医学检验职称考试2.

医学检验职称考试 11-2011、 DNA 芯片技术DNA 芯片技术, 实际上就是一种大规模集成的固相杂交, 是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量预先制备的 DNA 探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面,然后与标记的样品杂交。

通过对杂交信号的检测分析,得出样品的遗传信息(基因序列及表达的信息。

由于常用计算机硅芯片作为固相支持物,所以称为 DNA 芯片。

根据芯片的制备方式可以将其分为两大类:原位合成芯片和 DNA 微集阵列。

芯片上固定的探针除了 DNA ,也可以是 cDNA 、寡核苷酸或来自基因组的基因片段,且这些探针固化于芯片上形成基因探针阵列。

因此, DNA 芯片又被称为基因芯片、 cDNA 芯片、寡核苷酸阵列等。

作为新一代基因诊断技术, DNA 芯片的突出特点在于快速、高效、敏感、经济,平行化、自动化等,与传统基因诊断技术相比, DNA 芯片技术具有明显的优势:①基因诊断的速度显著加快, 一般可于 30min 内完成。

若采用控制电场的方式, 杂交时间可缩至 1min 甚至数秒钟。

②检测效率高,医学 `教育网搜集整理每次可同时检测成百上千个基因序列,使检测过程平行化。

③基因诊断的成本降低。

④芯片的自动化程度显著提高,通过显微加工技术,将核酸样品的分离、扩增、标记及杂交检测等过程显微安排在同一块芯片内部,构建成缩微芯片实验室。

⑤因为是全封闭,避免了交叉感染;且通过控制分子杂交的严谨度,使基因诊断的假阳性率、假阴性率显著降低。

DNA 芯片技术在肿瘤基因表达谱差异研究、基因突变、基因测序、基因多态性分析、微生物筛选鉴定、遗传病产前诊断等方面应用广泛。

如感染性疾病是由于病原微生物(病毒、细菌、寄生虫等侵入机体而引起。

目前已经获得一些生物的全部基因序列,包括 141种病毒, 几种细菌(流感嗜血杆菌、产甲烷球菌、支原体M.genitalium 及实验室常用的大肠杆菌等和一种真核生物(酿酒酵母,且数量还在增长。

因此,将一种或几种病原微生物的全部或部分特异的保守序列集成在一块芯片上,可快速、简便地检测出病原体,从而对疾病作出诊断及鉴别诊断。

用 DNA 芯片技术可以快速、简便地搜寻和分析 DNA 多态性,极大地推动法医生物学的发展。

比如将个体 SNPs 设计在一块 DNA 芯片上,与样品 DNA 杂交,即可鉴定基因的差异。

人的体型、长相约与 500多个基因相关,应用 DNA 芯片原则上可以揭示人的外貌特征、脸型、长相等,这比一般意义的 DNA 指纹谱又进了一步。

应用 DNA 芯片还可以在胚胎早期对胎儿进行遗传病相关基因的监测及产前诊断,为人口优生提供有力保证;而且可以全面监测 200多个与环境影响相关的基因,这对生态、环境控制及人口健康有着重要意义。

12、蛋白质组及分析技术随着大量生物体全基因组序列的获得,特别是人类基因组序列草图的完成,基因组学研究重点不可避免地从结构基因组学转向功能基因组学,而蛋白质组学(proteom 正是作为功能基因组研究的重要支柱在上世纪 90年代中期应运而生。

蛋白质组是指一个基因,一个细胞或组织所表达的全部蛋白质成分。

蛋白质组学研究的是在不同时间和空间发挥功能的特定蛋白质群体,从而揭示和说明生命活动的基本规律。

蛋白质组学可以分为三个领域:①蛋白质的大规模的分离与鉴定,以及它们的表达后修饰;②蛋白水平的差异显示在疾病中的运用;③运用当前的一切手段研究蛋白质与蛋白质之间的相互关系。

与基因组相比蛋白质组具有多样性和可变性。

对一个机体而言,基因的数目是恒定的,而蛋白质的种类和数目在同一个机体的不同细胞中各不相同,即使同一细胞在不同的时期,不同条件下,其蛋白质表达也不同。

虽然可以通过 cDNA 芯片等方法显示生物体的基因启动状况,但 mRNA 水平(包括mRNA 的种类和含量并不能完全反映出蛋白质的表达。

另外从研究手段方面来说,蛋白质研究技术比基因技术相对要复杂和困难,不仅氨基酸残基数量多于核甘酸残基,而且在蛋白质组研究中没有一种方法象 PCR 那样能迅速扩增目的片段,这样对于丰度低但功能重要的蛋白质很难进行大规模的研究。

目前,蛋白质组学研究的主要技术包括:双向(二维聚丙烯酰胺凝胶电泳医学 `教育网搜集整理(结合等电聚焦和 IEJK 分离蛋白质, 在固相载体上形成蛋白质 -多肽图谱,用敏感的方法染色(如银染并用图像分析电子计算机进行鉴定;将蛋白质点切下,用酶消化,进一步用氨基酸分析、质谱分析等进行鉴定;或结合蛋白质的毛细管电泳,高效液相色谱技术(HPLC 以至蛋白质芯片进行鉴定。

蛋白质芯片是近年来蛋白质组学研究中兴起的一种新的方法,它类似于基因芯片,是将蛋白质点到固相物质上,然后与要检测的组织或细胞等进行“杂交”,再通过自动化仪器分析得出结果。

这里所指的“杂交”是指蛋白与蛋白之间如(抗体与抗原在空间构象上能特异性的相互识别。

此方法与传统的研究方法相比具有如下优点:①蛋白质芯片是一种高通量的研究方法,能在一次实验中提供相当大的信息量,使我们能够全面、准确的研究蛋白表达谱,这是传统的蛋白研究方法无法做到的。

②蛋白质组芯片的灵敏度高,它可以检测出蛋白样品中微量蛋白的存在,检测水平已达 ng 级。

美国科学家 Haab 等运用绿色荧光标记抗体微阵列,用红色荧光标记蛋白混和物,并运用计算机识别(R/G的信号强弱,来进行检测,检测水平可达到 1ng/ml.③蛋白质芯片具有高度的准确性。

蛋白质组芯片可用于蛋白质组学研究中的各个领域,具体来说大致可分为三个方面:研究蛋白质与蛋白质之间的相互作用,筛选新的蛋白质;蛋白质芯片能够用于现在其它方法不能检测到的,如蛋白质 -药物、蛋白质 -脂质之间的相互作用;蛋白质组芯片还可用于检测蛋白与小分子物质的作用。

例如蛋白质与 DNA , RNA 分子等。

蛋白质芯片的制作是决定其运用的关键因素之一,蛋白质组芯片的制作比当前流行 DNA 芯片制作要复杂,特别是涉及大量不同种类的蛋白的高效表达与纯化。

因此,蛋白质芯片制作存在费时、费力且成本较高等不足,限制了其在临床的应用。

13、血小板无力症亦称 Glanzmann 病。

系常染色体隐性遗传。

它的基本缺陷是血小板膜 GP Ⅱ b/Ⅲ a 数量减少或缺乏,医学 |教育网搜集整理也可出现 GP Ⅱ b/Ⅲ a 基因的缺陷。

患者的血小板对 ADP 、胶原、肾上腺素、凝血酶、花生四烯酸等诱导剂无聚集反应,但对瑞斯托霉素有聚集反应。

14、离心技术概述离心技术是利用物体高速旋转时产生强大的离心力,使置于旋转体中的悬浮颗粒发生沉降或漂浮,从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离之目的。

这里的悬浮颗粒往往是指制成悬浮状态的细胞、细胞器、病毒和生物大分子等。

离心机转子高速旋转时,当悬浮颗粒密度大于周围介质密度时,颗粒离开轴心方向移动,发生沉降;如果颗粒密度低于周围介质的密度时,则颗粒朝向轴心方向移动而发生漂浮。

常用的离心机有多种类型,一般低速离心机的最高转速不超过 6000rpm ,高速离心机在25000rpm 以下,超速离心机的最高速度达 30000rpm 以上。

根据离心原理,可设计多种离心方法,常见下列三大类型:1. 差速离心法。

通过逐步增加相对离心力,使一个非均相混合液内形状不同的大小颗粒分步沉淀。

2. 密度梯度离心法。

离心前,离心管内先装入分离介质(如蔗糖、甘油等,使形成连续的或不连续的密度梯度介质,然后加入样品进行离心,具体又可分为:(1速度区带离心法。

离心前,离心管内先装入蔗糖、甘油、 CsCl 、 Percoll 等密度梯度介质,待分离样品铺在梯度液的顶部,离心管底部或梯度层中间,同梯度液一起离心,利用各颗粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同,使具有不同沉降速度的颗粒处于不同密度的梯度层内医学教 `育网整理,达到彼此分离的目的。

本法可分离各种细胞、病毒、染色体、脂蛋白、 DNA 和 RNA 等生物样品。

(2预制梯度等密度离心法。

要求在离心前预先配制管底浓而管顶稀的密度梯度介质,常用介质有蔗糖、 CsCl 、 Cs2SO4等,待分离样品一般铺在梯度液顶上,如需挟在梯度液中间或管底部,则需调节样品液密度。

离心后,不同密度的样品颗粒到达与自身密度相等的梯度层,即达到等密度的位置而获得分离。

(3自成梯度等密度离心法。

某些密度介质经过离心后会自成梯度,例 Percoll ,可迅速形成梯度, CsCl 、 Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺经长时间离心后也可产生稳定的梯度。

需要离心分离的样品可和梯度介质先均匀混合,离心开始后,梯度介质由于离心力的作用逐渐形成管底浓而管顶稀的密度梯度,与此同时,可以带动原来混合的样品颗粒也发生重新分布,到达与其自身密度相等的梯度层里,即达到等密度的位置而获得分离。

3. 沉降平衡离心法。

根据被分离物质的浮力密度差别进行分离,所用的介质起始密度约等于被分离物质的密度,介质在离心过程中形成密度梯度,被分离物质沉降或上浮到达与之密度相等的介质区域中停留并形成区带。

15、幼稚红细胞幼稚红细胞:除 1周内婴幼儿血涂片中可见少量有核红细胞外,其他则为病理现象,包括:①溶血性贫血:严重的溶血性贫血、新生儿溶血性贫血、自身免疫性溶血性贫血、巨幼细胞性贫血。

因红细胞大量破坏、机体相对缺氧, 使红细胞生成素水平增高,骨髓红系增生,网织红细胞和部分幼稚红细胞提前释放人血,说明骨髓有良好的调节功能。

②造血系统恶性疾患或骨髓转移性肿瘤:各种急、慢性白血病、红白血病。

由于骨髓充满大量白血病细胞而使幼红细胞提前释放,或因髓外造血所致,有核红细胞以中、晚幼红细胞为主。

红白血病时可见更早阶段幼稚红细胞,并伴形态异常。

③慢性骨髓增生性疾病:如骨髓纤维化,血涂片可见有核红细胞,来自髓外造血和纤维化的骨髓。

④脾切除后:骨髓中个别有核红细胞能到达髓窦,当脾切除后,不能被脾脏扣留,从而进入外周血。

16、积液的葡萄糖检测1. 葡萄糖检测原理:测定方法同血清葡萄糖定量方法,多采用葡萄糖氧化酶法或己糖激酶法。

2. 参考值:3.6~5.5mmol/L.①漏出液:较血糖稍减低。

②渗出液<3.33mmol/L.3. 临床意义(1判断积液的性质:葡萄糖减低主要见于:①化脓性积液,其次是结核性积液。

②类风湿性积液、恶性积液、非化脓性感染性积液、食管破裂性积液。

③恶性积液中葡萄糖含量减低,提示肿瘤有广泛转移、浸润,预后不良。

④心包积液中葡萄糖减低见于细菌性、结核性、风湿性或恶性积液等。

(2鉴别腹水的性质:结核性腹水中葡萄糖与血糖比值为 0.25~0.93;而肝硬化腹水中葡萄糖与血糖比值为 1.00~3.68.17、校准物质在常规分析过程中,使用标准物质对分析方法进行校准,是保证检测结果准确性的基础。

标准物质又称参考物质,是一类充分均匀,并具有一个(或多个确定的特性值的材料或物质。