免疫学检测中干扰因素

干扰因素和对策- 嗜异性抗体
嗜异性抗体通常是指与其他种类动物的 免疫球蛋白产生反应的人类抗体，具有广泛 的种特异性。免疫检测系统中大量使用单克 隆抗体，嗜异性抗体可与啮齿类动物IgG的 Fc段结合。这样嗜异性抗体既可与检测系统 中的捕获抗体结合、又可和标记抗体结合， 造成检测结果假阳性或假性升高。嗜异性抗 体干扰的程度、频率与患者的疾病状态、年 龄、性别等无关。
4
/L天然MAK33或15mg/L热处理
MAK33后结果正常
4 仅加入15mg/L热处理MAK33后
3
结果正常
0.08 0.06
干扰因素和对策- 嗜异性抗体
使用Access免疫化学发光检测系统测
定TSH、PSA、βHCG和皮质醇，前三项为
双位点非竞争法，后为竞争法。160份标本
测定HCG有5份（3.1%)假性升高；53份标
免疫学检测方法中的 干扰因素和对策
随着基础免疫学研究的深入和现代免 疫学理论的建立，使大量免疫学检测技术 被不断地创新、发明；在临床疾病诊治的 应用中也不断地推陈出新。目前应用免疫 学原理检测的检验项目占到三级综合医院 检验科全部检验项目的1／4，医疗收入约 占1／3。这就要求检验人员不断掌握最新 的临床免疫学知识和各种新的检验方法， 了解检验项目的基本原理。
干扰因素和对策- 类风湿因子
收集10份RF31～＞1000IU/L的患者血清， 在美国和欧洲66各临床实验室进行74个项目 的免疫竞争法或免疫夹心法检测，仪器和试 剂均配套。3445个结果中8.7％为假阳性。错 误高值结果中的21％（所有结果的1.8％）引 起了临床的错误诊断，在使用RF吸附剂后再 检测，错误结果得到纠正。39％的假阳性结 果也可在使用RF吸附剂后降低。
干扰因素和对策- 自身抗 体 嗜靶抗原的自身抗体，如抗甲状腺球蛋
白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，能与 靶抗原结合形成复合物，在免疫检测系统中 均可对靶抗原的测定结果造成负性干扰。
判断嗜靶抗原的自身抗体对检测的负干 扰，因紧密结合患者的疾病诊断、病史、其 他实验检查的结果综合分析。如甲亢、甲低、 I型糖尿病等。
本（37.9%)用嗜异性抗体吸附剂吸收后结果
出现差异性下降；有4份标本的结果出现＞
4SD的显著增高，使临床对结果的解释出现
改变。
Clin Chem 2003；49(7):1163～1169
嗜异性抗体的干扰－对策
在标本稀释液或待检标本中加入过量的动 物Ig (s) ，但加入量不足或亚型不同时无 效（要与捕获抗体和标记抗体的Ig亚型 相 同）。 捕获抗体使用F(ab`)2，切除Fc段。
Clinical Chemistry 2002;48(11):2008~2016
RF的干扰－对策
捕获抗体用F(ab`)2替代完整的IgG 标本用连有热变性（63℃，10 min）IgG的 固相吸附剂（Euroimmune公司）处理 （将 热变性IgG加入到标本稀释液或血清中同 样 有效），4℃过夜离心后在检测； 检测抗原时，可以用终浓度0.1mol/L 2-巯 基乙醇(2- ME)等加入到标本稀释液或标本
干扰因素和对策- 嗜异性抗体
将11261份血清标本使用荧光时间分辨免 疫分析系统（PE公司，二步法、双位点）检 测CEA，将缓冲液中加入小牛IgG 约210个病 人、3.3~4.7%的标本出现假性升高；加入 15mg/L热处理小鼠IgG（MAK33 ）（Roche） 可将干扰降为0.86%；同浓度天然小鼠IgG无 效；去除捕获抗体或标记抗体的Fc段也可将 干扰降至0.1%。
免疫学检测- 干扰因素
标本自身及前处理所造成的干扰因素 －类风湿因子（RF） －嗜异性抗体 －自身抗体 －补体 －纤维蛋白 －溶血或黄疸 －交叉反应物质 －外源性物质
干扰因素和对策- 类风湿因子
患者体内存在的类风湿因子能显著干扰 许多免疫学检测方法，IgM、IgG型RF可以与 免疫检测系统中的捕获抗体及标记二抗的Fc 段直接结合，从而导致检测结果假阳性或假 性升高。RF对不同检测系统的干扰程度有所 差异，影响程度并不与RF的浓度成正比 。目 前，在临床工作中使用的免疫检测试剂盒大 部分均没有很好地防止RF干扰的措施，国外 著名公司要好于国内公司。
免疫检测技术- 标记物
免疫测定技术均是以标记物示踪作为基 础，同位素、荧光素、酶是经典的三大标记 免疫测定技术。这三大标记技术发展了各种 各样的免疫测定方法，如RIA、ELISA、荧光 免疫测定、免疫化学发光测定等，目前应用 这三大标记技术的检测试剂盒在临床广为应 用。近年来，作为免疫测定发展方向的非同 位素标记技术以其敏感、安全等倍受关注。
基本概念
抗原：是一类能刺激机体免疫系统产生特异性 免疫应答、并能与相应免疫应答产物（抗体或 致敏淋巴细胞）发生特异性结合的物质。
抗体： 是由抗原刺激 B细胞经分化增殖形成 的浆细胞合成和分泌 的，能与相应抗原发
基本概念
免疫学检测就是利用抗原和抗体高度特异 性结合的原理而检测分析微量物质的方法。从 20世纪50年代美国学者Berson和Yallow发明 了放射免疫测定技术检测胰岛素起，免疫学检 测技术经历了从定性到定量；从常量分析到微 量、超微量分析；从手工检测到全自动化；从 单个标本检测到高通量检测等一系列长足的进 步。
要保证实验结果的正确性和可靠性，必 须对实验整个过程中各个环节中的干扰因素 有比较清楚的掌握和了解。在本次课中主要 讨生论化的是标本本身内在因素、以及由于人为 因临素检对标本处理不当等引起的外在因素、对 免疫检测结果造成的影响。在了解这些因素 的同时，如何在临床工作中注意和解决这些 干扰，以保证结果的准确性。
Clinical Chemistry 2002；48(4):613~621
表1. 不同处理方法对嗜异性抗体干扰的排除
处理方法
ห้องสมุดไป่ตู้
病人数 频率（％）
1 切除捕获抗体Fc段和加入热处 148
理15mg/LMAK33后结果正常
2 仅切除捕获抗体Fc段后结果正
41
常
3.0 0.82
3 切除捕获抗体Fc段或加入15mg