第十章 抗生素
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色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂；以0.05mol/L磷酸盐缓冲液（取7.1 g无水磷酸氢二钠至 1000ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，用磷酸调节pH值 至6.25）-甲醇(85:15)为流动相；检测波长为235nm。取头孢 噻肟对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含1 mg 的溶液，作为系统适应性试验溶液，取10μl注入液相色谱仪， 记录的色谱图应与标准图谱一致。
2.光谱法
（1）红外吸收光谱法(IR) 红外吸收光谱是一种专属性 较高的鉴别方法，反映了分子固有的结构特征。各国 药典对收载的β-内酰胺类抗生素几乎均采用了本法进 行鉴别。
（2）紫外分光光度法(UV) 通常利用最大吸收波长鉴 别法，即将供试品溶液配成适当浓度的水溶液，测定 紫外吸收光谱，根据其最大吸收波长或最大吸收波长 处的吸收度进行鉴别。
3.钾、钠盐的火焰反应 青霉素族、头孢菌素族药物中，许多制成钾盐或钠
盐供临床使用，因而可利用其火焰反应进行鉴别。
4.呈色和沉淀反应 （1）在稀盐酸中生成白色沉淀 青霉素钾和青霉素钠
加水溶解后，加稀盐酸2滴，即析出难溶于水的游离 酸白色沉淀。这些沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、 乙醚或过量的盐酸中溶解。
第十 章 抗生素类药物的分析检验
β-内酰胺类抗生素分析
β-内酰胺类抗生素的结构
性质
（1）酸性和溶解性质 青霉素和头孢菌素分子中 的游离羧基具有相当强的酸性，能与无机碱或某 些有机碱形成盐。它们的碱金属盐易溶于水，而 有机碱盐则易溶于甲醇等有机溶剂，难溶于水。 （2）旋光性 青霉素族分子中含有3个手性碳原 子，头孢菌素族含有2个手性碳原子，故都具有旋 光性。利用这一特点，可对这两类药物进行定性 和定量分析。
图 麦芽酚(Maltol)反应式
色谱法鉴别
（1）薄层色谱法 《中国药典》（2010年版）采用该法对本 类抗生素进行鉴别。
如对硫酸庆大霉素的鉴别方法：取供试品与标准品，分别加 水制成每1ml中含2.5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述 两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板（临用前于105℃活 化2小时）上；另取三氯甲烷-甲醇-氨溶液(1:1:1)混合振摇， 放置1小时，分取下层混合液为展开剂，展开后，取出薄层板， 于20-25℃晾干，置碘蒸气中显色，供试品溶液所显主斑点数、 位置和颜色应与标准品溶液主斑点数、位置和颜色相同。
和α-氨基酸的性质，可与茚三酮缩合，生成 蓝紫色化合物. 《中国药典》（2010年版）采用本法鉴别硫 酸小诺霉素，方法为：取供试品约5mg，加 水1ml溶解后，加0.1%茚三酮的水饱和正丁醇 溶液1ml与吡啶0.5ml，在水浴中加热5min， 即显紫蓝色。
氨基糖苷类抗生素
图 茚三酮反应原理
2.麦芽酚(Maltol)反应 此反应为链霉素的特征反应。链霉素在碱性溶 液中，链霉糖经分子重排使环扩大形成六元环， 然后消除N-甲基葡萄糖胺和链霉胍，生成麦芽 酚。在微酸性溶液中，麦芽酚与铁离子形成紫 红色配位化合物。
《中国药典》（2010年版）采用高效液相色谱法测定C组分 含量, 并规定C1应为25%~50%，C1a应为15%~40%，C2+C2a应为 20%~50%。
含量测定 氨基糖苷类抗生素的效价测定包括高效液 相色谱法和微生物检定法。
源自文库
谢谢!!
三、特殊杂质的检查
β-内酰胺类抗生素的特殊杂质主要有高分子
聚合物、有关物质和异构体等。 一般采用HPLC法控制其限量，也有采用杂质
的吸光度来控制杂质量的。 此外，有的还进行结晶性、“抽针试验”、
“悬浮时间与抽针试验”等有效性试验，对 原料药物则规定了“残留溶剂”的检查。
含量测定
高效液相色谱法(HPLC) 头孢噻肟钠的测定方法如下：
测定法 取供试品适量，精密称定，加流动 相溶解并定量稀释制成每1ml约含1 mg的溶液， 精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图； 另取头孢噻肟对照品，同法测定。按外标法 以峰面积计算供试品中C16H16N5O7S2的含量。
氨基糖苷类抗生素的分析
链霉素的结构
庆大霉素C族的结构
鉴别试验
1.茚三酮反应 本类抗生素为氨基糖苷结构，具有羟基胺类
（2）羟肟酸铁反应 青霉素和头孢菌素在碱性介质中与 羟胺作用，β-内酰胺环破裂生成羟肟酸；在稀酸中与高铁 离子呈色。不同的青霉素和头孢菌素的络合物显示不同的 颜色，如氨苄西林呈紫红色，头孢氨苄呈红褐-褐色。
（3）类似肽键反应 本类药物具 -CONH- 结构，一些取代 基有α-氨基酸结构，可产生双缩脲反应和茚三酮反应。如 氨苄西林，《中国药典》采用TLC鉴别时，以茚三酮为显 色剂。
特殊杂质检查及组分分析 1.有关物质的检查 本类抗生素中的有关物质一般采用HPLC法检查。 《中国药典》（2010年版）规定，硫酸链霉素、硫 酸西索米星、硫酸奈替米星、硫酸庆大霉素等药物 需要进行有关物质的检查。
2.庆大霉素C组分测定
由于抗生素各生产厂采用的发酵菌种不同、发酵工艺略有 差别、提炼工艺也各有特点，因此各厂产品的庆大霉素C组 分含量的比例不完全一致。庆大霉素C1、C2、C1a对微生物的 活性无明显差异，但其毒副作用和耐药性有差异，从而影响 产品的效价和临床疗效。因此，多国药典均规定控制各组分 的相对百分含量。
鉴别试验
本类药物的鉴别试验，现版药典采用的方法主要为IR、HPLC 和TLC法。
1.色谱法 利用比较供试品与对照品主峰的保留时间（tR）或斑点的比
移值（Rf）是否一致进行鉴别。HPLC法一般都规定在含量测 定项下的色谱图中，供试品与对照品主峰的保留时间应一 致。
2010版药典对抗生素药物的鉴别试验一般都设立了HPLC法 和TLC法两种方法，规定可在两种鉴别方法中任选一种。
2.光谱法
（1）红外吸收光谱法(IR) 红外吸收光谱是一种专属性 较高的鉴别方法，反映了分子固有的结构特征。各国 药典对收载的β-内酰胺类抗生素几乎均采用了本法进 行鉴别。
（2）紫外分光光度法(UV) 通常利用最大吸收波长鉴 别法，即将供试品溶液配成适当浓度的水溶液，测定 紫外吸收光谱，根据其最大吸收波长或最大吸收波长 处的吸收度进行鉴别。
3.钾、钠盐的火焰反应 青霉素族、头孢菌素族药物中，许多制成钾盐或钠
盐供临床使用，因而可利用其火焰反应进行鉴别。
4.呈色和沉淀反应 （1）在稀盐酸中生成白色沉淀 青霉素钾和青霉素钠
加水溶解后，加稀盐酸2滴，即析出难溶于水的游离 酸白色沉淀。这些沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、 乙醚或过量的盐酸中溶解。
第十 章 抗生素类药物的分析检验
β-内酰胺类抗生素分析
β-内酰胺类抗生素的结构
性质
（1）酸性和溶解性质 青霉素和头孢菌素分子中 的游离羧基具有相当强的酸性，能与无机碱或某 些有机碱形成盐。它们的碱金属盐易溶于水，而 有机碱盐则易溶于甲醇等有机溶剂，难溶于水。 （2）旋光性 青霉素族分子中含有3个手性碳原 子，头孢菌素族含有2个手性碳原子，故都具有旋 光性。利用这一特点，可对这两类药物进行定性 和定量分析。
图 麦芽酚(Maltol)反应式
色谱法鉴别
（1）薄层色谱法 《中国药典》（2010年版）采用该法对本 类抗生素进行鉴别。
如对硫酸庆大霉素的鉴别方法：取供试品与标准品，分别加 水制成每1ml中含2.5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述 两种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板（临用前于105℃活 化2小时）上；另取三氯甲烷-甲醇-氨溶液(1:1:1)混合振摇， 放置1小时，分取下层混合液为展开剂，展开后，取出薄层板， 于20-25℃晾干，置碘蒸气中显色，供试品溶液所显主斑点数、 位置和颜色应与标准品溶液主斑点数、位置和颜色相同。
和α-氨基酸的性质，可与茚三酮缩合，生成 蓝紫色化合物. 《中国药典》（2010年版）采用本法鉴别硫 酸小诺霉素，方法为：取供试品约5mg，加 水1ml溶解后，加0.1%茚三酮的水饱和正丁醇 溶液1ml与吡啶0.5ml，在水浴中加热5min， 即显紫蓝色。
氨基糖苷类抗生素
图 茚三酮反应原理
2.麦芽酚(Maltol)反应 此反应为链霉素的特征反应。链霉素在碱性溶 液中，链霉糖经分子重排使环扩大形成六元环， 然后消除N-甲基葡萄糖胺和链霉胍，生成麦芽 酚。在微酸性溶液中，麦芽酚与铁离子形成紫 红色配位化合物。
《中国药典》（2010年版）采用高效液相色谱法测定C组分 含量, 并规定C1应为25%~50%，C1a应为15%~40%，C2+C2a应为 20%~50%。
含量测定 氨基糖苷类抗生素的效价测定包括高效液 相色谱法和微生物检定法。
源自文库
谢谢!!
三、特殊杂质的检查
β-内酰胺类抗生素的特殊杂质主要有高分子
聚合物、有关物质和异构体等。 一般采用HPLC法控制其限量，也有采用杂质
的吸光度来控制杂质量的。 此外，有的还进行结晶性、“抽针试验”、
“悬浮时间与抽针试验”等有效性试验，对 原料药物则规定了“残留溶剂”的检查。
含量测定
高效液相色谱法(HPLC) 头孢噻肟钠的测定方法如下：
测定法 取供试品适量，精密称定，加流动 相溶解并定量稀释制成每1ml约含1 mg的溶液， 精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图； 另取头孢噻肟对照品，同法测定。按外标法 以峰面积计算供试品中C16H16N5O7S2的含量。
氨基糖苷类抗生素的分析
链霉素的结构
庆大霉素C族的结构
鉴别试验
1.茚三酮反应 本类抗生素为氨基糖苷结构，具有羟基胺类
（2）羟肟酸铁反应 青霉素和头孢菌素在碱性介质中与 羟胺作用，β-内酰胺环破裂生成羟肟酸；在稀酸中与高铁 离子呈色。不同的青霉素和头孢菌素的络合物显示不同的 颜色，如氨苄西林呈紫红色，头孢氨苄呈红褐-褐色。
（3）类似肽键反应 本类药物具 -CONH- 结构，一些取代 基有α-氨基酸结构，可产生双缩脲反应和茚三酮反应。如 氨苄西林，《中国药典》采用TLC鉴别时，以茚三酮为显 色剂。
特殊杂质检查及组分分析 1.有关物质的检查 本类抗生素中的有关物质一般采用HPLC法检查。 《中国药典》（2010年版）规定，硫酸链霉素、硫 酸西索米星、硫酸奈替米星、硫酸庆大霉素等药物 需要进行有关物质的检查。
2.庆大霉素C组分测定
由于抗生素各生产厂采用的发酵菌种不同、发酵工艺略有 差别、提炼工艺也各有特点，因此各厂产品的庆大霉素C组 分含量的比例不完全一致。庆大霉素C1、C2、C1a对微生物的 活性无明显差异，但其毒副作用和耐药性有差异，从而影响 产品的效价和临床疗效。因此，多国药典均规定控制各组分 的相对百分含量。
鉴别试验
本类药物的鉴别试验，现版药典采用的方法主要为IR、HPLC 和TLC法。
1.色谱法 利用比较供试品与对照品主峰的保留时间（tR）或斑点的比
移值（Rf）是否一致进行鉴别。HPLC法一般都规定在含量测 定项下的色谱图中，供试品与对照品主峰的保留时间应一 致。
2010版药典对抗生素药物的鉴别试验一般都设立了HPLC法 和TLC法两种方法，规定可在两种鉴别方法中任选一种。