液相流动相缓冲盐选择讲解学习
液相色谱缓冲盐的选择
乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7) 取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml,用10mol /L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml，即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0) 取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800ml,搅拌溶解，并稀释至1000ml,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1) 取氯化钙0.294g,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40 ml使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml，即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0) 取三羟甲基氨基甲烷6.06g,加盐酸赖氨酸3.65g、氯化钠5.8g、乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0，即得。
乌洛托品缓冲液取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml,即得。
巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42g,加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。
巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g,加水使溶解成2000ml，即得。
巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05g,加氯化钠3.7g及水适量使溶解,另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。
然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml，即得。
甲酸钠缓冲液(pH3.3) 取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.25～3.30,即得。
邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6) 取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6,加水稀释至1000ml，混匀，即得。
缓冲盐pH选择
一、磷酸二氢钾：无色结晶或白色颗粒状粉末。
在空气中稳定，在400℃时失去水，变成偏磷酸盐。
溶于约4.5份水，不溶于乙醇。
pH4.4～4.7。
相对密度2.34。
熔点252.6℃。
pKa=4.4—4.7（磷酸二氢钠的pKa=4.5）无色结晶或白色结晶性粉末。
无气味。
热至100℃失去全部结晶水，灼热变成偏磷酸钠。
易溶于水，几乎不溶于乙醇，其水溶液呈酸性。
0.1mol/L 水溶液在25℃时的pH为 4.5。
相对密度 1.915。
熔点60℃。
二、什么时候需要缓冲溶液？反相液相色谱分析中，流动相的PH值一般在2.5－7之间，当被分析物在反相条件下可离解，或样品的PH值在2.5－7之外时，就需要缓冲液。
在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基，他们的Pka在1－11之间，选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在，离子形式或中性化合物的形式。
如果样品的PH值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。
如何选择缓冲液PH值在选择缓冲液PH值之前，高于或低于被分析物的Pka两个PH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，但缓冲盐的pH值应在它本身PKa的上下1个pH值内，如超出此范围，缓冲作用将大大减弱。
从HH公式：PH＝Pka＋log（[A-]/[A]）得知，溶液PH值高于或低于Pka 2个单位，化合物中99％以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。
如果选择不到合适的，样品的pKa与流动相的pH非常接近，那么流动相pH微小的变化，都会引起样品保留时间较大的变动。
缓冲盐有助于增加方法的可靠性，以及色谱峰的尖锐性，PH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱，减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用，而使峰更尖锐，任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析，但我们认为PH值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。
PH＝3的磷酸钾盐都能获得良好的应用，一般是含羧基和氨基化合物分析中最好的缓冲液，并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。
液相色谱缓冲盐的选择
乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7) 取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml,用10mol /L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml，即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0) 取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800ml,搅拌溶解，并稀释至1000ml,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1) 取氯化钙0.294g,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40 ml使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml，即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0) 取三羟甲基氨基甲烷6.06g,加盐酸赖氨酸3.65g、氯化钠5.8g、乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0，即得。
乌洛托品缓冲液取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml,即得。
巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42g,加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。
巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g,加水使溶解成2000ml，即得。
巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05g,加氯化钠3.7g及水适量使溶解,另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。
然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml，即得。
甲酸钠缓冲液(pH3.3) 取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.25～3.30,即得。
邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6) 取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6,加水稀释至1000ml，混匀，即得。
反相色谱法中缓冲盐的选择
反相色谱法中缓冲盐的选择-现代液相色谱技术导论读书笔记（二）反相色谱法在色谱中是最广泛的应用，分离中性样品和离子样品的首选。
中性样品：样品不带正电荷或者负电荷的分钟哦，通常是由于样品酸或碱被离子化的结果。
虽然一个中性分子意味着该样品没有酸性或碱性分子，然而实际情况并非如此。
依赖于流动相的pH，样品中酸或碱可能在很大程度上（比如90%以上）体现出中性的（非离子化）形式，在这种情况下，色谱图和非离子化的化合物非常类似。
离子化样品：酸、碱、酸碱混合物（含或不含中性化合物）。
色谱柱常使用C18或C8，流动相常使用水和有机相的混合溶液。
常用的有机溶剂为CAN（首选），甲醇，异丙醇，四氢呋喃等。
水相通常是缓冲盐。
（一）流动相pH的确定在RPC中，色谱柱是非极性的，流动相是极性的。
极性很强的分子和极性的流动相之间作用更强烈，在色谱柱行保留较弱，首先离开色谱柱。
同样的，极性较弱的分子与非极性的色谱柱左右，后离开色谱柱。
因此大小接近的类似分子在RPC的洗脱大致随着他们的极性减低而减慢。
RPC的保留很大程度上是溶质分子和流动相或者色谱柱相互作用的结果。
增加B%（有机相），会使流动相极性减小，增加溶质和溶剂的相互作用，溶质分子的保留都减少。
提高温度同样减少溶质的保留。
色谱柱疏水性增加同样会减少溶质分子的保留，如同一样品在氰基柱上比C18柱较快出峰（氰基柱的极性比c18强）。
较高的极性会缩短样品在RPC上的保留时间。
离子化会显著提高酸或碱的极性，从而导致该物质在RPC中的保留因子K下降。
非电性分子离子化分子酸：HA ⇄A-+ H+碱：B+H+ ⇄BH+疏水性亲水性当pH增加时，酸失去质子而离子化，使在RPC中保留降低，当pH降低时，碱获得质子而离子化，使在RPC中保留降低。
离子化的酸和碱俊宇他们的酸度系数Ka相关。
当pH等于pka时，分子和离子化各占50%。
下图表示pH影响RPC保留行为的例子。
碱性化合物pka=5，从上图可以看出，在Ⅰ和Ⅲ阶段（在pka±1.5之外），保留时间随着pH 变化不大，在Ⅱ阶段（pka±1），保留时间随着pH变化呈线性关系。
反相色谱法中缓冲盐的选择-现代液相色谱技术导论读书笔记(二)
反相色谱法中缓冲盐的选择-现代液相色谱技术导论读书笔记（二）反相色谱法在色谱中是最广泛的应用，分离中性样品和离子样品的首选。
中性样品：样品不带正电荷或者负电荷的分钟哦，通常是由于样品酸或碱被离子化的结果。
虽然一个中性分子意味着该样品没有酸性或碱性分子，然而实际情况并非如此。
依赖于流动相的pH，样品中酸或碱可能在很大程度上（比如90%以上）体现出中性的（非离子化）形式，在这种情况下，色谱图和非离子化的化合物非常类似。
离子化样品：酸、碱、酸碱混合物（含或不含中性化合物）。
色谱柱常使用C18或C8，流动相常使用水和有机相的混合溶液。
常用的有机溶剂为CAN（首选），甲醇，异丙醇，四氢呋喃等。
水相通常是缓冲盐。
一：流动相pH的确定在RPC中，色谱柱是非极性的，流动相是极性的。
极性很强的分子和极性的流动相之间作用更强烈，在色谱柱行保留较弱，首先离开色谱柱。
同样的，极性较弱的分子与非极性的色谱柱左右，后离开色谱柱。
因此大小接近的类似分子在RPC的洗脱大致随着他们的极性减低而减慢。
RPC的保留很大程度上是溶质分子和流动相或者色谱柱相互作用的结果。
增加B%（有机相），会使流动相极性减小，增加溶质和溶剂的相互作用，溶质分子的保留都减少。
提高温度同样减少溶质的保留。
色谱柱疏水性增加同样会减少溶质分子的保留，如同一样品在氰基柱上比C18柱较快出峰（氰基柱的极性比c18强）。
较高的极性会缩短样品在RPC上的保留时间。
离子化会显著提高酸或碱的极性，从而导致该物质在RPC中的保留因子K下降。
非电性分子离子化分子酸：HA ⇄A-+ H+碱：B+H+ ⇄BH+疏水性亲水性当pH增加时，酸失去质子而离子化，使在RPC中保留降低，当pH降低时，碱获得质子而离子化，使在RPC中保留降低。
离子化的酸和碱俊宇他们的酸度系数Ka相关。
当pH等于pka时，分子和离子化各占50%。
下图一表示pH影响RPC保留行为的例子。
碱性化合物pka=5，从上图可以看出，在Ⅰ和Ⅲ阶段（在pka±1.5之外），保留时间随着pH变化不大，在Ⅱ阶段（pka±1），保留时间随着pH变化呈线性关系。
hic 常用流动相
hic 常用流动相HIC 常用流动相HIC（Hydrophobic Interaction Chromatography）是一种常用的分离和纯化生物大分子的技术。
在HIC中，流动相的选择是非常重要的。
本文将介绍HIC常用的流动相及其特点。
一、缓冲液在HIC中，缓冲液的选择对于保持生物大分子的天然构象和活性至关重要。
常用的缓冲液包括盐溶液、缓冲盐溶液和有机溶剂。
1. 盐溶液：盐溶液是HIC中最常用的缓冲液之一。
常用的盐包括氯化钠、氯化铵等。
盐溶液可以提供离子强度，从而增强生物大分子与固定相之间的疏水相互作用。
2. 缓冲盐溶液：缓冲盐溶液是在盐溶液的基础上加入缓冲剂的溶液。
常用的缓冲盐包括磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液等。
缓冲盐溶液除了提供离子强度外，还可以调节溶液的pH值，以适应不同生物大分子的分离和纯化需求。
3. 有机溶剂：有机溶剂在HIC中通常用于增强疏水相互作用。
常用的有机溶剂包括甲醇、乙醇等。
有机溶剂的加入可以改变流动相的极性，从而调节生物大分子与固定相之间的亲疏水性。
二、pH值pH值是流动相中一个重要的参数。
不同生物大分子的最佳分离条件可能存在差异，因此调节流动相的pH值可以改变生物大分子与固定相之间的相互作用。
在HIC中，pH值的选择受到缓冲剂的影响。
缓冲剂的pKa值决定了在不同pH值下缓冲液的离子性质。
因此，通过调节pH值，可以改变离子强度，从而调节生物大分子与固定相之间的相互作用。
三、温度温度也是HIC中一个重要的参数。
温度的选择可以影响生物大分子与固定相之间的相互作用。
通常情况下，较高的温度有助于降低疏水相互作用，从而减少非特异性吸附。
在HIC中，温度的选择应根据具体的实验条件和生物大分子的性质来确定。
一般来说，温度的选择应在保持生物大分子的活性的前提下尽量降低非特异性吸附。
四、添加剂在HIC中，添加剂的选择可以进一步改变流动相的性质，以调节吸附和解吸过程。
常用的添加剂包括甘油、聚乙二醇等。
使用缓冲盐作为流动相的注意事项
使用缓冲盐作为流动相的注意事项使用缓冲盐作为流动相的注意事项缓冲盐是一种常用于液相色谱分析的化学试剂，其作用是维持流动相的稳定性，使色谱分离过程更加准确和可靠。
然而，使用缓冲盐作为流动相并不是一件简单的事情，需要注意许多细节和注意事项。
本文将从选择缓冲盐、配置流动相、处理废液等方面逐步介绍使用缓冲盐作为流动相的注意事项。
一、选择缓冲盐使用缓冲盐作为流动相时，首先需要选择合适的缓冲盐。
通常情况下，常用的缓冲盐有磷酸盐、琥珀酸盐、乙酸盐等。
选择缓冲盐时需考虑溶解度、稳定性、PH范围等因素。
另外，还要考虑与目标化合物的相容性，以避免可能的干扰。
因此，在选择缓冲盐时，需要全面考虑各方面的因素。
二、配置流动相配置流动相是使用缓冲盐的关键步骤。
在配置流动相时，需要严格按照实验要求和方法要求进行配比和调配。
一般来说，流动相的配制需要使用纯水和有机溶剂（如甲醇、乙腈等），还需要将缓冲盐精确称量并加入到溶液中。
在配制的过程中需要注意避免气泡和悬浮物的产生，以保证流动相的质量和稳定性。
三、处理废液使用缓冲盐作为流动相时，会产生一定量的废液。
废液的处理需要特别注意，不能直接将废液排入下水道或随意丢弃。
废液中可能含有有机溶剂和化学试剂，需要按照相关规定进行分类、分装和处理。
一般情况下，废液需要经过中和、稀释、沉淀等工艺步骤，最终达到安全排放或者无害化处理的标准。
四、常见问题和解决方法在使用缓冲盐作为流动相时，可能会遇到一些常见问题，如流动相的稳定性差、色谱峰形状异常、峰分辨率低等。
对于这些问题，可以通过调整缓冲盐的浓度、更换缓冲盐种类、优化流速和温度等方法进行解决。
综上所述，使用缓冲盐作为流动相需要严格遵守实验要求和操作规程，合理选择缓冲盐、精确配置流动相并正确处理废液。
只有这样，才能保证色谱分离实验的准确性和可靠性，为科学研究和实验分析提供可靠的数据和结果。
液相流动相缓冲盐选择
下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。
甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。
但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。
在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。
对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。
考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。
当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如pH2.0和pH6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。
对流动相的优化主要体现在水相上。
流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。
如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。
如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。
（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。
了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。
缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。
例如，醋酸盐的pKa为4.8，缓冲范围为pH3.8~5.8。
高效液相流动相缓冲盐选择之欧阳引擎创编
下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。
甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。
但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。
在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。
对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。
考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。
当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如pH2.0和pH6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。
对流动相的优化主要体现在水相上。
流动相pH 值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。
如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。
如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。
（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。
了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。
缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。
例如，醋酸盐的pKa为4.8，缓冲范围为pH3.8~5.8。
液相色谱中缓冲盐的正确使用方法
液相色谱中缓冲盐的正确使用方法液相方法很多用到缓冲盐，那么缓冲盐应该如何正确使用，使用之后应该如何冲洗，如果因使用缓冲盐出现问题时，应该如何解决？这些问题你知道答案吗？Ol流动相中缓冲盐正确使用1、使用前的处理：在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。
原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。
理由：缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。
用含缓冲盐的（特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时）流动相进行分析时，如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大,而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的损害。
2、使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相（与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐）进行冲洗约30min,直至基线平稳。
如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。
02缓冲液使用注意1：避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。
2：缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。
3：实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95： 5的水甲醇冲洗。
4：使用缓冲液要及时掌握Ph范围，做到胸中有数。
5：清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。
6：长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路（拆下柱子，走30ml,再用5倍水冲洗）可以避免液路的堵塞。
7：选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。
如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。
液相色谱缓冲盐的选择
乙醇－醋酸铵缓冲液(pH3.7) 取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60m l和水20ml,用10mol /L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml，即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0) 取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800m l,搅拌溶解，并稀释至1000ml,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1) 取氯化钙0.294g,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40 ml使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml，即得。
三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0) 取三羟甲基氨基甲烷6.06g,加盐酸赖氨酸3.65g、氯化钠5.8g、乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0，即得。
乌洛托品缓冲液取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml,即得。
巴比妥缓冲液(pH7.4)取巴比妥钠4.42g,加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。
巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g,加水使溶解成2000m l，即得。
巴比妥－氯化钠缓冲液(pH7.8)取巴比妥钠5.05g,加氯化钠3.7g及水适量使溶解,另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。
然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml，即得。
甲酸钠缓冲液(pH3.3) 取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mo l/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.25～3.30,即得。
液相流动相缓冲盐选择(一类特选)
下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。
甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。
但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。
在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。
对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。
考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。
当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如pH2.0和pH6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。
对流动相的优化主要体现在水相上。
流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。
如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。
如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。
（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。
了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。
缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。
例如，醋酸盐的pKa为4.8，缓冲范围为pH3.8~5.8。
液相流动相缓冲盐选择精编版
液相流动相缓冲盐选择精编版MQS system office room 【MQS16H-TTMS2A-MQSS8Q8-MQSH16898】下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。
甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。
但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。
在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。
对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。
考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。
当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如和缓冲盐溶液），可提供最好结果。
对流动相的优化主要体现在水相上。
流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。
如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。
如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。
（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。
了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。
缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。
高效液相流动相缓冲盐选择之欧阳地创编
下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。
甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。
但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。
在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。
对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH 对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。
考虑到重现性，所用的pH 应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。
当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如pH2.0和pH6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。
对流动相的优化主要体现在水相上。
流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。
如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。
如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH 改变非常明显。
（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。
了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。
缓冲范围应在其缓冲液离子pK 值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。
例如，醋酸盐的pKa为 4.8，缓冲范围为pH3.8~5.8。
液相流动相缓冲盐选择
下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。
甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。
但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。
在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。
对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。
考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。
当待分析物pKa或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如pH2.0和pH6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。
对流动相的优化主要体现在水相上。
流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。
如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。
如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。
（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。
了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。
缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。
例如，醋酸盐的pKa为4.8，缓冲范围为pH3.8~5.8。
高效液相流动相缓冲盐选择
下面内容综合了Agilent 与网上查到得一些资料:一般来说,反相HPLC 得流动相包括有机相与水相,有机相常用得为色谱甲醇与乙腈,不太常用得还有四氢呋喃与异丙醇。
甲醇有其性价比得优势,但就是甲醇活性高,可能与某些样品发生反应,而且甲醇在低波长下有紫外吸收,会降低分析方法得灵敏度;乙腈虽然价格很高,毒性比甲醇大,但就是洗脱能力比甲醇强,很少与样品发生反应,用作流动相系统压力要比甲醇低很多,且截止波长比甲醇低20nm,增加了检测出在低波长下才有吸收得杂质得可能性,所以我们一般倾向于多用乙腈,少用甲醇。
但就是当样品峰形不好或者分离不好时,更换溶剂就是一个很好得选择,因为不同得溶剂可提供不同得选择性。
在反相色谱中,流动相中水相得pH 与离子强度在开发对条件微小变化不敏感得耐用方法中非常重要。
对于离子型化合物,典型样品得保留随pH 改变而明显变化,因此控制pH 对于保留与选择性得稳定非常重要,通常在pH2~4得条件下,保留时间对pH 得微小改变稳定性最高,因此建议将这一pH 范围作为大多数样品方法开发得起始pH,包括碱性化合物与一般得弱酸。
考虑到重现性,所用得pH 应高于或低于待分析物pKa 或pKb 上下一个pH 单位。
当待分析物pKa 或pKb 未知时,应测试一种以上流动相pH(如pH2、0与pH6、5缓冲盐溶液),可提供最好结果。
对流动相得优化主要体现在水相上。
流动相pH 值对色谱分离得影响有多钟方式,根据待分析物得结构性质,pH 可能影响选择性、峰形与保留。
如果就是非极性较强或中性得化合物,pH 对分离度与保留得影响一般不明显。
如果就是可离子化得化合物,如酸或碱,保留因子与选择性随pH 改变非常明显。
(1) 酸性分析物,应选择低pH 缓冲液流动相,以防止分析物离子化。
了解分析物得pKa,才能有效得选择流动相pH 。
缓冲范围应在其缓冲液离子pK 值±1 pH 单位,使流动相得优化具有一定得灵活性。
液相流动相最让人发愁的缓冲盐的,该如何选择？
液相流动相最让人发愁的缓冲盐的，该如何选择？缓冲液的选择当分别酸性或碱性样品时，通常需加入肯定量的缓冲盐，缓冲盐的浓度及类型如何确定？1、缓冲盐的浓度缓冲盐的浓度对离子样品保留值的影响通常较小，浓度一般为10-50mmol/l。
2、缓冲盐的类型缓冲盐类型的选择，主要取决于所需要的缓冲力量，在反向色谱中，流淌相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中特别重要。
对于离子型化合物，典型的样品的保留随pH转变而明显变化。
通常在pH2到4条件下，保留时间对pH的微小转变稳定性最高。
因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。
缓冲盐溶液的pH值越接近其pka，缓冲力量越强。
一般缓冲盐溶液的pH值应在其pka1的范围内。
3、缓冲盐的离子缔合（反离子对液相色谱行为的影响与理论解析）如酸性条件下分别碱性化合物，加入NH4CL，碱性物质离子与反离子相互作用的平衡导致它们相互的溶剂化并形成相关复合物离子：[碱]+[Cl] = [碱+ -- Cl]，在低pH时，碱性化合物被完成质子化，溶液阴离子（如CL-）在流淌相中破坏了碱性物四周的水分子并增加其疏水性，导致样品保留时间增加，当盐浓度大于50mM时，保留时间略有下降[4]，这可能是饱和反离子CI-引起的离子相互作用的屏蔽作用。
此外还可以添加硫酸钠或者高氯酸钠等转变碱性化合物的保留。
4.缓冲盐的其它性质缓冲盐的溶解性、挥发性和稳定性（可能与设备、样品和或色谱柱发生作用）对某些分别也很重要。
如磷酸盐，在含有高浓度有机相（70%以上），可能会析出；一些缓冲剂放置即降解，贮存或长期使用后其紫外汲取会增加（如：TFA、三乙胺）；一些缓冲盐能通过形成离子对，对样品发生作用（如三氟醋酸缓冲剂与阳离子样品，三乙胺与阴离子样品等）；挥发性的缓冲盐如碳酸胺、甲酸铵、醋酸铵等可应用于蒸发光散射、质谱的检测。
5.pH的选择通常进行分析方法开发时要求远离化合物的pKa，是远离主成分的pKa还是远离待测杂质的pKa？假如在pKa附件是否方法就不能用？是各杂质的pKa，只不过平常常常是通过主成分的pKa来代表各杂质，制定远离pKa2。
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液相流动相缓冲盐选
择
下面内容综合了Agilent和网上查到的一些资料：
一般来说，反相HPLC的流动相包括有机相和水相，有机相常用的为色谱甲醇和乙腈，不太常用的还有四氢呋喃和异丙醇。
甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度；乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。
但是当样品峰形不好或者分离不好时，更换溶剂是一个很好的选择，因为不同的溶剂可提供不同的选择性。
在反相色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。
对于离子型化合物，典型样品的保留随pH改变而明显变化，因此控制pH对于保留和选择性的稳定非常重要，通常在pH2~4的条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高，因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。
考虑到重现性，所用的pH应高于或低于待分析物pKa或pKb上下一个pH单位。
当待分析物pKa 或pKb未知时，应测试一种以上流动相pH（如pH2.0和pH6.5缓冲盐溶液），可提供最好结果。
对流动相的优化主要体现在水相上。
流动相pH值对色谱分离的影响有多钟方式，根据待分析物的结构性质，pH可能影响选择性、峰形和保留。
如果是非极性较强或中性的化合物，pH对分离度和保留的影响一般不明显。
如果是可离子化的化合物，如酸或碱，保留因子和选择性随pH改变非常明显。
（1）酸性分析物，应选择低pH缓冲液流动相，以防止分析物离子化。
了解分析物的pKa，才能有效的选择流动相pH。
缓冲范围应在其缓冲液离子pK值±1 pH单位，使流动相的优化具有一定的灵活性。
例如，醋酸盐的pKa 为4.8，缓冲范围为pH3.8~5.8。
（2）碱性化合物，在高pH条件下才能得到其非离子形态，但这对色谱柱不利。
通常许多碱性化合物在低pH条件的保留就已经满足要求了，所以可选择低pH条件。
如果选择高pH条件，则注意需选择耐强碱的色谱柱。
水里可以加酸、加碱、加盐，从而改变pH值、改善峰形、提高分离度。
常用的酸有磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸、甲基磺酸等。
单纯做液相时，低波长下磷酸最合适；而做液质时首选三氟乙酸，或甲酸、乙酸。
开发液相分析方法时流动相可首选0.1%的磷酸水溶液，然后再以此为基础做优化。
在单独用酸不行的时候再考虑使用缓冲盐，缓冲盐的选择原则是：简单、稳定、缓冲能力强、配制简单，需要调pH值时要有相应的酸或碱。
常用的缓冲盐是磷酸盐，主要是钾盐和钠盐，还有醋酸盐，常用的盐浓度在10~20mM左右（根据实际情况，有时可以选择更低或更高浓度，建议最高浓度不超过
50mM）。
下表是Waters提供的一个资料，常规实验室建议使用的缓冲盐体系。