浙江大学生物化学丙实验报告
导论 浙江大学生物化学及实验(丙)课件
Symbiotic system can now carry out aerobic catabolism. Some bacterial genes move to the nucleus, and the bacterial endosymbionts become mitochondria.
efficient because fuel is oxidized to CO2.
HH
H H C=C
/\
"J R—C ZCH
基团
Carbonyl (aldehyde)
Carbonyl (ketone)
R —C—R 2 0
Ether
R1—O—R2
Guanidinium
Ester Acetyl R
O H
OH
Imidazole Sulfhydryl
Anhydride (two
carboxylic acids)
A2
Amino (protonated)
H l + R—N—H
1H
Thioester
H
H
R—N—C—N/
JI ，
+N H / \ H H
R——C=CH
HN、 、夕
H
R— O
Carboxyl
R —C—O-o
R—C—N O
Hydroxyl R —O—H <(alcohol)
Enol
?—H,H
R—C=C
Imine N-Substituted
线粒体的进化
Anaerobic metabolism is inefficient because fuel is not completely oxidized.
浙江大学生物化学丙实验报告5
实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________实验名称：蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析及蛋白质相对分子质量测定 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习SDS －聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)的基本原理和操作方法2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 检测分析3、学习测定蛋白质相对分子质量(Mr)的方法二、实验内容和原理（1）实验内容1、SDS －PAGE 凝胶制作；2、蔗糖酶分离纯化产物的SDS －PAGE 电泳分离；3、洗脱测定并计算相对分子质量。
（2）实验原理 1、电泳是带电颗粒在电场作用下，作定向运动即向着与其电荷相反的电极移动的现象。
2、电泳法分离、检测蛋白质混合样品主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所产生的电泳迁移率的差别。
3、区带电泳是样品物质在一惰性支持物上进行电泳,因电泳后，样品不同组分形成带状区间，故称区带电泳。
4、聚丙烯酰胺凝胶（PAG)由丙烯酰胺和交联试剂N,N ’-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在有催化剂（如过硫酸铵或核黄素）和增速剂（如N,N,N ’,N ’-四甲基乙二胺，TEMED ）的情况下聚合而成的。
专业： 农业资源与环境 姓名： 李佳怡学号： 3130100246 日期： 2015.6.2 地点： 生物实验中心310装订线5、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是在恒定的、非解离的缓冲系统中来分离蛋白质，这主要是由蛋白质样品所带的电荷和分子质量的差异性进行分离；在电泳过程中仍保持蛋白质的天然构象、亚基之间的相互作用及其生物活性。
6、聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为⑴连续系统凝胶缓冲液的pH值及凝胶浓度不变。
浙江大学氨基移换反应及其产物的鉴定实验报告
实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 成绩： 实验名称： 氨基移换反应及其产物的鉴定 实验类型： 定量实验 同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得一、 实验目的和要求1、学习鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理；2、学习纸层析的原理和操作技术；二、 实验内容和原理1、氨基移换反应：氨基移换反应是在氨基移换酶（转氨酶)的催化下，氨基酸的α-氨基和α-酮酸的α-酮基之间发生的互换反应。
任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶催化，转氨酶的最适pH 接近7.4，在各种转氨酶中，谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase, GPT ）和谷草转氨酶（glutamic oxalacetic transaminase,GOT ）的活性最强。
转氨作用主要发生在肝脏中。
转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。
在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶（GPT ）、谷草转氨酶（GOT ）活性较高。
2、GPT 催化下的转氨作用装订线L －谷氨酸脱氢酶在体内特别是在肝细胞内含量丰富，活性高，催化L －谷氨酸氧化脱－NH 2，加碘乙酸能抑制其活性，从而可以保护氨基移换反应的产物L －谷氨酸。
3、纸层析原理本实验用纸层析法，检查由丙氨酸和α—酮戊二酸在肝细胞谷丙转氨酶（GPT) 的作用下所生成的谷氨酸，证明组织内的氨基移换作用。
滤纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，是利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情况（溶解度）的不同来分离混合物的一种技术。
层析溶剂是由有机溶剂和水组成。
由于滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。
在进行分离时，由于被分离物质的组分在两相中的分布不同，随着流动相的移动，物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配，从而造成不同组分移动的速度也不相同。
浙江大学生物化学丙实验报告1
专业：农业资源与环境姓名：李佳怡 ____________学号：_J6 _______________日期： __________________ 地点：生物实验中心310课程名称：生物化学实验（丙）实验名称：蔗糖酶的提取一、实验目的和要求（必填）三、实验材料与试剂（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）七、实验结果与分析（必填）.指导老师：方祥年 成绩:_ _同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛 二、实验内容和原理（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 六、实验数据记录和处理 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、 学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法;2、 巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。
二、实验内容和原理订 1、实验内容:线 蔗糖酶的提取、分离纯化2、实验原理:① 酵母细胞破碎液体剪切法―超声波法.机械搅拌法.高压匀浆法固体剪切法一压力和研磨 非机械法——> 物理法.化学渗透法.酶溶本实验采用研磨的方法。
通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取岀来。
② 蔗糖酶的初步分离纯化蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。
本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集 样品。
由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。
实验报告细胞破碎的常用方法三、实验材料与试剂1、实验材料市售干酵母粉10g/组（3〜4人）2、实验试剂石英砂，95%乙醇（-20*0,20mmol/L Tris-HCl 缓冲液。
四、实验器材与仪器电子天平（称量干酵母粉）：研碎（每组一套）：50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）：高速冷冻离心机：恒温水浴箱（50°C）；量筒（50ml）、微量移液枪（lOOOu 1）及枪头或移液管（1ml）、玻棒、滴管等;离心管（留样品I、II用）及离心管架：制冰机：一20°C冰箱。
浙江大学生物化学丙实验报告3、4
实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶蛋白含量的测定、蔗糖酶活力测定及其分离纯化效果的评价同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛、袁平、朱耀仁、蔡玉林 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、蔗糖酶蛋白含量的测定——Folin-酚法①学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法；②掌握分光光度法制作标准曲线，准确测定未知样品的蛋白质含量； ③掌握分光光度计的使用方法。
2、蔗糖酶活力测定——3.5－二硝基水杨酸法 ①掌握酶活力测定的基本原理和方法； ②学习酶的比活力的计算。
二、实验内容和原理1、Folin-酚测定法Folin-酚试剂是由甲、乙两种试剂组成的。
甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜和酒石酸钾钠组成，在碱性条件下蛋白质中的肽键与酒石酸钾钠铜盐起作用，生成紫红色络合物；乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成，在碱性条件下，铜-蛋白质络合物以及蛋白质中的酪氨酸残基（酚基）和色氨酸还原磷钼酸-磷钨酸试剂（乙试剂）产生深蓝色（钼蓝和钨蓝的混合物），其色泽深浅与蛋白质含量成正比。
可用500nm 波长比色测定，适于测定蛋白质含量0.05～0.5g/L 。
优点： 简单、迅速、灵敏度高；反应较稳定。
缺点： 该反应受多种因素的干扰。
2、蔗糖酶活力测定蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），是一种水解酶。
它能催化非还原性双糖（蔗糖）的1,2－糖苷键裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖（还原糖）。
因此，每水解1mol 蔗糖，就能生成2mol 还原糖。
还原糖的测定有多种方法，例如：纳尔逊－索模吉试剂比色法，斐林试剂法等。
2023年生物化学实验报告化学实验报告
2023年生物化学实验报告化学实验报告在当下这个社会中，报告的使用成为日常生活的常态，报告具有成文事后性的特点。
那么报告应该怎么制定才合适呢？下面我就给大家讲一讲优秀的报告文章怎么写，我们一起来了解一下吧。
生物化学实验报告化学实验报告篇一实验目的：1.熟悉清洗设备2.掌握清洗流程以及清洗前预准备实验设备：1.半导体兆声清洗机（sfq-1006t）-1；sc-2清洗的目的在于清除表面污染杂质，包括有机物和无机物。
这些杂质有的以原子状态或离子状态，有的以薄膜形式或颗粒形式存在于硅片表面。
有机污染包括光刻胶、有机溶剂残留物、合成蜡和人接触器件、工具、器皿带来的油脂或纤维。
无机污染包括重金属金、铜、铁、铬等，严重影响少数载流子寿命和表面电导；碱金属如钠等，引起严重漏电；颗粒污染包括硅渣、尘埃、细菌、微生物、有机胶体纤维等，会导致各种缺陷。
清除污染的方法有物理清洗和化学清洗两种。
我们这里所用的的是化学清洗。
清洗对于微米及深亚微米超大规模集成电路的良率有着极大的影响。
sc-1及sc-2对于清除颗粒及金属颗粒有着显著的作用。
仪器准备：①烧杯的清洗、干燥②清洗机的预准备：开总闸门、开空气压缩机；开旋转总电源（清洗设备照明自动开启）；将急停按钮旋转拉出，按下旁边电源键；缓慢开启超纯水开关，角度小于45o；根据需要给1#、2#槽加热，正式试验前提前一小时加热，加热上限为200o。
本次实验中选用了80℃为反应温度。
③sc-1及sc-2的配置：我们配制体积比例是1:2:5，所以选取溶液体积为160ml，对sc-1 nh4oh：h2o2：h2o=20:40:100ml，对sc-2 hcl：h2o2：h2o=20:40:100ml。
① 1#号槽中放入装入1号液的烧杯，待温度与槽中一样后，放入硅片，加热10min,然后超纯水清洗。
② 2#号槽中放入装入2号液的烧杯，待温度与槽中一样后，放入硅片，加热10min,然后超纯水清洗。
浙江大学生物化学实验甲 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量 共18页
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质的分子量
• 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（单体，Acr）和甲 叉双丙烯酰胺（双体，Bis）在催化剂（TEMED） 和引发剂（AP或VitB2）作用下聚合而成的三维网 状结构的凝胶。
• 单体和双体单独存在或混合在一起都是相对稳定的， 若有自由基存在则可引发二者的聚合。
相对迁移率mR = 样品迁移距离（cm） 染料迁移距离（cm）
分离胶
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质的分子量
• 以标准蛋白质分子量的对数对相对迁移率作图， 绘制标准曲线。并根据待测样品的相对迁移率，从 标准曲线上查出其分子量。
更多精品资源请访问
docin/sanshengshiyuan doc88/sanshenglu
10%SDS
75 ul
TEMED（原液）
4 ul
H2O
3.5 ml
10%过硫酸铵（AP） 60 ul
4%浓缩胶 0.35ml
0.3 ml 25ul 5 ul 2.3 ml 25 ul
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质的分子量
2、样品的提取及处理 ⑴、样品的提取 • 取新鲜叶片，冲洗干净，吸干表面水分，去掉叶脉，
SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质的分子量
• 聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为连续和不连续系统两种， 不连续电泳系统是采用两种不同的缓冲液配制两种 不同浓度的凝胶，它可使样品在两层胶的界面处浓 缩，从而大达提高了电泳的分辨率，使之特别适用 于稀样品的分离。
• 聚丙烯酰胺凝胶电泳法的特点：简便、快速、重复 性好，只需几微克的样品即可进行测定。当分子量 范围在15000~200000D时，所测得的结果与用其它 方法测得的结果相比，误差一般不超过10%。
（大学）生物化学实验报告
班级: 姓名：座号:实验一生物化学实验基本知识与操作一、课堂目标1．简述生化实验的五点基本知识2．动手练习三种吸量管的使用，培养严谨的科学态度3．选择弹动混匀法做操作练习，使试管内溶液混匀4．仔细观察老师使用离心机的示教过程，并练习使用。
二、生物化学实验基本知识1．实验前做好预习每次实验课前应首先复习与实验有关的理论知识，然后认真阅读实验指导，明确课时目标，了解实验原理、操作程序及实验中应注意的事项。
2．实验中要认真操作、仔细观察实验时要求学生严格按照实验指导和教师的要求，一丝不苟地进行操作，仔细观察和分析实验中出现的各种现象，如实地将实验结果、数据填写在记录本内。
3．正确使用和爱护仪器实验时须遵照教师要求，严格按操作规程正确使用每种仪器。
贵重仪器未经允许不得随意搬动，如不慎损坏，应及时报告指导老师。
4．保持实验室的整洁和秩序遵守实验室规则，实验时保持室内安静。
实验仪器及用具必须洁净，实验试剂的排列应整齐有序。
勿将试剂药品洒于桌面、地上或它处。
废物及强酸、强碱溶液应适当处理，以防堵塞和腐蚀水管。
实验结束，做好清洁工作，注意关断水，电源，关闭好门窗。
5．认真填写实验报告三、生物化学实验几项基本操作1．吸量管的选择和使用(1)刻度吸管常见容量有l0ml、5ml、2m1、1ml、0.5ml等数种。
通常将管身标明的总容量分刻度为100等分。
常选用与移取非整数量的试液，因厂家不同，有分刻度到尖端和刻度不到尖端的两种。
如刻度到管尖的，通常在管壁上标有“吹”字，放液时必须在容液流完后吹出残留于吸管尖端的试液。
使用前先认明。
(2)移液管吸管中间膨大，管壁只有一条总量标线，准确度较高，常用作移取整数量的试液。
常见规格有50ml、25m1、l0ml、5ml、2ml和lml等容量。
操作时在放出试液后，吸管尖端在容器内壁上仍要停留10~15秒钟。
以上两种吸管使用方法如下：用右手拇指和中指靠住吸管标线以上部分，将管尖插入所要移取的试液液面下约lcm处。
浙江大学生物化学丙实验报告
. . . . 实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：实验名称： 离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶 同组学生： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习离子交换层析的基本原理；2、学习离子交换层析分离蛋白质的基本方法和技术；3、学习蔗糖酶活性检测的基本原理和方法。
二、实验容和原理（1）实验原理 1、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，液体为流动相进行。
离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或者借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。
这些过程都是可逆的。
在某一pH 值的溶液中，不同的蛋白质所带的电荷存在差异，因而与离子交换剂的亲和力就有区别。
当洗脱液的pH 改变或者盐的离子强度逐渐提高时，使某一种蛋白质的电荷被中和，与离子交换剂的亲和力降低，不同的蛋白质按所带电荷的强弱逐一被洗脱下来，达到分离的目的。
离子交换剂是由基质、电荷基团（或功能基团）和反离子构成。
基质 电荷基团 反离子 电荷基团反离子电荷基团反离子基质基质—＋—＋＋可逆交换可逆交换＋＋溶液中的离子（交联纤维素、交联葡聚糖、交联琼脂糖)— ——阳离子交阴离子交换剂专业： 农业资源与环境姓名： 李佳怡学号： 3130100246 日期： 2015.5.19地点： 生物实验中心310装订线由于蔗糖酶的pI偏酸性,所以在pH7.3 缓冲液的环境中，粗分离纯化样品蔗糖酶带负电荷，因此我们用阴离子交换剂达到分离蔗糖酶的目的。
2、酶活力检测(定性检测）蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），能催化非还原性双糖（蔗糖）裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。
生物化学检验技术实验报告
生物化学检验技术实验报告一、实验目的1. 熟悉生物化学检验的基本原理和实验操作步骤。
2. 掌握常用生物化学检验技术，如光谱分析、电泳分析、层析分析、酶学分析等。
3. 提高实验操作能力和分析问题的能力。
二、实验原理生物化学检验技术是研究人体健康和疾病时的生物化学过程，通过测定组织、体液的成分，揭示疾病变化和药物治疗对机体生物化学过程和组织、体液成分的影响，以提供疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等信息的一门学科。
本实验将通过进行一系列生物化学检验技术实验，验证相关原理并分析实验结果。
三、实验材料与仪器1. 材料：淀粉酶、淀粉、碘液、不同温度和pH值的缓冲溶液等。
2. 仪器：分光光度计、电泳仪、层析柱、酶标仪、显微镜等。
四、实验方法与步骤1. 光谱分析技术实验：(1) 准备标准溶液：配制不同浓度的淀粉酶溶液。
(2) 测定吸光度：使用分光光度计，在特定波长下测定标准溶液的吸光度。
(3) 绘制标准曲线：以淀粉酶浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
(4) 样品测定：将待测样品加入分光光度计，测定其吸光度，并从标准曲线中计算出样品中淀粉酶的浓度。
2. 电泳分析技术实验：(1) 制备样品：将淀粉酶溶液与适当比例的蛋白质混合，作为样品。
(2) 进行电泳：将样品加入电泳仪，应用适当电压进行电泳。
(3) 观察并记录结果：观察电泳后的条带分布，记录相关数据。
3. 层析分析技术实验：(1) 准备层析柱：选用适当固定相和流动相，填充层析柱。
(2) 样品进样：将淀粉酶溶液加入层析柱，进行层析分离。
(3) 检测并记录结果：检测层析后的物质分布，记录相关数据。
4. 酶学分析技术实验：(1) 制备酶标板：将淀粉酶溶液分别加入酶标板的小孔中。
(2) 添加底物：向每个小孔中加入适量的淀粉溶液。
(3) 孵育：将酶标板放入恒温箱中，孵育一定时间。
(4) 检测并记录结果：使用酶标仪测定每个小孔的吸光度，记录相关数据。
浙江大学生化实验报告
浙江大学生化实验报告1.引言1.1 概述概述部分：本实验旨在对浙江大学生化实验进行系统的记录与分析，通过实验结果展现实验的过程和成果，并对实验的意义和未来的发展进行展望。
该实验采用了一系列生化实验方法，旨在研究生物体内生化反应的机制和规律，为生物医学领域的研究和发展提供有力支持。
通过对实验背景、方法和结果的详细描述，本报告旨在为读者提供全面的实验信息，让读者更加深入地了解实验的过程和意义。
1.2 文章结构文章结构部分的内容应该包括对整篇文章的章节安排和内容概要的介绍。
可以简要描述每个章节的主题和重点，以便读者可以更好地理解整篇文章的结构和内容安排。
例如："文章结构部分将主要介绍本篇文章的整体结构和各个章节的主要内容，以便读者可以更好地理解全文的脉络。
引言部分将从概述、文章结构和目的三个方面介绍本篇文章的主题和写作目的。
正文部分将包括实验背景、实验方法和实验结果三个部分，分别介绍了实验的背景知识、实验的具体操作步骤以及实验结果的分析和讨论。
结论部分将对实验结果进行深入分析和总结，并展望未来可能的研究方向和发展趋势。
通过整体的文章结构，读者将更清晰地了解本篇文章的内容安排和逻辑脉络。
"1.3 目的：本次实验旨在探究特定生化反应的机理和影响因素，通过实验的进行，旨在深入了解该生化反应的特性和规律，从而为相关领域的研究和应用提供理论和实验基础。
同时，通过实验的设计和操作，培养学生的实验操作能力和科学思维，提高他们的实践能力和动手能力。
通过实验结果的分析和总结，使学生们对生化实验有一个更深入的理解和认识，为未来的学习和研究打下坚实的基础。
2.正文2.1 实验背景本次实验旨在探究生化领域相关的实验内容，通过对生物组织、酶活性、代谢途径等方面进行深入研究，加深对生化学原理的理解和掌握。
生化实验既是理论知识的延伸，也是对知识的实践检验，对于培养学生的实验操作能力和科学研究能力具有重要意义。
实验背景包括对常见的生化实验技术和实验原理的介绍，例如酶活性检测方法、代谢途径的测定方法等。
蛋白质化学2 浙江大学生物化学及实验(丙)课件
1.同源蛋白质：在进化上关联的蛋白质，它们在不同的物种 中行使
相似的功能。
Mar-HSC70 C. virginica HSC70 D.meldziogagter HSC70
M.sexta HSC70 M.mutfculud HSC70
HSC70
MA KA?
nonpolar side chain
polar side chain
1.肽键的结构: (1)部分双键性质，反式构象
(2)刚性平面，肽平面
事实上，肽键的构象是受限制的
+180
air 120
60
s①
浇
<D
0
-60
-120
-180
0
Ramchandran 图 6 i degrees)
-180
+180
Mar-HSP70 C.vlrqlnica HSP70
HSP70 M.sexta HSP70 M.musculud HSP70 H.sapiens HSP7O
MASKGP
EiiDAAKNQVM
“IDAAKNQVAN EL.GDAAKNQVAN
IfWAAKNQVAN KlpDAAKNQVAN RL GDAAKNQVAN
hydrogen
4.多肽链主链上的每个肽键中的 羰
基氧原子都与其后的第四个氨 基酸
trogen
残基上的酰胺基形成氢键。 氢键的 方向与螺旋轴平行。
(2) 0-折登(0-sheet)：是另种常见的二级结构。
反向平行
view
平行
view
(3)3-转角(p-turn):—种回转式的二级结构。
生物化学实验报告
生物化学实验报告生物化学实验报告引言生物化学实验是生物化学领域中非常重要的一部分，通过实验可以揭示生物体内各种生物分子的结构、功能和相互作用关系。
本实验旨在研究某种酶的催化作用，并通过实验结果分析其底物浓度、酶浓度、温度和pH值对酶活性的影响。
实验材料和方法1. 实验材料：- 某种酶溶液- 不同浓度的底物溶液- 缓冲液- 试管- 显色剂2. 实验方法：1) 准备一系列不同浓度的底物溶液，并将其分别加入试管中。
2) 在每个试管中加入一定量的酶溶液，并混合均匀。
3) 将试管放入恒温水浴中，在不同温度下进行反应。
4) 在一定时间间隔内，取出试管，立即停止反应，并加入显色剂。
5) 使用光度计测量吸光度，并记录数据。
实验结果与分析1. 底物浓度对酶活性的影响：在一定酶浓度下，随着底物浓度的增加，酶活性也随之增加。
但当底物浓度过高时，酶活性达到饱和状态，继续增加底物浓度并不会显著增加酶活性。
2. 酶浓度对酶活性的影响：在一定底物浓度下，随着酶浓度的增加，酶活性也随之增加。
酶浓度越高，催化底物的速率越快。
但当酶浓度过高时，酶活性也会达到饱和状态。
3. 温度对酶活性的影响：酶活性受温度的影响较大。
在一定底物浓度和酶浓度下，随着温度的升高，酶活性先增加后降低。
这是因为在适宜温度范围内，酶分子的振动速率增加，活性位点更容易与底物结合，从而增强酶活性。
然而，当温度过高时，酶的结构会发生变性，导致酶活性降低。
4. pH值对酶活性的影响：酶活性对pH值也非常敏感。
不同的酶对于最适pH值有不同的要求。
在酶的最适pH值附近，酶活性最高。
当pH值偏离最适值时，酶的活性会显著降低。
结论通过本实验的研究，我们发现底物浓度、酶浓度、温度和pH值都对酶活性产生影响。
了解这些影响因素可以帮助我们更好地理解生物体内生物化学反应的调控机制，并为相关领域的研究提供指导和参考。
实验的局限性和改进方向本实验只研究了某种酶的催化作用，对于其他酶的研究还需要进一步探索。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
. .. . 实验报告课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 实验名称： 离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶 同组学生： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、实验目的和要求1、学习离子交换层析的基本原理；2、学习离子交换层析分离蛋白质的基本方法和技术；3、学习蔗糖酶活性检测的基本原理和方法。
二、实验容和原理（1）实验原理 1、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，液体为流动相进行。
离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或者借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。
这些过程都是可逆的。
在某一pH 值的溶液中，不同的蛋白质所带的电荷存在差异，因而与离子交换剂的亲和力就有区别。
当洗脱液的pH 改变或者盐的离子强度逐渐提高时，使某一种蛋白质的电荷被中和，与离子交换剂的亲和力降低，不同的蛋白质按所带电荷的强弱逐一被洗脱下来，达到分离的目的。
离子交换剂是由基质、电荷基团（或功能基团）和反离子构成。
基质 电荷基团 反离子 电荷基团反离子电荷基团反离子基质基质—＋—＋＋可逆交换可逆交换＋＋溶液中的离子（交联纤维素、交联葡聚糖、交联琼脂糖)— ——阳离阴离子交专业： 农业资源与环境姓名： 李佳怡学号： 3130100246 日期： 2015.5.19地点： 生物实验中心310 装订线由于蔗糖酶的pI偏酸性,所以在pH7.3 缓冲液的环境中，粗分离纯化样品蔗糖酶带负电荷，因此我们用阴离子交换剂达到分离蔗糖酶的目的。
2、酶活力检测(定性检测）蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），能催化非还原性双糖（蔗糖）裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。
本实验采用3.5－二硝基水酸法，其原理是3.5－二硝基水酸与还原糖共热（100℃）被还原成棕红色的氨基化合物，在一定围还原糖的量和反应液的颜色深度成正比，由此来确定并收集蔗糖酶纯化样品。
（2）实验容1、离子层析分离纯化实验1中粗分离纯化的蔗糖酶样品Ⅲ；2、定性检测判断所提取的蔗糖酶纯化样品多少。
三、实验材料与试剂1、实验材料蔗糖酶粗分离纯化样品Ⅲ2、实验试剂①DEAE-Sepharose Fast Flow (弱碱性阴离子交换剂)；②20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液；③20mmol/L Tris-HCl，（1mol/L NaCl）pH7.3缓冲液；④0.2mol/L乙酸缓冲液，pH4.5 ；⑤5%蔗糖溶液；⑥3，5-二硝基水酸试剂（DNS试剂）。
附：3，5-二硝基水酸试剂配置方法甲液：溶解6.9g 结晶酚于15.2ml 10％NaOH溶液中，并用水稀释至69ml,在此溶液中加6.9g亚硫酸氢钠；乙液：称取255克酒石酸钾钠加到300ml 10%NaOH溶液中，再加入800ml 1%3,5-二硝基水酸溶液。
甲,乙二溶液相混合即得黄色试剂,贮于棕色瓶中备用,在室温放置7-10天以后使用。
四、实验器材与仪器1、高速冷冻离心机；2、层析柱（φ1.0×20㎝）；3、恒流泵（流速0.8～1ml/min）(10rpm)；4、梯度混合器(100ml梯度杯)；5、核酸蛋白检测仪（灵敏度0.5A）；6、记录仪（纸速：0.5mm/min；灵敏度：50mV）；7、部分收集器及收集试管（4ml/管）；8、铁架台、夹子（固定层析柱用）；9、－20℃冰箱（保存样品用）；10、微量移液枪200ul、1000ul；11、1.5ml离心管（留样品Ⅲ和样品Ⅳ用）；12、7ml离心管（留样品Ⅳ用）；13、恒温水浴（100℃）；14、试管、移液管、试管架等。
五、操作方法和实验步骤1、样品处理（实验1已经完成）①取其中体积较多一只离心管中保存溶液用作离子交换柱层析进一步分离纯化蔗糖酶；②剩余一只用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力的测定以及用于SDS-PAGE分析。
③本实验中取离心管中较多的一只离心管用于实验。
2、装柱、平衡：①检漏：在层析柱中装入水，观察其有无渗漏，如有渗漏，需进行更换；②连接纯化检测系统：按照示意图将系统连接；（梯度混合器在之后打开）③调流速：装柱前先调好流速0.8ml～1ml/min；④加固定相（离子交换剂）：a将柱下端的出水口关闭；b加进5ml（约1/3柱床体积）20 mmol/LTris-HClpH7.3的缓冲液；c将处理好的DEAE—Sepharose Fast Flow，轻轻搅匀沿玻棒靠近柱管壁慢慢连续加进柱至层析柱上端。
注意事项：a凝胶不能太稀，也不能太稠，刚好呈流质状态；b加入过程不能带进气泡。
⑤调整、平衡：待凝胶自然沉积离柱管上端约1-3cm后松开层析柱出口，控制流速0.8ml～1ml/min；待柱凝胶沉降至稳定高度并分出水层后，吸去水层，用玻棒将沉降界面搅匀，再补加处理好的凝胶，直到凝胶沉降至稳定高度距层析柱上端约3cm处为止（注意保持凝胶柱面平整）。
用20 mmol/L Tris-HCl、pH7.3的缓冲液连通层析柱，进行柱平衡，直到流出液与缓冲液的pH一致。
3、加样：①关闭恒流泵：停止加入20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液。
待缓冲液液面与胶体表面相切时，恒流泵停止工作。
②加样品：用胶头滴管缓慢将蔗糖酶蛋白样品溶液（样品Ⅲ）加入层析柱中，注意顺着柱壁滴加，尽可能保持胶面平整。
注意事项：a加样过程中要缓慢，防止凝胶扬起；b在操作的过程中可以采取虎口加样的方法③进行洗脱：打开恒流泵，使样品溶液进入胶体，待样品溶液完全进入胶体后，用少量洗脱缓冲液将残余在层析柱壁上端样品洗下，并完全进入胶体后，再加洗脱缓冲液至一定高度。
4、洗脱（梯度洗脱法）①平衡：加样后，用20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液进行平衡，洗脱流速为0.8ml～1ml/min，洗去未被凝胶吸附的杂蛋白；②梯度洗脱：待层析柱流出液在核酸蛋白检测仪上绘出基线稳定，用20mmol/L Tris-HClpH7.3 缓冲液NaCl梯度洗脱（浓度为0-1mol/L NaCl ）层析柱联上梯度混合器，混合器中分别为50ml 0.05mol/L Tris-HCl pH7.3缓冲液和50ml含1mol/LNaCl的0.05ml/L Tris-HCl pH7.3缓冲液。
洗脱流速为0.8～1ml/min，每4ml接一管，洗脱至缓冲溶液流完为止。
5、酶活力检测①检测：跟踪测定峰值及两侧对应试管的蔗糖酶活力(用3，5-二硝基水酸法测定还原糖，从而测定酶活力）蔗糖酶活力检测②留样：将蔗糖酶活力高的若干管酶液集中，留样用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力测定、SDS-PAGE 分析、酶的基本性质实验和用于“用正交法测定几种因素对蔗糖酶活性的影响”（半自主性设计实验），样品低温－20℃保存。
六、实验数据记录和处理样品离心后：上层淡黄色，下层乳黄色。
柱层析图：七、实验结果与分析活力测定结果：根据水浴后各个试管的颜色深浅判断，第11、12管颜色最深，判断其酶活力最高，与图谱波峰状况相吻合。
图谱分析：洗脱共有两个峰，第一个峰较高，为杂质峰，第二个峰才为洗脱峰。
但洗脱凤峰形并不好，没有明显的下降坡，峰拖的很长。
判断原因可能为：在加入蔗糖酶蛋白样品溶液时，由于样品量过多，分两次加入，前后两次之间有一定的时间差，导致洗脱峰出现后，下降缓慢，甚至有微微上升的趋势。
并且，杂质峰也有下降后重新上升的峰，由此推断洗脱峰峰形不好的原因为加入样品时的不当操作。
同时杂质峰很高，并且持续时间较长，表明杂质很多。
小结：蔗糖酶含量高而且活性强的时候，能在短时间将大量的蔗糖水解成还原性糖，而3.5－二硝基水酸（DNS）与还原糖共热（100℃）被还原成棕红色的氨基化合物，在一定围还原糖的量和反应液的颜色深度成正比，可依此检验还原糖的量从而标定蔗糖酶的活力及含量。
据实验结果检验可知第一个峰为杂质蛋白，第二个峰为蔗糖酶蛋白。
实验收集的11、12管颜色最深，收集该两管酶液。
八、讨论、心得1、此次实验涉及了很多仪器的使用，由此也总结了一些使用要点和此类实验中的一些注意事项：①在进行凝胶的装填时需要一段时间等待沉降且在整个装填过程中决不能使凝胶暴露在空气里，一旦暴露，那么需要重新装填。
且要求填装得均匀，整齐，没有气泡。
本次试验我们小组就因为干胶而导致了实验的失败。
不仅浪费了很多时间，也表明我们的实验能力还有待提高。
②在使用浓度梯度时需要注意首先应该排出其中的气泡，用胶头滴管分别对准气孔吹吸已达到出去气泡的目的。
气泡的存在会影响盐溶液的浓度，从而影响实验的进行。
③在使用移液枪时应当注意不同的液体应当换取枪头，以免引起液体的污染。
④试管收集器有些时候不够灵敏，应当注意手动调节。
⑤在检测蔗糖酶时由于可以大致推测出现的试管号，在检测时可以有针对性的进行选取，比如可以按照1,3,5,6,7，8等这样的顺序检验。
⑥分离柱的螺帽在使用前应该清洗干净，防止堵塞。
同时应该检查长细管是否流畅，以保证实验的顺利进行。
⑦在进行实验前需检查分离柱是否是垂直的。
⑧打开浓度梯度仪时，当有气泡进入柱时，要求凝胶上方有液体则保证了实验的安全性。
⑨由于该实验较为耗费时间，三个人应该明确分工，有条不紊，这样才可以做到高效。
2、理论深化：①防凝胶干的目的：防气泡，使柱床压紧，减少死体积，从而避免颗粒大小不等的交换剂在自然沉降时分层的问题，有利于分辨率的提高。
②柱平衡的原因：离子层析法使用前必须平衡至所需的pH和离子强度。
柱子装好后用起始缓冲液淋洗，直至达到充分平衡方可使用。
③为什么要洗脱加样？——层析所用的样品应与起始缓冲液有相同的pH和离子强度，所选定的pH值应落在交换剂与被结合物有相反电荷的围，同时要注意离子强度应低，可用凝胶过滤达此目的。
④梯度洗脱优点：提高柱效，改善检测器的灵敏度⑤梯度洗脱原理：当样品中的一个峰的k值和最后一个峰的k值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。
梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。
梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。
如图（两个图一种原理，前者为洗脱装置和柱子之间封闭，适用于配备压力泵的色谱柱，后者为洗脱装置和柱子之间隔离开来，是梯度洗脱的简易装置。
）两个容器放于同一水平上，两容器连通，B与柱相连，当溶液由B流入柱时，A中的溶液就会自动来补充，经搅拌与第一容器的溶液相混合，这样流入柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化。
3、实验体会这次试验整体感觉是混乱，主要原因是对实验过程和仪器操作的不熟悉以及思路的不清晰。