Agilent HPLC使用过程中常见问题及解决方法

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安捷伦液相色谱使用问题与解决方案

安捷伦液相色谱使用问题与解决方案

安捷伦液相色谱使用问题与解决方案 Agilent LC 问题与答案一.什么原因导致液相色谱仪压力过高?可能的原因:1. 排气阀里面的 PTFE 滤蕊堵塞。

2. 压力上限设置太低。

3. 压力传感器堵塞。

4. 建议的措施:1. 打开排气阀。

如果压力依然很高,则更换排气阀内的 PTFE 滤芯。

2. 查看软件的压力上限设置并确保设置值适于分析。

3. 检查系统内的堵塞部位。

(如下所述)要检查是否堵塞,请采用隔离系统的方法来排除故障:将安装的色谱柱、预色谱柱和预色谱柱过滤器摘开。

①. 如果压力恢复到正常值,则在色谱柱的位置安装 ZDV 接头。

A 如果压力正常,则色谱柱、预色谱柱或过滤器是产生问题的原因。

请进行更换。

B 如果压力仍然很高,则在色谱柱的另一端查找堵塞位置(例如:通入检测器或从其通出的管路)。

②. 如果取出色谱柱后压力依然很高,则检查从排气阀到自动进样器的管路。

如果压力正常,则使用进样步骤命令将自动进样器的进样阀切换到旁路状态。

A 如果压力正常,则说明自动进样器堵塞。

请检查针、针座、针座毛细管和转子密封垫。

B 如果压力依然很高,则检查从进样六通阀到色谱柱入口之间的管线.。

二.改变填料孔径大小对液相色谱分离有什么影响?填料孔径越小,允许的流动相线速度越高。

最佳流动相线速度取决于固定相的颗粒大小。

在最佳线速度时,色谱柱生成的理论塔板数最多。

对于内径为 4.6mm 的色谱柱,10um 的颗粒流动相线速度为 0.75ml/min 或 5um 的颗粒流动相线速度为 1.5ml/min 时,塔板数最多三.如何避免峰拖尾和峰分叉?与色谱柱相关的原因及处理方法1 色谱柱污染; 处理方法:清洗或更换色谱柱2 色谱柱填料有问题;处理方法:反冲色谱柱或更换柱头过滤片3 色谱柱中间出现间断;处理方法:更换色谱柱或填充空隙4 保护柱失效;处理方法:更换保护柱5 样品分布差;处理方法:改进色谱柱进口的设计6 与色谱柱无关的原因:柱外体积大、样品过量、流动相组分(添加剂、pH值、缓冲液浓度)改变。

安捷伦气相色谱仪测定常见问题解答 气相色谱仪解决方案

安捷伦气相色谱仪测定常见问题解答 气相色谱仪解决方案

安捷伦气相色谱仪测定常见问题解答气相色谱仪解决方案在利用安捷伦气相色谱仪测测定物质时,常常回碰到一些问题,导致试验不能正常进行,下面我们来看看这些问题该怎么去解决一、有什么方法能替代液液萃取?固相微萃取、加速溶剂提取、微波萃取都是现在开展比较广泛的前处理方法二、色谱柱老化一般怎么处理好一些?1、程序升温老化效果较好,多做几个来回;2、柱子确定要接上载气;3、不要接检测器一端;4、紧密柱子zui高使用温度,应在低于此温度20度以下老化三、安捷伦气相色谱仪气相进样溶剂可以选择MtBE吗?与丙酮相比哪个更好呢?可以的,只是要看你的目标物在那个溶剂系统里面溶解性更强些,基质效应更小。

四、pgm是什么意思?Pgm是“program”的缩写,指的是这个柱子在程序升温的情况下可以短时间保持在这个温度。

五、安捷伦气相色谱仪酒类样品进样是顶空进样吗?不愿定,这个要看对酒类中什么样的物质感喜好,假如是沸点较低的挥发性有机物,那用顶空进样就可以得到较好的试验重复性。

六、安捷伦气相色谱仪标样溶于甲醇,进样时用丙酮稀释后,峰拖尾,且基线较高,有什么方法可以改善吗?是用正己烷溶解的?估量是不分流进样,可以调大隔垫吹扫的流量七、ecd一般用什么试剂溶解标样好一些?是不是甲醇乙腈丙酮一类对ecd进样不好不要用电负性较强的溶剂,甲醇、乙腈等的确要尽量少用,但丙酮还好。

八、乙酸乙酯对ecd合适吗,还有甲苯、正己烷、环己烷,虽然正己烷对ecdzui合适,但好多农药标样在正己烷溶解度低,只能溶解在强极性溶剂中,在这种情况有需要ecd检测怎么配标样比较好?对于ECD,尽量不要用电负性大的溶剂,但乙酸乙酯算中等极性,在某些情况下还是可以考虑使用的。

九、NPD是不是也对强极性试剂也是不太好?是的,特别是卤族溶剂,简单导致铷珠激发淬灭,所以尽量避开使用。

十、安捷伦气相色谱仪进样溶剂对响应影响不大吗?溶剂对响应的影响紧要体现在对目标物的溶解度上,在对色谱系统污染或损害小的基础上,选择溶解度较大的溶剂。

安捷伦液相色谱仪常见故障排除

安捷伦液相色谱仪常见故障排除

安捷伦液相色谱仪常见故障排除液相色谱仪常见故障排除HPLC故障排除症状类型可能的原因解决方案随机性, 污染物积聚冲冲洗柱;净化样品;使用HPLC 级溶剂连续性, 检测器灯故障更换紫外灯(寿命为1000 小时) 基线噪声大偶然性, 外部电气干扰使用LC 系统专用稳压器样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6进样溶剂过强使用较弱的进样溶剂或流动相更换并使用0.5 μm 孔隙率的在线过滤滤芯堵塞器柱有空隙或气沟用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱双峰进样器流路不通畅更换进样器转子柱头有空隙使用填料或玻璃珠填充柱顶部使用更高负载量的固定相增加色谱柱柱上样品超载内径减少样品量单峰, 存在干扰性组分净化样品;预分离开始出双峰请参见双峰减少接头的数量确保进样器密封垫紧存在未扫的死体积密确保接头正确固定拖尾峰碱性化合物, 硅醇相互作用换成聚合物固定相使用更强的流动相或添加竞争碱(例如,碱性物质, 硅醇相互作用三甲胺硅胶基, 柱降解使用特种色谱柱;聚合物柱或空间位阻进样量过大降低进样溶剂的强度以集中溶质进样阀中的峰扩散在进样前/后引入气泡以减少扩散数据系统的采样速率过低增大采样峰展宽检测器时间常数低调节时间常数使之与峰宽匹配流动相粘度过高提高柱温检测器池容积过大使用尽可能小的池容积(系统中无热交for more than 60 years of rural senior party member care funds; System of regulating the activities of grass-roots party organizations, and enhance the sense of belonging of grass-roots party members; Hold fast to implement "red credit", "red stake" two major project opportunities, strive to explore new ways of development of village collective economy, rural collective economy achieve breakthrough; A progress review by the Secretary of the party work of grass-roots party organizations, strengthens the responsibility of grasping party building, Party Secretary. Second, strengthening the construction of clean and honest Government and fight against corruption. Seriously implement the honest responsibility, actively carry out the independent Commission against corruption interview system, increase the leadership and the day-to-day supervision of party members and cadres at all levels, strengthen the not Winds of special treatment, treatment of "laid-back luxury and arrogance" and "three-pronged" problem, non-gang, national public officers, serving in leadership positions is not land, above-standard equipped with buses and cars for private purposes, and recreational city of gifts, hospitality, luxury and waste, "emptied the rating" special rectification work. Adhere to the rot will be punishing, corrupt Su, and 1 village, 4disciplinary administrative cadres and workers. Three is to strengthen peace to create a work. Strengthen source management, adhere to prevention, focusing on prevention. Carry out the "big reception, big tour" campaign, petitioning for the cadres of the换器)注射器体积过大减少进样量保留时间长使用梯度洗脱或较强的流动相单向阀泄漏更换单向压力波动泵密封垫泄漏更换泵密封微粒积聚过滤样品;在线过滤器;过滤流动相微粒积聚过滤样品;在线过滤器;过滤流动相压力渐增水/有机系统, 缓冲液沉淀测试缓冲液-有机混合物;确保兼容性保留超出总渗透体积体积排阻, 特异性相互作用添加流动相改性剂或更改溶剂柱温不断变化使柱恒温;绝缘;保证实验室温度恒定平衡时间不足以适应梯度洗脱要求,或等确信在溶剂改变或梯度结束后至少10 度洗脱流动相起变化个柱容积通过色谱柱减少氦气的剧烈脱气;保持溶剂贮器盖流动相组分选择性蒸发好;制备新的流动相保留时间不断变动缓冲能力不足用>20 mM 浓度的缓冲液保证梯度系统输送恒定组成;与手动制在线流动相混合不一致备流动相核对污染积聚冲洗色谱柱以去除污染物用浓样品进样冲洗柱,使其处于正常状最初几次进样—吸附在活性部位态流速在增加检查泵以确保正确;否则需重调保留时间逐渐缩短柱上进样超载减少样品键合固定相的流失保持流动相pH 值在2-8.5 间解决液流中的漏液现象,更换泵密封垫,流速在减慢检查泵的涡流和气泡硅胶填料的活化点使用流动相改性剂键合固定相的流失保持流动相pH 值在2-8.5 间保留时间逐渐增加流动相组成在变化确保流动相容器盖好硅胶填料的活化点流动相中加竞争碱硅胶填料的活化点固定相用更高覆盖度的填充料灵敏度问题峰位于检测器线性范围之外稀释或浓缩使之处于线性区内 for more than 60 years of rural senior party member care funds; System of regulating the activities of grass-roots party organizations, and enhance the sense of belonging of grass-roots party members; Hold fast to implement "red credit", "red stake" two major project opportunities, strive to explore new ways of development of village collective economy, rural collective economy achieve breakthrough; A progress review by the Secretary of the party work of grass-roots party organizations, strengthens the responsibility of grasping party building, Party Secretary. Second, strengthening the construction of clean and honest Government and fight against corruption. Seriously implement the honest responsibility, actively carry out the independent Commission against corruption interview system, increase the leadership and the day-to-day supervision of party members and cadres at all levels, strengthen the not Winds of special treatment, treatment of "laid-back luxury and arrogance" and "three-pronged" problem, non-gang, national public officers, serving in leadership positions is not land, above-standard equipped with buses and cars for private purposes, and recreational city of gifts, hospitality, luxury and waste, "emptied therating" special rectification work. Adhere to the rot will be punishing, corrupt Su, and 1 village, 4 disciplinary administrative cadres and workers. Three is to strengthen peace to create a work. Strengthen source management, adhere to prevention, focusing on prevention. Carry out the "big reception, big tour" campaign, petitioning for the cadres of the最初几次进样—样品在样品池或柱中被用浓样品处理样品池/柱吸附自动进样器流路阻塞自动进样器流路阻塞检查流量情况,确保无阻塞现象进样器样品定量管未充满确保样品池中已充满样品用内标法在制备样品,优化样品制备方在样品制品时有关的样品流失法柱平衡时间减慢(离长链离子对试剂平衡时间慢使用较短的烷链试剂子对现象) 液相基线噪音问题的排查思路常见色谱故障——基线噪音液相常见压力问题的原因分析1. 常见色谱故障——压力波动可能的原因:, 溶剂进口过滤芯堵塞, 溶剂未脱气, 泵的密封垫老化, 出口单向阀失效, 主动阀失效最常见的原因是:泵内有气泡for more than 60 years of rural senior party member care funds; System of regulating the activities of grass-roots party organizations, and enhance the sense of belonging of grass-roots party members; Hold fast to implement "red credit", "red stake" two major projectopportunities, strive to explore new ways of development of village collective economy, rural collective economy achieve breakthrough; A progress review by the Secretary of the party work of grass-roots party organizations, strengthens the responsibility of grasping party building, Party Secretary. Second, strengthening the construction of clean and honest Government and fight against corruption. Seriously implement the honest responsibility, actively carry out the independent Commission against corruption interview system, increase the leadership and theday-to-day supervision of party members and cadres at all levels, strengthen the not Winds of special treatment, treatment of "laid-back luxury and arrogance" and "three-pronged" problem, non-gang, national public officers, serving in leadership positions is not land, above-standard equipped with buses and cars for private purposes, and recreational city of gifts, hospitality, luxury and waste, "emptied the rating" special rectification work. Adhere to the rot will be punishing, corrupt Su, and 1 village, 4 disciplinary administrative cadres and workers. Three is to strengthen peace to create a work. Strengthensource management, adhere to prevention, focusing on prevention. Carry out the "big reception, big tour" campaign, petitioning for the cadresof the2. 常见色谱故障——压力过低可能的原因:, 溶剂进口过滤芯堵塞 , 连接管路泄漏或其它备件(泵头密封垫), 溶剂或流速改变, 主动阀失灵, 四元比例阀失灵, 单向出口阀失灵, 色谱柱失效(固定相流失)3. 常见色谱故障——压力过高可能的原因:, 柱子进口过滤芯被污染 , PURGE阀过滤芯被污染 , 色谱柱被污染, 连接管路,尤其是针座毛细管堵塞, 进样器旋转密封阀被堵塞, 进样针或针座被阻塞 for more than 60 years of rural senior party member care funds; System of regulating the activities of grass-roots party organizations, and enhance the sense of belonging of grass-roots party members; Hold fast to implement "red credit", "red stake" two major project opportunities, strive to explore new ways of developmentof village collective economy, rural collective economy achieve breakthrough; A progress review by the Secretary of the party work of grass-roots party organizations, strengthens the responsibility of grasping party building, Party Secretary. Second, strengthening the construction of clean and honest Government and fight against corruption. Seriously implement the honest responsibility, actively carry out the independent Commission against corruption interview system, increase the leadership and the day-to-day supervision of party members and cadres at all levels, strengthen the not Winds of special treatment, treatment of "laid-back luxury and arrogance" and "three-pronged" problem, non-gang, national public officers, serving in leadership positions is not land, above-standard equipped with buses and cars for private purposes, and recreational city of gifts, hospitality, luxury and waste, "emptied the rating" special rectification work. Adhere to the rot will be punishing, corrupt Su, and 1 village, 4 disciplinary administrative cadres and workers. Three is to strengthen peace to create a work. Strengthensource management, adhere to prevention, focusing on prevention. Carry out the "big reception, big tour" campaign, petitioning for the cadresof thefor more than 60 years of rural senior party member care funds; System of regulating the activities of grass-roots party organizations, and enhance the sense of belonging of grass-roots party members; Holdfast to implement "red credit", "red stake" two major project opportunities, strive to explore new ways of development of villagecollective economy, rural collective economy achieve breakthrough; A progress review by the Secretary of the party work of grass-roots party organizations, strengthens the responsibility of grasping party building, Party Secretary. Second, strengthening the construction of clean and honest Government and fight against corruption. Seriously implement the honest responsibility, actively carry out the independent Commission against corruption interview system, increase the leadership and theday-to-day supervision of party members and cadres at all levels, strengthen the not Winds of special treatment, treatment of "laid-back luxury and arrogance" and "three-pronged" problem, non-gang, national public officers, serving in leadership positions is not land, above-standard equipped with buses and cars for private purposes, and recreational city of gifts, hospitality, luxury and waste, "emptied the rating" special rectification work. Adhere to the rot will be punishing, corrupt Su, and 1 village, 4 disciplinary administrative cadres and workers. Three is to strengthen peace to create a work. Strengthensource management, adhere to prevention, focusing on prevention. Carry out the "big reception, big tour" campaign, petitioning for the cadresof the。

简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项

简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项

简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
安捷伦高效液相色谱仪(Agilent HPLC)是一种常用的分析仪器,广泛应用于化学、生物、环境等领域。

其操作流程和注意事项如下:
操作流程:
1. 准备样品溶液:根据分析目的选择适当的溶剂,将样品溶解或稀释至所需浓度。

2. 准备色谱柱:根据分析需求选择合适的色谱柱,并按照柱床规定的要求进行预处理,如洗涤、调pH等。

3. 连接系统:将色谱柱安装在仪器上,连接好进样器、泵、检测器和废液收集器等组件,确保连接紧密无漏。

4. 设置方法参数:根据分析需求,设置泵的流速、进样器的进样量、检测器的波长和灵敏度等方法参数。

5. 系统平衡:启动泵和检测器,运行空白试验,确保色谱柱和系统内部达到平衡状态。

6. 样品进样:将样品进样器插入样品瓶中,抽取足够的样品并注入进样器,按下进样按钮进行进样。

7. 进行分离:启动泵,使流动相通过柱床,样品分离过程中不断采集检测器的信号。

8. 数据处理:分析和处理检测器输出的信号,得出对应的峰面积、峰高度等结果,进行数据分析和解释。

注意事项:
- 严格按照使用手册和方法要求操作仪器,遵循操作规程,避免误操作和事故发生。

- 确保色谱柱、进样器及连接部分的密封性良好,防止泄漏和污染。

- 选择适当的溶剂和流动相,避免与柱材和样品相互作用,影响分析结果。

- 定期检查和维护仪器,如泵的排气、封头的更换、泄漏点的处理等,确保仪器正常运行。

- 样品处理过程中,注意避免光线、温度和湿度的影响,尽量保持稳定的分析环境。

- 使用仪器前,需提前熟悉相关方法和仪器操作,做好实验前的准备工作。

Agilent-HPLC使用过程中常见问题及解决方法

Agilent-HPLC使用过程中常见问题及解决方法

Agilent HPLC使用过程中常见问题及解决方法一、如何处理HPLC 中的盐带来的问题?很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。

建议在清洗时将水加热后再冲洗,这样既可以将盐溶解的更好,也可以溶解一些脂溶性物质,会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出,基线噪音……二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护泵是液相色谱的核心,泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中,并要在高压下保持流量和压力的稳定。

泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础,所以平日一定要重视对泵的维护。

下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。

1.流动相的准备为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损,流动相(特别是水相)应该新鲜配置并且过滤。

上机前对流动相进行适当的超声脱气,以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。

2.比例阀溶剂通道的分配四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道,建议将盐溶液接在下面的通道(A或D),将有机溶剂接在上面的通道(B 或C)上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。

且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。

3.过滤白头的维护过滤白头位于排气阀内,是一种聚四氟乙烯材质的微孔过滤芯,用于过滤流动相中的微粒,是经常需要维护的地方。

当系统压力有异常增高时,首先需要检查过滤白头是否阻塞了。

判断的方法是:打开排气阀,以纯水作流动相,将流速设为5mL/min,如果泵压超过10bar,则说明过滤白头需要更换了。

对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次,更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫,如果发现变形,也应及时更换。

如果过滤白头更换过于频繁,则需要认真检查一下流动相的品质,确保流动相上机前过滤,确保使用了合适的过滤膜。

如果流动相有长菌现象,除了配置新的溶剂,还应对相应的溶剂管线和脱气机通道进行彻底的清洗。

4.柱塞杆与柱塞密封圈的维护柱塞密封圈套在柱塞杆上用于隔离泵与外界,工作时,它和柱塞杆进行频繁的往复摩擦,使用一段时间后,会有一定的磨损,因而密封圈需要定期更换以保证系统的密封性。

安捷伦气相色谱仪分析中常见故障其排出方法 气相色谱仪解决方案

安捷伦气相色谱仪分析中常见故障其排出方法 气相色谱仪解决方案

安捷伦气相色谱仪分析中常见故障其排出方法气相色谱仪解决方案对一位色谱分析工来说,娴熟把握安捷伦气相色谱仪的结构原理及各部分的作用是很紧要的。

安捷伦气相色谱仪的基本构造有两部分,即分析单元和显示单元。

前者紧要包括气源及掌控计量装置﹑进样装置﹑恒温器和色谱柱。

后者紧要包括检定器和自动记录仪。

安捷伦气相色谱仪的常见故障及排出方法一、进样后不杰出谱峰的故障安捷伦气相色谱仪在进样后检测信号没有变化,仪不出峰,输出仍为直线。

碰到这种情况时,应按从样品进样针、进样口到检测器的次序逐一检查。

1、首先检查注射器是否堵塞,假如没有问题,2、再检查进样口和检测器的石墨垫圈是否紧固、不漏气,3、然后检查色谱柱是否有断裂漏气情况,4、最后察看检测器出口是否畅通。

5、检测器出口的畅通是很紧要的,有人在工作中会碰到这样的问题:前一天仪器工作还一切正常,第二天开机后却无响应峰信号。

检查进样口、注射器、垫圈和色谱柱都正常,可就是不出峰,无意中发觉进样口柱头压达不到设定值,总是偏高,这时才怀疑是ECD 检验器出口不畅通。

由于ECD的排放物有确定的放射性,所以ECD 出口是引到室外的。

当时是秋冬之交,雨水进入到ECD排出口之后冻住了,因此造成仪器ECD的出口堵塞,柱头压居高不下,气体在气路中无法流动,也就无法载样品到检测器,所以不出峰。

二、安捷伦气相色谱仪基线问题气相色谱基线波动、飘移都是基线问题,基线问题可使测量误差增大,有时甚至会导致仪器无法正常使用。

1、碰到基线问题时应先检查仪器条件是否有更改,近期是否新换气瓶及设备配件。

2、假如有更换或条件有更改,则要先检查基线问题是不是由这些更改造成的,一般来说,这种变化往往是产生基线问题的原因。

有些人在工作中就碰到过这种情形:新载气纯度不够,换过载气之后,基线渐渐上升(由于载气净化管的原因,基线不是立刻变化的)。

第二天开机之后,基线特别高,并伴有基线猛烈抖动,全部峰都湮没在噪音中,无法检测。

高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法

高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法

高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。

对于整个系统而言,柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。

2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器,如果在使用过程中不按照正确操作的话,就容易导致一些问题。

其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。

2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。

所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI(3.3 Bar)之间(在使用梯度洗脱时,柱压平稳缓慢的变化是允许的)。

压力过高、过低都属于柱压问题。

2.1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题,指的是压力突然升高,一般都是由于流路中有堵塞的原因。

此时,我们应该分段进行检查。

(1).首先断开真空泵的入口处,此时PEEK管里充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶,看液体是否自由滴下,如果液体不滴或缓慢滴下,则是溶剂过滤头堵塞。

处理方法:用30%的硝酸浸泡半个小时,在用超纯水冲洗干净。

如果液体自由滴下,溶剂过滤头正常,在检查;(2).打开Purge阀,使流动相不经过柱子,如果压力没有明显下降,则是过滤白头堵塞。

处理方法:将过滤白头取出,用10%的异丙醇超声半个小时。

如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下,过滤白头正常,在检查;(3).把色谱柱出口端取下,如果压力不下降,则是柱子堵塞。

处理方法:如果是缓冲盐堵塞,则用95%的水冲至压力正常。

如果是一些强保留的物质导致堵塞,则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降,则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上,用流动相冲洗柱子。

这时,如果柱压仍不下降,只有换柱子入口筛板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以尽量少用。

安捷伦色谱仪使用过程中常见问题和排除

安捷伦色谱仪使用过程中常见问题和排除

实验室精英前沿项目成果厂商动态行业活动国内国际食品安全生物医药能源环境材料行业数据其它AgilentHPLC使用过程中常见问题及解决方法2008-01-20 11:23原文出处:Agilent HPLC使用过程中常见问题及解决方法关键词:agilent安捷伦维护hplc液相色谱一、如何处理 HPLC 中的盐带来的问题?很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。

建议在清洗时将水加热后再冲洗,这样既可以将盐溶解的更好,也可以溶解一些脂溶性物质,会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出,基线噪音……二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护泵是液相色谱的核心,泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中,并要在高压下保持流量和压力的稳定。

泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础,所以平日一定要重视对泵的维护。

下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。

1.流动相的准备为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损,流动相(特别是水相)应该新鲜配置并且过滤。

上机前对流动相进行适当的超声脱气,以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。

2.比例阀溶剂通道的分配四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道,建议将盐溶液接在下面的通道(A或D),将有机溶剂接在上面的通道(B 或C)上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。

且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。

3.过滤白头的维护过滤白头位于排气阀内,是一种聚四氟乙烯材质的微孔过滤芯,用于过滤流动相中的微粒,是经常需要维护的地方。

当系统压力有异常增高时,首先需要检查过滤白头是否阻塞了。

判断的方法是:打开排气阀,以纯水作流动相,将流速设为5mL/min,如果泵压超过10bar,则说明过滤白头需要更换了。

对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次,更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫,如果发现变形,也应及时更换。

如果过滤白头更换过于频繁,则需要认真检查一下流动相的品质,确保流动相上机前过滤,确保使用了合适的过滤膜。

HPLC的故障诊断及其维修

HPLC的故障诊断及其维修

HPLC的故障诊断及其维修在实验室中,高效液相色谱(HPLC)是一种常用的分析方法,但是使用过程中可能会出现一些故障。

下面将对HPLC的常见故障进行诊断和维修。

1. 压力问题如果HPLC系统的压力异常升高或降低,可能是由于柱堵塞、封口件失效或泵的问题引起的。

此时需要检查柱是否需要更换,清洗封口件或者校准泵的工作方式。

2. 色谱峰形问题如果HPLC的色谱峰出现拖尾、畸变或分离不良的情况,可能是由于进样器、柱或检测器的问题。

此时需要检查进样器的清洁程度、柱的使用寿命以及检测器的工作状态。

3. 泄漏问题HPLC系统的泄漏可能会导致试剂的浪费并且对操作人员造成危险。

在发现泄漏时,需要立即停止使用HPLC系统,并检查管路和连接件是否紧固,替换损坏的零件。

4. 溶剂问题HPLC的溶剂可能会受到污染或者流速不稳定,导致分析结果不准确。

此时需要更换新的溶剂瓶、清洗管路和泵,并重新校准流速。

以上是HPLC常见的故障诊断和维修方法,为了保证分析结果的准确性和仪器的稳定性,实验室操作人员需要定期对HPLC进行检查和维护。

高效液相色谱(HPLC)作为一种准确、灵敏和可靠的分析技术,在化学、生物和制药领域中得到了广泛的应用。

然而,HPLC分析过程中常会遇到一些故障,这些故障可能会影响分析结果的准确性和可靠性。

因此,了解常见的HPLC故障并掌握相应的维修方法对于保障实验室分析工作的顺利进行至关重要。

5. 柱温度问题HPLC柱温度的稳定对于分离和检测分析结果非常重要。

如果发现柱温度不稳定或者超出设定范围,一般可以通过检查柱箱温度控制器、换热器或者冷却器来确定问题所在,并及时调整或更换相关部件。

6. 泵的稳压性能问题HPLC泵的稳压性能直接影响流速和流量的准确性。

如果发现流速或者流量不稳定,需要检查压力传感器、活塞密封件等部件是否出现损坏或者磨损,及时更换损坏部件进行维修。

7. 检测器故障检测器在HPLC分析中起着至关重要的作用,如果出现检测信号异常、漂移或者峰形畸变,需要检查检测器灯泡是否老化,光路是否受到污染或者调整参数设置是否准确,进行相应的维修和调整。

安捷伦气相色谱仪故障分析 气相色谱仪常见问题解决方法

安捷伦气相色谱仪故障分析 气相色谱仪常见问题解决方法

安捷伦气相色谱仪故障分析气相色谱仪常见问题解决方法安捷伦气相色谱仪故障分析方法(一)▲故障分析的基础:◇构成:由哪些部分构成?◇作用:各部分起什么作用?◇原理:各部分的工作原理是怎样的?◇判别:如何判别工作正常与否?◇注意事项:检修过程中哪些方面必需注意?安捷伦气相色谱仪故障分析方法(二)▲故障分析的思路:◇注意事项:1.保护人体,安全*,防止事故发生。

2.保护设备,避开故障扩大、转移。

◇确定范围:确定与该故障有关的部分和相关因素。

◇故障检查:1.次序推理法:依据工作原理次序推理,检查、找寻故障原因。

2.分段排出法:逐个排出,缩小范围,检查、找寻故障原因。

3.阅历推断法:依据阅历积累,检查、找寻故障原因。

4.比较检查法:参照工作正常的仪器,检查、找寻故障原因。

5.综合法:综合使用上述各种方法,检查、找寻故障原因。

安捷伦气相色谱仪故障分析方法(三)▲GC故障的种类:◇气路部分故障:气体输入不正常、气体品种不对或纯度不够、气路泄漏、气路堵塞、气路污染、气路部件故障、流量设置不正常、色谱柱问题、等等。

◇主机电路部分故障:启动或初始化不正常、温度掌控部分故障、键盘或显示部分故障、开关门不正常、点火不正常、电流设置不正常、量程或衰减设置不正常、其他功能性故障、等等。

◇检测器输出信号不正常:无信号输出、输出信号零点偏离、输出信号不稳定、输出信号数值不对、等等。

◇其他故障:气源不正常、电网电压不正常、二次仪表不正常、机械类故障、等等。

安捷伦气相色谱仪故障分析方法(四)▲故障的判别:◇基础:检查、找寻故障原因的基础是把握故障判别的方法。

把握故障判别方法的基础是谙习和了解仪器各部分的构成、作用、工作原理。

◇输入与输出:通常仪器的每个部分、部件、甚至零件都有它的输入和输出,输入一般是指该部分正常工作的前提,输出一般是指该部分所起的作用或功能。

◇老化:⊙在很多情况下,所谓的故障是由于老化不充分引起的,所以在必要的时候(例如一段时间未用或更换色谱柱后)应当进行老化,避开显现不必要的所谓故障。

安捷伦液相色谱仪常见问题及相应的解决方法 液相色谱常见问题解决方法

安捷伦液相色谱仪常见问题及相应的解决方法 液相色谱常见问题解决方法

安捷伦液相色谱仪常见问题及相应的解决方法液相色谱常见问题解决方法安捷伦液相色谱仪常见问题及相应的解决方法:一、安捷伦液相色谱仪常见问题柱压高原因分析以及解决方法:(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内。

先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压渐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟。

(2)样品污染沉积。

由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子,再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

二、安捷伦液相色谱仪常见问题不稳定原因分析以及解决方法:原因:系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。

解决方法:处理工作中注意察看流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避开吸入空气,流动相要充分脱气。

如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

三、安捷伦液相色谱仪常见问题指示原因分析以及解决方法:(1)泵密封垫圈磨损。

更换密封垫圈(2)大量气泡进入泵体。

在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮忙抽出空气。

四、安捷伦液相色谱仪常见问题重复性差原因分析以及解决方法:(1)进样阀漏液。

更换进样阀垫圈(2)加样针不到位。

保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的精准。

(3)液量不足。

五、安捷伦液相色谱仪常见问题峰分叉原因分析以及解决方法:(1)色谱柱被污染。

先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

(2)柱头填料塌陷。

拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。

去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。

液相色谱仪常见故障处理 液相色谱如何做好保养

液相色谱仪常见故障处理 液相色谱如何做好保养

液相色谱仪常见故障处理液相色谱如何做好保养液相色谱仪常见故障处理1、气泡溢出流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。

原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,堵塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。

处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,连续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。

打开泄压阀,打开泵,流速调至 1.0~3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。

即可将过滤器清洗干净。

关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。

2、柱压高原因(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;(2)样品污染沉积。

处理对于第一种情况先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压渐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

3、既无压力指示,又无液体流过(1)泵密封垫圈磨损;(2)大量气泡进入泵体。

处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮忙抽出空气。

4、压力波动大,流量不稳定原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。

处理工作中注意察看流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避开吸入空气,流动相要充分脱气。

高效液相色谱仪常见故障及解决方法

高效液相色谱仪常见故障及解决方法

78宁夏农林科技,Ningxia Journal of Agri.and Fores.Sci.&Tech. 2020,61(11 ):78-80高效液相色谱仪常见故障及解决方法吴江瑞,马燕,黄燕,孔祥明,杜越,魏晓琴,李慧中卫市农产品质量安全检验检测中心,宁夏中卫755000摘要:高效液相色谱法在农产品检测领域发挥着重要作用。

文章分析了高效液相色谱仪在使用中常见故障产生的原因,提出了常见故障解决方法,以期为检测人员提供参考。

关键词:高效液相色谱;常见故障;解决方法中图分类号:0657.31 文献标识码:A文章编号:1002-204X(2020)11-0078-03doi:10.3969/j.issn.1002-204x.2020.11.027Analysis of HPLC Common Faults Causes and SolutionsWu Jiangrui, Ma Yan, Huang Yan, Kong Xiangming, Du Yue, Wei Xiaoqin, Li Hui(Zhongwei City Agricultural Products Quality Safety Detection and Testing Center,Zhongwei,Ningxia 755000) Abstract High performance liquid chromatography plays an important role in the detection and testing of agricultural products.In this paper,the causes of common faults during the application of HPLC were analyzed.The solutions were also put forward,aiming to provide references for more testing personnel.Key words HPLC;Common faults;Solutions高效液相色谱法是农产品质量安全控制过程中不可缺少的重要方法,具有分离速度快、检测效率高、重现性好等特点,尤其在检测极性较强、相对分子质量较大、不易气化或受热易分解的农药中更能显示其优越性[1-2]。

安捷伦液相色谱仪常见问题解决方案 液相色谱解决方案

安捷伦液相色谱仪常见问题解决方案 液相色谱解决方案

安捷伦液相色谱仪常见问题解决方案液相色谱解决方案1、基线波动的原因?基线波动有可能与试验室的温度及湿度变化有关系。

需确保室温及湿度稳定,将安捷伦液相色谱仪从通风橱中取出,并将色谱柱和毛细管进行隔热保温。

2、安捷伦液相色谱仪—什么原因导致基线毛刺?这很有可能是流动池内有气泡。

请先停泵来进行确认,假如毛剌消失,则很有可能是由于流动池内有气泡。

需要冲洗流动池。

假如毛剌仍旧存在,则需检查检测器本身的电噪音有关。

3、如何削减基线噪音?无规律噪音可能与污染有关。

请冲洗色谱柱,对样品做合适的前处理以避开污染,并使用HPLC级别的溶剂。

连续噪音有可能由检测器或泵造成。

要确定问题是否发生在检测器还是在泵,请先关泵停掉流量,监测基线。

假如此时基线平稳,则噪音可能与泵有关系。

使用ChemStation在线诊断或LC手持掌控器检查泵方面的故障。

假如停泵后噪音连续存在,则说明噪音与检测器有关。

首先,请尝试更换灯。

假如问题仍旧存在,则请厂家联系联系。

4、如何避开液相基线飘移?基线向上飘移表明系统中有污染。

请冲洗色谱柱,净化样品,然后使用新溶剂。

向下飘移通常是由于检测室或柱箱中的温度波动的原因。

减小室温变化,将仪器从通风橱中取出,并将色谱柱和毛细管保温隔热。

向下飘移也可能由于溶剂的纯度不是HPLC级别的溶剂而且此纯度低的溶剂在紫外有吸取。

5、如何排出流动相/流动池中的气泡?避开流动相中产生气泡的方式是将流动相经脱气装置进行脱气。

假如没有脱气装置,则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。

也可以在检测器的出口端加一根细管线以调整流动池中的背压,但必需注意不要超过流动池的最大压力,否则会造成流动池漏液或流动池损坏。

假如流动池中显现气泡,则先摘下色谱柱,用一根管线直接将流动相接入检测器的入口。

将异丙醇以较大的流速注入流动池。

直到基线上看不到尖峰为止。

气泡就应当清除掉了。

液相色谱仪的原理就是利用待分别的各种物质在两相中的调配系数、吸附本领等亲和本领的不同来进行分别的。

【最新资料】安捷伦液相仪器的故障排除

【最新资料】安捷伦液相仪器的故障排除

1.系统(二元泵)进气系统进气会导致泵性能较差、检测器基线噪音、系统压力不稳定(压力波动),极端情况下会导致保留时间精度较差。

系统中出现空气可能是以下原因引起:溶剂过滤器堵塞(过滤器中得压力梯度导致流动相中出现气泡)未对流动相进行脱气微量泄漏(空气进入系统,但没有流动相泄漏的明显迹象)未对泵进行充分吹扫泵部件有缺陷波动值波动值以系统压力的百分比形式表示压力波动(峰-峰)。

波动值能够很好地反映泵性能。

通常,波动值大于1%表明系统中含有空气压力测试压力测试用于测试从泵头的出口球形阀到检测器入口的系统部件的密闭性。

泄漏测试失败表明系统中存在泄漏情况。

泄漏测试泄漏测试用于验证泵部件的运行是否正常,并排除导致问题的泵模块。

Pressure Test (binary pump)Leak Test (binary pump)1.系统(单元泵和四元泵)进气Pressure Test (isocratic and quaternary pumps)Leak Test (isocratic and quaternary pumps)2.校正错误(DAD/MWD)正确的波长校正取决于检测器的光学和电子部件的正确对齐。

校正不正确可能是以下原因引起的:新灯(建议在更换灯之后进行波长校正)灯安装不正确流通池安装不正确在先前的校正过程中,流通池未填满水(有气泡)波长校正波长校正测试检查使用氘灯的α (656.1 nm) 和β (486 nm) 发射线进行的校正。

如果测试表明校正不正确,则必须执行Wavelength Recalibration。

Wavelength Calibration Test2.校正错误(VWD)正确的波长校正取决于检测器的光学和电子部件的正确对齐。

校正不正确可能是以下原因引起的:新灯(建议在更换灯之后进行波长校正)灯安装不正确流通池安装不正确在先前的校正过程中,流通池未填满水(有气泡)光栅未对齐波长校正测试波长校正测试用于检查检测器的校正设置。

安捷伦液相色谱仪常见故障排除

安捷伦液相色谱仪常见故障排除

液相色谱仪常见故障排除
液相基线噪音问题的排查思路常见色谱故障——基线噪音
液相常见压力问题的原因分析1. 常见色谱故障——压力波动
可能的原因:
∙溶剂进口过滤芯堵塞
∙溶剂未脱气
∙泵的密封垫老化
∙出口单向阀失效
∙主动阀失效
最常见的原因是:泵内有气泡
2. 常见色谱故障——压力过低
可能的原因:
∙溶剂进口过滤芯堵塞
∙连接管路泄漏或其它备件(泵头密封垫)
∙溶剂或流速改变
∙主动阀失灵
∙四元比例阀失灵
∙单向出口阀失灵
∙色谱柱失效(固定相流失)3. 常见色谱故障——压力过高
∙柱子进口过滤芯被污染
∙PURGE阀过滤芯被污染
∙色谱柱被污染
∙连接管路,尤其是针座毛
细管堵塞
∙进样器旋转密封阀被堵

∙进样针或针座被阻塞。

安捷伦液相色谱仪使用问题与解决方法 液相色谱常见问题解决方法

安捷伦液相色谱仪使用问题与解决方法 液相色谱常见问题解决方法

安捷伦液相色谱仪使用问题与解决方法液相色谱常见问题解决方法Agilent液相色谱仪是一种应用特别广泛的有机多组分化学分析仪器。

它具有分别效能高,分析速度快,样品用量少,可进行多组分测量等优点。

Agilent液相色谱仪在石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面应用很广。

它除用于定量和定性分析外,还能测定样品在固定相上的调配系数、活度系数、分子量和比表面积等物理化学常数。

一种对混合气体中各构成分进行分析检测的仪器。

但是由于人员素养样品的性质以及仪器本身等方面的原因,常常显现这样那样的分析故障严重影响了正常的生产分析。

所以把握一种精准、快速的排出Agilent液相色谱仪故障的方法特别紧要。

安捷伦液相色谱仪12601 、如何成为真正的液相高手(1)、确定要珍惜仪器厂商供应的各种培训,由于他们的培训很有针对性,而且很专业。

(2)、要多做,液相是一个比较多而杂的系统,在做样的过程中,总会碰到各种问题,通过本身的大脑解决问题,渐渐积累就会穴道很多东西。

其次要敢于动手,不要总挂念会把仪器弄坏,拆仪器的时候细心一点就好了,记着各个部件的次序,连接方式。

动手次数多了,成功的机会就多了,也就更有信念了。

(3)、要看一些相关理论的书籍,要了解一些关于液相的分别原理,如何优化色谱系统和峰形,能够本身解决一些分别的问题。

这样才是一个液相高手。

假如只是会很娴熟的使用工作站和维护和修理仪器,排出故障,我觉得这只是一个操作高手,而不是一个真正的液相高手。

2、新装82341 GPIB 板,如何与ChemStation 通讯?在 LC ChemStation CD—ROM 中有安装说明,还包括驱动程序安装信息。

请在Windows Explorer 中查看子目录:ManualsInstallationLC Systems。

您在此处可找到《安装手册》,其中包含有关如何安装 GPIB 板以及如何调用驱动程序的渐渐操作说明。

3、为什么进样后在工作站在线图谱上看不到红色开始线?ChemStation 软件有一个“在线图谱”窗口,在此窗口中可显示从所连接的检测器接收到的全部信号。

HPLC_Agilent1100操作注意事项

HPLC_Agilent1100操作注意事项

效液相色谱仪(Agilent 1100)操作注意事项色谱柱:1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书,注意适用范围,如pH值范围、鞫?2、使用符合要求的流动相;3、使用保护柱;4、如所用流动相为含盐流动相,反相色谱柱使用后,先用水或低浓度甲醇水(如5%甲醇水溶液),再用甲醇冲洗。

5、色谱柱在不使用时,应用甲醇冲洗,取下后紧密封闭两端保存;6、不要高压冲洗柱子;7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱;使用过程中注意轻拿轻放。

操作过程:1、开机操作:(1)、打开电源,用Harb相连接时,注意Harb电源,打开计算机,打开Bootp Server(一般启动时已打开);(2)、自上而下打开个组件电源,Bootp Server里显示有信号时(有六行字符),打开工作站(先打开On line);(3)、打开冲洗泵头的10%异丙醇溶液的开关(需用针捅抽),控制流量大小,以能流出的最小流量为准;(4)、注意各流动相所剩溶液的容积设定,若设定的容积低于最低限会自动停泵,注意洗泵溶液的体积,及时加液;(5)、使用过程中要经常观察仪器工作状态,及时正确处理各种突发事件。

2、先以所用流动相冲洗系统一定时间(如所用流动相为含盐流动相,必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相),正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯,以延长灯的使用寿命;3、建立色谱操作方法,注意保存为自己命名的Method,勿覆盖或删除他人的方法及实验结果;4、使用手动进样器进样时,在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒,洗针液一般选择与样品液一致的溶剂,进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上,并排除针筒中的气泡;5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎,在更换流动相时注意保护,当发现过滤头变脏或长菌时,不可用超声洗涤,可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤;6、实验结束后,一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上,再用甲醇冲洗。

冲洗过程中关闭D灯、W灯;7、关机时,先关闭泵、检测器等,再关闭工作站,然后关机,最后自下而上关闭色谱仪各组件,关闭洗泵溶液的开关;8、使用者须认真履行仪器使用登记制度,出现问题及时向老师报告,不要擅自拆卸仪器。

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Agilent HPLC使用过程中常见问题及解决方法一、如何处理HPLC 中的盐带来的问题?很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。

建议在清洗时将水加热后再冲洗,这样既可以将盐溶解的更好,也可以溶解一些脂溶性物质,会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出,基线噪音……二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护泵是液相色谱的核心,泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中,并要在高压下保持流量和压力的稳定。

泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础,所以平日一定要重视对泵的维护。

下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。

1.流动相的准备为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损,流动相(特别是水相)应该新鲜配置并且过滤。

上机前对流动相进行适当的超声脱气,以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。

2.比例阀溶剂通道的分配四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道,建议将盐溶液接在下面的通道(A或D),将有机溶剂接在上面的通道(B 或C)上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。

且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。

3.过滤白头的维护过滤白头位于排气阀内,是一种聚四氟乙烯材质的微孔过滤芯,用于过滤流动相中的微粒,是经常需要维护的地方。

当系统压力有异常增高时,首先需要检查过滤白头是否阻塞了。

判断的方法是:打开排气阀,以纯水作流动相,将流速设为5mL/min,如果泵压超过10bar,则说明过滤白头需要更换了。

对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次,更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫,如果发现变形,也应及时更换。

如果过滤白头更换过于频繁,则需要认真检查一下流动相的品质,确保流动相上机前过滤,确保使用了合适的过滤膜。

如果流动相有长菌现象,除了配置新的溶剂,还应对相应的溶剂管线和脱气机通道进行彻底的清洗。

4.柱塞杆与柱塞密封圈的维护柱塞密封圈套在柱塞杆上用于隔离泵与外界,工作时,它和柱塞杆进行频繁的往复摩擦,使用一段时间后,会有一定的磨损,因而密封圈需要定期更换以保证系统的密封性。

更换活塞密封垫时检查活塞杆上是否有划痕。

有划痕的活塞将导致轻度渗漏,并降低密封垫的使用寿命。

应尽早更换有划痕的活塞。

柱塞密封圈有反相和正相之分,反相密封圈为黑色,石墨Teflon材质;正相呈橘黄色,聚乙烯材质,更适用于正相溶剂。

1100/1200标配的是反相密封圈,正相应用时,需要更换为正相密封圈。

盐溶液对柱塞密封圈的寿命有着很大的影响,使用有盐溶液作为流动相的体系时,要注意盐溶液通道的清洗,千万不能让盐溶液在系统中过夜,常常一个晚上析出的盐粒就会造成系统堵塞,对泵产生较大的损害。

为了延长密封圈和柱塞杆的寿命,在经常使用较高浓度的缓冲盐溶液的情况下,建议安装柱塞清洗附件。

柱塞清洗的原理在于:柱塞泵在工作时,虽然有密封圈密封,但由于毛细作用,还是会有一些流动相渗入到密封圈与柱塞杆之间。

如果流动相中有缓冲盐,当柱塞杆壁上的溶剂挥发掉后,极细小的盐粒留了下来。

这样的盐粒就象砂纸一样磨损着柱塞杆和柱塞密封圈,会大大降低柱塞杆和密封圈的寿命。

柱塞清洗附件是在柱塞杆的中间加入了一个可以有水流过的腔体,通过水不断的流动,就可以带走渗进来的盐溶液,防止了盐粒的析出,保护了柱塞杆和柱塞密封圈。

通常我们往柱塞清洗的水里加入10%的异丙醇,可以减小水的张力,便于清洗液流动,并且抑制长菌。

但有一点要注意的是,装有柱塞清洗附件的泵头,清洗液流量可以很小(如没分钟几滴),但一定不要让清洗通道里干涸,如果水流光了,应该尽快换上新的溶液。

否则会减少柱塞杆和密封圈的寿命。

5.主动阀的维护主动阀是流动相进入泵体的门户。

如果我们发现流量为零,流量不稳,或泵压波动特别大,常常都是因为主动阀漏或是堵了。

主动阀里面装有一个小的单向阀芯,我们将其取下,在异丙醇内超声清洗一下,一般能解决这样的问题。

如果超声不能解决问题的话,可以更换该阀芯。

对于经常使用缓冲盐体系的用户,手头常备一个这样的阀芯是非常有用的,往往可以及时解决问题,大大的降低停机带来的损失。

6.出口阀的维护出口阀内部也有,如果有盐粒或其它杂质渗入其中,也会造成出口阀的堵或漏,常常表现为压力的异常波动。

通常我们可以用异丙醇或60度左右的热水冲洗系统,如果无效,在异丙醇中超声清洗它常常会解决这样的问题。

三、保留时间重现性不好,可能的原因有哪些?保留时间不重现还会影响到峰面积的重现性,导致实验无法进行。

引起这种现象因素很多,建议检查以下几个方面:- 确认流动相是新鲜配置的,比例没有错误。

- 确认色谱柱是好的。

- 检查一下溶剂瓶里的溶剂过滤器没有长菌,没有被堵塞。

- 如果使用梯度洗脱方法,请确认平衡时间足够长。

- 仔细观察柱前压的变化,如果压力稳定,就可以判断泵的系统没有问题,请更换新的色谱柱试试。

- 如果是压力不稳定,一定会影响保留时间。

四、柱前压不稳定,压力上下波动的常见原因?引起这种故障最常见的原因是泵里有气泡,建议用以下的方法排除。

- 如果系统没有配置脱气机(二元泵),溶剂一定要经常超声脱气。

- 脱气机的效率不够,特别是用甲醇/水的系统最容易发生。

可以将A,B通道串联;C,D 通道串联用来延长脱气的时间,效果非常明显。

主动阀阀芯污染。

可以将阀芯取下,用甲醇超声清洗。

五、为什么排气阀里的过滤芯经常堵塞?如果是排气阀里的过滤芯堵塞引起的压力升高,请仔细检查一下换下来的过滤芯。

正常情况下,一个过滤芯可以使用6个月左右,如果经常更换就有问题。

- 如果过滤芯的颜色发黑,说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的,请确认流动相使用的缓冲盐的浓度是否太高了,是否使用了柱塞清洗装置。

缓冲液在泵头内部析出的盐的结晶会加速密封垫的磨损。

- 如果过滤芯的颜色是乳白色的,非常干净。

说明过滤芯很有可能是被流动相污染了。

请检查一下是否使用了过期的溶剂(水,有机溶剂),或质量不好的溶剂。

请马上更换别的品牌的溶剂或使用纯净水(推荐:娃哈哈纯净水)。

如果流动相经过了滤膜过滤,请确认是否使用了正确的,优质的滤膜。

建议先不要使用滤膜过滤流动相,看看是否可以解决过滤芯堵塞的问题。

- 如果存放缓冲液或水的溶剂瓶不经常清洗,该通路会生长藻类,藻类会污染整个流路系统和脱气机的腔体,藻类及其代谢产物也会堵塞过滤芯。

如果发生了这种情况,建议用60度的热水清洗溶剂瓶,并用异丙醇清洗整个管路和脱气机。

建议一定要用棕色瓶存放缓冲溶液,避光,并且定期清洗溶剂瓶。

六、峰面积或峰高重现性不好,偏差大,可能的原因有哪些?如果HPLC系统配有自动进样器,这种情况主要是自动进样器的问题。

- 首先确认柱前压是稳定的,保留时间的重现性好。

- 将自动进样器的抽样速度降低到50ul/min以下(默认值是200ul/min)。

如果样品粘度较大,降低抽样速度可以极大地改善粘度较大的样品的进样精度。

- 如果进样针或针座有轻微的堵塞,对进样精度的影响也非常大。

- 如果是手动进样器,请确认一定要使用Agilent配的标准进样针,且进样器的废液出口要与进样口水平,避免虹吸的影响。

如果是满Loop进样,建议注射5倍Loop的进样体积。

七、自动进样器的针头或针座经常堵塞,如何处理?- 如果针头或针座经常堵塞,请检查使用的进样瓶隔垫。

质量不好和已经破损的隔垫易产生很多碎屑。

进样时,这些细小的碎屑很容易将针头,针座堵塞。

使用Agilent的正规隔垫并且经常更换旧的隔垫就可以避免这类问题。

- 如果样品是经过离心处理的,是用针头吸取上清液进样, 请将针头进样位置提高。

- 如果针头或针座发生了堵塞,可以用以下简单的办法处理:通过Chemstation诊断界面的更换针头,针座的程序将其取下,反接到泵的出口,用反吹的办法将其疏通。

大部分是可以顺利解决的。

八、紫外检测器(DAD,VWD)信号波动大,噪音大,光强度检测通不过,如何处理?引起这种问题的因素很多,要一步一步排除,直到找到问题真正原因。

- 确定柱前压稳定;溶剂(高纯度的有机溶剂,水)使用正确,流动相脱气良好;- 检查检测器的氘灯是否已经到了使用寿命,是否更换过新的氘灯。

- 用异丙醇清洗整个系统,更换过滤芯,排除污染源。

- 清洗流动池和有关的透镜(需要工程师去现场服务)九、HPLC出“鬼峰”,如何排除?HPLC出“鬼峰” 大部分发生在反相体系(甲醇,乙腈,水),是溶剂被污染造成的。

还有一种原因是进样系统有残留。

- 先运行一个空白梯度洗脱的方法,从100%水过渡到100%有机溶剂,如果“鬼峰”出现,可以判断是水被污染了(水中有藻类Algae的污染)。

如果是使用纯水机制作的水,这种现象是最常见的。

建议用户更换“娃哈哈” 纯净水。

- 进样系统有残留很容易判断,建议加强或改善洗针程序,延长冲洗Loop的时间。

十、如何查看灯的使用时间或用新灯后如何重置"0"?在ChemStation 软件的“诊断”级别中,单击检测器图标。

就会看到一个下拉菜单,选择<显示模块详细信息>,然后会看到一个记事簿和扳手图标。

单击此图标会看到另一个下拉菜单。

选择<维护记事簿项>,然后选择“维护消息”项,查看灯的实际累加使用时间。

如要换灯,选灯已更换,ChemStation 软件会提示您重新设置计数器。

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