全长乙型肝炎病毒基因组的扩增及序列分析

含拉米夫定耐药基因的乙型肝炎病毒全基因组载体的构建及鉴定

ｓ（）Ｋ一载体，酶切和测序鉴定重组质粒含有ＨＢ — ＮＶＤＡ全基因组后，以该重组质粒的多聚酶逆转录酶区
为模板，计引入突变位点的引物，合酶链反应（Ｃ）行定点突变，变产物经ＤｎＩ化后，化设聚ＰＲ进突ｐ消转
ｏｅａｔｉｉｓＢ．ＭｅｈｆｈｐｉｓｖｒｔｕｔｏｄｓＦｕｌｌｎｔｌ—ｅｇｈＨＢＶ— ＤＮＡｓｅｔａｔｄａｍｐｌｅｙｐｏｙｒｓｈｉｅｃｉｎｗａｘｒｃｅｎｄａｉｄｂｌｍｅａｅｃａｎｒａｔｉｆｏ
（Ｃ．ＴｅｅＰＲｐｏｕｔａｌｎｄｉｔｐｌｅｃｉｔＫ一ｅｔ．ＰｉｅｓｗｒｄｓｎｄａｃｒｉＰＲ）ｈｎｔＣｒｄｃｗｓｏｅｏＢｕｓｒ — （）ｖｃｒｒｒｅｅｅｉｅｃｏｎｔｈｃｎｐＳｏｍｇｄｇｏ
ＸＡＧＦｎ— ｅ，ｕＪｎｘ，ＩＮｅｇｍｉＬｉ —ｉＷＡＧＱａｇ，ＬＹｎ —ｅ，ＩＮＷｅ，ＬＵＸ —ｏｇ，Ｌａｇ．１ａＮｉＩｏｇｗｉＣｑｉＩｕｄｎ。ＩｎｎＥＧ
ＤｅｒｍｅｔｏｎｅｔｏｐａｔｎｆＩｆｃｉｎ，ＴｈＴｈｒＡｆｌａｅＨｏｐｔｌＳＹａ —ｅＵｎｖｒｉｙ；２ｎｓｉｅｏｃｉＲｅｅｉｄｆｉｔｄｉｓｉａ，ｕｎｔｓｎｉｅｓｔＩｔｔｆＶａｃｎｅｕｔ — ｓａｃｅｒｈ，ＳｎＹａ —ｅｕｔｓｎＵｎｉｅｓｔｖｒｉｙ；３ＣｅｔａｂｒｔｒｎｒｌＬａｏａｏ￣，Ｔｈｔｆｌｅｓｉａ，ＳｎＹａ —ｅｉｅｓｔｅＴｈｉｄＡｆｉｉｄＨｏｐｔｌｕｔｓｎＵｎｖｒｉ ‘ ａｔｙ；Ｇｕａｇｈｏ００，Ｃｈｎａｎｚｕ５１６３ｉ

乙型肝炎病毒基因组中罕见大片段缺失突变的分析

俞杨，邬兰，焦杰，杜同信，王自正，颜宁
（南京医科大学附属南京医院：１．核医学科分子诊断室；２．感染性疾病科，江苏南京２１０００６）
摘要：目的对来源于一例慢性乙型肝炎患者的包含罕见大片段缺失的乙肝病毒（ＨＢＶ）全基因组进行序列分析。方法提取乙肝病毒基因组ＤＮＡ，扩增全长基因组，通过单克隆化分析不同准种中大片段缺失的位点和长度；将包含两段缺失突变的片
，
文献标识码：Ａ文章编号：１６７３ — ４１３０（２０１３）１１一ｌ３５７ — ０３
ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｒａｒｅｍｕｔａｔｉｏｎｏｆｌａｒｇｅｆｒａｇｍｅｎｔｄｅｌｅｔｉｏｎｉｎｔｈｅｇｅｎｏｍｅｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ
Ｙｕｇａｎｇ，ＷｕＬａｎ，ＪｉａｏＪｉｅ，ＤｕＴｏｎｇｘｉｎ，ＷａｎｇＺｉｚｈｅｎｇ，ＹａｈＮｉｎｇ
（１．ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｉａｇｎｏｓｉｓ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｕｃｌｅａｒＭｅｄｉｃｉｎｅ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｉｓｅａｓｅ，ＮａｎｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＮａｎｊｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ２１０００６，Ｃｈｉｎａ）￣ｒ＇Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｗｈｏｌｅｇｅｎｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ（ＨＢＶ）ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｒａｒｅｌａｒｇｅｆｒａｇｍｅｎｔｄｅｌｅｔｉｏｎ

公共核酸数据库乙肝病毒全基因组序列概况和中国HBV参照序列的建立

的病毒表面抗原（ｓ）达下降，甚至检测转为ＨＢＡｇ表
序列的不断增加，经系统进化分析，又增加了Ｅ，，ＦＧ，Ｈ基因型，发展为８个基因型以及不同的亚型［．４］
截至２００７年１１日，美国国立生物技术信息月
阴性．但是ＨＢ并没有被彻底清除，仍在低水平Ｖ
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自投井乎遗展第１卷第２２０年２．８期０８月
１２１
＊专题评述＊
公共核酸数据库乙肝病毒全基因组序列概况和中国ＨＶ参照序列的建立＊Ｂ
吴光华。丁惠国。曾长青。一
行了分析，提出全面结合宿主临床信息和ＨＢ基因组信息研究的建议．Ｖ
关键词公共核酸数据库ＨＶ全基因组序列基因型中国地区参照序列Ｂ复制．而没有受到抗体或药物抑制的某些突变株可
ห้องสมุดไป่ตู้
乙肝病毒（ｅａｉｓｉｓｈｐｔｉＢｖｒ，ＨＢ感染是一个ｔｕＶ）
１．中国科学院研究生院，北京１０４；２００９．中国科学院北京基因组研究所，北京１１００３０；３．首都医科大学附属北京佑安医院，北京１０６００９
摘要
截至２００７年１月，世界三大核酸数据库（ｎａｋＭＢＤＤＪ库中已经登录来自４ＧｅＢｎ，ＥＬ，Ｂ）６
严重的临床问题，据世界卫生组织的资料表明，全世界约３的人口，即２００亿人有感染乙型肝炎病毒的血清学证据，其中３５亿人为慢性感染，每年．至少有１０万人死于ＨＢ感染所致的肝衰竭、肝０Ｖ

乙型肝炎病毒基因组新基因的研究及意义

乙型肝炎病毒基因组新基因的研究及意义杨倩;成军;董菁;张树林【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2004(013)001【摘要】乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝部分双链DNA病毒，不仅引起急慢性病毒性肝炎，而且与肝纤维化(LF)、肝细胞癌(HCC)的发生发展密切相关[1]。

全世界约有3．5亿人受到HBV感染，危害严重但目前还没有特效的治疗技术和方法。

我们对HBV基因组准种特点进行长期而广泛研究[2-5]。

最近我们对于中国HBV 流行株的全基因序列进行克隆和序列分析，发现了前-前-S和前-X基因序列，并利用分子流行病学、分子生物学技术对其进行了验证，从而改写了HBV DNA编码基因序列研究的历史。

【总页数】4页(P72-75)【作者】杨倩;成军;董菁;张树林【作者单位】100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心;100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心;100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心;100039,北京,解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心【正文语种】中文【中图分类】R512.62【相关文献】1.慢性乙型肝炎患者病毒基因组与乙型肝炎病毒e抗原、肝功能关系分析 [J], 刘振杰;曹永坚;岑子华;徐宁2.乙型肝炎病毒基因组S区编码产物的检测及临床意义 [J], 黄学忠;吴祥;黄秀琴;潘虎3.恩施地区乙型肝炎患者中乙型肝炎病毒基因组核苷类似物耐药突变研究 [J], 朱琼香;李小丹;向辉;王祖君;殷爱华4.乙型肝炎病毒基因组中p53应答成分结合序列的确定及意义 [J], 朱明华;Duan,LX5.乙型肝炎病毒基因组异质性与宫内传播关系的研究 [J], 承海;苏海霞;王素萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

西藏部分地区12株藏族人群C_D重组型乙型肝炎病毒全基因序列分析

（ＨＣＣ）。目前，根据ＨＢＶ全基因序列核苷酸差异详细描述重组的具体特征。本研究在前期基础上，
大于８％，或者Ｓ基因序列核苷酸差异大于４％，将ＨＢＶ分为九个基因型（Ａ－Ｉ）［１－３］，最近另有报道Ｊ型乙肝病毒［４］，其中Ｂ型和Ｃ型是中国最常见的乙肝病毒基因型，约占中国ＨＢＶ感染者的９５％［５］，其中，北方以Ｃ型为多，南方以Ｂ型为多，各省之间分布不完全相同，另外还有Ａ／Ｃ［６］、Ｂ／Ｃ［７］、Ｃ／Ｄ重组型。［８］
收稿日期：２０１５－１１－１３；修回日期：２０１６－０３－０１基金项目：国家科技重大专项（２０１２ＺＸｌ０００２００１）作者简介：刘铁柱，沈立萍并列第一作者。刘铁柱（１９８８－），男，在读硕士研究生，从事乙型肝炎病毒研究工作，Ｔｅｌ：１３１４１２９４７０８，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｔｉｅｚｈｕ１９８８＠１６３．ｃｏｍ；沈立萍（１９７４－），女，副研究员Ｔｅｌ：１５８１０６８０５３５，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｌｐｓｓ１２８＠１２６．ｃｏｍ＊通讯作者：毕胜利，崔富强并列通讯作者。毕胜利（１９６１－），从事病毒性肝炎研究工作。Ｔｅｌ：１３９１１５６８３６７，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｅｎｇｌｉ－ｂｉ＠１６３．ｃｏｍ；崔富强（１９７１－），研究员，Ｔｅｌ：１３７１８８９１６９６；Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｕｉｆｕｑ＠１２６．ｃｏｍ
本４８例。ＨＢｓＡｇ的检测方法为ＡＢＢＯＴＴ公司的微粒子免疫化学发光法。待检样本均在－８０℃ 冰箱保存，避免反复冻融。２核酸提取利用ＱＩＡＧＥＮ公司的ＱＩＡａｍｐＤＮＡＢｌｏｏｄＭｉｎｉＫｉｔ试剂盒提取上述血清中ＨＢＶＤＮＡ，提取的方法为硅胶膜柱提吸附方法，严格按照试剂说明书操作步骤进行，提取的ＤＮＡ样本于－８０℃ 储存待检，避免反复冻融。

乙型肝炎病毒基因组EnhI突变分析及其意义的开题报告

乙型肝炎病毒基因组EnhI突变分析及其意义的开题报告题目：乙型肝炎病毒基因组EnhI突变分析及其意义一、研究背景乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒（HBV）引起的疾病，全球范围内有超过2亿人感染该病毒。

HBV基因组包含4个重叠的区域：C区、P区、S区和X区。

研究表明，HBV的基因组序列存在着许多突变现象，其中包括了较为明显的ENH I区域突变，其突变类型多种多样，如C1653T、T1753V、A1762T/G1764A和T1674C等。

ENH I区域是HBV基因组的调节元件，对HBV的复制和转录具有重要作用。

因此，分析ENH I区突变对于探究HBV耐药性、流行病学和病毒进化等方面具有重要意义。

二、研究内容和目的本研究将分析HBV基因组ENH I区的突变类型和频率，探究其对HBV复制和传播的影响。

通过PCR扩增和Sanger测序技术，对患者体液样本中的HBV ENH I区进行测序，分析突变的种类和频率，并比较不同突变类型对HBV复制和传播的影响。

同时，还将探究ENH I区突变在不同人群中的分布情况及其与不同治疗策略之间的关系。

三、研究意义通过对HBV基因组ENH I区突变的分析，可以更全面地了解HBV的进化和演化历程，为预防和治疗HBV感染提供理论依据。

同时，通过对不同突变类型的分析比较，也可以为制定针对特定突变的治疗策略提供参考。

本研究还可以为HBV的流行病学调查、病毒传播动态及其与宿主的协同演化研究提供参考和指导。

四、研究方法本研究将利用PCR扩增和Sanger测序技术对患者体液样本中的HBV ENH I区进行测序，分析突变的种类和频率。

同时，也将通过计算机模拟和分子生物学实验，探究ENH I区突变对HBV复制和传播的影响。

五、预期结果本研究的预期结果是，对HBV ENH I区突变类型和频率的分析将有助于深入探究HBV的基本特征、流行病学和病毒进化历程。

同时，对不同突变类型对HBV复制和传播的影响分析可以为制定针对特定突变的治疗策略提供理论依据。

乙肝病毒基因检测和基因型ppt课件

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21
•抗-HBe：
•意味着 HBV部分被清除或抑制，复制减少，传染性降低, 但慢性肝炎, 肝硬化阳性率高
• e抗体和e抗原一般不同时存在，e抗原消失， e抗体产生。
• e抗体（+）说明患者曾出现过HBeAg
• 但对e抗体（+）者不可视为HBV复制平息。
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抗-HBc IgM ：是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示病人血液有强传染性。抗-HBc IgM阳性也可见于慢性活动性肝炎。
抗-HBc IgG ：高滴度表明机体正感染HBV；而低滴度抗-HBc IgG则是既往感染过HBV 的指标，具有流行病学的意义。 (非保护性抗体)
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乙型肝炎病毒血清标志物的综合评价
(1) (2) (3) (4) (5) ＋－＋－＋急性或慢性乙型肝炎，高传染性＋－－－＋急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg携带者＋－－＋＋急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝，弱传染性－＋－－＋急性HBV感染康复期或有既往感染史，有
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双标记探针: Taqman probes
5’
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Excitation Excitation
RR
Q
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3’
3’ 5’ Q
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1. HBV DNA 检测结果与血清标志物的综合评价
⑴ 与HBsAg检测结果的关系 :
一般来说HBsAg阳性，HBV DNA测定常常阳性。在实践中可能遇到的问题是HBsAg测定结果阴性，而HBV DNA测定阳性, 其原因可能是因为:

乙型肝炎病毒的DNA检测技术进展

乙型肝炎病毒的DNA检测技术进展乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝炎疾病，全球范围内仍然是一种重要的公共卫生问题。

据世界卫生组织数据显示，全球有超过2亿人感染了乙型肝炎病毒，其中大约3500万人患有慢性乙型肝炎。

乙型肝炎病毒的DNA检测技术是诊断和监测乙型肝炎的关键工具之一。

DNA检测技术是通过检测乙型肝炎病毒的DNA片段来确定感染者是否存在病毒感染以及感染的程度。

传统的乙型肝炎病毒DNA检测方法主要是聚合酶链反应（PCR）技术。

PCR技术通过扩增病毒DNA片段，使其在实验室中能够被检测到。

然而，PCR技术存在一定的局限性，如需要复杂的实验室设备和专业技术人员，以及较长的检测时间。

近年来，随着生物技术的发展，乙型肝炎病毒DNA检测技术也得到了长足的进展。

其中，核酸序列基因芯片技术是一种新兴的DNA检测方法。

该技术利用芯片上固定的乙型肝炎病毒DNA探针，通过与待测样本中的病毒DNA特异性杂交反应，实现对病毒DNA的检测和定量。

与传统PCR技术相比，核酸序列基因芯片技术具有快速、高通量、高灵敏度和高特异性的优点。

此外，该技术还可以同时检测多种病毒亚型和基因突变，对于乙型肝炎病毒的分型和耐药性监测具有重要意义。

除了核酸序列基因芯片技术，还有其他一些新兴的乙型肝炎病毒DNA检测技术也值得关注。

例如，数字PCR技术（dPCR）是一种通过将PCR反应分割成数千个微小反应来实现对病毒DNA的精确计数的方法。

与传统PCR技术相比，dPCR技术具有更高的准确性和可重复性。

此外，下一代测序技术（NGS）也被广泛应用于乙型肝炎病毒的基因组学研究和病毒变异的监测。

NGS技术可以在较短的时间内高通量地测序乙型肝炎病毒的全基因组，为研究乙型肝炎病毒的种群遗传学和病毒演化提供了有力工具。

乙型肝炎病毒DNA检测技术的进展为乙型肝炎的诊断和治疗提供了更精确和准确的手段。

通过及时检测和监测乙型肝炎病毒的DNA水平，可以更好地评估感染者的病情和治疗效果，并制定个体化的治疗方案。

1.1倍长乙型肝炎病毒基因组在Huh7细胞中的高效复制和表达

1.1倍长乙型肝炎病毒基因组在Huh7细胞中的高效复制和表达蒋林彬;施建飞;刘妍;刘文;李兰兰;钟彦伟;徐东平【摘要】目的构建乙型肝炎病毒(HBV)1.1倍基因组长度的重组载体,研究其在人肝癌细胞系Huh7中的复制与表达.方法以慢性乙型肝炎患者C基因型HBV DNA 为模板,用聚合酶链反应(PCR)扩增出HBV基因组的两条DNA片段,酶切后与载体连接成含HBV 1.1倍基因组长度的重组载体.经PCR、酶切及测序鉴定后,将重组载体经FuGENE(R) HD转染入Huh7细胞,用ELISA检测转染细胞培养上清液的HBsAg和HBeAg表达,用荧光定量FCR和Southern杂交检测HBV DNA的复制水平及复制中间体.结果经鉴定证实成功构建1.1倍基因组长度C基因型HBV重组载体,体外转染Huh7细胞48h后,培养上清液中检出HBsAg和HBeAg表达;转染72h后,荧光定量PCR检出较高的HBV DNA复制水平(107～109拷贝/ml);Southern杂交检出病毒复制中间体.结论构建的1.1倍长重组载体可以介导高水平的HBV病毒复制和基因表达,为进一步体外瞬时转染HBV表型耐药分析奠定基础.【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2010(035)006【总页数】4页(P635-638)【关键词】肝炎病毒,乙型;基因组;病毒复制;基因表达【作者】蒋林彬;施建飞;刘妍;刘文;李兰兰;钟彦伟;徐东平【作者单位】解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室;100039,北京,解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室;100039,北京,解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室;100039,北京,解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室;100039,北京,解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室;100039,北京,解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室;100039,北京,解放军302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室【正文语种】中文【中图分类】R512.63目前,在抗乙型肝炎病毒(HBV)感染治疗中广泛使用的核苷(酸)类似物具有不良反应小,抑制HBV复制迅速等优点[1]。

乙型肝炎病毒基因变异的探究

若此区基因的变异株（ａ抗原），血清中虽有抗一ＨＢｓ
参考文献：
而无免疫保护作用，结果ＨＢｓＡｇ与抗一ＨＢｓ可同时出现
于血清中；有试验证明，ｓ基因的突变体可干扰病毒颗粒的组装，导致ＨＢＶ颗粒分泌下降；实验研究还发现，

［１］骆抗先．乙型肝炎一基础与临床．人民卫生出版社，
１９９７．【２】叶维法．肝病免疫学．科学技术出版社，１９９３．
ＨＢＶ基因组剪接ｓ基因区产生的大分子蛋白变异体可
导致肝细胞空泡化及肝细胞凋亡作用，与ＨＢＶ感染导致肝细胞直接病变有关。由此可见，ｓ基因的多处变异均
（ＹＭＤＤ）区域，不同的核苷类似物耐药株的变异位点不一致，拉米夫定耐药株的Ｐ基因变异多位于Ｂ区和ｃ区，其中ｃ区ＹＭＤＤ变异最为常见，而泛昔洛韦耐药株的Ｐ基因变异多位于Ｂ区，两者较少重叠，这对于设计使用不同的核苷类似物有重要的指导意义。核苷类似物可避免的，目前体内外实验均证明耐药性的产生与Ｐ基因变异有关。随着抗ＨＢＶ核苷类似物的临床应用，正确
的，但相对集中于Ｐ基因酪氨酸一蛋氨酸一天门冬氨酸
系列简单、准确的分型方法，推动了ＨＢＶ基因型的流ＨＢＶ基因组又称ＨＢＶＤＮＡ，由３２００碱基对组成，
行病学及临床相关研究。为环状部分双股ＤＮＡ，分为长的负链（Ｌ）和短的正链（ｓ）

乙型肝炎病毒基因组中前-前-S区编码基因的界定

World Chin J Digestol 2003 August;11(8):1091-1096世界华人消化杂志　ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R２００３　年版权归世界胃肠病学杂志社P.O.Box 2345 Beijing 100023, China Fax: +86-10-85381893Email:****************** • 病毒性肝炎　VIRAL HEPATITIS •乙型肝炎病毒基因组中前－前－Ｓ区编码基因的界定董菁，　成军董菁，成军，　中国人民解放军第３０２医院传染病研究所基因治疗研究中心九十十全军病毒性肝炎防治研究重点实验室．　ｃｊ＠ｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ．ｃｏｍ．ｃｎ收稿日期：　２００３－０３－０８接受日期：　２００３－０４－１６Study on definition of pre-pre-S region in hepatitis B virus genomeJing Dong, Jun ChengJing Dong, Jun Cheng, Gene Therapy Research Center, Institute of Infectious Diseases, The 302 Hospital of PLA, Beijing 100039, China Supported by the National Natural Science Foundation of China, No.C03011402, No. C30070690; and the Key Science and Technology Brainstorm Project of PLA during the 9th five year plan period, No.98D063; the Start-up Funds for Returned Overseas Students of PLA, No.98H038; and the Science and Technology Brainstorm Funds for Young Scholars of PLA during 10th five year plan period, No. 01Q138; and the Research and Technology Foundation of PLA during 10th five year plan period, No.01MB135.Correspondence to: Dr. Jun Cheng, Gene Therapy Research Center,Institute of Infectious Diseases, The 302 Hospital of PLA, Beijing 100039,************************.cnReceived: 2003-03-08 Accepted: 2003-04-16AbstractAIM: To investigate the new open reading frame (ORF) in hepatitis B virus (HBV) genome.METHODS: The whole HBV genome was amplified by long-distance and accurate polymerase chain reaction (LA-PCR)method from the serum of 2 patients with chronic HBV infection, and then the PCR products were ligased into pGEM Teasy vectors. Five clones of HBV genome were sequenced.Sequences of our finding were compared with other HBV genome sequence deposited in GenBank.RESULTS: A new ORF was found in HBV genome, just before Pre-S1 region. It was defined as pre-pre-S region. The pre-pre-S ORF was deduced to be translated with Pre-S1,Pre-S2 and S gene in frame. Its amino acids sequence was as the following: MQLIITSKLGIIYILCGRLVFYIREKLHAV PHFVGHHILGNKSYS. There was a TA-rich region before the ATG of pre-pre-S ORF , indicating a possible promoter for its transcription.CONCLUSION: There is a new ORF pre-pre-S located up-stream to pre-S1 region.Dong J, Cheng J. Study on definition of pre-pre-S region in hepatitis B virus genome. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2003;11(8):1091-1096摘要目的：　乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因组内部结构基因与编码基因之间相互重叠本研究通过对于中国ＨＢＶ感染者的流行病毒株的基因序列进行分析比较我们采用的技术是长距离且精确ＰＣＲ（ＬＡ－ＰＣＲ）技术自慢性ＨＢＶ感染患者外周血血清中扩增ＨＢＶ基因组序列与其他ＨＢＶ基因组序列进行比较．结果：　测序结果５株ＨＢＶ全基因组核苷酸序列存在一新的ＯＲＦ并发现该区之前存在一ＴＡ富集区与前－Ｓ１命名为前－前－Ｓ区．董菁，　成军．　乙型肝炎病毒基因组中前－前－Ｓ区编码基因的界定．　世界华人消化杂志２００３；１１（８）：１０９１－１０９６/1009-3079/11/1091.asp０引言乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因组全长３　２００个核苷酸（ｎｔ）左右长度为３　１８２　ｎｔ并在ＨＢＶ基因组中界定了４个开放读码框架（ＯＲＦ）Ｐ并储存于ＧｅｎＢａｎｋ中其生物学功能也不相同［９］前－Ｓ２和Ｓ三个区1092 ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 世界华人消化杂志２００３年８月１５日第１１卷第８期一开放读码顺序（ｉｎ　ｆｒａｍｅ）进行翻译的．　我们应用长距离并且精确ＰＣＲ技术（ｌｏｎｇ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ＰＣＲ寻找新的ＯＲＦ存在的证据ｐＧＥＭ　Ｔｅａｓｙ载体细菌ＪＭ１０９为本室保存酚Ｘ－ｇａｌ等均为国产试剂．１．２　方法１．２．１　血清来源和ＤＮＡ分离血清来源：　临床诊断为病毒性肝炎编码号分别为Ｇ６８３和Ｇ３７６病毒性肝炎防治方案１）抽提法提取２００　µＬ血清中的ＨＢＶ　ＤＮＡ保存备用．１．２．２　多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增目的片段参考文献［１１设计引物为Ｐ１：５Ｐ２：　５．ＬＡ－ＰＣＲ参数如下：　９４　５５　共３５个循环再延长１０　ｍｉｎ．１．２．３　克隆目的片段将ＰＣＲ产物在１０　ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶中电泳玻璃奶法回收ＰＣＲ产物氨苄青霉素和Ｘ－ｇａｌ蓝白斑法筛选阳性菌落由上海博亚公司完成．　测序引物为ｐＧＥＭ　Ｔｅａｓｙ载体自有的Ｔ７测序引物包括：　Ｐ１：　５－ＡＣＧ　ＧＧＡ　ＣＧＴ　ＡＧＡ　ＣＡＡ　ＡＧＧ　ＡＣ－３；　Ｐ４：　５－ＡＡＣ　ＴＡＣ　ＡＣＧ　ＣＡＧ　ＴＧＣ　ＣＴＣＡＴ－３并将推断的ＯＲＦ翻译为氨基酸序列血清型包括：　ａｄｒ［５，８］ａｄｗ４和ａｙｗ［１］．２结果２．１　ＨＢＶ基因组核苷酸序列的测定以２例乙型肝炎患者血清中抽提的ＨＢＶ基因组为模板将患者体内存在的ＨＢＶ基因组克隆到测序载体中．经验证后Ｇ６８３－Ａ２获得的ＨＢＶ基因组核苷酸长度分别为３　２１５３　２１５和３　１２５　ｎｔ．　测序结果存入美国国立卫生院的ＧｅｎＢａｎｋ中ＡＦ３６３９６３Ｇ３７６的２株克隆之间的同源性为９６．６　％界定了４个主要ＯＲＦ的长度包括前－Ｓ１发现在前－Ｓ１区的上游有一未定义的ＯＲＦ前－Ｓ２和Ｓ基因按照同一开放读码顺序（ｉｎ　ｆｒａｍｅ）进行翻译在ＧｅｎＢａｎｋ中选择不同血清型的全基因序列进行比较．选择的ＧｅｎＢａｎｋ序列号为：　Ｄ１２９８０　（ａｄｒ　［５］　）：　３　２１５　ｂｐ；　Ｇ３２９６１６　（ａｄｒ　［８］）：　３　２２１　ｂｐ；Ｘ０４６１５　（ａｙｒ［４］）：　３　２１５　ｂｐ；　Ｘ０２７６３　（ａｄｗ２［３］　）：　３　２２１　ｂｐ；　Ｚ３５７１７（ａｄｗ４）：　３　２２１　ｂｐ和Ｇ３２９６４０　（ａｙｗ［１］　）：　３　１８２　ｂｐ．　结果发现克隆株Ｇ３２９６１６而克隆Ｇ３２９６４０为ＡＴＣ由于点替换突变导致表达终止．对前－前－Ｓ区上游核苷酸序列分析在前－前－Ｓ区起始密码子ＡＴＧ上游有３段ＴＡ富基序列分别为：　ＡＴＧ上游－８－２２：　ＡＴＴＡＡＡ；　－３９编码４５个氨基酸残基（ａａ）Ｇ６８３的３个克隆在第２０和第３０位均编码缬氨酸（Ｖ）Ｍｕｋａｉｄｅ　ｅｔ　ａｌ　［５］该多肽Ｍｒ　５２００左右５个强碱性ａａ董菁，　等．　乙型肝炎病毒基因组中前－前－Ｓ区编码基因的界定 1093 在美国国立卫生院（ＮＩＨ）的门户网站发现存储的５个克隆有前－前－Ｓ区多肽序列ＣＡＡ２５７４７９３　％（４２／４５）Ｇｅｌｉｂｅｒｔ　ｅｔ　ａｌ　［１，２］首次报告了ＨＢＶ基因组的全序列之后进行测序的方法获得的全序列．　我国学者［７，８］于１９８４年报道了大陆ＨＢＶ株（ａｄｒ）的序列．　而后的学者多利用重叠引物ＰＣＲ法扩增ＨＢＶ基因血清型之间的区别．目前在美国国立卫生院的ＧｅｎＢａｎｋ中但之后的学者对４个ＯＲＦ分区的界定并无异议．１９９５年之后以ＴＡ克隆法将患者体内的ＨＢＶ基因组克隆到质粒载体中－５又展示了模板多样性易于操作．本研究展示了同一患者来源的ＨＢＶ基因组不同克隆之间的变异程度９７．５　％５株之间的同源性为９３．６　％符合准种表现．　本研究其他报道［１３－２２］以及其他学者近期的研究结果［２３－２６］证实了１９９０年代初病毒学家［２７，２８］提出的ＨＢＶ准种假说．本研究在分析所获得的５个克隆的过程中长度１３５　ｂｐ其中３个克隆具有前－前－Ｓ区ＯＲＦ前－Ｓ１前－前－Ｓ区较以往认为的大蛋白多出一个小的疏水区．　如果前－前－Ｓ区被证明是真实存在的可能与蛋白的空间折叠或表面蛋白合成后分泌有关．前－前－Ｓ多肽推断氨基酸序列中含有６个亮氨酸（Ｌ）１５３９位尚需要进一步证实．我们应用了２种方法来证实前－前－Ｓ区的真实存在．　方法一是在ＧｅｎＢａｎｋ中选择不同血清型的ＨＢＶ基因组全序列结果发现甘人宝ｅｔ　ａｌ　［８］Ｏｋａｍｏｔｏ　ｅｔ　ａｌ　［４］克隆的ＨＢＶ基因组序列中均存在前－前－Ｓ区ＯＲＦ．　方法二是利用ＮＩＨ网站的ＢＬＡＳＴ软件结果发现已经存入ＧｅｎＢａｎｋ中的序列中分别为：ＢＡＡ３２８４９［２９］　（１９９８年）ＣＡＡ２５７４７［３１］（１９８３年）１９９８年）９３　％可以肯定前－前－Ｓ区是实际存在的作者认为存在一身份不明的ＯＲＦ（ｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｍｅ　（ｓ　ｇｅｎｅ））；而Ｍｉｍｍｓ　ｅｔ　ａｌ　［３２］将克隆Ｓ４３４９２进行再分析后他们认为的前－Ｓ１长度为１６４　ａａ以往的研究认为该区的编码并不是一种普遍现象其他学者多认同这一观点欧美学者在最初的研究中获得的样本存在一定的偏差由于目前仍缺乏对ＨＢＶ的大规模分子流行病学资料而不认为这是一种主流现象应当认为前－前－Ｓ区的存在不是一种个别现象而且截短型表面抗原中蛋白［３６，３７］和大蛋白［３８］具有反式激活作用我们的早期研究已经证明了ＨＢＶ截短型表面抗原中蛋白和Ｘ蛋白［４０－４２］具有强大的反式激活作用而Ｇ３７６的２株克隆和甘人宝ｅｔ　ａｌ　［８］Ｏｋａｍｏｔｏ　ｅｔ　ａｌ　［４］发表的克隆株在这２个位点编码为疏水氨基酸ＡＯＲＦ之前应当存在启动子区域无真核基因所特有的ＴＡＴＡ－ｂｏｘ结构ＡＴＧ上游－８上游－１７上游－３９在距前－前－Ｓ区ＡＴＧ上游－７９为ＡＴＴＡＡＡＡＴＴＡＡＴＴＡＴ．　这段上游序列中是否具有启动子功能存在前－Ｓ区启动子１（ＳＰ　Ｉ）［４６］存在ＳＰ　ＩＩ［４７］．　ＳＰ　Ｉ和ＳＰ　ＩＩ分别调控既往定义的大蛋白和中／主蛋白的表达［４８－５０］．我们的初步分析认为前－前－Ｓ区之前可能存在一启动子区进一步的工作将验证ＳＰ　ＩＩＩ的存在．总之我们将其命名为前－前－Ｓ区．　前－前－Ｓ区之前可能有一新的启动子区域（ＳＰ　ＩＩＩ）．如前－前－Ｓ多肽的表达得到进一步证实ＨＢＶ进入肝细胞机制（受体学说）ＨＣＣ产生机制研究均产生重大影响．４参考文献1Galibert F, Mandart E, Fitoussi F, Tiollais P, Charnay P. Nucle-otide sequence of the hepatitis B virus genome (subtype ayw)cloned in E. coli . Nature 1979;281:646-6502Charnay P, Mandart E, Hampe A, Fitoussi F, Tiollais P, Galibert F. Localization on the viral genome and nucleotide sequence of the gene coding for the two major polypeptides of the hepatitis B surface antigen (HBsAg). Nucleic Acids Res 1979;7:335-3463Valenzuela P, Quiroga M, Zalvidar J, Gray P, Rutter WJ. The董菁，　等．　乙型肝炎病毒基因组中前－前－Ｓ区编码基因的界定 1095nucleotide sequence of the hepatitis B viral genome and the iden-tification of the major viral genes. In:Fields BN Eds ANIMAL VIRUS GENETICS. New York, Academic Press, 1980:57-70 4Okamoto H, Imai M, Shimozaki M, Hoshi Y, Iizuka H, Gotanda T, Tsuda F, Miyakawa Y, Mayumi M. Nucleotide sequence of a cloned hepatitis B virus genome, subtype ayr:comparison with genomes of the other three subtypes. J Gen Virol 1986;67:2305-23145Mukaide M, Kumazawa T, Hoshi A, Kawaguchi R, Hikiji K.The complete nucleotide sequence of hepatitis B virus, sub-type adr (SRADR) and phylogenetic analysis. Nucleic Acids Res 1992;20:61056董菁，　李进，　施双双，　皇甫竞坤，　成军，　王勤环，　洪源，　李莉．　乙型肝炎病毒基因组准种与变异特点的研究．　解放军医学杂志 2002;27:116-1187吴祥甫，　周翊钟，　冯宗铭，　李载平，　夏绍源．　人乙型肝炎病毒－ＨＢＶａｄｒ亚型基因组的克隆和限制酶切图谱．　中国科学Ｂ辑 1983;2: 162-1678甘人宝，　储美谨，　沈绿萍，　钱苏雯，　李载平．克隆的ａｄｒ亚型乙型肝炎病毒（ｐＡＤＲ－１）的核苷酸顺序．　中国科学Ｂ辑 1986;5:55-65 9成军，　杨守纯．　现代肝炎病毒分子生物学．　第１版．　北京：人民军医出版社， 1997:179-18210中华医学会传染病与寄生虫分会。

乙型肝炎病毒全基因组PCR扩增产物的直接测序

Ｃｒｅｐｎｉｇａｔｏ：ＣＥＮｉｌ．Ｅｉ：ｃｗ＠ｔｍ．ｏｏｒｓｏｄｎｕｈｒＨＷｅ— ｅｉｍａｌ — ｌｏｃｍ
【ｂｔｃ】ＯｊｔｅＴｓｂｓａｅｏｆｉｃｓｑｅｃｇｔＣｍｌｃｔｎｐｏｕｔＡｓａｔｒｂｃｖｏｔｌｈｔｄｏｄｅｕｎｉｅＲａｐｆａｏｒｃｅｉｅａｉｍｈｒｒｔｅｎｈＰｉｉｉｄｓ
方法方法分析ＨＶ基因型和ＹＤ变异情况。结果ＢＭＤ２０例标本中有１扩增阳性并得到全长基因组８例
乙型肝炎病
序列；真性分析表明，保本法引起的人为核苷酸突变率约为１。序列分析表明，８例标本中有１％；１０例
为基因型Ｂ８例为基因型Ｃ；出现耐拉米夫定的ＹＤ变异，为基因型Ｃ、２例ＭＤ均。结论
毒全基因组ＰＲ扩增产物直接测序，Ｃ方法简便，可满足临床和科研的需要。
【关键词】乙型肝炎病毒；ＣＰＲ产物；测序
ＤｉｅｔｓｑｅｃｎｆＰｒｃｅｕｎｉｇｏＣＲｍｐｉｃｔｎｐｏｕ￣ｏｐｔｓＢｉｕｏａｌａｏｒｄｃｉｆｉｆＨｅａｔｖｒｓｃｍｐｅｅｇｎｍｅＣＮｉｉｉｌｔｅｏＨＥＷｅ－
２０Ｏ９年２月第３卷第ｔＯ／Ｅｐ期ｎＪｘ
ｈｅｔｉＨｅｒ／ｉｎ， ¨ａ２０￣ｃＤｓ（ａ￣ｃＦｔ）Ｆｒ０９，Ｖｌ，Ｎ．ｆＡｉｏｄｙｏ３ｏ１

乙型肝炎病毒全长基因组的扩增

一
ＤＡ板量对ＰＲ扩增效率的影响。果：Ｎ模Ｃ结最佳退火温度为６％，佳引物浓度为０５ＩｏＬ模板量在１０拷贝８最、ｘｌ，ｍ／５以上能扩增出乙肝病毒全长基因．模板量达到１ｓ贝抑制扩增效率。结论：火温度为６ ℃ 、但０拷退８引物浓度为０５．
ｇｎｏｓＭｅｈｏｄＰｒｍｅｓｗｉｈｔｅｂｎｎｇｓｔｔ５ｅｄｏｈｅａｉｅｓｒｄｗｅｅｄｓｇｅｎｏｅｈｐｔｔｓＢｅｍｅ．ｔｓｉｒｔｈｉｄｉｉｅａ一ｎｆｔｅｎｇｔｖｔａｎｒｅｉｎｄａｄｗｈｌｅａｉｉｖｒｎｍｅｒｍｐｉｅｓｎｎｅｓｅｐＰＣＲ．ＰＣＲｏｄｉｉｎｒｈｎｄｔｃｄｅｔｅｍｏｔａｐｏｉａｅｍｅｌｉｇｉｇｅｏｓｗｅｅａｌｆｄｕｉｇｏ —ｔｕｓｉｃｎｔｏｓｗｅｅｃａｇｅｏｄｅｉｈｓｐｒｐｒｔｔｎｔｍｐｅａｕｅａｎｈｐｉｌｃｃｎｒｔｏｆｔｅｐｒｍｅｓＩｆｕｎｅｏｈａｔｔｆｔｍｐａｅＤＮＡｎａｐｉｃｔｏｅｒｔｒｄｔｅｏｔｍａｏｎｅｔａｉｎｏｈｉｒ．ｎｅｃｆｔｅｑｕｎｉｏｅｌｔｌｙｏｍｌａｉｎｗａｓｉｆ
Ｉｏ／、－ＩＬ乙肝病毒ＤＡ模板量在１０～１ｓ贝为乙肝病毒全长基因扩增的合适ＰＲ反应条件。ｔｍＮ５０拷Ｃ关键词肝炎病毒，乙型基因组聚合酶链反应退火温度（ｍ值）Ｔ

利用一代测序进行HBV基因分型和耐药检测

龙源期刊网利用一代测序进行HBV基因分型和耐药检测
作者：鲁旖
来源：《健康必读（上旬刊）》2019年第10期
【摘 ;要】目的：建立利用一代测序进行乙型肝炎病毒基因分型和耐药分析的方法。

方法：查阅文献及利用NCBI设计引物，摸索和优化PCR扩增条件，PCR产物用一代测序进行测序分析。

结果：本方法所用引物及PCR产物能用于一代測序进行HBV基因分型和耐药检测。

结论 ;建立了利用一代测序进行乙型肝炎病毒基因分型和耐药分析的方法，为临床诊治提供个性化诊疗依据。

【关键词】乙型肝炎病毒;基因测序;基因分型
【中图分类号】R54 ;;;;;【文献标识码】A; ;;;;【文章编号】1672-3783（2019）10-0286-02
乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）基因组DNA是不完全双链的环状DNA，由一条不完整的正链和一条不闭合的负链组成。

;;HBV基因型包括A～I，我国以B型和C为主。

儿童乙型肝炎血清流行病学调查及乙型肝炎病毒基因型分析的开题报告

儿童乙型肝炎血清流行病学调查及乙型肝炎病毒基因型分析的开题报告【导语】本文是一份关于儿童乙型肝炎血清流行病学调查及乙型肝炎病毒基因型分析的开题报告，主要涉及了相关背景、研究目的、研究方法、预期结果以及研究意义等方面。

【正文】一、研究背景乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝炎，具有高传染性和严重的慢性病状。

目前，全球有超过3.4亿人感染HBV，每年约有70万人死于由此引起的肝炎。

中国是HBV感染的高发地区之一，尤其是儿童感染的情况越来越严重。

二、研究目的本研究旨在进行儿童乙型肝炎血清流行病学调查及乙型肝炎病毒基因型分析，探究乙型肝炎病毒基因型与感染、发病等方面的关系，为乙型肝炎的预防和治疗提供理论依据。

三、研究方法本研究采用问卷调查和实验方法相结合，具体步骤如下：1、问卷调查：以一定比例的儿童作为样本，通过建立良好的联系和沟通，了解其感染HBV的情况，以及与HBV感染相关的卫生知识等；2、血清学检测：对样本血清进行HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb等相关指标的检测，以评价感染HBV的情况；3、基因型分析：利用PCR技术对HBV DNA 进行扩增，并对扩增产物进行基因测序，采用Mega6软件对序列信息进行分析，并建立HBV病毒树，以了解HBV病毒基因型分布情况，探讨基因型与发病、转归的关系。

四、预期结果通过本研究，可以了解到儿童乙型肝炎感染的普遍情况，探究其传播方式、症状以及卫生保健等方面的影响因素，以及HBV不同基因型之间的遗传差异，从而探讨预防和治疗的有效策略。

五、研究意义1、本研究可以有效的了解儿童乙型肝炎病毒基因型的分布情况，为采取针对性的措施提供了科学依据；2、本研究对于乙型肝炎的防控工作具有重要的意义，对预防疾病、提高人民健康水平有积极的作用；3、本研究对于揭示基因型与发病、转归之间的关系，为临床治疗提供更加科学的方案和方法。

【结语】本研究将在儿童乙型肝炎血清流行病学调查及乙型肝炎病毒基因型分析方面作出重要贡献，为相关领域的探究提供可靠的数据和理论依据。

乙型肝炎病毒HBX基因的克隆、表达和蛋白的纯化

乙型肝炎病毒HBX基因的克隆、表达和蛋白的纯化伍静;鲍向红;杨静谊;罗小楠;张良成;贺超;张毅;吴凯;李维国【摘要】克隆乙肝病毒X基因,并在大肠杆菌中进行表达和纯化.用PCR方法从结乙肝病毒基因组扩增出HBX基因片段,克隆至pMD18-T载体中.序列测定正确后,将其亚克隆到表达载体pProExHTa并在大肠杆菌BL21中表达.表达蛋白经SDS-PAG及Western-blot分析后,亲和层析法纯化蛋白.结果成功克隆了HBX基因,并对其在E.coli中进行了表达.SDS-PAGE及Western blot分析表明表达产物正确.通过IMAC纯化系统获得17 kD纯化蛋白,与文献报道相符.结果成功获得了纯化的HBX蛋白,为进一步研究HBX蛋白与宿主蛋白之间的相互作用奠定基础.%To clone the gene of HBX of hepatitis B virus,then express the protein of HBX in Escherichia, Coli BL21 (E. Coli) and purify the expressed protein, the HBX gene was amplified from the genome of HBV by PCR and cloned into plasmid pMD18-T. The fragment sequenced correctly was subcloned into the expression vector pPro-ExHTa and expressed in E. Coli BL21. The expressed protein was identified by SDS-PAGE analysis and Western blot method, and subsequently purified it by His-tag purification system. It is resulted that gene of HBX was successfully cloned and expressed in E. Coli, and the expressed protein was identified correctly by SDS-PAGE analysis and Western blot analysis. It is conclused that HBX was successfully expressed and purified, for the further study HBX protein and protein host of interaction between the lay the foundation.【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2012(012)014【总页数】4页(P3319-3322)【关键词】乙肝病毒;HBX;表达;纯化【作者】伍静;鲍向红;杨静谊;罗小楠;张良成;贺超;张毅;吴凯;李维国【作者单位】第四军医大学训练部,西安710032;第四军医大学训练部,西安710032;第四军医大学训练部,西安710032;第四军医大学训练部,西安710032;第四军医大学训练部,西安710032;第四军医大学训练部,西安710032;第四军医大学训练部,西安710032;第四军医大学训练部,西安710032;第四军医大学训练部,西安710032【正文语种】中文【中图分类】R373.21乙型肝炎病毒(hepatitis virus，HBV)的慢性感染是导致肝细胞癌(HCC)发生的主要原因之一，而HBV相关的HCC排名十大癌症之一［1］。

高灵敏度巢式PCR方法扩增HBV全长基因组

高灵敏度巢式PCR方法扩增HBV全长基因组张天英;陈清瑞;杨炳春;陈仕海;袁权;葛胜祥【期刊名称】《厦门大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(050)005【摘要】A broad and high-sensitive nested PCR method was developed to amplify complete hepatitis B virus ( HBV) genome. Two sets of nested primers were designed to amplify two overlapped fragments on HBV genome (Fragment A:ntl825-nt3215/0-702; Fragment B:nt503-1823). The two fragments covered complete viral genome. Serial dilutions of six HBV plasmids with different genotype (genotype A, B, CD, E andG) ,theHBVDNAIUof four groups was:>l. OX 10l. 0X103-l. 0X104.2.0X 102-l. 0X10 <2.0× 102 IU/mL,and a total of 100 HBsAg( + ) clinical serum specimens were tested by the new method for evaluating its performance. The results demonstrated that the average lower detection limit of the new method for the HBV plasmids with different genotype was 2. 0× 102-l.0× 103 IU/mL. Among 100 clinical serum plete HBV genomes were successfully obtained in 75 specimens (75%) using the new nested PCR method,while were only obtained in 15 specimens (15%) using previously described one-step method. The detection sensitivity of the new method was associated with viral load of specimens and was significantly higher than previous on-step method. In conclusions,the presented new method supplied a sensitive way to complete HBV genomesequencing and could important role in functional and epidemic research for hepatitis B virus.%探讨一种用于乙型肝炎病毒(HBV)基因组扩增的灵敏度高、广谱性好的巢式聚合酶链式反应(nested PCR)方法,适用于较低病毒拷贝数标本的HBV DNA扩增.通过设计两套通用巢式引物,实现对各基因型(A,B,C,D,E,G)HBV均具有较高的扩增效率；采用两步法分段扩增HBV基因组,对两段目的产物进行测序拼接获得HBV的全基因序列.应用本方法对4组病毒拷贝量(IU/mL)分别为:＞1.0×104,1.0×103～1.0×104,2.0×102～1.0×103,＜2.0×102的100份血清标本进行全长基冈组扩增,其中75份获得阳性结果,各组阳性率依次为:100％,66.7％,60％,25％,有效扩增灵敏度为2.0×102～1.0×103 IU/mL;而一步法只在病毒拷贝量＞1.0×104 1U/mL的标本组中获得15份阳性结果,总的阳性率仅为15％,说明该方法扩增灵敏度明显高于一步法.因此,本方法为HBV流行病学调查研究HBV基因组序列提供了更高的灵敏度,可在流行病学调查中发挥重要作用.【总页数】4页(P947-950)【作者】张天英;陈清瑞;杨炳春;陈仕海;袁权;葛胜祥【作者单位】厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,福建厦门361005;厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,福建厦门361005;厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,福建厦门361005;厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,福建厦门361005;厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,福建厦门361005;厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,福建厦门361005【正文语种】中文【中图分类】Q356.3【相关文献】1.用PCR方法从基因组DNA中扩增人睫状神经营养因子基因 [J], 杜方勇2.巢氏PCR扩增低拷贝HBV全基因组方法的建立及应用 [J], 张孟;李倩;周华君;孙长贵;成军;戴玉柱3.应用巢式-实时定量PCR方法检测慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV cccDNA [J], 陈延平;孟存英;徐光华;冯继红;王平忠;白雪帆4.巢式逆转录-聚合酶链反应扩增人骨形成蛋白2全长cDNA及其真核表达载体的构建 [J], 俞莉敏;党耕町;杨吉成;郑祖根5.两轮多重反转录巢式PCR方法扩增全长GalUR基因 [J], 杨静慧;Gefu Wang-Pruski;Mark Hodges因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。