6000rpm转速离心3min,弃上清液。
3．重复1-2步（1-3次），直至洗净红细胞，颜色变白为止。
4.加入300ul核裂解液，上下颠倒2min,室温静置2min。
5.加入100ul饱和NaCl和600ul氯仿，轻轻上下颠倒2min, 4°C，6000rpm 转速离心5min。
6.小心吸取上清液（不能吸入下层液体），移至新的1.5ml的离心管。
7.加入600ul冷藏无水乙醇，轻轻摇动，观察有无絮状物质。
8. 4°C，13000rpm转速离心3min，小心倒掉上清液，用滤纸吸取管壁周围的液体，室温下是离心管完全干燥。
（1h左右）9.沿管壁慢慢加入50ul ddHO，然后轻轻吹打均匀。
210.-20°C的冰箱保存。
全血提取DNA分离纯化
全血提取DNA分离纯化，利用PCR扩增检测回收，并用得到的DNA片段做等温吸附曲线实验目的：以人类纯血为材料利用磁分离方法提取并分离提纯。
以DN A为模版扩征600bp片段，电泳检测纯化回收，最终以此片段作为羧基磁球在PEG/nacl吸附下的材料。
实验步骤：（一）全血基因组DNA提取流程1取20ul新鲜,冷冻或抗凝全血加入到1.5ml离心管中（提取超过20%的样本时，可按比例调节加入各缓冲液体积）2加入600ullysis/binding Buffer和20ul Magnetic Beads，涡旋混合器上混匀20s室温放置10min，期间涡旋混匀3次，每次10s。
3. 将离心管置于磁分离架上吸附磁珠2min，移除上清。
4. 加入800ulWashing BufferⅠ，涡旋混合器上混匀10s。
离心管置于磁分离架上待磁珠完全吸附后（约30s）移除上清。
5. 加入800ulWashing BufferⅡ，涡旋混合器上混匀10s。
离心管置于磁分离架上待磁珠完全吸附后（约30s）移除上清。
6. 加入800ulWashing BufferⅢ，涡旋混合器上混匀10s。
离心管置于磁分离架上待磁珠完全吸附后（约30s）移除上清，重复一次（注：尽量移除残留液体，减少洗涤液对后续实验影响）。
7. 将离心管置于磁分离架上（保持磁分离状态），56℃烘箱中干燥3min以除去乙醇。
8. 加入100ulElution Buffer，在涡旋混合器上混匀20s，56℃烘箱中温育5min（温育期间每隔2min涡旋一次）。
9. 取出温育后的离心管，涡旋混合器上混匀10s后离心管置于磁分离架上吸附磁珠（约60s），收集上清液于新的离心管中，约20℃下保存备用。
（二）利用PCR扩增并进行电泳和定性检测（1）取2个1.5ml的离心管，分别向其中加入20ul磁性颗粒，再向1ngDNA,加TE（pH8.0）至总体积为40ul，（2）室温下结合10分钟（期间涡旋振荡20次），（3）9000rpm离心10s，并收集上清液，（4）加入80ul TE（pH8.0）缓冲液涡旋振荡洗涤一次，12000rpm离心10分钟离心除上清，（5）加入40ul1M的磷酸buffer于离心管中，涡旋振荡混匀与80℃脱附40min，将脱附液用TE（pH8.0）稀释10倍，（6）取各实验组上清液和稀释10倍的脱附液各2ul为模板加入PCR扩增体系。
人类基因组DNA的提取_2014
人类基因组DNA的提取【实验目的】1.学习和掌握从人全血中提取基因组DNA的方法。
【实验原理】全血中含有白细胞，可从白细胞中获得基因组DNA。
非离子去污剂如Triton X-100可直接破裂血中红细胞和白细胞的细胞膜，释出血红蛋白及细胞核，反应体系中含一定浓度蔗糖，维护核膜内外的渗透压，以防止核膜破裂，通过离心等手段即可获得白细胞的细胞核。
核悬液中加入核裂解液破坏核膜，并使DNA从核蛋白中解离，裂解液中的EDTA能抑制细胞中DNase的活性，保护DNA暂时不被降解。
再经异丙醇沉淀即可获得基因组DNA。
基因组DNA提取应遵循以下原则，1、尽量保证核酸一级结构的完整性。
2、排除其它分子(如蛋白质、多糖、脂类、有机溶剂等)的污染，使下游试验顺利进行。
【实验用品】1.材料：外周血2.器材：水浴锅、离心机、微量移液器、Tip头、Eppendorf管3.试剂：（1）细胞裂解液：（2）核裂解液（3）蛋白沉淀液（4）DNA溶解液（5）RNA酶（6）异丙醇（7）70%乙醇（8）TE缓冲液【实验步骤】1. 1.5ml离心管中加入300ul经抗凝处理的人全血，加入900ul细胞裂解液翻转5-6次混匀。
2.室温保存10分钟（其间翻转2-3次）裂解红细胞。
室温13000*g离心20秒，弃上清（会有约20ul残留液）。
3.涡旋震荡10-15秒（使细胞核充分重悬）。
加入300ul核裂解液，移液器抽吸5-6次混匀（此时溶液会变粘稠）。
37℃温浴10分钟。
4.加入100ul 蛋白沉淀液，涡旋震荡10-20秒。
5.室温13000*g离心3分钟。
可见到深褐色的蛋白沉淀。
6.将上清转移至1.5ml离心管中，加入300ul室温异丙醇。
7.轻柔翻转离心管，可观察到白色丝状物（即DNA）8.室温13000*g离心1分钟。
可见离心管底部有DNA白色沉淀物。
弃上清。
9.加入300ul 70%乙醇，轻柔翻转清洗DNA，室温13000*g离心1分钟。
全血基因组DNA提取步骤
全血基因组DNA提取步骤1、冷冻全血室温化开。
（如时间紧可37℃化开，反复冻融有利于细胞破裂释放核酸）。
2、取1mL全血，加400μl灭菌蒸馏水，轻缓颠倒混匀5min。
（破碎红细胞）3、10000rpm，10min，可见底部沉淀，倒掉液体。
4、加1mL水，弹起沉淀，颠倒混匀5min。
（破碎红细胞）5、10000rpm，10min，倒掉液体。
（视情况而定，可再洗一次）6、依次加入500μl STE，25μl 10%SDS，10μl 10μg/mL 蛋白酶K。
弹起，颠倒混匀。
7、50℃水浴过夜，可加摇床。
（蛋白酶K的最适温度为55℃，资料上为3h，考虑到过夜时间较长，故降低温度）8、从水浴锅中取出，待降至室温。
9、加500μl Tris饱和酚，颠倒混匀10min。
10、12000rpm，10min。
从离心机取出时注意不要摇动离心管。
仔细将上清移入另一离心管，注意不要吸到中间蛋白层。
11、上清液中加500μl Tris饱和酚，颠倒混匀10min。
12000rpm，10min，取上清。
12、上清液中加500μl 酚/氯仿/异戊醇（25:24:1），颠倒混匀10min。
12000rpm，10min，取上清。
13、上清液中加500μl 氯仿/异戊醇（24:1），颠倒混匀10min。
12000rpm，10min，取上清。
14、加1mL冰冻无水乙醇，轻轻颠倒，可见白色絮状沉淀，用枪头挑入另一离心管。
若只见白色浑浊液体（无絮状沉淀），可加20μl 醋酸铵，轻轻颠倒混匀，液体可变清亮。
8000rpm，5min。
倒去液体。
15、加1mL 70%冰冻乙醇洗涤沉淀，8000rpm，5min。
倒去液体。
16、将离心管倒扣在滤纸上，晾干（需1h以上）。
17、加100μl TE，弹起，置4℃过夜溶解。
次日0.8%琼脂糖凝胶电泳检测。
全血dna提取原理
全血dna提取原理
全血DNA提取是一种常用的实验技术，旨在从人体全血样本
中分离纯净的DNA。
全血DNA提取的原理主要包括以下几
个步骤。
首先，将全血样本进行离心，以分离血液中的红血细胞（RBCs）、白血细胞（WBCs）和血小板。
离心后，上清液
中含有RBCs和WBCs混合的细胞组分。
其次，采用红细胞裂解缓冲液，使RBCs在牺牲细胞膜完整性
的同时释放出细胞内的血红素。
血红素会结合到缓冲液中的成分上，从而不会对后续DNA提取步骤产生干扰。
然后，WBCs的核酸膜被洗涤和蛋白酶降解，以去除表面的蛋
白质和杂质。
随后，用组织裂解缓冲液处理细胞，以破坏细胞膜结构，释放出细胞内的DNA。
为了去除细胞膜碎片、蛋白质和其他杂质，可通过离心将细胞碎片沉淀下来，上清液则富含DNA分子。
将上清液用等体积
的冰冷异丙醇（isopropanol）沉淀DNA，使其从溶液中析出。
最后，用乙醇洗涤沉淀得到的DNA，以去除残留的盐和其他
重组浓度和纯度的DNA样本。
最终，通过在适当的缓冲液中
重新溶解DNA，即可获得纯净的全血DNA样品。
全血DNA提取的过程中需要注意使用无菌操作和一些酶解、
洗涤等步骤，以确保提取出的DNA样品纯度高、浓度适当，并且不受外界污染影响。
血液基因组dna的提取
血液基因组dna的提取
血液基因组DNA的提取是一种常用的分子生物学技术，在实
验室中可以进行以下步骤：
1. 样本收集：使用适当的采集工具，如血液采集管或抽血针，从受试者的静脉或指尖收集血液样本。
2. 细胞溶解：将采集到的血液样本转移到一个试管中，并加入细胞溶解缓冲液。
这个缓冲液中含有盐和酶，可以溶解血细胞膜，释放细胞内的核酸。
3. 蛋白质消化：加入蛋白酶K等酶，用于消化血液样品中的
蛋白质，使DNA从蛋白质中解脱出来。
4. DNA沉淀：通过加入盐和酒精，使DNA从溶液中沉淀出来。
沉淀的DNA可以通过离心将其分离出来。
5. 清洗和纯化：将沉淀的DNA用乙醇或异丙醇洗涤，以去除
残留的盐和酒精。
然后使用缓冲液或纯化试剂将DNA溶解和
纯化。
6. DNA浓度和质量测定：使用分光光度计或荧光探针等工具，测定提取的DNA的浓度和质量。
这一步可以帮助确定DNA
是否适用于后续的实验。
血液基因组DNA提取的具体方法可能因实验室和所需的
DNA用途而有所不同。
以上步骤提供了一个常见的基本流程，但具体的实验细节和试剂可以根据实验需求进行调整和优化。
抗凝全血提取基因组dna方法
抗凝全血提取基因组dna方法
1.引言
基因组DNA提取是许多分子生物学实验和研究的前提。
在血液样本中提取基因组DNA，通常需要先对血液进行抗凝处理。
抗凝全血提取基因组DNA方法是通过抗凝处理后提取全血中的基因组DNA的一种比较常用的方法。
2.抗凝处理
抗凝处理是将血液样本添加抗凝剂，防止血液凝固的过程。
常用的抗凝剂有EDTA、肝素、血管收缩素等。
EDTA是最常用的抗凝剂，因为它可以有效地抑制血液中凝血酶，而且对于细胞膜和DNA分子没有明显的影响。
3.基因组DNA提取方法
3.1样本收集
收集血液样本，采用抗凝剂抗凝化处理。
3.2细胞破碎和溶解
将抗凝全血加入离心管中，离心剪切打破细胞，使DNA脱离细胞核，然后加入强力裂解缓冲液，将细胞裂解并使DNA溶解。
3.3脱除蛋白质和其他杂质
加入蛋白酶K，将DNA的包袱物脱离，进行蛋白质除去，加入酒精，以沉淀DNA，将上清液去除，反复洗涤。
3.4DNA酶解
加入DNA酶，酶解剩余RNA，质粒DNA等杂质，加入盐酸，调节pH值。
3.5DNA沉淀和洗涤
加入加盐缓冲液，沉淀DNA，加入酒精，洗涤即可。
4.结论
抗凝全血提取基因组DNA方法对于一些需要处理大量样本的实验和研究，具有很高的效率和可重复性。
同时，该方法也易于操作，可灵活调整实验条件。
需要注意的是实验中要注意抗凝剂和一些去杂质物品的添加量。
全血DNA的提取及电泳
2.白色絮状沉淀
二、琼脂糖凝胶电泳
1.原理
⑴琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定以 及纯化DNA或者RNA分子的方法。
⑵这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用 DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效 应，达到分离混合物的目的。
⑶电泳介质
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，是由D型和 L型半乳糖以α-1，3和β-1，4糖苷键相连形成的线状高 聚物。沸水中溶解，45℃ 开始形成多孔性刚性滤孔， 凝胶孔径的大小（孔径范围从50nm到大于200nm）决定 于琼脂糖的浓度。
⑵.实验试剂： ① 琼脂糖
② 5×TAE电泳缓冲液 ③ 6×电泳载样缓冲液（ 6× loading dye）：
0.25％ 溴酚蓝，0.25% 二甲苯青，40 ％(w/v) 蔗糖水溶液，贮存于 4℃。 ④ goldview I型核酸染料：
每10 μl DNA加入2 μl染料。
⑶.实验仪器
凝胶成像系统
最后用乙醇沉淀洗出DNA。
2.材料与方法
⑴.材料 用含抗凝剂的采血管进行采血，抗凝剂一般 有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不会影响下 游的反应。 每5ml的血液中加入0.4ml 0.04M EDTA配好 的EDTA溶液，颠倒混匀即可。 保存于-20℃至-80℃，最好在2个月内提取。
3%明胶，TES， Tris饱和酚（pH7.8）， 氯仿：异戊醇（24:1），无水乙醇，TE
3.点样时枪头下伸，点样孔内不能有气泡，缓冲液不要 太多。
凝胶冷却至50℃，加goldview I 2 μl摇匀
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
凝胶凝固后取出梳子
加缓冲液
准备样品
点样
电泳
注意观察溴酚蓝染液的迁移
紫外灯下观察电泳结果
全血基因组DNA的提取
思考
❖本实验中所用的试剂GB、GD、PW、 TB的作用分别是什么?
❖DNA提取量少或者DNA样品不纯的原 因可能有哪些?
地中海贫血基因检测
全血基因组DNA提 取
概述
❖地中海贫血是由于某类珠蛋白合成受 抑制所引起的溶血性贫血。
❖地中海贫血主要分为α-地中海贫血和 β-地中海贫血。
α-地中海贫血基因诊断操作流程
β-地中海贫血基因诊断操作流程
实验目的 ❖1 掌握离心柱法提取全血DNA的
检测方法
❖2 了解DNA浓度及纯度的检测
试剂准备 ❖血液DNA提取试剂盒
❖主要成分包括：
缓冲液GB 缓冲液GD 漂洗液PW 洗脱缓冲液TB 蛋白酶K 无水乙醇（自备） ❖其他材料：吸附柱CB3 收集管 1.5ml离心 管
实验步骤
❖ 每组做两个标本， 先准备两个1.5ml离 心管，编号
Ⅰ 样本裂解
➢加20ul蛋白酶 ➢加200ul全血 ➢加200ul GB
实 验 原 理(离心柱法) ❖独特的缓冲液/蛋白酶K迅速裂解
细胞和灭活细胞内核酸酶，使蛋白 与DNA分离,然后基因组DNA在高 盐状态下选择性吸附于离心柱内硅 胶膜，再通过一系列快速的漂洗－ 离心的步骤,抑制物去除液和漂洗 液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因 组DNA从硅胶膜上洗脱。
实验步骤
沉淀核酸
裂样解本后裂样解本
加入吸附柱
核酸吸附
缓冲液漂洗
漂洗去杂
DNA洗脱收集
➢向吸附柱中加入 500ulGD ,13000rpm离心30sec , 倒掉废液,将吸附柱放回收集管中 ➢向吸附柱中加入 600ulPW ,13000rpm离心 30sec ,倒掉废液,将吸附柱放回收 集管中 ➢向吸附柱中加入 600ulPW ,13000rpm离心2min , 倒掉废液,将吸附柱放. 回收集管中 ➢柱子开盖室温放置数分钟,以彻底 晾干吸附柱中残余的漂洗液
Qiagen全血基因组DNA提取标准步骤(51185)
全血基因组DNA提取
试剂盒名称：
QIAamp DNA Blood Midi Kit（100）
Qiagen全血基因组DNA提取试剂盒
试剂盒货号：
51185
前期准备：
1.5mL EP管、水浴锅、水平转子离心机、震荡器等设备耗材准备，试剂盒提供的蛋白酶溶解、AW1和AW2使用前加入相应体积的无水乙醇。
注：所需设备耗材由新华医院分子诊断实验室提供。
实验步骤：
1、往15mL离心管管底加入100微升Qiagen蛋白酶。
2、加入1mL全血。
注：全血体积不足1mL时，PBS补齐1mL。
3、加入1.2mL AL缓冲液，充分混匀，震荡器上斡旋震荡至少一分钟，使溶液成为均相溶液。
4、70℃水浴锅温育10分钟。
5、加入1mL无水乙醇，充分震荡。
6、转移液体至吸附柱中，3000rpm离心3分钟，拿出吸附柱，倾倒滤液，将吸附柱重新放回15mL离心管中。
7、小心加入AW1缓冲液至吸附柱中，盖上盖子，5000rpm离心
1分钟。
8、加入2mL AW2缓冲液至吸附柱中，盖上盖子，5000rpm离心15分钟。
9、将吸附柱转移至一新的15mL离心管中，弃去装有滤液的收集管。
10、加入200微升AE洗脱液，室温静置5分钟，5000rpm离心2分钟。
11、将获得的基因组DNA进行浓度及质量测定。
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勿起泡。胶凝固后垂直取出梳子，
将制好的胶板置入电泳槽内，并加入
3.加样、电泳
电泳缓冲液。
凝胶电泳操作注意事项
1.缓冲系统：注意缓冲液的使用是否正确。 2.凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一
致，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。
倒入板中的凝胶应避免出现气泡，影响电泳结果。 3.样品加入量：加样量的多少依据加样孔的大小及DNA 中片段的数量和大小而定，过多的量会造成加样孔超载， 从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。
（7） 加入500ul GenTLE Solution Ⅲ 轻微振荡10s充分混合。
此时沉淀看不清。
室温12,000rpm离心5min
将上清转移至另一个新的离心管中
加入等体积（500ul）异丙醇，轻柔颠倒混匀。 4℃12,000rpm离心5min，小心去除上清，加入1ml的70%乙醇清洗沉淀， 再次4℃12,000rpm离心5min，小心去除上清并干燥沉淀。
破坏血细胞同时，与核酸形成电中性的复合体。
GenTLE solution Ⅱ： 复合体离心收集后清洗，洗涤作用。 GenTLE solution Ⅲ： 将DNA从核蛋白中解离出来。 异丙醇：将DNA沉淀回收。 70%酒精：利用DNA不溶于酒精的特性，去除DNA沉淀中 残留的盐类分子。
四、实验流程与要求
沉淀的溶解：加入30ul DH2O（或TE缓冲液）。
提取DNA质量的初鉴
琼脂糖凝胶电泳
0.3g琼脂糖+30ml 0.5×TBE缓冲液， 加热至完全溶化且摇匀，温度适宜时 加入荧光染料。 将样品梳插于内槽，并将制胶槽平放
1.制备琼脂糖凝胶
2.胶板的制备
在桌上，将冷却至60度的琼脂糖凝胶 缓缓倒入槽内，使其形成均一胶面，
三、实验材料
1、高速离心机。 2、全血DNA提取试剂盒（TaKaRa宝生物工程公司） 试剂盒组成： GenTLE solution Ⅰ GenTLE solution Ⅱ GenTLE solution Ⅲ 3、异丙醇、70%乙醇。 1瓶 2瓶 1瓶
各试剂成分作用：
GenTLE solution Ⅰ：
经各种抗凝剂处理过的全血
新鲜全血的收集
（EDTA、柠檬酸或肝素）
全血DNA的提取
按试剂盒说明书操作。见后
提取DNA质量的初鉴
1、琼脂糖凝胶电泳初步鉴定； 2、测定DNA浓度及纯度；
A260/A280比值
全血DNA的提取
（1）
振荡混匀数秒
（2）
GenTLE Solution I 500ul 100ul混匀的全血
5. 电泳系统的变化会影响DNA的迁移，加入DNA标准参照 物进行判定是必要的。 6. DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品
应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。
7. DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状 及大小。采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA 分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶 的浓度。小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以
（三）常用提取方法： 有机溶剂抽提法（氯仿-异戊醇法） 盐析法（经典Miller盐析法） NaI法 ……
NaI法提取外周血白细胞DNA，提取的DNA可直接用于酶 切、PCR扩增、银染序列。通过本实验学习和掌握NaI法 提取DNA。
二、实验原理
从全血制备白细胞DNA，可用双蒸水溶胀红细胞及 白细胞膜，释放出血红蛋白及细胞核，使核酸处于 易提取状态，加NaI破核膜并使DNA从核蛋白中解 离，用氯仿/异戊醇抽提使蛋白质沉淀完全，DNA 存在于上层水相中，以异丙醇沉淀DNA，离心弃去 异丙醇，70%酒精干燥，即可获得白细胞DNA。
提高分辨率。
五、实验结果
在凝胶成像系统中紫外灯观察拍照（戴手套操 作）。DNA存在处显出桔红色荧光条带（EB染 料呈现桔红色）。
Molecular Biology
谢谢！
（3）
室温放置10min以上
12,000rpm离心5min(20℃以上离心) （4） （6） 加入1ml GenTLE Solution Ⅱ 沿管内侧内壁加入到离心管中 轻柔颠倒离心管2-3次，室温
12,000rpm离心2min,去除上清。
（5）
小心去除管中液，枪头不 要碰到离心管内壁（防止 吸走沉淀物）
分子生物学检验技术的应用
本学期实验内容
1
2
3
理论考试占70%，实验成绩占30%
实验一 全血基因组DNA的提取
基因组（Genome）：细胞中一套完整单 倍体的遗传物质的总和。
原核生物基因组
病毒基因组
真核生物基因组
真核基因组DNA的分离纯化 （1）核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都 以与蛋白质结合的状态存在。
（2）真核生物的染色体DNA为双链线性分子；
分离核酸注意事项：
（1）减少化学因素对核酸的降解。 （2）减少物理因素对核酸的降解。 （3）防止核酸的生物降解：
策略：新鲜生物组织或细胞样品。
核酸提取的主要步骤：
一般为破碎细胞，去除与核酸结合的蛋白质以及 多糖、脂类等生物大分子，去除其他不需要的核
酸分子，沉淀核酸以去除盐、有机溶剂等杂质，
最后得到纯化的核酸。
一、实验目的与意义
（一）目的：掌握全血DNA提取基本技能。
（二）意义：基因组DNA含有细胞中全部的遗传信息，
从全血中提取DNA是遗传性疾病、胎儿产前无创
伤诊断、肿瘤和传染性疾病等的早期确诊的重要 手段和技术，DNA提取的质量和产量直接影响PCR 扩增、分子克隆、限制性内切酶的酶切反应等试验 的成败。
Molecular Biology
分子生物学检验技术
研究对象
分子生物学
其表达产物蛋白质
DNA及RNA
分子水平
功能 探讨生命现象 遗传 关系、作用
以超乎想象的速度飞速发展，渗透到医学每一个领域。
与临床检验诊断学关系
使疾病诊断深入到基因水平
基因诊断
可以毫不夸张的说，如果没有分子生物学的应用，
人类探索生命活动的行为将会寸步难行。