《肝癌微型百科全书》

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文献检索选择题（含答案）

文献检索选择题（含答案）|1.用“肝疫苗”能检索到：A 肝炎疫苗B 肝核酸疫苗C 肝炎灭活疫苗D 肝炎联合疫苗正确答案:A2.通过主题途径检索有关肺癌的文献，以下哪个是正确的主题词：A 肺肿瘤B 肺肉瘤C 肺癌D 肺脓肿正确答案:A3.《中国图书馆分类法（第四版）》将知识门类分为“哲学”、“社会科学”和（）三大部类。

A 自然科学B 人文社科C 医药科学D 政治学"正确答案:A4.专利说明书属于下列哪种类型的文献：A 一次文献B 零次文献C 二次文献D 三次文献正确答案:A5.“语种”的字段简称是下面哪一个：B ABC TID SO正确答案:A6.下列检索算符哪个是位通配符{A B = C < D +正确答案:A7.检索有关肝癌最新研究进展的最佳检索式是：A 肝肿瘤[扩展全部树]/全部副主题词 and 综述 in PTB 肝癌[扩展全部树]/全部副主题词 and 综述 in PAC 肝癌[扩展全部树]/全部副主题词 and 进展D 肝肿瘤[扩展全部树]/全部副主题词 and 研究进展正确答案:A$8.每一种正式出版的图书都有一个代表图书基本信息的号码，它的名称是：A ISBNB ISSNC IBMD IBSN正确答案:A9.手稿文属于下列哪种类型的文献：A 零次文献B 一次文献C 二次文献D 三次文献正确答案:A10.字段简称“AU”的意思是以下哪一个：B 出处C 摘要D 地址-正确答案:A11.下列文献类型哪个属于三次文献A 综述B 专利说明书C 期刊论文D 文摘正确答案:A12.通过主题途径检索“隐球菌并发的糖尿病(两病并存而未指明因果关系）”, 其中一个主题词是“隐球菌病/并发症”，另一个主题词是：A 糖尿病/并发症B 糖尿病/病因学C 糖尿病/副作用D 糖尿病/化学诱导正确答案:A数据库是由以下哪个机构开发研制的…A BIOSISB NCBIC WHOD ISI正确答案:B14.书信属于下列哪种类型的文献：A 二次文献B 零次文献C 一次文献D 三次文献正确答案:B15.下面哪个不是BP的收录内容：A BioResearch IndexB Biological Abstracts/RRMC BAD CA正确答案:D^16.《中国中医药学主题词表》设置了（）个专门用于中医药学的副主题词：A 10B 11C 82D 83正确答案:B17.用“CONTROL”能检索到：A CONTROLLERB CONTROLSC CONTROLLINGD CONTROLLED 正确答案:B18.年鉴属于下列哪种类型的文献：A 零次文献B 三次文献C 一次文献D 二次文献【正确答案:B数据库检索浙江大学发表的文章，应该用：A zhejiang university[au]B zhejiang university[ad]C zhejiang university[ab]D zhejiang university[py] 正确答案:B20.以下哪种检索语言是规范化语言A 关键词B 主题词C 分类号D 同义词正确答案:B—21.《中国图书馆分类法（第四版）》中内科护理学的分类号是（）。

《金匮要略》与肿瘤论治

《金匮要略》与肿瘤论治赵兰美;叶丽红【摘要】Objective] Summarizing the diagnosis and treatment about the tumor-related disease from “Synopsis of Prescriptions of the Golden Chamber”, thus to better use classic in clinic. [Method] Sort out the book that involves tumor-related diseases pathogenesis, therapeutic treatment and syndrome differentiation treatment, combine with each of the clinical words, analyze and summarize all the clinical experience of physicians. [Results]The book is not equipped with tumor article, many cancer-related clinical manifestations of the disease description can be seen in each chapter, although not forming a system, its pulse and symptoms are involved in different parts of the tumors. And the symptoms of lung cancer, stomach cancer, and gynecological tumors also have beenmentioned.[Conclusion] Visible in the book, the etiology and pathogenesis of tumor related diseases have a certain understanding. In the aspect of treatment, pay attention to combining disease syndrome differentiation, treatment and syndrome differentiation. Then concluding all the physicians clinical experience we can see that “Synopsis of Prescriptions of the Golden Chamber”for the treatment of tumors has great significance. And classic of traditional Chinese medicine for modern TCM clinical still have important reference value and guiding significance.%[目的]总结归纳《金匮要略》中肿瘤相关的诊治内容，以利将经典更好地指导现代临床。

肝癌简介

腹壁静脉曲张
腹水
转移途径
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血行转移：肝内血行转移：最早、最常见，可引起门静脉高压、腹水肝外血行转移：肺、骨、脑、肾上腺等淋巴转移：肝门淋巴结最常见，其次是胰、腹膜后、主动脉旁和锁骨上淋巴结种植转移：腹膜、膈、卵巢、胸腔,少见
复旦大学附属肿瘤医院
诊断
• 实验室检查 • 影像学检查
治疗原则
• I a: 手术
伴肝硬化: 无水酒精瘤内注射术后：中药/免疫/化疗
• I b Ⅱ a : 手术肝功能异常: 中药/西药保肝治疗
术后残癌:放射治疗/动脉内化疗癌栓: 中药/免疫治疗/ 肝动脉内化疗/化疗无残癌及癌栓: 中药，或生物治疗法
治疗原则
• Ⅱ b:
根治性切除 TAE/局部放射治疗/生物治疗/中药治疗手术难度较大或不能手术: 肝硬化不严重者放疗+中药/ 瘤内注射无水酒精/TAE 癌肿 13cm以上: 介入治疗/放疗+中药多发：放射治疗/放疗+介入弥漫：全身化疗弥漫+肝硬化严重：中医中药/生物治疗
治疗原则
• Ⅲ a、Ⅲ b：
腹水中药或西药利尿剂治疗血性腹水+癌栓：腹带加压包扎肝癌+黄疸：阻塞性黄疸:局部放疗/局部瘤内注射/介入治疗/PTCD 非阻塞性黄疸：中药治疗，保肝治疗肺转移：单个病灶：手术/放疗多个：放疗全肺弥漫：生物治疗或化疗药物，中药治疗骨转移：单个或几个：放射治疗广泛：化疗药物/生物治疗/放射性核素治疗门静脉、肝静脉、下腔静脉癌栓：肝动脉灌注化疗/生物治疗/中药治疗
肝肿大和肝区肿块
• 是中、晚期肝癌最常见的体征
• 肝肿大呈进行型、质地坚硬，边缘不整齐

肝癌的极早预防,诊断及治疗很关键

肝癌的极早预防,诊断及治疗很关键发布时间：2021-08-31T09:40:54.673Z 来源：《医师在线》2021年4月8期作者：蒋武[导读]蒋武四川安岳县人民医院 642350 肝癌被称为癌王，发病隐匿，出现症状时通常已进入中晚期，治愈率低，病情发展快，死亡率极高，对于人们的健康和生命安全产生了严重的威胁，可见肝癌的及早预防、诊断和治疗是十分重要的。

本文对肝癌的预防、诊断和治疗等相关知识进行了探讨。

一、早期预防肝癌的重要性肝癌是一种发生在肝脏位置的癌症，肝脏由肝细胞组成，位于右肺下方，由两个肝叶构成，是人体内最大的消化器官，肝脏除了该细胞之外，还有血管、胆管，胆汁经胆管流入肠道，参与人体的营养吸收。

肝脏有分解和储存营养物质的功能，并且能够产生凝血因子，在人体流血时及时止血，担负着解毒功能，分解血液中的酒精和有毒物质。

肝癌在我国是常见的肿瘤疾病之一，农村地区的发病率相比于城市更高，男性患者多于女性患者，随着人们年龄的增长，肝癌发病率也有所增加。

肝癌的发病原因目前尚未明确，已知与肝炎病毒感染、食物、肥胖、酗酒等因素有关，全世界范围内每年死于肝癌的患者有接近一半是来自于我国。

对于肝癌疾病的早期预防，应得到人们的高度重视，远离肝癌的促发因素，做好定期的体检工作。

二、肝癌的早期预防措施肝癌可受到多种因素的协同作用影响而发生，例如食物中存在致癌物质、有饮酒习惯、身体缺少某种微量元素、受到遗传因素的影响，患有乙型肝炎、丙型肝炎疾病等。

大多数的肝癌患者都会经历肝炎、肝硬化的演变过程，也有部分患者是感染了肝炎病毒之后，直接形成了肝细胞和病毒的合成，引起突变，导致肝癌的发生。

预防肝癌必须要做好个人的卫生，积极接种乙肝疫苗，预防肝炎疾病，防止肝癌的发生风险，酒精对于肝脏产生的危害是很大的，酒精进入人体之后，通过肝脏代谢功能完成对酒精的代谢，大量饮酒会损伤肝细胞，引起肝功能异常。

若是感染了乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的群体有饮酒习惯，更是能够在酒精作用下促进乙肝病毒和丙肝病毒与肝细胞的融合，形成正常干细胞的变异，导致癌变。

八年制内科学原发性肝癌

八年制内科学原发性肝癌原发性肝癌(primary carcinoma of liver)是指发生在肝细胞或肝内胆管细胞的癌肿，其中肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)占原发性肝癌中的绝大多数，胆管细胞癌(cholangiocarcinoma)不足5%。

本病恶性程度高，浸润和转移性强，远期疗效取决于能否早期诊断及早期治疗，甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)和影像学检查相结合是早期诊断的主要辅助手段。

【流行病学】近年来原发性肝癌的发病率在全球范围内均有增加趋势，居恶性肿瘤的第5位，死亡率位居恶性肿瘤的第3位。

我国是肝癌的高发国家，肝癌病例约占全球的55%，死亡率仅次于肺癌，位居第二。

肝癌的发病率在不同地域间具有明显差异。

东亚的发病率最高，其次为非洲撒哈拉地区、东南亚和南欧，而北欧及美洲的发病率最低。

国内沿海高于内地，东南和东北高于西北、华北和西南，其中江苏启东、福建同安、广东顺德、广西扶绥是高发区。

男：女比例为2.7：1。

【病因和发病机制】原发性肝癌的病因尚不完全清楚，可能是多因素协同作用的结果。

根据流行病学的调查，多认为与以下易患因素有关。

(一)病毒性肝炎病毒性肝炎是原发性肝癌诸多致病因素中的最主要因素，其中以慢性乙型和丙型肝炎最为常见。

由于不同国家和地域病毒性肝炎的流行病学不同，故原发性肝癌患者肝炎病毒的检出率不同。

我国肝癌患者中HBV的检出率髙达90%，而在欧美及日本等HCV感染的高发国家及地区，肝癌患者的HCV检出率高。

HBV的致癌机制复杂，目前多认为是由于HBVDNA与宿主DNA的整合、HBV游离复制型缺陷病毒的存在以及HBV的某些基因产物使宿主基因组丧失稳定性，激活或抑制包括癌基因和抑癌基因在内的细胞生长调控基因的表达，进而促进肝细胞癌变。

HCV的致癌机制不同于HBV，其可能是通过表达基因产物间接影响细胞的增殖分化而诱发肝细胞恶变。

基因1型HCV感染者较其他基因型感染者更易发生肝癌;HBV/HCV重叠感染或合并HIV感染者发生肝癌的风险性明显增加;血清肝炎病毒检测值长期处于高水平者更易发展为肝癌。

肝癌疾病基础知识-222【15页】

组织学分型肝细胞癌（HCC)：占75%~85% 肝内胆管癌（ICC)：占10%~15% 混合型肝细胞-胆管癌（cHCC-CCA）：少见
原发性肝癌诊疗指南 2022年版
肝癌临床表现
肝癌早期缺乏典型临床表现，中晚期出现明显症状：
➢ 肝区疼痛：多为持续性钝痛、刺痛或胀痛，由于肿瘤迅速生长，使肝包膜张力增加所致。
➢ 临床表现及诊断
• 肝癌早期缺乏典型临床表现，中晚期出现明显症状，一般表现为肝区疼痛、全身及消化道症状、肝大。临床诊断以影像学检查结果为主，实验室检查起评估作用
➢ 治疗策略
• 中国肝癌临床分期为参考中国患者情况制定的分期策略，以此决定治疗策略 • 肝脏储备功能良好的Ⅰa 期、Ⅰb 期和Ⅱa 期肝癌是手术切除的首选适应证；对于不可切除的肝癌，术
肝功能检查：谷氨酸氨基转移酶（ A LT ）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、胆红素、白蛋白及凝血酶原时间等指标
影像学检查
添加标题
超声显像：便捷、检查常用 CT/MRI磁共振成像:.确诊首选数字减影血管造影：微创性检查核医学影像学检查：分期 ➢ 肝癌的穿刺活检
原发性肝癌诊疗指南 2022年版
肝硬化
”肝细胞炎症-肝硬化-肝细胞癌“肝癌三部曲肝脏组织反复发生炎症直至坏死，肝脏在自我修复的过程中产生“瘢痕”，肝脏纤维化和硬化的病理状态逐步形成，进一步恶变成肝癌
肝癌分类
原发性肝癌：统指起源于肝细胞和肝内胆管上皮细胞的恶性肿瘤。根据癌细胞类型不同，细分为以下三种。不同类型在发病机制、生物学行为、病理组织学、治疗方法以及预后等方面差异较大。
肝癌流行病学：世界常见，中国高发
2020年全球肝癌发病率与死亡率
2020年全球肝癌新发病例90.6万，死亡病例80 万；中国肝癌新发病例41万，死亡病例39.1万

肝癌细胞来源的外泌体作用正常肝细胞后差异表达环状RNA的筛选

6063重庆医学2021年11月第50卷第21期㊃论著㊃d o i:10.3969/j.i s s n.1671-8348.2021.21.002网络首发h t t p s://k n s.c n k i.n e t/k c m s/d e t a i l/50.1097.R.20210920.0506.004.h t m l(2021-09-23)肝癌细胞来源的外泌体作用正常肝细胞后差异表达环状R N A的筛选*沈彩红1,孙林2,黄文杰2,沈永奇3,卢永刚4,孙一帆2ә(广西医科大学附属柳铁中心医院:1.感染科;2.检验科;3.肿瘤科;4.肝胆外科,广西柳州545007)[摘要]目的筛选肝癌H e p G2细胞外泌体处理L O2细胞后差异表达的环状R N A(c i r c R N A),并通过生物信息学预测分析其可能在肝癌发生㊁发展中的作用㊂方法收集经H e p G2细胞外泌体共同培养后的L O2细胞和正常培养的L O2细胞样本,采用A r r a y s t a r H u m a n c i r c R N A A r r a y s V2芯片检测㊁筛选差异表达的c i r-c R N A;进行聚类分析筛选明显差异表达的c i r c R N A,并用实时荧光定量聚合酶链反应方法进行初步验证㊂筛选获得的c i r c R N A利用基因本体论和京都基因与基因组百科全书分别进行基因功能注释分析及信号通路富集分析㊂结果经H e p G2细胞外泌体处理的L O2细胞与正常培养的L O2细胞比较,以差异表达倍数(F C)>2且P<0.05为筛选标准,筛选出235个差异表达的c i r c R N A,其中50个c i r c R N A上调表达,185个c i r c R N A下调表达㊂经生物信息学分析,筛选出5个明显上调的c i r c R N A(h s a_c i r c R N A_0010044㊁h s a_c i r c R N A_009012㊁h s a_c i r c R N A_101016㊁h s a_c i r c R N A_100917㊁h s a_c i r c R N A_007918)和5个明显下调的c i r c R N A(h s a_c i r c R N A_ 002082㊁h s a_c i r c R N A_103128㊁h s a_c i r c R N A_092388㊁h s a_c i r c R N A_007343㊁h s a_c i r c R N A_071935)㊂这些c i r-c R N A经H e p G2细胞外泌体处理后的L O2细胞中的表达水平与筛选结果一致㊂被富集的宿主基因主要参与蛋白质结合㊁细胞周期㊁转录调节㊁丝裂原活化蛋白激酶(MA P K)信号通路等㊂结论筛选出5个明显上调和5个明显下调与肝癌发生㊁发展相关的c i r c R N A㊂[关键词]肝肿瘤;外泌体;c i r c R N A;生物标志物[中图法分类号] R735.7[文献标识码] A[文章编号]1671-8348(2021)21-3606-06 S c r e e n i n g o f d i f f e r e n t i a l l y e x p r e s s e d c i r c R N A s a f t e r e x o s o m e s d e r i v e d f r o mh e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a c e l l s t r e a t i n g n o r m a l h e p a t o c y t e*S H E N C a i h o n g1,S U N L i n2,HU A N G W e n j i e2,S H E N Y o n g q i3,L U Y o n g g a n g4,S U N Y i f a n2(1.D e p a r t m e n t o f I n f e c t i o n;2.D e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y;3.D e p a r t m e n t o fO n c o l o g y;4.D e p a r t m e n t o f H e p a t o b i l i a r y S u r g e r y,A f f i l i a t e d L i u t i e C e n t r a l H o s p i t a l o fG u a n g x i M e d i c a l U n i v e r s i t y,L i u z h o u,G u a n g x i545007,C h i n a)[A b s t r a c t]O b j e c t i v e T o s c r e e n o u t t h e d i f f e r e n t i a l l y e x p r e s s e d c i r c R N A a f t e r h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a (H C C)H e p G2c e l l s d e r i v e d e x o s o m e s t r e a t i n g L O2c e l l s,a n d t o p r e d i c t a n d a n a l y z e i t s r o l e i n t h e o c c u r r e n c e a n d d e v e l o p m e n t o f H C C b y b i o i n f o r m a t i c s.M e t h o d s T h e L O2c e l l s c o-c u l t u r e d w i t h H e p G2c e l l s e x o s o m e s a n d n o r m a l l y c u l t u r e d L O2c e l l s s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d.T h e d i f f e r e n t i a l l y e x p r e s s e d c i r c R N A w a s d e t e c t e d a n d s c r e e n e d b y A r r a y s t a r H u m a n c i r c R N A A r r a y s V2c h i p.T h e c l u s t e r i n g a n a l y s i s w a s p e r f o r m e d,s i g n i f i-c a n t l y d i f f e r e n t i a l l y e x p r e s s e d c i r c R N A w a s s c r e e n e d,i t s p r e l i m i n a r y v e r i f i c a t i o n w a s c o n d u c t e d b y t h e r e a l-t i m e f l u o r e s c e n c e q u a n t i t a t i v e P C R m e t h o d.c i r R N A o b t a i n e d b y s c r e e n i n g u s e d t h e g e n e o n t o l o g y a n d K y o t o e n c y c l o p e d i a o f g e n e s a n d g e n o m e s t o c o n d u c t t h e g e n e f u n c t i o n a l a n n o t a t i o n a n a l y s i s a n d s i g n a l p a t h w a y e n-r i c h m e n t a n a l y s i s r e s p e c t i v e l y.R e s u l t s I n t h e c o m p a r i s o n L O2c e l l s t r e a t e d b y H e p G2c e l l s e x o x o m e a n d n o r m a l l y c u l t u r e d L O2c e l l s,w i t h t h e d i f f e r e n t i a l e x p r e s s i o n f o l d(F C)>2,m o r e o v e r P<0.05a s t h e s c r e e n-i n g s t a n d a r d,235d i f f e r e n t i a l l y e x p r e s s e d c i r R N A w e r e s c r e e n e d o u t,i n w h i c h,50c i r c R N A s w e r e u p-r e g u l a t e d a n d180c i r c R N A s w e r e d o w n-r e g u l a t e d.A f t e r t h e b i o i n f o r m a t i c s a n a l y s i s,5s i g n i f i c a n t l y u p-r e g u l a t e d c i r c R-N A s(h s a_c i r c R N A_0010044,h s a_c i r c R N A_009012,h s a_c i r c R N A_101016,h s a_c i r c R N A_100917,h s a_c i r-c R N A_007918a n d5s i g n i f i c a n t l y d o w n-r e g u l a t e d c i r c R N A s(h s a_c i r c R N A_002082,h s a_c i r c R N A_103128,h s a_c i r c*基金项目:国家自然科学基金项目(81760501);广西壮族自治区自然科学基金项目(2018G X N S F A A294029,2017G X N S F A A198041);广西壮族自治区柳州市科技计划项目(2018D H10504,2018B J10506,2019B J10612)㊂作者简介:沈彩红(1972-),副主任医师,本科,主要从事肝脏疾病的研究㊂ә通信作者,E-m a i l:s u n y i f a n13@126.c o m㊂Copyright©博看网 . All Rights Reserved.R N A_092388,h s a_c i r c R N A_007343,h s a_c i r c R N A_071935)w e r e s c r e e n e d o u t.T h e c i r R N A e x p r e s s i o n l e v e l s i n L O c e l l s a f t e r t r e a t i n g b y H e p G2c e l l e x o s o m e w e r e c o n s i s t e n t w i t h t h e s c r e e n i n g r e s u l t s.T h e e n r i c h e d h o s t g e n e s w e r e m a i n l y i n v o l v e d i n p r o t e i n b i n d i n g,c e l l c y c l e,t r a n s c r i p t i o n r e g u l a t i o n a n d MA P K s i g n a l i n g p a t h-w a y.C o n c l u s i o n T h e f i v e s i g n i f i c a n t l y u p-r e g u l a t e d a n d d o w n-r e g u l a t e d c i r c R N A s a r e s c r e e n e d o u t,w h i c h a r e a s s o c i a t e d w i t h t h e o c c u r r e n c e a n d d e v e l o p m e n t o f H C C.[K e y w o r d s]h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a;e x o s o m e s;c i r c R N A;b i o m a r k e r肝癌是常见的恶性肿瘤之一,其在肿瘤中的发病率位列第4,病死率位列第3[1]㊂肝癌具有较高的发病率和病死率,急切需要有效的早期诊断㊂目前,肝癌早期诊断较为理想的血清标志物为甲胎蛋白,但由于其特异度不高,故亟待探索其他有助于肝癌早期有效诊断的生物标志物㊂近年来,外泌体在肿瘤疾病中的作用已成为研究热点之一㊂外泌体中含大量核酸㊁蛋白㊁脂质等物质,参与了细胞之间或细胞与组织间的通讯,影响肿瘤的发生㊁发展㊂环状R N A(c i r-c R N A)作为外泌体内含物中的一种核酸,随着R N A 测序技术的迅速发展,大量c i r c R N A被发现与肿瘤的发生存在潜在的关联,发挥了重要的调控作用,具有巨大潜力,因此,其有可能成为肝癌早期筛查的一种新型生物标志物[2]㊂本研究通过对肝癌H e p G2细胞外泌体与正常肝细胞L O2共同培养后c i r c R N A表达进行比较,筛选验证了具有差异表达的c i r c R N A,并预测分析了其在肝癌发展的作用,现报道如下㊂1材料与方法1.1试剂与仪器外泌体提取试剂盒(美国T h e r m o公司)㊁总R N A提取试剂盒(美国Q i a g e n公司)㊁T r i z o l试剂(美国I n v i t r o g e n公司)㊁A r r a y s t a r S u p e r R N A L a b e l i n g K i t(美国A r r a y s t a r公司)㊁A r r a y s t a r H u m a n c i r-c R N A A r r a y s V2(美国A r r a y s t a r公司)㊁S Y B R G r e e n 聚合酶链反应(p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n,P C R)试剂盒(美国T h e r m o公司)㊁逆转录试剂盒(美国T h e r m o 公司)㊁A B7500荧光定量P C R仪(美国A p p l i e d B i o-s y s t e m s公司)㊁低温冷冻离心机(美国S i g m a公司)㊁A g i l e n t H y b r i d i z a t i o n O v e n㊁A g i l e n t S c a n n e r G2505C㊁N a n o d r o p N D-1000等㊂实时荧光定量P C R 所用引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,序列见表1㊂表1实时荧光定量P C R反应引物产物名称方向引物序列(5'-3')h s a_c i r c R N A_0010044正向G G A G A G T G T T G G A A G C C T G G反向C T C C A A T G C C T T T C C A C T C C T h s a_c i r c R N A_009012正向T G C T T T C C T G A A G T C C T G C C反向A C C G C G T G T T C C A C A T T G T A h s a_c i r c R N A_101016正向C T G C T T G C A G G C T T T C A G T C反向C A G C C A G C G C A T T A C A T C A T h s a_c i r c R N A_100917正向T T G C C A A A C T C C C A C C T A G C反向G G A A T G G C A T C A T C A A C A G C h s a_c i r c R N A_007918正向A G A T G C G T G G T A A C C A G A C C反向A G A A G C A A T G C C T G A G C C A A h s a_c i r c R N A_002082正向A C C A G A T C A G G A T T T G A G C G G反向G G C C T C T A T T G C C A T G T G C C h s a_c i r c R N A_103128正向T G A C C A A G C A C C A A A A G C A A G反向A T C A T C C T G A T G G G G T G G G G h s a_c i r c R N A_092388正向G C T G T A A G T G G C C T G G C T T C反向T G C G G G G C A T A G G A T A G T C A h s a_c i r c R N A_007343正向G G A T A C T G A C C G C A T G A G C A反向C C T C T G G T A C T C G A T T G G C G h s a_c i r c R N A_071935正向C C G G A C G G G A C T C T C A A A A A反向A T G T C G T A G T G G T T G G C C T G1.2方法1.2.1外泌体提取与鉴定收集生长良好的H e p G2细胞培养液至离心管中,4ħ㊁3000r/m i n离心30m i n后收集上清液至新的离心管加入外泌体提取试剂,4ħ过夜孵育后再4ħ㊁3000r/m i n离心60m i n,弃上清液,所得沉淀即为外泌体㊂用无菌1ˑ磷酸盐缓冲盐溶液(P B S)重悬外泌体,储存于-80ħ备用㊂通过透射电镜扫描和纳米颗粒跟踪分析仪对所提取的外泌体进行鉴定㊂1.2.2标本收集与处理7063重庆医学2021年11月第50卷第21期Copyright©博看网 . All Rights Reserved.分为对照组(正常肝细胞L O2)和实验组[正常肝细胞L O2+H e p G2细胞外泌体(100μg/m L)]㊂按照分组对L O2细胞进行处理,H e p G2细胞外泌体与L O2细胞共培养48h后收集细胞,加上T r i z o l裂解液,用总R N A提取试剂盒提取总R N A,进行c i r-c R N A芯片分析㊂1.2.3外泌体处理L O2细胞后差异表达c i r c R N A 筛选选取实验组和对照组标本各2份总R N A,使用美国A r r a y s t a r公司的8x15K的A r r a y s t a r H u m a n c i r-c R N A A r r a y s V2芯片在A g i l e n t H y b r i d i z a t i o n O v e n 仪器上进行c i r c R N A杂交检测,用A g i l e n t S c a n n e r G2505C仪器进行扫描获取c i r c R N A芯片检测数据㊂利用R s o f t w a r e l i mm a p a c k a g e,以P<0.05且差异表达倍数(f o l d c h a n g e)>2的条件筛选差异表达的c i r c R N A㊂在筛选差异表达c i r c R N A中选择上调和下调差异表达倍数排在前5位的c i r c R N A进行进一步验证㊂1.2.4差异表达的c i r c R N A生物信息学分析通过生物信息学相关数据库对差异表达的c i r-c R N A进行基因本体论(g e n e o n t o l o g y,G O)富集分析和京都基因与基因组百科全书(k y o t o e n c y c l o p e d i a o f g e n e s a n d g e n o m e s,K E G G)信号通路分析,预测差异表达的c i r c R N A相关的生物学功能㊂1.2.5实时荧光定量P C R验证c i r c R N A的表达使用逆转录试剂盒将提取的细胞总R N A逆转录为c D N A,按照S Y B R G r e e n P C R试剂盒说明书进行实时荧光定量P C R检测筛选得到的上调和下调差异表达前5位的c i r c R N A相对表达水平㊂1.3统计学处理采用S P S S22.0统计软件进行数据分析,计量资料采用xʃs表示,采用t检验㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1外泌体的提取和鉴定经透射电镜观察,从H e p G2细胞培养液中提取到的沉淀物其形态为有圆形或椭圆形脂膜结构的小囊泡,见图1A;颗粒大小为50~150n m,见图1B㊂成功从H e p G2细胞培养液中分离提取到外泌体㊂2.2 C i r c R N A芯片原始数据均一化C i r c R N A芯片原始图像资料采用A g i l e n t F e a-t u r e E x t r a c t i o n软件进行数据提取,利用R语言l i m-m a软件包依据Q u a n t i l e算法规则对c i r c R N A芯片数据进行标准化和均一化处理㊂经标准化和均一化处理后消除了染色偏差和点样针头带来空间差异引起基因表达量的不同,对照组和实验组标本c i r c R N A表达经标准化后荧光信号强度基本一致,可进一步进行c i r c R N A基因差异表达分析㊂2.3芯片数据差异表达基因筛选分析C i r c R N A基因芯片在对照组和实验组共培养后共检测出10017个c i r c R N A,为筛选出正常L O2细胞和外泌体处理后细胞中差异表达的基因,以F C>2且P<0.05为筛选标准,筛选出235个差异表达的c i r c R N A,其中50个c i r c R N A上调表达,185个c i r-c R N A下调表达;其中前10位明显上调和明显下调的c i r c R N A见表2㊂根据F C>2且P<0.05作为筛选标准绘制火山图,见图2㊂经H e p G2细胞外泌体处理L O2细胞后,c i r c R N A低表达数量多于高表达数量㊂A:外泌体形态鉴定;B:外泌体颗粒大小检测㊂图1 H e p G2细胞外泌体鉴定两侧红点和蓝点:两组间存在差异表达的c i r c R N A;右侧蓝点:经外泌体处理后L O2细胞中上调表达的c i r c R N A;左侧红点:外泌体处理后L O2细胞中下调表达的c i r c R N A㊂图2差异表达的c i r c R N A火山图分析结果8063重庆医学2021年11月第50卷第21期Copyright©博看网 . All Rights Reserved.2.4 外泌体处理后L O 2细胞相关c i r c R N A 的聚类分析对照组和实验组经筛选获得的c i r c R N A 表达水平进行聚类分析结果见图2㊂差异表达的c i r c R N A 中L O 2细胞经外泌体处理后低表达的c i r c R N A 多于高表达的c i r c R N A ,见图3㊂与火山图分析结果一致㊂2.5 在L O 2细胞中验证差异表达的c i r c R N A根根前面筛选结果挑选出其中表达倍数差异较大的前5个表达上调或下调的c i r c R N A ,见表2㊂上调表达的h s a _c i r c R N A _0010044㊁h s a _c i r c R N A _009012㊁h s a _c i r c R N A _101016㊁h s a _c i r c R N A _100917㊁h s a _c i r c R N A _007918和下调表达的h s a _c i r c R N A _002082㊁h s a _c i r c R N A _103128㊁h s a _c i r c R N A _092388㊁h s a _c i r c R N A _007343㊁h s a _c i r c R N A _071935等c i r -c R N A 在H e pG 2细胞外泌体处理后的L O 2细胞表达与之前分析结果一致,见图4㊂h s a _c i r c R N A _0010044㊁h s a _c i r c R N A _009012㊁h s a _c i r c R N A _101016㊁h s a _c i r c R N A _100917㊁h s a _c i r c R N A _007918等c i r c R N A 确实在经外泌体处理后的L O 2细胞中的表达水平明显上调,差异均有统计学意义(P <0.05);h s a _c i r c R N A _002082㊁h s a _c i r c R N A _103128㊁h s a _c i r -c R N A _092388㊁h s a _c i r c R N A _007343㊁h s a _c i r c R N A _071935等c i r c R N A 确实在经外泌体处理后的L O 2细胞中的表达水平明显下调,差异有统计学意义(P <0.05),与之前生物信息学预测分析结果一致㊂纵轴:基因聚类;横轴:标本聚类;绿色:该基因在经外泌体处理后的L O 2细胞中低表达;红色:基因在经外泌体处理后的L O 2细胞中高表达;黑色:该基因在二者中无明显差异㊂图3 正常L O 2细胞经H e pG 2细胞外泌体处理后差异表达c i r c R N A 聚类分析热图表2 正常L O 2细胞经H e pG 2细胞外泌体处理后表达上调和下调的c i r c R N A (倍数改变排列在前10的c i r c R N A )c i r c R N AP F C (a b s)上下调变化趋势c i r c R N A来源染色体c i r c R N A序列正负链来源c i r c R N A _t y p e 来源母基因名称h s a _c i r c R N A _0010440.01807942.9811690上调c h r 12-s e n s e o v e r l a p p i n gS L C 2A 13h s a _c i r c R N A _0090120.00931422.8313518上调c h r 7-s e n s e o v e r l a p p i n gS T X 1Ah s a _c i r c R N A _1010160.01163532.8130440上调c h r 12-e x o n i c D U S P 16h s a _c i r c R N A _1009170.03649302.7983013上调c h r 11-e x o n i c P I C A L Mh s a _c i r c R N A _0079180.01756492.7634157上调c h r 12-e x o n i c S L C 2A 13h s a _c i r c R N A _1009130.03721032.7506092上调c h r 11-e x o n i c P I C A L Mh s a _c i r c R N A _1038550.01004282.7503486上调c h r 5-e x o n i c A D A M T S 6h s a _c i r c R N A _0067830.00719052.6880178上调c h r 14+i n t r o n i cS I P A 1L 1h s a _c i r c R N A _0029710.02663842.6334308上调c h r 6+e x o n i c S N X 9h s a _c i r c R N A _1010080.01343762.6298240上调c h r 12+e x o n i cR I M K L Bh s a _c i r c R N A _0020820.004426511.4024590下调c h r 11+S e n s e o v e r l a p p i n g M A L A T 1h s a _c i r c R N A _1031280.00134325.6485287下调c h r 21+e x o n i c D Y R K 1Ah s a _c i r c R N A _0923880.00106805.3436779下调c h r 11+S e n s e o v e r l a p p i n gI N C E N P h s a _c i r c R N A _0073430.00390685.2212208下调c h r 5+e x o n i c T R I O h s a _c i r c R N A _0719350.00744155.0450218下调c h r 5+e x o n i c T R I Oh s a _c i r c R N A _4046430.00799784.9856133下调c h r 1-e x o n i c P I K 3C 2B h s a _c i r c R N A _1019960.00080684.8158175下调c h r 17+e x o n i c S P E C C 1h s a _c i r c R N A _0016910.02144024.4573086下调c h r 7-e x o n i c H N R N P A 2B 1h s a _c i r c R N A _1019650.00254784.4469815下调c h r 17-e x o n i c D H X 33h s a _c i r c R N A _0047960.00028214.3104706下调c h r 17+e x o n i cK P N B 19063重庆医学2021年11月第50卷第21期Copyright©博看网 . All Rights Reserved.图4正常L O2细胞经H e p G2细胞外泌体处理后差异表达上调和下调的c i r c R N A聚类分析热图2.6差异表达c i r c R N A的G O、K E G G分析结果G O富集分析经H e p G2外泌体处理后L O2细胞中表达上调或下调前5个的c i r c R N A宿主基因可能参与的生物过程主要富集在转录㊁转录调控,R N A聚合酶Ⅱ启动子转录的调控,R a c蛋白信号传导的调控,血管内皮生长因子受体信号通路等;可能参与的细胞成分主要富集在核仁㊁细胞质㊁核质㊁细胞膜等;可能参与的分子功能主要富集在蛋白质结合㊁D N A结合㊁转录因子激活结合㊁N-乙酰转移酶活性等㊂K E G G信号通路分析发现经H e p G2外泌体处理后L O2细胞中表达上调或下调前5的c i r c R N A的宿主基因与细胞周期㊁丝裂原活化蛋白激酶(MA P K)信号通路㊁磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(P I3K/A k t)信号通路㊁神经营养蛋白信号通路㊁肿瘤发生等密切相关㊂3讨论外泌体是一种具有双层脂膜结构的细胞外小泡,由J O H N S T O N E等[3]在1989年研究成熟的绵羊网织红细胞时发现报道㊂外泌体经细胞内吞-融合-外排等过程形成直径为50~140n m圆形或椭圆形囊泡,广泛分布于血浆㊁脑脊液㊁乳汁㊁胸腹腔积液㊁尿液等物质中,甚至存在于细胞培养上清液中[4],其内含丰富的核酸[(微小R N A(m i c r o R N A,m i R N A)㊁长非编码R N A(l o n g n o n-c o d i n g R N A,l n c R N A)㊁c i r-c R N A等]㊁蛋白质㊁脂质等生物活性物质可在细胞间进行信号传递[5]㊂外泌体参与了细胞之间或细胞与组织之间重要信息和物质的交换,在人类细胞生长㊁发育㊁分化㊁衰老等生理过程中发挥着重要作用㊂越来越多的研究表明,外泌体参与了细胞间通讯和微环境调节,可促进病毒扩散及炎症的发生,诱导肿瘤细胞之间交换致癌因子并维持相邻基质细胞的肿瘤生长,在肿瘤转移㊁发生中具有重要作用;通过传递非编码R N A触发化学耐药性诱导肝脏疾病的恶性转化,刺激免疫激活及免疫逃逸,可作为生物标志物用于肿瘤的预测和诊治[6-8]㊂c i r c R N A是由5'和3'末端首尾环化形成一个特殊环状结构,通过套索驱动环化和内含子配对驱动环化形成的c i r c R N A[9-10],其结构稳定在体内不易被核酸酶降解㊂近年来,随着高通量测序技术和生物信息学的迅速发展,c i r c R N A广泛存在于不同生物的细胞质中,具有多样性㊁高度稳定性㊁时空特异性等[11-12]㊂在胃癌㊁乳腺癌㊁结肠癌等恶性肿瘤中的研究发现, c i r c R N A可与m i R N A结合,竞争性抑制m i R N A的转录调控,进而影响肿瘤的生长㊁发育[13-15]㊂此外,在多种恶性肿瘤中发现,肿瘤分泌的外泌体中存在大量差异表达的c i r c R N A,研究其影响肿瘤生长㊁发育的生物功能,可作为一种生物标志物在肿瘤诊断㊁预后评估等方面具有极大的潜力[16]㊂肝癌分泌的外泌体中含丰富的核酸(m i R N A㊁l n-c R N A㊁c i r c R N A等),在肝癌的发生㊁发展中起着重要的作用,其生物功能也成为研究热点之一㊂肝癌细胞分泌的外泌体m i R N A-21能使肝星状细胞向肿瘤相关的成纤维细胞转化促进肿瘤的发生[17]㊂肝癌高转移的肝癌细胞分泌的外泌体m i R N A-1247-3p可直接作用靶向B4G A L T3基因促使肝细胞癌(H C C)向肺癌转移[18]㊂转化生长因子β选择性使l i n c R N A-R O R 在肝癌细胞分泌的外泌体中表达增加,使H C C细胞对索拉菲尼敏感性降低,对其产生耐药性而降低疗效[19]㊂在肝癌H e p G2㊁97L㊁L M3等细胞系分泌的外泌体中发现,c i r c P T G R1与间质表皮转化因子(M E T)竞争性靶向m i R N A449a促进肝癌的发生㊁发展[20]㊂肝癌细胞分泌的外泌体c i r c-100338可通过作用人脐静脉内皮细胞促进血管生成,使肝癌发生转移[21]㊂C i r c-0061395在肝癌分泌的外泌体中表达增加,可通过m i R-877-5p/P I K3R3轴影响细胞增殖㊁侵袭㊁迁移等能力促进肝癌的发生㊁发展[22]㊂肝癌细胞分泌的外泌体中c i r c UH R F1表达增加造成自然杀伤细胞功能紊乱,c i r c UH R F1可通过降解m i R-449c-5p上调T I M-3的机制诱导自然杀伤细胞的功能障碍,参与免疫抑制导致肝癌预后较差[23]㊂因此,肝癌分泌的外泌体中含有大量核酸物质在肝癌转移㊁发生㊁发展及治疗中均发挥了重要的作用,在肝癌的诊断和预后治疗方面具有巨大潜力,外泌体中更多的核酸其生物功能需进一步研究发现㊂本研究通过H e p G2细胞外泌体与正常L O2细胞共同培养后对其c i r c R N A表达谱进行了全面测序,按F C>2且P<0.05为筛选标准,筛选出235个差异表达的c i r c R N A,其中50个c i r c R N A上调表达, 185个c i r c R N A下调表达㊂通过火山图㊁聚类热图等分析,在H e p G2细胞外泌体与正常L O2细胞共同培养后筛选出差异表达明显上调或下调的前5个c i r-c R N A,并通过实时荧光定量P C R验证h s a_0163重庆医学2021年11月第50卷第21期Copyright©博看网 . All Rights Reserved.c i r c R N A_0010044㊁h s a_c i r c R N A_009012㊁h s a_c i r-c R N A_101016㊁h s a_c i r c R N A_100917㊁h s a_c i r c R N A_ 007918等c i r c R N A经外泌体处理后表达水平明显上调,差异有统计学意义(P<0.05);h s a_c i r c R N A_ 002082㊁h s a_c i r c R N A_103128㊁h s a_c i r c R N A_ 092388㊁h s a_c i r c R N A_007343㊁h s a_c i r c R N A_071935等c i r c R N A经外泌体处理后表达水平明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)㊂通过G O㊁K E G G富集分析,经H e p G2外泌体处理后L O2细胞中表达上调或下调前5个的c i r c R N A的宿主基因可能参与了转录调控㊁R N A聚合酶Ⅱ启动子转录的调控血管内皮生长因子受体信号通路㊁蛋白质结合㊁D N A结合㊁转录因子激活结合㊁细胞周期㊁MA P K信号通路㊁P I3K-A k t信号通路㊁神经营养蛋白信号通路等生物过程㊂细胞周期是细胞分裂和复制的过程,与细胞增殖㊁分化密切相关,而细胞增殖失控正是癌症发生㊁发展的特征之一[24]㊂综上所述,h s a_c i r c R N A_0010044㊁h s a_c i r c R N A_ 009012㊁h s a_c i r c R N A_101016㊁h s a_c i r c R N A_100917㊁h s a_c i r c R N A_007918等5个表达上调和h s a_c i r c R N A_ 002082㊁h s a_c i r c R N A_103128㊁h s a_c i r c R N A_092388㊁h s a_c i r c R N A_007343㊁h s a_c i r c R N A_071935等5个表达下调的c i r c R N A可能影响肝癌的发生㊁发展,有可能成为潜在的生物标志物,为今后研究肝癌的发生机制提供了理论依据㊂同时,本研究尚存在一些不足,由于实验条件和时间的限制对差异表达的c i r-c R N A只在细胞上进行了初步的验证其表达,并未进行后续实验验证㊂因此,今后仍需增加后续相关验证实验,逐步验证其生物功能,进一步研究c i r c R N A在肝癌发生㊁发展中的作用机制㊂参考文献[1]C H E N W,Z H E N G R,B A A D E P D,e t a l.C a n c-e r s t a t i s t i c s i n C h i n a,2015[J].C A C a n c e r JC l i n,2016,66(2):115-132.[2]S H I X,WA N G B,F E N G X,e t a l.c i r c R N A s a n de x o s o m e s:a m y s t e r i o u sf r o n t i e r f o r h u m a nc a n c e r[J].M o l T h e r N u c l e i c A c id s,2020,19:384-392.[3]J O H N S T O N E R M,B I A N C H I N I A,T E N G K.R e t i c u l o c y t e m a t u r a t i o n a n d e x o s o m e r e l e a s e: t r a n s f e r r i n r e c e p t o r c o n t a i n i n g e x o s o m e s s h o w sm u l t i p l e p l a s m a m e m b r a n e f u n c t i o n s[J].B l o o d,1989,74(5):1844-1851.[4]Q U Z,WU J,WU J,e t a l.E x o s o m e s d e r i v e df r o m H C C c e l l s i n d u c e s o r a f e n i b r e s i s t a n c e i nh e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a b o t h i n v i v o a n d i nv i t r o[J].J E x p C l i n C a n c e r R e s,2016,35(1):159.[5]K A L L U N I R.T h e b i o l o g y a n d f u n c t i o n o f e x o-s o m e s i n c a n c e r[J].J C l i n I n v e s t,2016,126(4): 1208-1215.[6]A B U D O U R E Y I MU M,Z HO U H,Z H I Y,e ta l.R e c e n t p r o g r e s s i n t h e e m e r g i n g r o l e o f e x o-s o m e i n h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a[J].C e l l P r o-l i f,2019,52(2):e12541.[7]L I U H,L I B.T h e f u n c t i o n a l r o l e o f e x o s o m e i nh e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a[J].J C a n c e r R e s C l i nO n c o l,2018,144(11):2085-2095.[8]L I L M,L I U Z X,C H E N G Q Y.E x o s o m e p l a y sa n i m p o r t a n t r o l e i n t h e d e v e l o p m e n t o f h e p a t o-c e l l u l a r c a r c i n o m a[J].P a t h o l R e s P r a c t,2019, 215(8):152468.[9]J E C K W R,S O R R E N T I N O J A,WA N G K,e ta l.C i r c u l a r R N A s a r e ab u n d a n t,c o n s e r v e d,a n da s s o c i a t e d w i t h A L U r e p e a t s[J].R n a,2013,19(2):141-157.[10]Q U S,Y A N G X,L I X,e t a l.C i r c u l a r R N A:an e w s t a r o f n o n c o d i n g R N A s[J].C a n c e r L e t t, 2015,365(2):141-148.[11]M E M C Z A K S,J E N S M,E L E F S I N I O T I A,e ta l.C i r c u l a r R N A s a r e a l a r g e c l a s s o f a n i m a lR N A s w i t h r e g u l a t o r y p o t e n c y[J].N a t u r e, 2013,495(7441):333-338.[12]L I Z,HU A N G C,B A O C,e t a l.E x o n-i n t r o nc i r c u l a r R N A s r e g u l a t e t r a n s c r i p t i o n i n t h e n u-c l e u s[J].N a t S t r u c t M o l B i o l,2015,22(3):256-264.[13]Z H A N G J,HO U L,L I A N G R,e t a l.C i r c D L S Tp r o m o t e s t h e t u m o r i g e n e s i s a n d m e t a s t a s i s o fg a s t r i c c a n c e r b y s p o n g i n g m i R-502-5p a n d a c-t i v a t i n g t h e N R A S/M E K1/E R K1/2s i g n a l i n g[J].M o l C a n c e r,2019,18(1):80.[14]Y A N G R,X I N G L,Z H E N G X,e t a l.T h e c i r-c R N A c i r c A G F G1a c t s a s a s p o n g e o f m i R-195-5p t o p r o m o t e t r i p l e-n e g a t i v e b r e a s t c a n c e r p r o-g r e s s i o n t h r o u g h r e g u l a t i n g C C N E1e x p r e s s i o n[J].M o l C a n c e r,2019,18(1):4. 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All Rights Reserved.[13]HA T E M S N,RWD H E U I L A,G A N D J B A-K H C H E.C a r d i a c a d i p o s e t i s s u e a n d a t r i a l f i-b r i l l a t i o n:t h e p e r i l s o f a d i p o s i t y[J].C a r d i o-v a s c R e s,2016,109(4):502-509.[14]S H E N D F,T A N G Q Z,Y A N L,e t a l.T e t r a n-d r i ne b l o c k s c a r d i a c h y p e r t r o p h y b y d i s r u p t i n g r e a c t i v e o x y g e n s p e c i e s-d e p e n d e n t E R K1/2s i g-n a l l i n g[J].B r J P h a r m a c o l,2010,159(4):970-981.[15]G U O J,J I A F,J I A N G Y,e t a l.P o t e n t i a l r o l e o fMG53i n t h e r e g u l a t i o n o f t r a n s f o r m i n g-g r o w t h-f a c t o r-b e t a1-i n d u c e d a t r i a l f i b r o s i s a n dv u l n e r a b i l i t y t o a t r i a l f i b r i l l a t i o n[J].E x p C e l lR e s,2018,362(2):436-443.[16]K AWA G U C H I M,T A K A H A S H I M,HA T AT,e t a l.I n f l a mm a s o m e a c t i v a t i o n o f c a r d i a c f i-b r o b l a s t s i s e s s e n t i a l f o r m y oc a rd i a l i s c he m i a/r e p e r f u s i o n i n j u r y[J].C i r c u l a t i o n,2011,123(6):594-604.[17]WA N G Y,WU Y,C H E N J,e t a l.P i r f e n i d o n ea t t e n u a t e s c a r d i a c f ib r o s i s i n a m o u s e m o d e l o fT A C-i n d u c e d l e f t v e n t r i c u l a r r e m o d e l i n g b ys u p p r e s s i n g N L R P3i n f l a mm a s o m e f o r m a t i o n[J].C a r d i o l o g y,2013,126(1):1-11. 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基于网络药理学和实验验证探究狼毒大戟醇提物治疗肝细胞癌的分子机制

网络出版时间：２０２３－０６－１５１５：１４：３６　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ２／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２３０６１４．１５４８．０４７．ｈｔｍｌ◇网络药理学◇基于网络药理学和实验验证探究狼毒大戟醇提物治疗肝细胞癌的分子机制田辛晨１，３，王浩辰２，张一鸣３，张家琪３，张登甜２，颜廷昊１，３，赵　静３，蒋树龙１，３（１．山东大学齐鲁医学院，山东济南　２５００００；２．济宁医学院临床医学院，山东济宁　２７２０００；３．济宁医学院附属济宁市第一人民医院，山东济宁　２７２０００）收稿日期：２０２３－０２－２２，修回日期：２０２３－０４－１２基金项目：国家自然科学基金项目（Ｎｏ８１８７３２４９）；山东省青年泰山学者资助计划（Ｎｏｔｓｑｎ２０１９０９２２）；山东省自然科学基金（ＮｏＺＲ２０２２ＭＨ３１９）作者简介：田辛晨（１９９５－），男，硕士生，研究方向：肿瘤内科学，Ｅｍａｉｌ：ｔｘｃ０８１７＠１２６ｃｏｍ；赵　静（１９８８－），女，副主任药师，研究方向：中药抗肿瘤药效评价，通信作者，Ｅｍａｉｌ：９９５２０１６２０＠ｑｑ．ｃｏｍ；蒋树龙（１９７９－），男，主任医师，研究生导师，研究方向：中医药抗肿瘤，通信作者，Ｅｍａｉｌ：ｊｎｓｌｊｉａｎｇ＠１６３．ｃｏｍｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２１１００３文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０７－１３５４－０８中国图书分类号：Ｒ２８２７１；Ｒ３１９；Ｒ３２９２８；Ｒ３４５５７；Ｒ７３５７摘要：目的　基于网络药理学和实验验证解析狼毒大戟醇提物治疗肝细胞癌作用机制。

方法　通过ＴＣＭＳＰ、ＳｗｉｓｓＡＤＭＥ、ＳｗｉｓｓＴａｒｇｅｔＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎ数据库以及参考文献获得狼毒大戟醇提物活性成分和作用靶点；运用ＧｅｎｅＣａｒｄｓ和ＤｉｓＧｅＮＥＴ数据库筛选肝细胞癌相关基因；利用Ｖｅｎｎｙ平台、ＳＴＲＩＮＧ平台和Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ软件构建蛋白质－蛋白质互作网络图；使用ＤＡＶＩＤ数据库进行ＧＯ和ＫＥＧＧ富集分析。

基于lncRNA-mRNA共表达网络的HBV相关肝癌生物靶点筛选及综合分析

16・右江医学2021年第49卷第1期Chinese Youjiang Medical Journal2021,Vol.49No.1基于lncRNA-mRNA共表达网络的HBV相关肝癌生物靶点筛选及综合分析农顺强1，2,陈晓昊1，2,许桂丹2,韦武均2,彭彬'，周律，邓益斌^银(1.右江民族医学院附属医院检验科,2.右江民族医学院研究生学院，3.广西肝胆疾病临床医学研究中心，广西百色533000)【摘要】目的对公共基因表达数据库(GEO)中的HBV相关肝癌数据进行生物信息学分析，探讨长链非编码RNA (lncRNA)与mRNA在HBV相关肝癌中的作用。

方法从GEO数据库下载HBV相关肝癌数据集，利用相应R包对数据集的差异表达基因进行计算与比较,获取差异基因并构建lncRNA-mRNA共表达网络、蛋白质相互作用(PPI)网络和模块分析；继而对共表达网络中的mRNA进行基因本体论(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)路径分析;并分析与关键lncRNA高度相关的mRNA与患者生存曲线的相关性。

结果通过基因分析获得HBV相关肝癌高度相关的差异lncRNA30个,mRNA676个。

共表达的mRNA主要参与的GO通路有细胞黏附、细胞运动的负调控、生物黏附、酶联受体蛋白信号通路、细胞趋化性;KEGG通路主要有类固醇激素生物合成、视黄醇代谢、PI3K-Akt信号通路、ECM-受体相互作用、化学致癌作用、黏着斑、Rap1信号通路等。

与关键lncRNA(DNM3OS、HAND2-AS1、HELLPAR、AC126118.1、FAM230E、LINC01139、LINC01943、AL022344.1和PCAT7)高度相关的mRNA (GGT5、CEP55、DPT、TEK、TRIP13、STAB2、ESM1和MS4A1)与患者生存曲线有显著相关性(P<0.01)遥结论ln-cRNA(DNM3OS、HAND2-AS1、HELLPAR、AC126118.1、FAM230E、LINC01139、LINC01943、AL022344.1和PCAT7)对HBV相关肝癌的发生发展及预后具有重要作用，为HBV相关HCC发生发展的机制研究、预后指标、药物治疗靶点的选择等提供参考遥揖关键词铱乙肝病毒;肝细胞癌;lncRNA-mRNA共表达网络;生物标志物中图分类号:R735.7文献标志码:A DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2021.01.004Screening and comprehensive analysis of biological targets of HBV-related hepatocellular carcinoma based on lncRNA-mRNA co-expression networkNONG Shunqiang12,CHEN Xiaohao1，2,XU Guidan2,WEI Wujun2,PENG Bin[,ZHOU L俟1,2,DENG Yibin[,猿银(1.Department of Laboratory Medicine,Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities；2.Graduate School,Youjiang Medical University for Nationalities；3.Guangxi Clinical Medical ResearchCenter for Hepatobiliary Diseases,Baise533000,Guangxi,China)揖Abstract]Objective To perform bioinformatics analysis on HBV related liver cancer data in public gene expression omnibus(GEO),so as to investigate the role of long non-coding RNA(lncRNA)and mRNA in HBV related hepatocellular carcinoma(HCC).Methods Data set of HBV related HCC were downloaded from GEO,and differentially expressed genes in the data set were calculated and compared by corresponding R packets to obtain differentially expressed genes and con-基金项目：国家自然科学基金(81460123)；广西自然科学基金(2018GXNSFAA281187)；广西科技计划人才与基地项目(桂科AD17129025)；广西研究生教育创新计划项目(YCSW2019222)作者简介:农顺强，男，主管技师，在读硕士研究生，研究方向:HBV相关肝癌非编码RNA调控机制研究。

肝癌的治疗科普知识!

肝癌的治疗科普知识！石棉县人民医院外一科四川雅安 625400肝癌属于临床常见的恶性肿瘤，我国目前每年肝癌新发病例为37万，发病率恶性肿瘤的第四位，而发病后死亡病例占恶性肿瘤的第二位，好发生于中年男性。

那么肝癌都有什么类型？发病后有什么治疗方式？现在就让我们一起了解一下吧。

1、肝癌病因及疾病类型原发性肝癌的发生原因目前仍未明确，但一般认为与病毒性肝炎、饮酒、毒物寄生虫、遗传等因素相关。

而继发性肝癌的发生与机体内其他部位恶性肿瘤细胞转移相关。

原发性肝癌主要包括肝内胆管混合癌、肝细胞癌、混合型癌，其中肝细胞癌在原发肝癌中占比约为85~90%，而继发性肝癌为临床更为常见的肝癌的一种，继发性肝癌与原发性肝癌占比约为2：1至4：1。

肝癌以其病理形态、生长方式、肿瘤大小、细胞分化程度可进行不同肝癌种类的划分：（1）病理形态：分为巨块型、弥漫型、结节型；（2）生长方式：弥漫型、浸润膨胀混合型、膨胀型、浸润型；（3）肿瘤大小：微小肝癌（直径在2cm及以下）、小肝癌（直径超过2cm但小于等于5cm）、大肝癌（直径在5cm以下但小于等于10cm）、巨大肝癌（直径超过10cm）；（4）细胞分化程度：Ⅰ级为高度分化、Ⅱ级与Ⅲ级为中度分化、Ⅳ级为低度分化。

2、肝癌临床症状肝癌早期无特异性症状，当患者明显感受到不适感的时候，一般已经进入肝癌中晚期。

主要临床症状：（1）肝区疼痛：一般为中上腹或者右上腹持续性刺痛、胀痛、隐痛，劳累后、夜间会出现疼痛感受加重的情况。

（2）消化道症状：腹泻、呕吐、食欲减退、腹胀等症状为肝癌患者常见症状，但因这些症状缺乏特异性，因此容易被忽略；严重者因发生明显静脉曲张，因此极易发生上消化道出血症状；（3）发热：一般情况下温度为37.5~38℃，个别病例可高达39℃以上，而由肝癌引发的发热症状以口服抗生素基本无效，但口服吲哚美辛等退热现象明显；（4）临床检查：可见患者出现不同程度肝大、腹水、黄疸症状；（5）代谢异常：肝癌患者受本身代谢异常或肝癌组织影响会出现一系列代谢异常症状，包括高钙血症、西血糖、红细胞增多、高脂血症等症状。

【保护肝脏疾病常识】原发性肝癌1

第三章肝癌原发性肝癌的症状及预防原发性肝癌（primarycarcinomaoftheliver）是我国常见恶性肿瘤之一。

死亡率高，在恶性肿瘤死亡顺位中仅次于胃、食道而居第三位，在部份地区的农村中则占第二位，仅次于胃癌。

我国每年死于肝癌约11万人，占全世界肝癌死亡人数的45％。

由于依靠血清甲胎蛋白（AFP）检测结合超声显像对高危人群的监测，使肝癌在亚临床阶段即可和出诊断，早期切除的远期效果尤为显著。

加之积极综合治疗，已便肝癌的五年生存率有了显著提高。

什么是原发性肝癌发生在肝脏的恶性肿瘤很多，可分为原发性肝癌和继发性肝癌两大类。

如果发现了肝脏有肿瘤，必须鉴别这个肿瘤是在肝脏发生的，还是由别处的恶性肿瘤转移过来的。

如果肿瘤是在肝脏发生的称为原发性肝癌。

如果由其他器官的恶性肿瘤通过血液或淋巴管转移到肝脏，这就是继发性肝癌。

原发性肝脏恶性肿瘤有几种原发性肝脏恶性肿瘤，按发生的组织可分为恶性上皮细胞肿瘤和恶性间叶组织肿瘤两类，前者远比后者多见。

恶性上皮细胞肿瘤又有肝细胞性肝癌、胆管细胞性肝癌、混合细胞性肝癌，以及肝类癌、婴幼儿肝母细胞瘤、肝原发性鳞状细胞癌等之分。

我国肝癌病理协作组提出将原发性肝癌分为:1.块状型2.结节型3.小癌型4.弥漫型诊断病理诊断ct检查相关整本阅读：/ebook/e36c467c2b160b4e767fcf60.html1．肝组织学检查证实为原发性肝癌者。

2．肝外组织的组织学检查证实为肝细胞癌。

临床诊断1．如无其他肝癌证据，AFP对流法阳性或放免法>400μg/ml，持续四周以上，并能排除妊娠、活动性肝病、生殖腺胚胎源性肿瘤及转移性肝癌者。

2．影像学检查有明确肝内实质性占位病变，能排除肝血管瘤和转移性肝癌，并具有下列条件之一者：①AFP>200mg/mI。

②典型的原发性肝癌影像学表现。

②无黄疸而AKP或r－GT明显增高。

④远处有明确的转移性病灶或有血性腹水，或在腹水中找到癌细胞。

基于网络药理学预测肝爽颗粒治疗肝癌的作用机制

摘要：利用网络药理学技术和生物信息学方法，探讨肝爽颗粒对治疗肝癌（Liver cancer）的活性成分、作用靶点及分子机制。利用
TCMSP、Pubchem、SEA 和 Swiss Target Prediction 数据库筛选肝爽颗粒活性成分和作用靶点；通过 GeneCards 和 OMIM 数据库筛选
肝爽颗粒处方基于《宋·太平惠民和剂局方》中经典名方逍遥散配伍基础，结合现代药学研究成果及临床治疗肝病经验方组成，由保定步长天浩制药有限公司生产为中成药制剂[4]。功能主治为疏肝健脾、清热散瘀、保肝护肝还软坚散结。近 20 年来，肝爽颗粒已在临床上被广泛地应用于治疗急、慢性肝炎，肝硬化，肝功能损害。药理研究表明，肝爽颗粒可抑制肝细胞的纤维增生，促进肝细胞的再生，改善肝脏微循环及提高患者的免疫力[5]。临床实践表明，肝爽颗粒治疗慢性乙型肝炎可改善肝脏炎性活动度及纤维化程度，具有良好安全性 [6]。鉴于中药治疗具有多成分、多靶点等特点，目前，肝爽颗粒治疗肝癌的药效物质基础及作用机制尚未完全阐明。已有研究者从肝爽颗粒中分离出多种化合物，并证明其化学成分具有抗肝纤维化和有效防治肝硬化的作用 [7-10]。但这些成分是否能够在治疗肝
收稿日期：2022-12-02 基金项目：国家重点研发计划项目（2018YFC1704100）；国家重点研发计划项目（2018YFC1704105）作者简介：孙鹏（1998-），男，吉林长春人，在读硕士研究生，从事中医内科学（肝脾胃病方向）研究。 ※通讯作者：刘铁军（1954-），男，吉林长春人，教授，主任医师，博士研究生导师，从事肝胆脾胃病的临床与研究。
SUN Peng1, WANG Han2,3, ZHANG Weisong1, SANG Ziqi1, LIU Yuru1, YE Tong1, LIU Tiejun3※

原发性肝癌的中医药治疗研究进展

★林小林1 唐林1 陈宝贵2（1.天津中医药大学津 301700）［摘要］原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma 是我国常见的恶性肿瘤之一。

中西医结合治疗能有效控制肿瘤，中医药治疗肝癌的病因病机、辨证论治、［关键词］原发性肝癌；中医药治疗中图分类号：R273 文献标识码：A通信作者：陈宝贵，主任医师，博士生导师。

E-mail ：****************。

原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma）简称肝癌，是肝细胞和肝内胆管上皮细胞发生恶变引发的恶性肿瘤，常为慢性肝病和肝硬化的并发症，是我国常见的恶性肿瘤之一，尤与乙肝病毒（HBV）和丙肝病毒（HCV）的慢性感染有关［1］。

根据2015年中国恶性肿瘤病发的统计结果，肝癌的发病率位居第四，死亡率位居第三［2］。

本病发病率男女之比为5∶1。

目前，肝癌的治疗手段主要有：（1）手术治疗（手术切除或肝移植）；（2）局部治疗：①经皮穿刺瘤内注射无水乙醇（PEI）；②射频消融术（RF）；③经皮肝动脉插管栓塞化疗（TACE）；（3）生物治疗（分子靶向药物治疗、免疫治疗、基因治疗）；（4）放疗和系统化疗；（5）中医药治疗等。

尽管新的诊断方法和治疗手段不断涌现，但是肝癌起病隐匿，早期缺乏典型症状；临床症状明显者，病情大多已进入中晚期。

因此，要进一步提高患者的生存率就必须重视早期诊断和规范治疗，尤其是个体化治疗。

肿瘤发展进程中需要多学科协作［3］（Multidisciplinary team，MDT）综合治疗模式的参与管理。

恶性肿瘤的治疗不再仅着眼于单纯消除瘤体，而是有计划、合理地应用各种综合治疗手段，以期达到最大限度控制肿瘤，提高治愈率，改善患者生活质量，延长患者生存期的目的；这与中医“整体观念”“调和阴阳”“以人为本”“扶正祛邪”等理念相类。

作为多学科协作治疗中的重要一员，中医家在传统中医基础理论的指导下，对肝癌的病因病机进行了更深入的探索。

原发性肝癌定义与诊断(primarycarcinomaoftheliver)

原发性肝癌定义和诊断
临床表现
起病隐匿，早期无明显症状,经甲胎蛋白（AFP）普查检出的早期肝癌，称为亚临床肝癌。 1．中晚期表现 ⑴ 肝区疼痛：为最常见且出现较早的症状。
呈持续性胀痛或钝痛。肝区疼痛是由于肿瘤增长快速，肝包膜被牵拉所引起。当肝表面的癌结节破裂，坏死的癌组织及血液流入腹腔时，可突然引起剧痛，产生急腹症的表现。如出血量大，则引起晕厥和休克。 ⑵肝肿大：呈进行性，质坚硬，表面多有大小不等结节或巨块，边缘钝而不整齐。
原发性肝癌定义和诊断
• 3．超声波检查是目前肝癌影像诊断中的首选方法，能显示2cm以上的肝癌。
• 4．CT检查阳性诊断率在90％以上，如经肝动脉导管注射造影剂则可检出5-10mm的微小病灶。
• 5．MRI检查显示肝癌的内部结构及血管的浸润较清晰，定位准确，对小肝癌的检出率达80％以上。
• 6．选择性肝动脉造影能显示直径在1cm以上的癌结节，对小肝癌阳性率可达87％。
• 7．肝穿刺活检和腹腔镜检查
原发性肝癌定义和诊断
医疗诊断要点
对肝炎史5年以上、乙型或丙型肝炎病毒标记阳性、肝硬化、肝癌家族史、35岁以上高危人群者，进行AFP检测，结合B超检查1-2次/年，是发现早期肝癌的方法。临床诊断标准： 1.AFP＞400μg/L，能排除活动性肝病、妊娠、生殖系胚胎
原发性肝癌定义和诊断
诊断
• 中晚期肝癌易诊断
• 早期肝癌的诊断： AFP+B超是诊断早期肝癌的基本措施低浓度AFP持续增高，ALT正常 AFP>500μg/l持续1月或>200μg/l持续8周
原发性肝癌定义和诊断
鉴别诊断
1．继发性肝癌 2．肝硬化
3．活动性肝病 AFP与ALT同时升高—肝病 AFP升高，ALT下降—肝癌 AFP>500mg/l—肝癌 AFP200-400μg/l－追踪观察