实验九细胞内蛋白质的分布与显示
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实验九
细胞内蛋白质 的显色与分布
(必做，综合性实验，4学时）
实验目的
ห้องสมุดไป่ตู้
掌握原位显示细胞内酸性、 碱性蛋白质的方法并了解细 胞内蛋白质的一般分布
实验原理
酸、碱性蛋白质的显示及分布
组织经三氯乙酸处理后可将核酸（DNA &RNA）抽提掉， 细胞内保留下组蛋白和其它蛋白，组蛋白为碱性蛋白， 其它蛋白呈酸性为酸性蛋白。蛋白质为两性电解质，在 较其等电点为碱性环境中，蛋白质本身带阴电荷，在较 其等电点为酸性环境中，蛋白质本身带阳电荷，组蛋白 的等电点约8.5，酸性蛋白的等电点约4.6—6.75，固绿 为酸性染料，其色素离子带阴电荷，在pH 2.2时，组蛋 白和酸性蛋白均带阳电荷，均可以与固绿色素离子结合 而着色。在pH8.0时，组蛋白带有阳电荷，仍然可以与固 绿色素离子结合着色，而酸性蛋白带有阴电荷，不能与 固绿的色素离子结合，不能显色。
缓冲液(pH2.2) 洗30s 制片镜检
缓冲液(pH8.0) 洗30s 制片镜检
实验结果
• 经固绿（pH2.2）染色后,细胞 质和细胞核均呈绿色 • 经固绿(pH8.0) 染色后,只有 细胞核被染成绿色
固绿染色法示细胞内总蛋白
固绿染色法示细胞内碱性蛋白
实验报告要求
摘要及关键词
前言 材料和方法 结果与分析 参考文献
实验材料及试剂
仪器：显微镜 水浴锅 材料：洋葱鳞茎 试剂：10%甲醛； 5%三氯乙酸； 0.1%固绿（pH2.2和pH8.0）； 磷酸缓冲液（ pH2.2和pH8.0）； 蒸馏水
实验流程
洋葱鳞茎内表皮
10% 甲醛固定 15 min
蒸馏水洗3次（吸去水) 5%三氯乙酸 90oC 15min 用蒸馏水轻缓洗涤至无气味 0.1% 固绿染色5min （pH2.2） 0.1%固绿染色5min （pH8.0）
细胞内蛋白质 的显色与分布
(必做，综合性实验，4学时）
实验目的
ห้องสมุดไป่ตู้
掌握原位显示细胞内酸性、 碱性蛋白质的方法并了解细 胞内蛋白质的一般分布
实验原理
酸、碱性蛋白质的显示及分布
组织经三氯乙酸处理后可将核酸（DNA &RNA）抽提掉， 细胞内保留下组蛋白和其它蛋白，组蛋白为碱性蛋白， 其它蛋白呈酸性为酸性蛋白。蛋白质为两性电解质，在 较其等电点为碱性环境中，蛋白质本身带阴电荷，在较 其等电点为酸性环境中，蛋白质本身带阳电荷，组蛋白 的等电点约8.5，酸性蛋白的等电点约4.6—6.75，固绿 为酸性染料，其色素离子带阴电荷，在pH 2.2时，组蛋 白和酸性蛋白均带阳电荷，均可以与固绿色素离子结合 而着色。在pH8.0时，组蛋白带有阳电荷，仍然可以与固 绿色素离子结合着色，而酸性蛋白带有阴电荷，不能与 固绿的色素离子结合，不能显色。
缓冲液(pH2.2) 洗30s 制片镜检
缓冲液(pH8.0) 洗30s 制片镜检
实验结果
• 经固绿（pH2.2）染色后,细胞 质和细胞核均呈绿色 • 经固绿(pH8.0) 染色后,只有 细胞核被染成绿色
固绿染色法示细胞内总蛋白
固绿染色法示细胞内碱性蛋白
实验报告要求
摘要及关键词
前言 材料和方法 结果与分析 参考文献
实验材料及试剂
仪器：显微镜 水浴锅 材料：洋葱鳞茎 试剂：10%甲醛； 5%三氯乙酸； 0.1%固绿（pH2.2和pH8.0）； 磷酸缓冲液（ pH2.2和pH8.0）； 蒸馏水
实验流程
洋葱鳞茎内表皮
10% 甲醛固定 15 min
蒸馏水洗3次（吸去水) 5%三氯乙酸 90oC 15min 用蒸馏水轻缓洗涤至无气味 0.1% 固绿染色5min （pH2.2） 0.1%固绿染色5min （pH8.0）